CC BY
42
25. Чукаев С.А., Ботоева Е.А., Бураева Л.Б., Лом-боева С.С. Антиоксидантные и мембраностабилизирующие свойства сухого экстракта ортилии однобокой // Человек и лекарство: материалы VIII Рос. нац. конгр.
- М., 2001. - С. 636.
26. Шурыгина Ю.Ю. Противовоспалительное действие экстракта панцерии шерстистой: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Улан-Удэ, 2000. - 20 с.
27. Olennikov D.N., Tankhaeva L.M., Nikolaeva G.G., Tsyrenzhapov A.V, Nikolaev S.M., Chekhirova G.V Biologically active substances from Cacalia hastata leaves.
1. Carbohydrates from leaves and their hypoglycemic activity // Chemistry of Natural Compounds. - 2004. -V.40. - №1. - P.1-5.
28. Olennikov D.N., Tankhaeva L.M., Nikolaeva G.G., Nikolaev S.M. Biologically active substances from Cacalia hastata leaves. 2. Carotenoids and chlorophylls // Chemistry of Natural Compounds. - 2004. - V.40. - №1.
- P.96-97.
29. Olennikov D.N., Tankhaeva L.M., Nikolaeva G.G., Nikolaev S.M., Rokhin A.V, Kushnarev D.F. Biologically active substances from Cacalia hastata leaves. 3. Organic
acids // Chemistry of Natural Compounds. - 2004. - V.40.
- №3. - P.289-290.
30. Olennikov D.N., Mikhailova T.M., Tankhaeva L.M., Nikolaeva G.G., Nikolaev S.M. Biologically active substances from Cacalia hastata leaves. 4. Phenolic acids // Chemistry of Natural Compounds. - 2005a. - V41. -№2. - P.222-223.
31. Olennikov D.N., Tankhaeva L.M. Biologically active substances from Cacalia hastata leaves. Coumarins and triterpenes // Chemistry of Natural Compounds. -2005b. - V.41. - №5. - P.600-601.
Ботоева Елена Аполлоновна - кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии с курсом педиатрии Бурятского государственного университета. 670002, ул. Октябрьская, 36, Улан-Удэ, тел.: (3012) 448255. E-mail: [email protected].
Botoeva Elena Apollonovna - candidate of medical sciences, associate professor, department of obstetrics and gynecology with pediatrics course, Buryat State University. 670002, Oktyabrskaya str., 36, Ulan-Ude, tel.: (3012) 448255. E-mail: [email protected].
УДК 612.034.68
Е.А. Ботоева
К ВОПРОСУ О МЕХАНИЗМАХ ДЕЙСТВИЯ ФИТОСРЕДСТВ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ДЛЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ФАРМАКОТЕРАПИИ ПОВРЕЖДЕНИЙ МАТКИ
В статье приведены современные представления о механизмах действия фитоэкстрактов Ключевые слова: экспериментальная фармакотерапия, растительные средства
E.A. Botoeva
TO THE ISSUE ON MECHANISMS OF EFFECT OF PHYTOREMEDIES USED FOR EXPERIMENTAL PHARMACOTHERAPY OF UTERUS DAMAGES
In the article modern concepts about mechanisms of phytoextracts effect have been revealed.
Keywords: experimental pharmacotherapy, vegetative remedies.
Используемые в настоящее время методы терапии заболеваний матки и ее придатков не всегда позволяют добиться полной реабилитации больных и предотвратить рецидивы воспалительного процесса. Это можно объяснить тем, что при заболеваниях матки и ее придатков в патологический процесс вовлекаются все звенья репродуктивной, нейроэндокринной системы, центральная и вегетативная нервная, сердечно-сосудистая, мочевыделительная, иммунная системы, гемостаз и обмен веществ [1, 4, 5]. Наличие нарушений микроциркуляции с дефицитом кровоснабжения органов малого таза, нарушений проницаемости сосудов, болевого, гипертермического синдромов, ганглионевритов, изменений в центральной и периферической нервной системе, является одним
из ведущих патогенетических механизмов заболеваний матки и ее придатков и делает возможным применение фитосредств в схемах комплексного лечения заболеваний половых органов.
