К ВОПРОСУ О ВОЗМОЖНОСТИ ВИДОВОЙ ДИАГНОСТИКИ TETRANYCHUS URTICAE И T. ATLANTICUS (ACARI: TETRANYCHIDAE) С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МТ-ГЕНА COI Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

УДК 595.42

К ВОПРОСУ О ВОЗМОЖНОСТИ ВИДОВОЙ ДИАГНОСТИКИ TETRANYCHUS URTICAE И T. ATLANTICUS (ACARI: TETRANYCHIDAE) С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МТ-ГЕНА COI

Н.Д. Коноплёв1, А.Н. Игнатов2,3, С.Я. Попов1

'РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева, www.timacad.ru, Москва 2ООО Исследовательский центр "ФитоИнженерия", www.phytoengineering.ru, с. Рогачево, Московская обл.

3Российский университет дружбы народов, www.rudn.ru, Москва

В последние 10-15 лет при проведении видовой диагностики членистоногих широко используют молекулярные методы. Они показались особенно значимыми при работе с представителями паутинных клещей рода Tetranychus (Acari: Tetranychidae) в связи с высокой сложностью их видовой идентификации традиционным, морфологическим способом. Тем не менее, в ряде случаев при проведении диагностики близких видов паутинных клещей с помощью ПЦР случаются сбои, связанные с несовершенством применяемых методик. Для оценки возможностей видовой идентификации при помощи ПЦР проведен анализ доминирующей в подобных исследованиях методики молекулярной диагностики по гену цитохром-С оксидазы-I (гену COI). Исследование проводилось на примере широко распространенных на евроазиатском континенте значимых видов фитофагов - обыкновенного паутинного клеща Tetranychus urticae Koch, 1836, и атлантического паутинного клеща Tetranychus atlanticus McGregor, 1941 (именуемого в мировой сводке зоологической номенклатуры Tetranychus turkestani Ugarov et Nikolski, 1937). Использовались образцы, отобранные из 29 различных мест России и одной японской популяции. Достаточно большая часть тестируемого материала была предварительно подвергнута видовому анализу по значимым морфологическим признакам (форме и размеру эдеагуса самца). ПЦР-анализ показал, что особи каждой протестированной популяции паутинных клещей принадлежали одному из двух упомянутых видов, однако различия в последовательностях исследуемого гена между данными видами оказались столь малыми, что не позволили разделить их на обособленные таксономические единицы. Полученные результаты подтвердили ранее выдвинутые рядом зарубежных исследователей предположения о несостоятельности использования гена COI при идентификации паутинных клещей видов T. urticae и T. atlanticus. В то же время приведённая методика позволила достоверно определить принадлежность тестируемых клещей к роду Tetranychus.

Ключевые слова: Tetranychidae, Tetranychus urticae, Tetranychus atlanticus, Tetranychus turkestani, COI, видовая диагностика.

Видовая идентификация организмов - первый шаг в биологических исследованиях. Традиционная видовая диагностика насекомых и клещей основана преимущественно на морфологических различиях. Однако у ряда членистоногих различия в пределах рода немногочисленны и выражены слабо. В связи с этим в последние десятилетия широко используются методы видовой диагностики, основанные на ПЦР.

К членистоногим, морфологическая диагностика которых затруднена, относятся паутинные клещи рода Tetranychus (Acariformes: Tetranychidae), включающие ряд экономически важных видов, распространенных на больших территориях земного шара. Среди них своей значимостью выделяются следующие виды: обыкновенный паутинный клещ - Tetranychus urticae Koch, 1836; туркестанский паутинный клещ - Tetranychus turkestani Ugarov et Nikolski, 1937 и атлантический паутинный клещ Tetranychus atlanticus McGregor, 1941 (sensu Mitrofanov et al., 1987). Необходимо отметить, что название последнего вида нами сохранено согласно "Определителю те-траниховых клещей фауны СССР и сопредельных стран" [Митрофанов и др., 1987], однако в мировой сводке зоологической номенклатуры он именуется как Tetranychus turkestani Ugarov et Nikolski, 1937, и T. atlanticus сведен к нему в синоним.

