CC BY
128
ПЕРСПЕКТИВЫ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
© А.Б. Мелентьев, 2001 УДК340.67: 615.212.7.074
А.Б. Мелентьев
К ПРОБЛЕМЕ ИНТЕРПРЕТАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА ВОЛОС И НОГТЕЙ НА ОПИАТЫ
Бюро судебно-медицинской экспертизы (нач. — проф. П.И. Новиков) Челябинской области
В статье приведены методика анализа волос на опиаты и результаты статистической обработки анализов волос и ногтей, проведенных в Челябинском областном бюро судебно-медицинской экспертизы в 19992000 г.г. Показана зависимость концентрации морфина в волосах от их цвета и половой принадлежности.
Указано, что высокий процент отрицательных анализов светлыхирьжих волос, по сравнению с более темными, может создавать трудности в интерпретации результатов анализа. При отрицательных результатах теста на опиаты светлых и рыжих волос нельзя с достаточной степенью надежности утверждать, что субъект не является хроническим потребителем наркотиков опийной группы. Для повышения достоверности тестов предлагается проводить одновременно анализ на опиаты волос и ногтей.
INTERPRETATION RESULTS OF HAIR AND NAIL ANALYSIS ON OPIATS
A.B.Melentyev
Chelabinsk
Method of hair analysis on opiats and the results of statistical hair and nail analysis in Chelabinsk forensic medicine department in 1999-2000 is presented in the article. Dependence between morphine concentration in hair, its color and sex has been shown. In order to rise the authentic of tests it is suggested to make hair and nail analysis together.
В последние годы, как за рубежом, так и в России, активно разрабатываются методики анализа волос на наркотические вещества с целью выявления фактов злоупотребления наркотическими веществами у военнослужащих, нарушителей правил дорожного движения, у лиц выполняющих потенциально опасную работу и др. [2, 6, 7]. В судебной химии анализ волос нанаркоти-ки производится с целью установления факта хронического злоупотребления по направлению органов следствия и суда, а также, для исключения случаев однократного факта приема наркотических средств, которые могут быть связаны с разовым введением наркотика с целью совершения противоправных действий. Факт хронического употребления наркотиков важен и для родителей, которые подозревают своих детей в употреблении наркотиков, для своевременного принятия мер по лечению и реабилитации.
В Челябинском областном бюро судебно-медицинской экспертизы тестирование волос на наркотические вещества проводится более четырех лет. Основной объём анализов проводится на морфин и кодеин, так как в нашем регионе героин — основной «тяжелый» наркотик из-за близости границ со странами Средней Азии. При анализе полученных за это время результатов нами отмечен довольно высокий процент отрицательных анализов волос при обнаружении метаболитов героина в крови и (или) моче. С целью выявления причин наблюдаемого явления проведен ста-
тистический анализ результатов тестирования волос на опиаты за последние два года.
В последние годы нами используется методика анализа волос на опиаты, разработанная в нашем бюро, с применением для дериватизации масляного ангидрида, ниже приведено описание методики и основные её характеристики. Методика предназначена для количественного определения в волосах и ногтях общего морфина и кодеина. Применяемые нами ранее методики с использованием для дериватизации пентафтор-пропионового и гептафтормасляного ангидридов, хотя и обладали более высокой чувствительностью, но оказались очень требовательными к условиям хранения и использования этих реактивов. Это в условиях серийных анализов иногда приводило к полной потере целых серий анализируемых образцов. К тому же высокая цена этих импортных реактивов также играет немаловажную роль. Применение дешевого отечественного масляного ангидрида в наших условиях оказалось более технологичным, так как хранение его не требует особых условий, а получаемые дериваты стабильны, по крайней мере, в течение месяца.