В результате проведенных исследований установлено, что испытуемые новые лекарственные экстракты - сухой экстракт ортилии однобокой, сухой экстракт панцерии шерстистой обладают выраженной фармакотерапевтической эффективностью при экспериментальных повреждениях матки и ее придатков - остром эндометрите у белых крыс, хроническом сальпингите у кроликов, эктопии шейки матки у белых крыс. Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что реализации фармакотерапевтической эффективности испытуемых фитосредств способствует широкий
спектр фармакологической активности указанных экстрактов: спазмолитической, антимикробной, анальгезирующей, жаропонижающей, седативной, диуретической, кардиотонической и гемо-статической [2, 7, 9, 15].
Известно, что основным патогенетическим механизмом развития мембранодеструктивных нарушений в клетках ткани матки и маточных труб при воспалительных заболеваниях матки и ее придатков является активация перекисного окисления липидов, некомпенсирующаяся анти-оксидантной системой организма [4, 5].
Мембраностабилизирующую активность сухих экстрактов ортилии однобокой и панцерии шерстистой определяли in vitro по степени торможения перекисного и осмотического гемолиза отмытых эритроцитов человека [2,7]. Инкубационная среда состояла из донорских отмытых эритроцитов и фосфатного буфера (pH=7,4). Перекисный гемолиз вызывали добавлением в инкубационную среду реактива Фентона: FeSO4 ■ 7H2O - 0,02 мг/мл; H2O2 - 0,02 мг/мл (в пересчете на 100%-ный раствор перекиси водорода). Компоненты, входящие в состав реактива Фентона, были использованы в минимальных концентрациях, вызывающих полный лизис 1%-ный суспензии эритроцитов. Суспензию эритроцитов готовили из свежей эритроцитарной массы донорской крови путем трехкратного отмывания в физиологическом растворе в соотношении 1:10 и центрифугировали при 1,5 тыс. об ./мин. в течение 10 минут. Для получения осмотического гемолиза к суспензии эритроцитов добавляли равный объем дистиллированной воды. Степень гемолиза измеряли через 24 часа по поглощению надоса-дочной жидкости при А=540 нм на спектрофотометре СФ=26. Поскольку раствор экстракта ортилии имел собственную окраску, были поставлены дополнительные пробы на цвет препарата в соответствующих дозах. Полученные показатели поглощения учитывали при расчете активности испытуемого экстракта. Активность сухого экстракта ортилии однобокой, сухого экстракта панцерии шерстистой исследовали в широком диапазоне концентраций: от 0,1 до 1,0 мг/мл. Исследование проводили в трехкратной повторности. Действие разных концентраций фитоэкстрактов оценивали в процентах по отношению поглощения в контроле (без добавления испытуемых веществ в инкубационную среду) [7, 15].