Паутинные клещи рода Tetranychus преимущественно являются полифагами, что в совокупности с высокими темпами размножения делает их серьезными вредителями ценных сельскохозяйственных растений как в открытом, так и защищенном грунте. Представители рода

Tetranychus распространены очень широко, различные виды могут встречаться во всех регионах мира. К примеру, один из наиболее важных видов - T. urticae, является безусловным космополитом. T. atlanticus обнаружен в широком поясе от стран Западной Европы на Восток до Омска [Попов, 2013].

Традиционные методы идентификации паутинных клещей, основанные на морфологических признаках, трудоемки и требуют большого опыта из-за сравнительно небольшого числа признаков в пределах одного вида и сложности их выявления. В последнее время для видовой дифференциации паутинных клещей все чаще используются методы генетического анализа, которые не требуют специальных знаний и навыков относительно изучаемых объектов, а также неспецифичны к полу и стадии развития анализируемых особей. В качестве маркера для генетического анализа членистоногих и, в частности, паутинных клещей, широко используется ген митохондриальной ДНК, кодирующий цитохром-С оксидазу-I (далее - ген COI). Последовательность пар нуклеотидов в локусе этого гена отличается большими различиями между видами и, одновременно, небольшой внутривидовой вариацией, что должно предполагать относительно высокую точность идентификации паутинных клещей.

Целью данной работы является оценка возможностей молекулярной видовой диагностики по гену COI на примере особей двух достоверно различаемых морфологически видов паутинных клещей - T. urticae и T. atlanticus, отобранных в России.

Материалы и методы

Паутинные клещи

Список популяций паутинных клещей, использовавшихся в данном исследовании, с указанием мест отбора и растений-хозяев, представлен в таб. 1. Часть образцов (№1-6) была собрана в ходе обследований, проведенных С.Я. Поповым (РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева), а образцы №7-30 были предоставле-

ны в виде секвенированных нуклеотидных последовательностей сотрудниками ФГБУ "Россельхозцентр" и сотрудниками ряда частных сельскохозяйственных предприятий. Маточные колонии клещей первой группы популяций (№1-6) поддерживаются на кафедре защиты растений РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева.