Методика химического анализа волос на опиаты
Проба волос или ногтей (около 150 мг) промывается в течение нескольких минут 5 мл. воды и 2 мл. ацетона, промывные жидкости сливаются и не исследуются. Промытые волосы сушатся при комнатной температуре в токе воздуха, измельчаются ножница-
ми и во флакон отвешивается проба волос — 100 мг. К объекту добавляется 2 мл 10% соляной кислоты и 20 мкл раствора внутреннего стандарта (0,02 г/л этилмор-фина г/х). Смесь обрабатывается в ультразвуковой бане 5 минут, нагревается при 90оС 1 час в закрытом флаконе и охлаждается. Кислота частично нейтрализуется 0,2 мл 30% раствора NaOH, добавляется около 100 мг бикарбоната натрия до образования насыщенного раствора, по индикаторной бумаге «Рифан» проверяется рН среды (8,3-8,6). Опиаты экстрагируются 5 мл смеси хлороформ-изобутанол (6:1) в течение 10 минут. Органический слой отделяется и пропускается через патрон с безводным сульфатом натрия и растворитель выпаривается досуха в токе воздуха. К сухому остатку добавляется по 40 мкл триэтиламина и масляного ангидрида, смесь нагревается в закрытом флаконе 30 минут при 90оС. После охлаждения жидкости во флакон добавляется 0,5 мл 1 н раствора соляной кислоты и 2 мл гексана, смесь встряхивается 1 минуту и помещается на 30-40 минут в морозильное отделение холодильника до замораживания водного слоя. Верхний гексановый слой сливается, а к водной фазе добавляется 0,6 мл 1 н раствора едкого натра, проверяется рН среды по универсальному индикатору (более 9) и объект экстрагируется 3 мл этилацетата в течение 5 минут, водный (нижний) слой удаляется, а органический слой обезвоживается с помощью сульфата натрия и испаряется досуха. К сухому остатку добавляется 100 мкл этилацетата и 1-1,5 мкл анализируется методом газовой хроматографии с масс — селективным детектором в режиме SIM по ионам 369, 282,229 (кодеина масляный эфир), 383,296,354 (этилморфина масляный эфир — внутренний стандарт), 355,268,425 (морфина масляный эфир).
Газохроматографический анализ проводился на газовом хроматографе НР-5890 (серия II) с масс — селективным детектором НР-5972 фирмы «HEWLETT PACKARD» колонка капиллярная НР-5-MS длиной 30 м., внутренним диаметром 0,25 мм, начальная температура колонки — 120оС, выдержка 1,0 мин., увеличение температуры со скоростью 20 град/мин до 300°С с выдержкой при конечной температуре — 7 минут. Режим постоянного потока «Constant flow» — 1,1 мл/мин. Начальное давление на колонке 13 psi. Температура инжектора 250оС, устройства сопряжения с детектором — 285оС. Ввод пробы без разделения потока со сбросом избытка через 1мин. в отношении потоков 1:15 (Split/Splitless). Вводимый объем образца в этилацетате 1-1,5 мкл. Ре-
гистрация ионного тока осуществляется после задержки на выход растворителя — 10 мин. после ввода пробы. Напряжение на электронном умножителе на 600 вольт выше «А^о^пе». Как исключение, при недостатке волос нами проводится анализ из навески волос 50 мг при соответствующем уменьшении объёма внутреннего стандарта и объёма реконструирующего растворителя перед газохроматографическим анализом.
Нарис. 1 приведены масс-спектры электронного удара масляных эфиров морфина, кодеина и этилморфина. Предел обнаружения морфина и кодеина по данному методу 0,2 нг/мг волос. Линейность — 0,2 -10 нг/мг. На рис. 2 приведена типичная хроматограмма по характеристическим ионам, полученная при анализе волос героинового наркомана.
Статистический анализ
В выборку для статистического анализа попали экспертизы (в основном от трупов), проведенные в 19992000 г.г., в которых опиаты обнаружены в волосах, крови или моче (часто в трех или четырех объектах одновременно). Всего в выборку попало 122 экспертизы с анализами волос и ногтей. В качестве основных признаков, по которым дифференцировали волосы, был их цвет и половая принадлежность. Для оценки влияния цвета волос и половой принадлежности на концентрацию общего морфина в волосах и ногтях использовали дисперсионный анализ. Сортировка по цветуволос, который определялся визуально, проводилась по следующим категориям: каштановые, рыжие, светло-русые, русые, темно-русые и черные. Распределение выборки по цветам волос приведено на рис. 3. Для каждого цвета волос рассчитывались средние концентрации в них морфина, долю отрицательных результатов анализа волос на опиаты (при наличии морфина в крови или моче) и средние концентрации морфина в ногтях (для каждой группы по цвету волос).
Обсуждение результатов
В таблице 1 приведены основные статистические характеристики выборки по анализу волос и ногтей. Наличие связи между цветом волос и концентрацией в них морфина выявлено с высокой долей вероятности (уровень значимости < 0,001) и иллюстрировано на рис. 4. Это явление известно и ряд авторов изучали накопление наркотических веществ в волосах и шерсти животных в зависимости от цвета волос и содержания в них меланина [3-5] и получали аналогичные результаты.
Таблица 1.
Основные статистические характеристики результатов анализа волос и ногтей на содержание морфина
Концентрация общего морфина Количество наблюдений Средняя величина, нг/мг Среднеквадратичное отклонение Минимум -максимум
В волосах 122 1,86 1,17 0 - 29,9
В ногтях 17 7,09 2,94 0,2-27,8
а)
б)
Abundance
в)
Abundance
Рис.1. Масс-спектры электронного удара масляных эфиров: а) морфина, б) кодеина, в) этилморфина.