Влияние сухих экстрактов ортилии однобокой и панцерии шерстистой на кинетику перекисного
окисления липидов определяли с помощью метода Fe2+ - индуцированной хемилюминесценции (ХЛ). В качестве индуктора ХЛ использовали 10-2 М раствор FeSO4. Измерение интенсивности ХЛ проводили с помощью хемилюминометра «PXL-01» (Россия) [14]. Инкубационную смесь помещали в термостатируемую ячейку (t=37o C), находящуюся в затемненной камере. В качестве модельной системы использовали суспензию ли-попротеидов яичного куриного желтка, которую готовили из свежих куриных яиц и фосфатного буфера (20 мМ KH2PO4, 10 мМ KCl, pH 7,4), взятых в соотношении 1:1. Концентрация СЭОО в инкубационной системе составляла от 0,01 до
1,0 г/л. Регистрировали следующие параметры: амплитуда «быстрой вспышки» ХЛ (I б.в.), скорость ХЛ на начальной экспоненциальной стадии «медленной вспышки», определяемой как тангенс угла наклона кинетической кривой «медленной вспышки» (tg5), амплитуду «медленной вспышки» (Н.м.в.) [14,15]. По зарегистрированным уровням хемилюминесценции различных доз сухого экстракта ортилии однобокой, сухого экстракта панцерии шерстистой графически определяли концентрацию испытуемого средства, при которой наблюдали ингибирование хемилюминесценции на 50% (С1/2), используемую для расчета антиокислительной активности (АОА) полученного экстракта:
1
АОА= “(г/л) -1
с1/2
Исследование антиоксидантной активности указанных сухих экстрактов ортилии однобокой и панцерии шерстистой проводили с применением методов in vitro. Фракционирование сухих экстрактов проводили методом градиентной жидкофазной экстракции с применением ряда растворителей: сухого экстракта C. hastata - гексан, хлороформ, этилацетат, н-бутанол; сухого экстракта O. Secunda-хлороформ, этилацетат, н-бутанол (в ходе фракционирования наблюдалось выпадение межфазного осадка, который также подвергали исследованию); сухого экстракта P. lanata - гексан, хлороформ, этилацетат.
Определяли общую антиоксидантную емкость (TAC) исследуемых средств, антирадикаль-ную активность (DPPH), влияние исследуемых средств на динамику перекисной деградации ß-каротина (CBA) [10, 11, 16].
Выявлено, что сухие экстракты ортилии однобокой и панцерии шерстистой обладают выражен-
ными антиоксидантными свойствами. Установлено, что фитоэкстракт ортилии однобокой уменьшает амплитуду «медленной вспышки» с 79,06% до 0. Эффективная действующая концентрация по двухкратному уменьшению tg угла наклона «медленной вспышки» (С 1/2) составляет 0,021 г/л. Рассчитанное численное значение параметра антио-кислительной активности (АОА) данного средства составляет 47,6 (г/л)-1. При исследовании влияния сухого экстракта панцерии шерстистой на кинетику Fe2+ - индуцированной хемилюминисценции (ХЛ) выявлено, что испытуемое средство обладает умеренно выраженными антиокислительными свойствами. Эффективная действующая концентрация по двухкратному уменьшению tg угла наклона медленной вспышки (С 1/г) составляет 0,345 мг/мл, а рассчитанное численное значение параметра антиокислительной активности (АОА) составляет 2,90 (г/л)-1. Концентрация сухого экстракта панцерии в инкубационной системе составляла от
0,03 до 1,0 мг/мл [14, 15].
Предполагая равномерное распределение фитоэкстрактов по тканям всего организма, концентрация данных средств in vitro 0,1 мг/мл соответствует экспериментально-терапевтической дозе -100 мг/кг массы животных. При присутствии экстракта ортилии однобокой в модельной системе многослойных липосом в данных количествах регистрируется ингибирование процессов перекисного окисления липидов (по данным хе-милюминесцентного анализа) на 90%. При присутствии экстракта панцерии в модельной системе многослойных липосом в данных количествах регистрируется ингибирование процессов ПОЛ (по данным хемилюминесцентного анализа) на 40-45%.
Данное обстоятельство позволяет предположить, что антиоксидантные свойства фитоэкстрактов могут вносить определенный вклад в обеспечение механизмов их фармакологического действия, в качестве корректора состояний свободнорадикальной патологии.
Так как в основе патологических изменений любой воспалительной реакции лежат процессы свободнорадикального окисления липидов, интересным представлялось определение мембраностабилизирующих свойств испытуемого фитоэкстракта.