Таблица 1. Список популяций паутинных клещей, использующихся в исследовании

№ Вид (по морф. признакам) Дата сбора, год Место сбора Растение-хозяин

1 T. atlanticus 2010 Краснодарский край, г. Краснодар Дурнишник (Xanthium sp.)

2 T. atlanticus 2010 Омская обл., г. Омск Земляника (Fragaria sp.)

3 T. atlanticus 2010 Московская обл., г. Москва, РГАУ-МСХА Борщевик (Heracleum sp.)

4 T. urticae 2013 Волгоградская обл., Новоаннинский р-н, у лесной опушки Кирказон (Aristolochia sp.)

5 T. urticae 2001 Япония, префектура Хоккайдо, г. Такикава Арбуз обыкновенный (Citrullus lanatus)

6 T. atlanticus 2012 Волгоградская обл., г. Новоаннинский, 15-20 м вглубь леса Кирказон (Aristolochia sp.)

от опушки

7 T. urticae 2009 Московская обл., с. Дубки, ВНИИССОК Баклажан (Solanum melongena)

8 T. urticae 2009 Московская обл., с. Дубки, ВНИИССОК Томат (Solanum lycopersicum)

9 T. urticae 2009 Московская обл., с. Дубки, ВНИИССОК Баклажан (Solanum melongena)

10 T. urticae 2009 Московская обл., г. Москва, ГБС им. Цицина РАН Роза (Rosa sp.)

11 T. urticae 2010 Костромская обл., с. Минское Томат (Solanum lycopersicum)

12 T. urticae 2010 Тверская обл., г. Лихославль, частные теплицы Фасоль (Phaseolus sp.)

13 T. urticae 2010 Владимирская обл., г. Суздаль, частные теплицы Баклажан (Solanum melongena)

14 T. urticae 2010 Псковская обл., д. Опочицы Земляника (Fragaria sp.)

15 T. urticae 2010 Ленинградская обл., Гатчинский р-н Роза (Rosa sp.)

16 T. urticae 2011 Московская обл., г. Ступино Земляника (Fragaria sp.)

17 T. urticae 2011 Тамбовская обл., г. Мичуринск, открытый грунт Томат (Solanum lycopersicum)

18 T. urticae 2011 Воронежская обл., г. Борисоглебск Борщевик (Heracleum sp.)

19 T. urticae 2011 Саратовская обл,. г. Балашев Баклажан (Solanum melongena)

20 T. urticae 2011 Саратовская обл., г. Саратов Томат (Solanum lycopersicum)

21 T. urticae 2011 Волгоградская обл., г. Камышин Фасоль (Phaseolus sp.)

22 T. urticae 2011 Волгоградская обл., г. Волгоград Томат (Solanum lycopersicum)

23 T. urticae 2011 Волгоградская обл., г. Волгоград Перец (Capsicum sp.)

24 T. urticae 2011 Волгоградская обл., г. Волгоград Арбуз обыкновенный (Citrullus lanatus)

25 T. urticae 2011 Волгоградская обл., г. Волгоград Огурец (Cucumis sativus)

26 T. urticae 2011 Ростовская обл., г. Волгодонск Томат (Solanum lycopersicum)

27 T. urticae 2011 Ростовская обл., г. Волгодонск Роза (Rosa sp.)

28 T. urticae 2011 Ростовская обл., г. Волгодонск Земляника (Fragaria sp.)

29 T. urticae 2011 Ростовская обл., г. Волгодонск Томат (Solanum lycopersicum)

30 T. urticae 2011 Ростовская обл., г. Волгодонск Томат (Solanum lycopersicum)

середине. Диаметр бородки эдеагуса равен в среднем 2.49 ^т, варьируя от 2.4 до 2.6, редко до 2.7 ^т [Попов, 2013].

Самцы Т. айаШст имеют эдеагус с рукояткой и крючком, образующими тупой угол. Рукоятка эдеагуса без бульбообраз-ного утолщения в основании. Дорсальная поверхность бородки эдеагуса тупоугольная с закругленной вершиной, смещенной к заднему отростку. Передний и задний отростки бородки примерно равны по длине, причем передний - с явственной закругленной вершиной, задний - клювовидный, заостренный. Диаметр бородки - в среднем 4.48 ^т, варьируя от 4.4 до 4.6 ^т, редко достигая значений с одной стороны до 4.8 ^т (рис. 1) [Попов, 2013].

Таким образом, самостоятельность Т. айапйст и Т. игЫсае по морфологическому видовому критерию не подлежит сомнению.

Образцы №7-30, предоставленные в виде секвенированных последовательностей ДНК, были изначально обозначены как Т. игНсае.

Выделение ДНК и условия ПЦР

С целью исключения действия различных размеров тел самок и самцов, ДНК выделялась путем гомогенизации одиноч-

Маточные колонии культивировались на срезанных листьях фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris), помещенных на ватные колобки в кюветах с водой при следующих условиях: температуре - 17-22 °C, относительной влажности - 70±10 %, фотопериоде (L:D) - 16:8 час.

Морфологический анализ T. urticae и T. atlanticus Видовая принадлежность каждой самки, включаемой в маточные колонии N»1-6, тестировалась по ее потомству - самцам, помещаемым в постоянные препараты с модифицированной жидкостью Свана, с последующим высушиванием и микро-скопированием при фазовом контрасте при 800-1200-кратном увеличении. Морфологический анализ паутинных клещей рода Tetranychus проводился по форме и размеру эдеагуса самцов.

