CC BY
15
ЛИТЕРАТУРА
1. Noisy in New-Iork City and todevelop Me ans of abatingit. Noisi abatement comission, 1930, 30S стр. Отчет комиссии; в приложении специальные доклады экспертов; библиографические указания. —2. Heinrick Hoettge, Weniger Zarin, Vetkehrstechnik, № 9, 1935,- 3.W a g n e r Willi, Das Zarmprobleme vom Standpunkt des Ingenieurs, V. D. I. № 22, 1933.—4. Max Mengeringhausen, Geräuschlose Wasserleitungen, Gesundheits ingenenieuer, №11,1933.—5. Hämmer, Schallbeher-schung, Bauwelt, № 18, 1935 (о бесшумных конструкциях). —6. Sauter, Schall, Erschütterungen, Hörsamkeitschriften aus den Cetzten Jahren Bauwelt, 1935, стр. 42!, В работе собрана исключительно богатая библиография.—'7. Zeller W., Bibliographie über Boden-und gebäudeschwingungen Lärm. Fahrzeugschwingungen. Berlin. VDI. Verlag. 71; 1933 (834 работы, из них-250 английских и французских).
Из новейшей русской литературы можно указать:
1. Н. А. В о л ко в, Защита зданий и помещений от шума и сотрясений, Строитель И, 1934 (общие принципы, звукоизоляционные материалы и мероприятия). —2. Бронштейн, О городских шумах, Сорегор. № 8, 1935. Изоляция от шума и сотрясений в больничном строительстве, Вестник стандартизации, № 5—6, 1932. Реферат по ст. из журнгла Zschr. f. d. ges. Krankenhausurssen.—3. A p к и н Д., Борьба с шумом и звукопроводнос!ью (реферат). Фронт науки и техники, № 5 -6, 1934.
3. В. ЛАЩИЛИНА (Пятигорск)
К вопросу о бактериофаге в бутылочных минеральных водах
Из отдела курортной гигиены Государственного центрального бальнеологического института (зав. отделом Л. А. Лебедев)
Вопрос о нахождении бактериофага в воде не является новым, но в доступной нам литературе мы не нашли указаний на обнаружение лизйрующего начала в бутылочной минеральной воде, что, несомненно, имеет определенное практическое значение. Литический агент обнаружен нами в бутылочной воде чисто случайно.
При проведении опытов с бутылочной минеральной водой, зараженной штаммами кишечной палочки (в одном случае штаммом А, выделенным непосредственно из воды, в другом — штаммом В, выделенным непосредственно из faeces), мы натолкнулись в обоих случаях на явление диссоциации введенных в опыт штаммов.
Для заражения пользовались различными бутылочными минеральными водами как в газированном, так и в дегазированном состоянии, хранившимися при температуре 15°: нарзаном, славяновской, смирновской, ессентуками № 4, 17—20.
Производя обычные при санитарно-бактериологических исследованиях посевы воды на число колоний, уже в первые дни после заражения мы отмечали на чашках Петри различные типы колоний.
Эти явления наблюдались в отношении всех минеральных вод, как газированных, так и дегазированных, вне зависимости от различия штаммов В. coli.
Почти из всех бутылок в известный период хранения их высевались преимущественно два типа колоний: одни — крупные, в 3—8 мм (за исключением крупных Ъ—3 мм колоний R-форм), флюоресцирующие, растекающиеся, постепенно
переходящие в остекляневшие прозрачные колонии. В дальнейшем, при пересевах воды, от этих колоний оставались только голубоватые, прозрачные, едва заметные тени. 'При этом некоторые варианты крупных колоний утрачивали способность концентрировать фуксин на среде Эндо и давать металличность. При микроскопии этих колоний иногда можно было наблюдать плохую окрашивае-мость и зернистость плазмы бактериальных клеток.
Другие колонии — мелкие (0,2—0,4 мм), серовато-кремовые, непрозрачные, слегка блестящие, часто дававшие при микроскопии инкапсулированную небольшую -грамнегативную палочку.
■Сочетание некоторых особенностей, «ультуральных, морфологических и других свойств этих форм кишечной палочки натолкнуло нас на мысль о возможности присутствия здесь феномена Творт-д'Эрелля.