Abundance
Рис. 2. Хроматограмма по характеристическим ионам экстракта волос героинового наркомана.
Каштановые Рыжие Св.-русые Черные Темно-русые Русые
Цвет волос
Рис. 3. Распределение выборки по цвету волос.
Цвет волос
Рис. 4. Зависимость средней концентрации морфина от цвета волос.
0,6000
0,5000
0,4000
к
ц
сі 0,3000
0,2000
0,1000
0,0000
Цвет волос
Рис. 5. Зависимость доли отрицательных анализов волос на морфин от цвета волос.
Однако обращает на себя внимание не столько зависимость средней концентрации морфина в волосах от их цвета, сколько зависимость доли отрицательных анализов волос на морфин от их цвета (рис. 5). Эта зависимость имеет значение при интерпретации результатов анализа. Если около пяти процентов отрицательных анализов черных и темно-русых волос можно объяснить возможностью случайного разового отравления героином при отсутствии его систематического потребления, то высокий процент отрицательных анализов рыжих (50%) и светло-русых волос (26,7%) этим объяснить уже нельзя. Наличие такого высокого процента отрицательных результатов анализа волос (при наличии морфина в крови или моче) существенно затрудняет интерпретацию результатов. Одним из объяснений наблюдаемого явления может быть то, что светлые и рыжие волосы чаще подвергались окраске или обесцвечиванию. В литературе описаны исследования, посвященные влиянию обесцвечивания, окраски и завивки волос на концентрацию в них наркотиков [1,3]. Отмечается, что любые воздействия на волосы, приводящие к изменению концентрации в них меланина, приводят к изменению концентрации в них наркотиков. Обесцвечивание волос, химическая окраска и завивка, длительное выветривание или вымывание приводят обычно к уменьшению концентрации наркотика в волосах и ногтях [1].
Так как окраска волос и их обесцвечивание характерны, в основном для женщин, то половая принадлежность может служить некоторой мерой влияния химического и термического воздействия на концентрацию морфина в волосах. Доля женских волос в выборке была всего 7,4% (9 экспертиз). Причем среди них не было черных и темно-русых. Средняя концентрация морфина в женских волосах (независимо от их цвета) была ниже -
0,58 нг/мг, чем в среднем по выборке — 1,86 нг/мг. Доля отрицательных экспертиз среди женских волос— 11% была, тем не менее, сравнима со средней по выборке — 14,7%. Следовательно, обесцвечивание и химическая завивка волос, хотя и могут уменьшить концентрацию морфина в волосах, но только этими факторами нельзя объяснить высокий процент отрицательных анализов рыжих и светлых волос и наблюдаемое явление может быть объяснено очень низким естественным связыванием морфина светлыми и рыжими волосами. Из приведенных данных следует, что при отрицательных результатах анализа на опиаты светлых и рыжих волос нельзя с достаточной степенью надежности утверждать, что субъект не является хроническим потребителем наркотиков опийной группы. Выходом из этой ситуации может быть одновременный анализ волос и ногтей. По нашим данным средние концентрации морфина в ногтях выше — 7,09 нг/мг, чем в волосах этих же экспертиз — 2,5 нг/мг. Причем, нами не обнаружено значимой связи между цветом волос и концентрацией морфина в ногтях, за исключением относительно более высокой концентрации морфина в ногтях черноволосых субъектов — 12,5 нг/мг. Отсутствие зависимости концентрации морфина в ногтях от цвета волос по нашему мнению может быть связано с недостаточным объёмом данных анализа ногтей (17 экспертиз), несколько иным механизмом связывания морфина в ногтях, чем в волосах или более медленным их ростом по сравнению с волосами [1]. В любом случае, одновременный анализ волос и ногтей, по нашему мнению, повышает надежность тестирования. Вопросы же механизма связывания морфина в ногтях и определения существования зависимости между концентрацией морфина в ногтях и цветом волос субъекта нуждаются в дальнейшем исследовании.
Литература
1. Симонов Е.А., Изотов Б.Н., Фесенко А.В. Наркотики: методы анализа на коже, в её придатках и выделениях. — М.: «Анахарсис», 2000. — 130 с.