Самцы T. urticae имеют эдеагус с рукояткой и крючком, образующими тупой угол. Рукоятка эдеагуса без бульбообраз-ного утолщения в основании и уменьшается к бородке почти равномерно, передний и задний отростки бородки явственные, более-менее симметричные, несколько заострены. Дорсальная поверхность бородки округлая с наиболее высокой точкой в

Таблица 2. Список праймеров, использующихся в исследовании

Название По следовательно сть

mite1 GGAGGATTTGGAAATTGATTAGTTCC

mite2 AAWCCTCTAAAAATRGCRAATACRGC

mite3 TGATTTTTTGGTCACCCAGAAG

mite4 TACAGCTCCTATAGATAAAAC

Рисунок 1. Эдеагус самцов T. urticae (слева) и T. atlanticus (справа) [Попов, 2013].

ных взрослых клещей в 15 мкл (самцы) или в 25 мкл (самки) смеси STE буфера (100 ммоль NaCl, 10 ммоль Tris-HCl, 1 ммоль EDTA, pH 8.0) и протеиназы К (10 мг/мл, 2 мкл) в 1.5 мл пробирке Eppendorf. Смесь инкубировалась 30 минут при 37 °C, а затем

- 5 минут при 95 °C [Multiple Infections with Cardinium..., 2013]. Амплификация проводилась с использованием комплекта реактивов "Encyclo Plus PCR kit" (Евроген, Россия) в соответствии с инструкцией производителя. Для амплификации фрагментов гена COI использовались стандартные праймеры, они представлены в таб. 2. Общий протокол амплификации: предварительная денатурация - 4 мин при 94 °C, затем 35 циклов по 1 мин при 94 °C, 1 мин при 48 °C, 1 мин при 72 °C, и финальная элонгация

- 4 мин при 72 °C. Протокол амплификации оптимизировался при необходимости. Продукты ПЦР визуализировались на 1.5 % агарозном геле в 0.5X TAE буфере.

Секвенирование и филогенетический анализ

При подготовке к секвенированию продукты ПЦР были очищены комплектом "Cleanup Standard" (Евроген, Россия) и

Результаты и

Проблема дискриминации морфологически достоверно различающихся видов T. urticae и T. turkestani на основе последовательности гена COI возникла почти с самого начала использования ПЦР-методики. В частности, Навайас и Бурсо [Navajas, Boursot, 2003] обнаружили, что эти два вида полифилетичны по митохондриальной ДНК (COI), но монофилетичны по ядерной рибосомальной ДНК (ITS2). Авторы смогли разделить данные виды на основе последовательностей ITS2, однако различия были основаны только на трёх диагностических сайтах. Позднее Рос и Брееувер [Ros, Breeuwer, 2007], используя ген COI, подтвердили, что указанные два вида не образуют отдельные монофилетические клады и поставили под сомнение существование T. turkestani как отдельного вида. Мацуда с соавторами [DNA-Based Identification of Spider Mites., 2013] в обзоре, проведя анализ 13 видов рода Tetranychus, отметил, что все эти виды могут быть идентифицированы на основе последовательности гена COI, однако годом позже [Phylogenetic analysis of the spider mite., 2014] уточнил, что T. urticae и T. turkestani можно разделить при помощи генов 18S и 28S рРНК.