Установлено, что экстракт ортилии вызывает значительное снижение степени осмотического гемолиза (в среднем на 51,4-60,2%); причем процент гемолиза имеет тенденцию к снижению при
повышении концентрации препарата в реакционной среде. Данный фитоэкстракт также вызывает уменьшение процента гемолиза эритроцитов, индуцированного добавлением в модельную систему in vitro реактива Фентона. При этом испытуемое средство в диапазоне концентраций от 0,1 до
1,0 мг/мл снижает гемолиз в 2 раза по сравнению с контролем.
Изучение мембраностабилизирующего действия сухого экстракта панцерии шерстистой проводили в концентрациях от 0,02 до 0,8 мг/мл с реактивом Фентона. Действие разных концентраций фитоэкстракта оценивали в процентах по отношению поглощения в контроле (без добавления испытуемых веществ в инкубационную среду). Испытуемое средство вызывает значительное снижение степени осмотического гемолиза (в среднем на 63,2-80,4%); причем процент гемолиза имеет тенденцию к снижению при повышении концентрации препарата в реакционной среде. Данный фитоэкстракт также вызывает уменьшение процента гемолиза эритроцитов, индуцированного добавлением в модельную систему in vitro реактива Фентона. При этом испытуемое средство в диапазоне концентраций от 0,02 до 0,4 мг/мл снижает величину исследуемого параметра до 54,3-69,5% от уровня контрольных значений. А в концентрации 0,8 мг/мл проявляет более высокую активность (процент гемолиза снижается в 2,2 раза).
Отмеченное уменьшение степени гемолиза эритроцитов, возможно, обусловлено ингибированием образованных при распаде реактива Фентона гидроксильных радикалов под влиянием соединений, наличествующих в использованном экстракте. Вследствие этого предотвращается инициация перекисного окисления липидов и повышается устойчивость эритроцитарных мембран.
Сопоставление результатов, полученных в описанных выше сериях экспериментов, позволяет заключить, что сухие экстракты ортилии однобокой, панцерии шерстистой обладают мембраностабилизирующими свойствами, причем данный вид активности более выражен в условиях моделирования в экспериментах in vitro осмотического, нежели перекисного гемолиза.
Наличие у фитоэкстрактов мембраностаби-лизирущих свойств может рассматриваться как один из составных механизмов, реализующих его специфическое действие, обеспечивая целостность клеточных мембран и мембран субклеточ-
ных органелл от повреждающего действия лизо-сомальных ферментов.
Кроме того, в результате исследования способности к восстановлению биологического субстрата в условиях in vitro установлено, что общая антиоксидантная емкость сухого экстракта ортилии однобокой наибольшая из всех исследуемых средств (384,56 мг/г). Антирадикальная активность сухого экстракта ортилии однобокой составляет 4,79 мкг/мл и превышает таковую стандартного антиоксиданта кверцетина (9,93 мкг/мл). Изучение химического состава и данные ВЭТСХ-аутографии показали, что наличие фенольных соединений (флавоноидов, фенил-пропаноидов, фенольных кислот) обусловливает наличие данного вида биологической активности [10, 11, 16]. Результаты проведенных исследований дают основание рассматривать указанные экстракты в качестве потенциальных антиокси-дантных агентов.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что общим молекулярно-клеточным механизмом действия испытуемых фитоэкстрактов является наличие выраженной общей антиок-сидантной активности, связанной как с прямым радикалперехватывающим действием фенольных соединений, входящих в их состав, так и опосредованным, связанным с хелатирующей активностью и активацией эндогенной антиоксидантной системы организма. Подтверждением антиради-кального механизма и стабилизации клеточных мембран под влиянием растительных средств служат также полученные данные о снижении перекисного гемолиза эритроцитов, вызываемого реактивом Фентона. Наблюдаемое снижение гемолиза, очевидно, обусловлено ингибированием гидроксильных радикалов, образующихся в реакции Фентона, благодаря чему предотвращается инициация СРО и повышается устойчивость эритроцитарных мембран к окислительным процессам.