Дальнейшие наблюдения в этом направлении подтвердили наши предположения.
Из экспериментально зараженной бутылочной минеральной воды нами было выделено два штамма бактериофага (или, как его называют многие исследователи, «литического агента»): один—-из партии воды, зараженной штаммом кишечной палочки А, другой—-из партии В.
Штаммы бактериофагов, соответственно штаммам культур, назовем также фагАифагВ.
И тот и другой штаммы бактериофага были выделены с чашек Петри.
При непосредственном посеве воды на чашки с мясо-пептонным агаром pH—7,4 на 'последних были обнаружены спонтанно стерильные пятна.
Кроме двух-трех случаев обнаружения лизирующего начала, описанных в данной работе, нами неоднократно наблюдались стерильные пятна больших размеров (1—2 мм), получаемые спонтанно при непосредственном посеве на число колоний, незараженной, обычной бутылочной минеральной воды (в большинстве случаев при достаточно длителы?ом сроке хранения ее), что, повидимому, указывает на известную активность бактериофага, находящегося в воде.
Активность же фага, как мы знаем, связана непосредственно с активностью размножения бактериальной флоры. iK этому вопросу мы еще вернемся.
Переходя к изложению результатов проведенных опытов, мы должны отметить, что штамм бактериофага А оказался более активным, чем штамм В, и поэтому ббльшую часть опытов мы провели с первым.
Штамм фага А был выделен при посеве на количество колоний зараженной газированной водой ессентуки № 20 из расчета 100 000 бактериальных единиц на 1 см3 воды.
Бактериофаг В выделен был также из газированной воды ессентуки № 4, зараженной из расчета приблизительно 50 бактериальных клеток на 1 см3 воды.
Проводя первые опыты по выявлению фага А при пересеве подозрительного материала в пептонную воду, мы наблюдали через 48 часов в жидкой среде картину спонтанной крупнохлопчатой агглютинации при совершенно прозрачной среде. Подобные явления можно было наблюдать при ряде пассажей данного субстрата через жидкую среду.
Для проведения опытов (свыше 200) с бактериофагом А было взято несколько штаммов кишечной палочки, выделенных непосредственно из простой воды, минеральной и из faeces, а также были взяты патогенные виды кишечной группы «typhi и abdominalis» паратифа А и В.
Некоторые опыты проводились нами комбинированным методом, в частности были проведены опыты с двумя штаммами кишечной палочки не только для выявления лизирующей способности и силы фага или чувствительности данных культур, но и с целью выяснения диффузных свойств фага.
Методика этих опытов была такова. Петля бактериальной эмульсии, содержащей в одном случае культуру кишечной палочки одного из указанных выше штаммов, в другом — смесь водных неспороносных микробов вносилась в 1 см3 стериальной воды, которая выливалась в стерильную чашку Петри и заливалась агаром, как при обычном посеве воды на количество колоний. После застывания агара на поверхность его снова наливался такой же слой агара и уже на поверхности второго, верхнего слоя агара засевался шпаделам субстрат лизирующего начала с кишечной палочкой. Через 24 часа после пребывания чашек в термостате на верхнем слое агара появилось много стерильных пятен, а в нижнем слое наблюдался обильный рост мелких колоний. Через 48 часов в нижнем слое отмечался некоторый лизис колоний, а через 5—6 дней уже ее было никаких признаков роста бактериальной флоры. Это явление наблюдалось на -всех без различия чашках со штаммами как кишечной палочки, так и водных бактерий.
Таким образом в результате этих наблюдений можно было констатировать явления диффузии фага в коллоид среды — в агар.
Небезынтересно отметить также ряд опытов (40), проведенных внутриагаровым методом, которые при известных условиях почти во всех случаях (т. е-, со всеми подвергавшимися испытанию культурами) дали положительный результат в отношении деятельности фага даже в период ослабления его активности.
Эти опыты ставились двумя способами и производились почти без прогревания (в период ослабления активности фага).
В одних случаях субстрат смешивался с агаром при температуре 50°, в других —• при 70°. В обоих случаях агар сейчас же после тщательного смешивания выливался на чашку. По застывании агара на поверхности его ¡производился петлей засев различных культур без предварительного прогревания субстрата.
