CC BY
5УДК 613.63:621.61
Л.В. Луковникова, Г.И. Сидорин, Л.И. Дьякова, Н.И. Сходкина, М.А. Битти, О.С. Черкащенко
К ОБОСНОВАНИЮ ОБУВ ТРИАЗАВИРИНА ДЛЯ ВОЗДУХА РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
ФГУН «Северо-Западный научный центр гигиены и общественного здоровья», Санкт-Петербург
Представлены материалы по экспериментальному обоснованию ОБУВ для воздуха рабочей зоны нового противогриппозного препарата триазавирина. Приводятся параметры острой токсичности при различных путях введения, результаты оценки раздражающего и сенсибилизирующего действия, определения пороговой концентрации однократного ингаляционного воздействия, величина рекомендуемого ОБУВ р.з..
Ключевые слова : триазавирин, параметры токсичности, опасности, ОБУВ р.з..
L.V. Lukovnikova, G.I. Sidorin, L.I. Dyakova, N.I. Skhodkina, MA. Bittie, O.S. Tcherkashenko. Basing approximate safe level of exposure to Triazavirin in air of workplace. The authors present materials on experimental basis of approximate safe level of exposure to new anti-flu medication Triazavirin in air of workplace. The article covers acute toxicity parameters for various intake routes, results of irritating and sensitizing effects evaluation, determination of threshold concentration for single inhalation effect, value of recommended approximate safe level of exposure.
Key words: Triazavirin, toxicity parameters, jeopardy, approximate safe level of exposure
В современных условиях развития общества значительный вклад в загрязнение окружающей среды вносят предприятия по производству лекарственных препаратов. Гигиеническое регламентирование лекарственных средств, исследования их биологической активности, по мнению специалистов, имеют некоторую специфику [1, 3, 4]. Это обусловлено особенностями их промышленного производства (сочетание широкой номенклатуры лекарственных препаратов с небольшим объемом выпуска готовой продукции, прерывистым и многостадийным технологическим процессом, периодичностью годового производства) и направлением экспериментальных исследований, предшествующих промышленному синтезу.
В научной литературе практически отсутствуют сведения о токсичности и опасности триазавирина при поступлении через легкие, поэтому целью нашего исследования было изучение вредного действия аэрозоля названного препарата и обоснование гигиенического регламента (ОБУВ) триазавирина для воздуха рабочей зоны.
М а т е р и а л и м е т о д и к и. Триазавирин — натрия 7-метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1, 2, 4] триазоло[5,1-с] [1, 2, 4] триазин-1-ид дигидрат — является синтетическим аналогом пуриновых нуклеозидов (гуанина) с выраженным противовирусным действием.
Триазавирин — синтезированный оригинальный препарат для лечения гриппа (в том числе птичьего), крымской геморрагической лихорадки, западного и восточного энцефаломиелита и других альфавирусных, а также буньявирусных инфекций. Минимальная суточная терапевтическая доза препарата составляет 0,5 г; высшая суточная доза — 1,0 г. При приеме внутрь триазавирин трансформируется в активный метаболит, обладающий противовирусной активностью. В основе механизма действия — ингибирование синтеза вирусных РНК, ДНК и репликации геномных фрагментов.
Экспериментальные исследования проводились на половозрелых беспородных мышах с исходной массой 18—20 г, белых беспородных крысах — 180—200 г. Все животные поступали из питомника РАМН «Рапполово» и содержались на стандартном рационе. Полученные экспериментальные данные подвергались статистической обработке с применением параметрической (критерий Стъюдента—Фишера) и непараметрической (метод Вилкоксона— Манна—Уитни) статистики; параметры острой токсичности рассчитывались при помощи метода пробит-анализа в модификации В.Б. Прозоровского.
Исследуемое вещество в зависимости от конкретной задачи вводилось в желудок, брюшную полость. В желудок триазаверин вводили с по-
мощью металлического зонда в 2 % растворе крахмала. Контрольные животные одновременно с подопытными в равных объемах получали растворитель (2 % раствор крахмала).
Исследование местного раздражающего и кожно-резорбтивного действия триазаверина проводили на белых мышах и крысах. На мышах — путем однократной аппликации триаза-вирина на вазелиновой основе на 2/3 хвоста с экспозицией 2 ч; на крысах — путем нанесения триазаверина на вазелине на предварительно выстриженный от шерсти участок кожи (2x2 см) боковой поверхности тела с экспозицией 4 ч. На участки кожи контрольных животных наносили вазелин.
Оценка раздражающего действия на слизистые оболочки проводилась при внесении в конъюнктивальный мешок глаза крыс 25 % мази вещества на вазелиновой основе с последующей регистрацией видимых и скрытых повреждений роговицы в течение 3 сут. Скрытые повреждения роговицы выявляли с помощью 1 % раствора флюоресцеина в 2 % растворе NaHCO3.
Исследование аллергенных свойств проводили методом выявления гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) на мышах путем введения препарата в полном адьюванте Фрейн-да (ПАФ). Для этого подопытных животных вначале сенсибилизировали однократно, путем внутрикожного введения в основание хвоста 100 мкг триазавирина, эмульгированного в 60 мкл смеси ПАФ и раствора Хенкса в соотношении 1 : 1. Контрольным животным вводили 60 мкл данной смеси без добавления изучаемого вещества. Для выявления сенсибилизации через 5 сут подопытным и контрольным мышам в подушечку задней лапы вводили (100 мкг) триазавирина в 40 мкл раствора Хенкса. Через 6 и 24 ч после тестирования измеряли величину отека с помощью микрометра МК-О-25.