повторно визуализированы на агарозном геле. Секвенирование проводили по методу Сэнгера [Sanger, Coulson, 1975] на автоматическом секвенаторе "ABI PRISM 3730" (Applied Biosystems, США). Использовался набора реактивов "BigDye Terminator v.3.1 Cycle Sequencing Kit" (Applied Biosystems, США) согласно инструкции по применению. Каждая последовательность была секвенирована с использованием прямых праймеров по меньшей мере дважды. Первичный анализ полученных последовательностей проводили с помощью пакета BLAST (http://www. ncbi.nlm.nih.gov/BLAST). Выравнивание гомологичных последовательностей проводили с помощью программы CLUSTALW v 1.75 [The CLUSTAL_X windows interface., 1997]. Проверку и редактирование последовательностей вручную проводили с помощью редактора BioEdit v 7 [Hall, 1999]. Построение филогенетических деревьев проводили с использованием алгоритмов ME (minimum evolution) [Saitou, Nei, 1987], реализованного в пакете программ MEGA 5.0 [Nei, Kumar, 2000]. Статистическая достоверность полученных деревьев рассчитывалась с помощью бутстреп ("bootstrap")-анализа путем построения 100 альтернативных деревьев и дана в процентах от исходного значения. Все полученные последовательности гена COI были депонированы в GenBank NCBI (The National Center for Biotechnology Information, США) под номерами KX648257-KX648290.

их обсуждение

Для оценки принадлежности полученных последовательностей ДНК клещей тем или иным видам, из GenBank NCBI были отобраны последовательности гена COI различных видов паутинных клещей, а также более отдаленных представителей членистоногих. По полученной совокупности последовательностей построено филогенетическое дерево (рис. 2).

Как видно из рис. 2, все полученные последовательности гена COI сгруппировались с T. urticae / T. turkestani (= T. atlanticus), полученными из GenBank, что указывает на принадлежность клещей всех исследуемых популяций одному из данных видов. При этом не наблюдается явной видовой дифференциации между нуклеотидными последовательностями, чего не происходит с образцами других видов. Таким образом, мы удостоверяем, что и образцы T. urticae и T. atlanticus, полученные из России, не разделяются по изучаемой последовательности.

Необходимо отметить, что филогенетическое дерево, полученное для гена COI, отражает эволюцию данного конкретного гена, а не организма в целом, и может вступать в противоречия с результатами морфологического анализа или анализа полного генома исследуемого объекта.

Заключение

Нами на материале российского происхождения пока- два массовых вида - T. urticae и T. atlanticus. В то же время зано, что методика видовой диагностики паутинных кле- данная методика может служить способом точной родовой щей по гену COI несовершенна и не позволяет различать идентификации данных видов паутинных клещей.

56 г

51

60

85

63

О Tetranychus urticaeAurkestani (AB116573, АВ736076, АВ736077, KJ729022...) 9 22- Volgograd. Solanum lycopersicum 9 23- Volgograd. Capsicum sp. 9 6- Novoanninsky. Aristolochia sp. 9 10- Moscow Botanical Garden. Rosa sp. 9 11 - Minskoye. Solanum lycopersicum 9 3 - RTSAU. Heracleum sp. -1 9 3- RTSAU. Heracleum sp. -2 9 17 - Michurinsk. Solanum lycopersicum 9 3 - RTSAU. Heracleum sp. - 3 9 2- Omsk. Fragaria sp. О Tetranychus urticae (AJ41458) 9 29- Volgodonsk. Solanum lycopersicum 9 9 - VNIISSOK. Solanum melongena Ф 5 - Japan. Takikawa. Citrullus lanatus -1 9 21- Kamyshin. Phaseolus sp. 9 4- Novoanninsky district. Aristolochia sp. 9 15- Gatchinsky district. Rosa sp.

27- Volgodonsk. Rosa sp. О Tetranychus urticae (HQ732265, HQ732267, HQ732264, HQ732266, AJ316605)

> 8 - VNIISSOK. Solanum lycopersicum 113 - Suzdal. Solanum melongena 1 25 - Volgograd. Cucumis sativus >16- Stupino. Fragaria sp.

> 20 - Saratov. Solanum lycopersicum 1 28 - Volgodonsk. Fragaria sp.