При этом наблюдалось следующее интересное явление: в первом случае (смесь субстрата с агарам при температуре 50°) на секторах не обнаруживалось роста ни одной из введенных в опыт культур, и :в частности даже «1урЬ», тогда как во втором случае (смесь субстрата с агаром при температуре 70°) на чашках наблюдался рост большинства культур, хотя и не такой .пышный, как на контрольных чашках. Результаты опытов оказались одинаковыми во всех 40 случаях.
¡Из опытов с бактериофагом А можно сделать следующие выводы.
Бактериофаги способны лизировать, т. е. растворять ряд культур (несколько штаммов кишечной палочки и некоторые штаммы водных бактерий). Другими словами, этот штамм обладает некоторой поливалентностью, которая, возможно, является следствием привыкания фага (д'Эрелль) в воде не только к кишечной палочке, ¡в данном случае количественно подавляющей, но и к другим видам бактерийной флоры, т. е. к той ассоциации водных микробов, которые могут находиться в воде. Возможно, что эта поливалентность объясняется ¡смесью независимых фагов (Дроботько, 'Бронфенбреннер).
Бактериофаги могут диффундировать на известном протяжении в толщу коллоида среды (агара). Подобные явления отмечает также в своих опытах советский исследователь Скородумов (Тифлис).
Фаг в определенной генерации с некоторыми культурами может давать стерильные пятна больших размеров, что расценивается некоторыми последователями как показатель силы бактериофага.
При совместном выращивании литического агента с культурами иногда появлялась зеленая пигментация жидкой среды, интенсивность окраски которой менялась, повидимому, в зависимости от степени •активности фага. Так, например, в период образования больших стерильных пятен окраска получалась особенно яркой, при ослаблении же фага ояа была едва заметной.
Штамм этого фага, вопреки общепринятому мнению, обладает небольшой термоустойчивостью и в первые сутки .почти не дает просветления жидкой среды, которое в большинстве случаев наступает только на 4—6 день.
В этот же период иногда можно наблюдать при микроскопии жидкого субстрата шаровидные фракции и полное отсутствие бактериальных клеток.
Наконец, необходимо отметить еще одно свойство -этого штамма — большое понижение активности фага после ряда генераций. По наблюдениям Дерра, после 15-.ro пассажа культура делается нормальной-
Помимо указанных штаммов, выделенных из зараженной воды, литический агент был найден в свеженалитом нарзане (февраль 1936 г.), через пять дней после налива. Нами было проведено несколько опытов с этим штаммом для подтверждения присутствия фага. Интересно отметить, что только вода из бутылки, где найден штамм, при посеве на число колоний дала О, тогда как при посеве воды из других бутылок получено от Г до 16 колоний в 1 см3. Эта же бутылка оказалась единственной в ряде других, которая дала брожение на среде Эйкмана и рост металлических колоний на среде Эндо, давших характерную картину для В. coli, но не продуцировавших индола.
Эти противоречивые с первого взгляда данные (с одной стороны, отсутствие роста микрофлоры при непосредственном высеве воды на чашки, с другой стороны, наличие брожения, а следовательно и роста флоры, в среде Эйкмана) можно объяснить следующим: при наличии в воде бактериофага он, повидимому, в определенный период задерживает рост бактериальных клеток, и поэтому при непосредственном посеве воды на твердую среду не обнаружено роста флоры. Посев этой же Ьоды в среду Эйкмана, содержащую сахар-глюкозу, дал рост. Возможно, что это объясняется угнетающим действием глюкозы на лизирующее начало (Казарновская) и, следовательно, повышением резистентности бактерий.
Наряду с указанными выше металлическими колониями на чашке Петри обнаружено 7 больших стерильных пятен, которые были перелиты для выявления лизирующего начала в пробирки с пептонной водой и помещены в термостат с температурой 37°. В течение 24 часов пробирки, за исключением одной, оставались прозрачными. Для контроля стерильности сделан пересев на твердую среду и в результате все 6 чашек Петри с мясо-пептонным агаром также оказались стерильными. Это дало основание предполагать, что и в данном случае оказывает свое действие лизирующее начало.