Полученные данные аргументируют целесообразность применения сухих экстрактов ортилии однобокой и панцерии шерстистой в гинекологической практике в комплексе с другими лечебнопрофилактическими мероприятиями при заболеваниях матки и ее придатков, которые протекают с нарушениями в эндокринной, половой, нервной, сосудистой и других системах, и требуют длительного лечения. Многогранность действия лекарственных растительных средств, высокая эффективность, безвредность, удобство в приме-
нении превращает фитотерапию в незаменимый компонент оптимизации комплексного лечения заболеваний матки и ее придатков.
Литература
1. Айламазян Э.К., Пономаренко Г.Н., Конари-нам Е.Ф. Инфракрасная лазеротерапия в комплексном лечении больных с хроническим сальпингоофоритом // Вопр. Курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. - 2005. - № 6. - С. 21-23.
2. Бураева Л.Б., С.С. Ломбоева. Противовоспалительное действие сухого экстракта ортилии однобокой // Разработка и внедрение новых методов и средств традиционной медицины. - М., 2001. - Т.2. - С. 182185.
3. Брюханов В.М., Зверев Я.Ф., Санаров Е.М., Пензина Т.Н., Керашева С.И. Сравнительное изучение мочегонного и противомикробного действия растений семейства грушанковых и толокнянки в эксперименте // Фармакология водно-солевого обмена и почек: материалы V Всерос. науч. конф. - Чебоксары, 1997. -С.12.
4. Каганова М.А. Клинико-иммунологические аспекты патогенеза хронических воспалительных заболеваний придатков матки, пути коррекции: автореф. дис... канд. мед. наук. - Самара, 2007. - 23 с.
5. Канищева А.Ю. Клинико-микробиологическая и морфологическая характеристика хронических воспалительных заболеваний органов малого таза у женщин и их связь с инфекциями, передаваемыми половым путем: автореф. дис. д-ра мед. наук. - М., 2003. -54 с.
6. Куклина Л.Б., Изатулин В.Г., Федосеева Г.М., Красникова И.М. Фармакологическое и химическое исследование ортилии однобокой // Тибетская медицина: традиции, перспективы, интеграция. - Улан-Удэ: Изд-во БНЦ СО РАН, 1997. - С. 57-58.
7. Ломбоева С.С., Танхаева Л.М., Асеева Т.А. Разработка способа получения сухого экстракта ортилии однобокой и его стандартизация // Мат-лы науч.-практ. конф., поев. 70-летию службы ККЛС в Бурятии.
- Улан-Удэ, 2003. - С. 82-85.
8. Ломбоева С.С., Олейников Д.Н. Органические кислоты Orthilia secunda (L.) House // Биологически активные добавки и перспективы их применения в здравоохранении: материалы науч.-практ. конф. - Улан-Удэ, 2003. - С. 31-32.
9. Николаев С.М., Ботоева Е.А., Бураева Л.Б., Ломбоева С.С. Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на течение экспериментального эндометрита // Сиб. мед. журн. - 2002. - № 5. - С. 78-81.
10. Олейников Д.Н., Цыренжапов A.B., Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Николаев С.М., Бураева Л.Б. Кардиопротекторное действие органических кислот листьев Cacalia hastata L. // Здоровье и образование в XXI веке: материалы IV Междунар. науч.-практ. конф.
- М., 2003а. - С. 467-468.
11. Олейников Д.Н., Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Маркарян A.A. Методика количественного определения суммарного содержания органических кислот в растительном сырье // Растительные ресурсы. -2004а. - Т.40. - Вып.3. - С. 112-116.
12. Пензина Т.Н. Фармакологическая активность некоторых растений семейства грушанковых в эксперименте: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Барнаул, 1999. - 25 с.
13. Телятьев В.В. Полезные растения Центральной Сибири. - Иркутск: Вост.-Сиб. кн. изд-во, 1985.