О Tetranychus urticae (AB736081, KR014232, AB736080, AJ316606) 7- VNIISSOK. Solanum melongena 19 - Balashov. Solanum melongena 1 - Krasnodar. Xanthium sp. 12 - Likhoslavl. Phaseolus sp. 14 - Opochitsy. Fragaria sp. О Tetranychus urticae (AJ316598, HM565907) 1 5 - Japan. Takikawa. Citrullus lanatus - 2 1 24 - Volgograd. Citrullus lanatus 1 26 - Volgodonsk. Solanum lycopersicum О Tetranychus urticae/turkestani (AJ316603, AJ316600, EU556754, EU345430...) О Tetranychus turkestani (AJ316604, AJ316602) 9 18- Borisoglebsk. Heracleum sp. 9 30- Volgodonsk. Solanum lycopersicum

О Tetranychus urticae (HM565896, FJ594469, HM565898, KF447572, AJ316597...) О Tetranychus pueraricola (KJ729021, AB736071) -aa О Tetranychus kanzawai (AB079035, AB079033, AB736045, AB736048, AB079034...)

Рисунок 2. Анализ сходства фрагментов ДНК паутинных клещей исследуемых популяций (чёрные маркеры) с гомологичными фрагментами гена COI паутинных клещей, отобранными из GenBank NCBI (белые маркеры). Рядом с ветвями показан процент повторяющихся деревьев, в которых сопряженные таксоны объединены при бутстреп-тесте.

Библиографический список

54

75

96

62 '

81

55

92

82 '

Митрофанов В.И. Определитель тетраниховых клещей фауны СССР и сопредельных стран (Tetranychidae, Bryobiidae) / В.И. Митрофанов, З.И. Стрункова, И.З. Лившиц; ред. В.Г. Бабаева. Душанбе: Дониш. 1987. 223 с.

Попов С.Я. Таксономический статус ряда видов паутинных клещей рода Tetranychus (Acari, Tetranychidae) и репродуктивные барьеры при скрещивании морфологически близких и отдаленных видов) / С.Я. Попов // Экологические аспекты ограничения вредоносности популяций насекомых и клещей: сборник статей. М.: Издательство РГАУ-МСХА. 2013. С. 224-259.

DNA-Based Identification of Spider Mites: Molecular Evidence for Cryptic Species of the Genus Tetranychus (Acari: Tetranychidae) / T. Matsuda et al. // Journal of Economic Entomology. 2013. Vol. 106. N1. P. 463-472. Hall T.A. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT / T.A. Hall // Nucleic Acids Symp. Ser. 1999. Vol. 41. P. 95-98. Multiple Infections with Cardinium and Two Strains of Wolbachia in The Spider Mite Tetranychus phaselus Ehara: Revealing New Forces Driving

the Spread of Wolbachia / D.-X. Zhao et al. // PLoS ONE. 2013. Vol. 8. N 1. P. 1-9.

Navajas M. Nuclear ribosomal DNA monophyly versus mitochondrial DNA polyphyly in two closely related mite species: the influence of life history and molecular drive / M. Navajas, P. Boursot // Proceedings. Biological sciences / The Royal Society. 2003. Vol. 270. N1. P. 124-127.

Nei M. Molecular Evolution and Phylogenetics / M. Nei, S. Kumar. New York: Oxford University Press. 2000. 333 p.

Phylogenetic analysis of the spider mite sub-family Tetranychinae (Acari: Tetranychidae) based on the mitochondrial COI gene and the 18S and the 5' end of the 28S rRNA genes indicates that several genera are polyphyletic / T. Matsuda et al. // PloS one. 2014. Vol. 9. N10. P. 1-12.

Ros V.I.D. Spider mite (Acari: Tetranychidae) mitochondrial COI phylogeny reviewed: host plant relationships, phylogeography, reproductive parasites and barcoding / V.I.D. Ros, J. a J. Breeuwer // Experimental & applied acarology. 2007. Vol. 42. N4. P. 239-262.

Saitou N. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees / N. Saitou, M. Nei // Molecular biology and evolution. 1987. Vol. 4. N 4. P. 406-425.