Для окончательной проверки этих предположений один из штаммов В. coli был подвергнут испытаниям по описанной выше методике, давшим в большинстве случаев положительные результаты, что подтвердило присутствие лизирующего агента.
Неоднократные выявления лизирующего начала в бутылочной минеральной воде и довольно частые наблюдения стерильных пятен на агаре (при непосредственном посеве воды) свидетельствуют о легкости обнаружения в этих условиях лизирующего начала. Возможно, что минеральная вода (по аналогии с химикалиями) в известной мере стимулирует развитие фага. Повидимому, минеральная вода, являясь неблагоприятной средой для жизнедеятельности микробов, в то же время не может полностью воспрепятствовать развитию бактериологической флоры, являющейся, по мнению большинства исследователей, необходимым условием повышения активности фага.
Но наряду с возможностью размножений бактериальной флоры в бутылочной минеральной воде через короткое время после разлива приходится констатировать и обратное явление — отмирание этой флоры в более поздние сроки хранения воды. Явления отмирания особенно ярко выражены в карантинных1 и экспериментально зара-
1 Карантинными водами называются бутылочные минеральные воды, не
удовлетворяющие предъявляемым к ним санитарно-бактериологическим требованиям {высокий колораж, низкий соН-титр и т. д.) и задержанные по этим при-
чинам на складах. ■ I
женных минеральных водах и преимущественно касаются тех вод, где первоначально имелось незначительное число колоний.
Результаты научно-исследовательской работы с бутылочной минеральной водой, зараженной В. coli с экспериментальной целью, из которой были выделены штаммы бактериофага, и данные массовых анализов производственного характера, произведенных одновременно для санитарно-бактериологического контроля длительно хранившихся карантинных вод, показали картину отмирания бактериальной флоры вообще, в частности В. coli, в известный период хранения вод. Таких анализов и опытов нами проведено свыше 300. Отмирание обычно выражается в снижении числа колоний после нескольких месяцев хранения воды с сотен тысяч до единиц (в экспериментально зараженных водах) и резком снижении процентного' содержания кишечной палочки, т. е. изменении coli-титра. Некоторые данные по карантинным водам опубликованы Акимовой и Ла-щилиной (Лабораторная практика, № 5, 1935).
Невольно возникает предположение, что в числе факторов, вызывающих постепенное отмирание бактериальной флоры в бутылочной минеральной воде (питательный субстрат pH среды, температура, С02 и др.), определенную роль играет и наличие бактериофага.
В связи с обнаружением бактериофага в бутылочной минеральной воде и возможностью вследствие этого распада белковой субстанции бактериальных клеток встает вопрос о влиянии подобных вод на организм человека, а значит и о санитарной оценке карантинных вод.
-• . Выводы
1. В бутылочных минеральных водах Кавминвода констатированы случаи обнаружения бактериофагов.
2. Лизирующее начало выделено из экспериментально зараженной бутылочной воды из бутылочной минеральной воды свежего налива.
3. Бактериофаг, возможно, играет не последнюю роль в дальнейшем отмирании бактерийной флоры в бутылочных минеральных водах.
4. Влияние фага на качество минеральных вод, в частности карантинных, требует в дальнейшем более углубленной проработки этого вопроса.
ЛИТЕРАТУРА
1. д'Эрель, Бактериофаг, перевод с франц. изд. 1922 г. под ред. С. В. Коршуна, Гиз, 1926.—2. Г а р д н е р, Микробы и ультрамикробы, перевод с англ. изд. 19.51 г. Н. В. Коган, Биомедгиз, 1935.—3. Р и в е р с, Фильтрующиеся вирусы,—4. Акимова и Лащилина, Лабор. практ., № 5, 1935.—5. Бибергал, Клин, мед., № 4, стр. 205, 1928.—6. Д роб от ь к о, Микробиол. жури., № 4, стр.205, 1928.- 7. Изобилен с к и й и Соболева, журн. эпидем. и микроб., № 3, 1934.—8. Казарновская, Бактериофагия, изд. Академии наук СССР, 1932,—9. Литературные обзоры, Вестн. микроб, и эпидем., № 2, 1927.—10. Скородумов, Лабор. практ., № 3, стр 3, 1931.