- 417 с.
14. Чукаев С.А., Ботоева Е.А., Бураева Л.Б., Ломбоева С.С. Антиоксидантные и мембраностабилизирующие свойства сухого экстракта ортилии однобокой // Человек и лекарство: материалы VIII Рос. нац. конгр.
- М., 2001. - С.636.
15. Шурыгина Ю.Ю. Противовоспалительное действие экстракта панцерии шерстистой: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Улан-Удэ, 2000. - 20 с.
16. Olennikov D.N., Mikhailova T.M., Tankhaeva L.M., Nikolaeva G.G., Nikolaev S.M. Biologically active substances from Cacalia hastata leaves. 4. Phenolic acids // Chemistry of Natural Compounds. - 2005 - V41. - №2.
- P.222-223.
Ботоева Елена Аполлоновна - кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии с курсом педиатрии Бурятского государственного университета. 670002, ул. Октябрьская, 36, Улан-Удэ, тел.: (3012) 448255. E-mail: [email protected]
Botoeva Elena Apollonovna - candidate of medical sciences, associate professor, department of obstetrics and gynecology with pediatrics course, Buryat State University. 670002, Oktyabrskaya str., 36, Ulan-Ude, tel.: (3012) 448255. E-mail: [email protected].
УДК 612.033.72 Е.А. Ботоева
ВЛИЯНИЕ ФРАКЦИЙ, ИЗВЛЕЧЕННЫХ ИЗ ОРТИЛИИ ОДНОБОКОЙ,
НА РЕПРОДУКТИВНУЮ СИСТЕМУ БЕЛЫХ КРЫС В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
В статье приведены результаты исследования влияния фитоэкстрактов на репродуктивную систему. Ключевые слова: экспериментальная фармакотерапия, растительные препараты.
E.A. Botoeva
THE INFLUENCE OF FRACTIONS EXTRACTED FROM ORTHILIA SECUNDA ON REPRODUCTIVE SYSTEM OF WHITE RATS IN EXPERIMENT
In the article the results of research on influence ofphytoextracts on reproductive system have been revealed. Keywords: experimental pharmacotherapy, vegetative preparations.
Целью данного исследования явилось изучение влияния хлороформной, этилацетатной, бута-нольной, водной фракций, извлеченных из ортилии однобокой, на баланс гонадотропинов в сыворотке крови на активных стадиях астрального цикла, массу репродуктивных органов и состояние эндометрия у белых крыс.
Результаты проведенных исследований показали (табл. 1), что введение испытуемых веществ вызывает изменения, сходные с наблюдавшимися при введения эстрогенов. Из таблицы следует, что в дозе 30 мг/кг массы животных эстрогеноподобным действием обладает хлороформная и этилацетатная фракции, повышая содержание фолликулостимулирующего и лютеинизирую-щего гормонов в крови крыс в активные стадии эстрального цикла. При этом изменение содержания ФСГ было более выраженным, чем изменение содержания ЛГ. Хлороформная фракция увеличи-
вала уровень ФСГ в стадии проэструса на 44%, в стадии эструса - на 30%. Этилацетатная фракция увеличивала уровень ФСГ в стадии проэструса на 16%, в стадии эструса - на 55%. Полученные результаты исследований свидетельствуют о стимулирующем влиянии ортилии однобокой на гонадотропную активность гипофиза, вследствие чего, возможно, и происходит стимуляция стеро-идогенеза в яичниках у животных.
Известно, что стероидные гормоны (эстрогены) осуществляют свое основное влияние на органы половой сферы - матку и яичники [4, 5,
6, 7]. В результате проведенных исследований установлено увеличение массы матки и яичников при введении фракций, извлеченных из ортилии однобокой. Полученные результаты показывают, что при введении хлороформной и этилацетатной фракций также выявлено наиболее значительное увеличение массы и яичников (на 23,5 и 29,8%