Sanger F. A rapid method for determining sequences in DNA by primed synthesis with DNA polymerase / F. Sanger, A.R. Coulson // Journal of molecular biology. 1975. Vol. 94. N 3. P. 441-418.

The CLUSTAL_X windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools / J.D. Thompson et al. // Nucleic acids research. 1997. Vol. 25. N 24. P. 4876-4882.

Translation of Russian References

Mitrofanov V.I. The determiner of the Tetranychoidea mites of the USSR and neighboring countries fauna (Tetranychidae, Bryobiidae) / V.I. Mitrofanov, Z.I. Strunkova, I.Z. Livshits; ed. V.G. Babaeva. Dushanbe: Donish. 1987. 223 p. (In Russian). Popov S.Ya. Taxonomic status of some spider mites species of the genus

Tetranychus (Acari: Tetranychidae) and reproductive barriers in crossings between morphologically adjacent and distant species / S.Ya. Popov // Ecological aspects of limiting the harmfulness of insects and mites populations: a collection of articles. Moscow: Izdatel'stvo RGAU-MSKhA. 2013. P. 224-259. (In Russian).

Plant Protection News, 2017, 4(94), p. 43-47

TO QUESTION OF OPPORTUNITY OF TETRANYCHUS URTICAE AND T. ATLANTICUS

(ACARI: TETRANYCHIDAE) IDENTIFICATION USING MTDNA COI GENE

N.D. Konoplev1, A.N. Ignatov2,3, S.Ya. Popov1

1Russian State Agrarian University, Moscow, Russia 2 "Phytoengineering" R&D Center, Rogachevo, Moscow Region, Russia 3Peoples' Friendship University, Moscow, Russia

Cytochrome c oxidase subunit I (COI) gene-based polymerase chain reaction (PCR) was used to estimate opportunity of Tetranychus species identification. The study was carried out using the example of widespread on the Eurasian continent and important phytophagous species, two-spotted spider mites T. urticae Koch, 1836 and T. atlanticus McGregor, 1941. Mite individuals were collected from 29 different places if Russia and from one Japanese population. A sufficiently large part of the test material was preliminarily subjected to a species analysis by significant morphological traits (the shape and size of male aedeagus). PCR-analysis showed that individuals of all the investigated spider mites belong to the two mentioned species, but differencies in the sequences of analized gene between these species were small to divide the specimens into separate taxonomic units. Obtained results confirmed the previously advanced assumptions of a number of foreign researchers on the inadequacy of COI gene for identification of T. urticae and T. atlanticus.

Keywords: Tetranychidae; Tetranychus urticae; Tetranychus atlanticus; Tetranychus turkestani; COI; species diagnostics.

Сведения об авторах

РГАУ - МСХА имени К. А. Тимирязева, 127550, Россия, Москва, ул. Тимирязевская, 49.

* Коноплёв Никита Дмитриевич. Аспирант каф. защиты растений, e-mail: [email protected]

Попов Сергей Яковлевич. Зав. каф. защиты растений, д.б.н., профессор, e-mail:[email protected]

Исследовательский центр "ФитоИнженерия", 141080, Россия, Московская обл. Дмитровский р-н. с. Рогачево, ул. Московская, 58. Игнатов Александр Николаевич. Зам. генерального директора, д.б.н., профессор, e-mail: [email protected]

Information about the authors

Russian State Agrarian University - Moscow Timiryazev Agricultural Academy, 127550, Russia, Moscow, Timiryazevskaya street, 49. *Konoplev Nikita Dmitrievich. Postgraduate student of plant protection department, e-mail: [email protected] Popov Sergei Yakovlevich. Head of plant protection department, DSc in Biology, professor, e-mail: [email protected] "Phytoengineering" R&D Center, 141880, Russia, Moscow Region, Dmitrov district, Rogachevo, Moskovskaya street, 58. Ignatov Alexander Nikolaevich. Deputy general director, DSc in Biology, professor, e-mail: [email protected]

* Ответственный за переписку

* Responsible for correspondence