2. Alvares F.J., Carmen Del Rio M. // Lancet. — 1994. — № 8918. — P. 282.
3. Cirimele V., KintzP., Mangin P. // J. Anal. Toxicol. —1995 — V. 19. — № 5. —P. 331-332.
4. Cone E.J., Darwin W.D., Wang W.L. // Forens. Sci. Int. —1993. —V. 63. — P. 55-68.
5. NakaharaY., TakahashiK., KikuraR. //Biol. andPharm. Bull.— 1995.— V. 18. — №9. — P. 1223-1227.
6. SchutsH., Ahrens B., Erdmann F., Rochnols G., WeilerG. // Sriegel Fozsch. —1993. —V. 10. — №1. — P. 31-34.
7. WagnerH.-J., MoellerM.R. //Dtsch. Alztebl. — 1995. —V. 92. — № 44. — P. 2169-2171.
© А.Л. Ураков, А.П. Коровяков, М.В. Корепанова, А.П. Кравчук, Н.А. Уракова, 2001 УДК 616.8-009.831-085
А.Л. Ураков, А.П. Коровяков, М.В. Корепанова, А.П. Кравчук, Н.А. Уракова
ПОСТМОРТАЛЬНАЯ КЛИНИКО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКАВЛИЯНИЯ ИНФУЗИОННО ВВЕДЕННЫХ В СТАЦИОНАРЕ РАСТВОРОВ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ПРОЦЕСС ПРИЖИЗНЕННОГО РАЗВИТИЯ ГИПО- ИЛИ ГИПЕРОСМОТИЧЕСКОЙ КОМЫ
Кафедра общей и клинической фармакологии (зав. — проф. А.Л. Ураков) и кафедра общей и биоорганической химии (зав. — доц. А.П. Коровяков) Ижевской государственной медицинской академии
Предложен простой и доступный метод постморталъной экспертной оценки влияния инфузионно введенных в лечебном учреждении растворов лекарственных средств на процесс развития гипо- или гиперосмотической комы, основанный на отличии осмотической активности лекарственных средств от 280-300 мОсм/кг воды и делении их по этому показателю на 3 группы: гипо-, нормо- и гиперосмотические средства.
POSTMORTAL CLINICO-PHARMACOLOGICAL ESTIMATE OF INFLUENCE OF SOLUTIONS REMEDIES INFUSED IN HOSPITAL ON THE PROCESS OF VITAL DEVELOPMENT OF HYPO- OR HYPEROSMATIC COMA A.L. Urakov, A.P. Korovyakov, M.V. Korepanova, A.P. Kravchuk, N.A. Urakova
Izhevsk
A simple and accessible method of postmortal expert estimate of influence of solutions remedies infused in hospital on the development of hypo- or hyperosmatic coma, based on the difference between solutions osmatic activity from 280 till 300 mOsm/kg and its division into 3 groups: hypo-, norm- and hyperosmatic remedies is suggested.
Судьба умерших в стационаре не отделима от роли введенных в их организм лекарств также, как и судьба поправивших свое здоровье и выписавшихся из него, поскольку лекарства, как и болезни, могут являться причиной не только выздоровления, но и смерти [1,6,7]. Зачастую процессу смерти пациентов стационара предшествует процесс интенсивной лекарственной терапии путем инфузионного введения массивных объемов всевозможных жидких лекарственных средств в соответствии с различными рекомендациями по их правильному выбору и назначению [3, 9]. Однако современные руководства предусматривают далеко не все возможные клинические ситуации и не все вероятные осложнения лекарственных средств, поэтому именно лечащему врачу дается окончательное право выбора лекарств, их лекарственных форм, доз, объемов, концентрации и т.д. [8,9].
В процессе выбора лекарственных средств лечащий врач вынужден в целях своей юридической безопасности опираться на нормативно-технические документы, либо на рекомендации общепризнанных авторов. В частности, при инфузионном введении растворов лекарственных средств в процессе интенсивной терапии принято опираться на рекомендации по использованию в основном изотонических растворов в объеме около 5 л/сутки с целью дезинтоксикации [4].
Тем не менее, достижение эффективной дезинтоксикации при этом всегда сопряжено с опасностью, с одной стороны, чрезмерного увеличения объема циркулирующей крови [2], а с другой, по-нашему мнению, чрезмерного повышения осмотического давления плазмы. Причем особенно трудно разрешимой проблемой сегодня является последнее.
Дело в том, что научная литература, научно-техническая документация и отдельные фармакопейные статьи на лекарственные средства, производимые как в России, так и за рубежом, не содержат информации по осмолярности растворов лекарственных средств, за исключением рентгеноконтрастных [10]. В этихусло-виях лекарственные средства вводятся в организм пациентов без учета их потенциальной и реальной роли в водно-солевом обмене.
Для разрешения различных проблем общей и судебной патологии в связи с госпитальной смертностью, в частности больных сахарным диабетом, мы предлагаем проведение постмортальной клинико-фармакологической экспертизы, нацеленной на выяснение суммарной осмотической активности инфузионно введенных лекарственных средств и их возможной роли в изменении осмотического давления плазмы на момент смерти пациента. Как следует из полученных нами результатов не только глюкоза, рентгеноконтрастные