Токсические свойства аэрозоля триазавирина оценивали после однократного 4-часового ингаляционного воздействия. Моделирование концентраций осуществлялось динамическим способом в специально сконструированных камерах для ингаляционных затравок (А.С. № 1183102 от 06.04.84) с применением дозатора пыли, компрессора УК 40-2М, содержащего фильтр для очистки воздушного потока [2]. Указанный дозатор имеет широкий диапазон величин подачи пы-лей, что позволило регулировать количество аэрозоля в камере и создавать концентрации аэрозоля триазавирина на заданном уровне. Постоянство концентрации препарата в зоне дыхания живот-
ных обеспечивалось благодаря двум воздушным потокам: верхнему и нижнему. Контроль за концентрацией аэрозоля триазавирина проводился весовым и химическим методами. Были испытаны следующие концентрации: камера № 1: 115,49 ± 13,27 (~115 ± 13) мг/м3, камера № 2: 62,08 ± 11,07 (~62 ± 11) мг/м3, камера № 3: 4,82 ± 0,78 (~5 ± 0,8) мг/м3 .
У животных, подвергавшихся ингаляции триазавирина, проводилось исследование центральной нервной системы (ЦНС) — по способности к суммации подпороговых импульсов (СПП) и изменению поведенческих реакций («норковый» рефлекс); состояние дыхательных путей — по изменению частоты дыхания; мем-бранотоксическое действие оценивали по устойчивости мембран эритроцитов и содержанию восстановленного глютатиона в крови; в крови определяли количество эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина общепринятыми в клинической практике методами. Функцию печени изучали по активности аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови и количеству выделившихся метаболитов амидопирина с мочой; функцию почек — по величине суточного диуреза, содержанию белка, хлоридов в моче и титруемой кислотности мочи.
Р е з у л ь т а т ы. Клиника острого отравления сразу после введения триазавирина в брюшную полость характеризовалась адинамией, частым поверхностным дыханием, а через 3 мин — наступлением бокового положения (наркоза). Параметры острой токсичности триа-завирина представлены в табл. 1.
Как видно из таблицы, по параметрам острой токсичности триазавирин относится к 4 классу опасности (ГОСТ 12.1.007 — 76).
Данные экспериментов по исследованию раздражающего и кожно-резорбтивного действия показали, что триазавирин не оказывал раздражающего действия на кожу; не наблюдалось гибели животных, снижения массы тела и появления каких-либо других признаков интоксикации, как в момент нанесения, так и в последующий 10-дневный период наблюдения. Признаков раздражения слизистых, а также видимых и скрытых повреждений роговицы не было обнаружено ни через 4 ч, ни через сутки после воздействия.
Как показали результаты выполненного исследования по оценке аллергенного действия, триазавирин не вызывает сенсибилизации организма и не является потенциальным аллергеном.
В обобщенном виде результаты проведенных исследований по оценке ингаляционного воз-
Обозначения: ± изменение показателя статистически достоверно (р < 0,05); 0 — отсутствие статистически достоверных изменений показателя (р > 0,05); метаболиты амидопирина: 4 — аминоантипирин (4-ААП), ацетил-4 — аминоантипирин (ацетил—4-ААП).
Т а б л и ц а 1
Параметры острой токсичности триазавирина
Вид животных Способ введения Доза, мг/кг
DU dl50 DL84
Мыши в брюшную полость 876 1708 (1313,8—2220,4) 2540
в желудок 4860 7620 (6195—9373) 10380
Крысы в брюшную полость 498 1353 (1048—1745) 2211
в желудок >10000
Т а б л и ц а 2
Результаты однократного 4-часового ингаляционного воздействия на организм белых крыс аэрозоля триаза-вирина
№ п/п Показатели Концентрация триазавирина, мг/м3
115 62 5
1. СПП - 0 0
2. «Норковый» рефлекс 0 + 0
3. Частота дыхания 0
4. Содержание лейкоцитов в крови 0 0
5. Содержание эритроцитов в крови 0 0 0
6. Количество гемоглобина в крови - 0 0
7. Содержание тромбоцитов в крови 0 0 0
8. Кислотная резистентность эритроцитов 0 0
9. Восстановленный глютатион в эритроцитах 0 0 0
10. Аланинаминотрансфераза (АЛТ) в сыворотке крови 0 0
11. Аспартатаминотрансфераза (АСТ) в сыворотке крови 0 0
12. Метаболиты амидопирина в моче 4-ААП - + -
ацетил-4-ААП 0 0 0
13. Диурез 0 0 0
14. Содержание белка в моче 0 + 0
15. Титруемая кислотность мочи 0 0 0
16. Хлориды в моче 0 0 0
действия аэрозоля триазавирина представлены в табл. 2.
Как видно из табл. 2, концентрация 115 мг/м3 вызывала статистически достоверные изменения состояния ЦНС (снижение СПП), крови (снижение содержания гемоглобина), детоксицирующей функции печени (снижение выделения 4-ААП с мочой). Концентрация 62 мг/м3 приводила к статистически достоверному увеличению показателей состояния ЦНС
(«норковый» рефлекс), печени (изменение выделения 4-ААП с мочой) и почек (содержание белка в моче). Концентрация триазавирина 5 мг/м3, при которой наблюдалось изменение одного показателя состояния функции печени — снижение выделения 4-ААП с мочой, была принята за близкую к пороговой однократного ингаляционного воздействия (Ышас.) при 4-часовой экспозиции.
Для обоснования величины ОБУВр.з. в соответствии с МУ 1.1.726—98 были проведены математические расчеты с использованием всех полученных параметров, в том числе и фармакологических (МСТД, ВСТД).
В ы в о д ы. 1. По параметрам острой токсичности триазавирин относится к 4 классу токсичности и опасности (ГОСТ 12.1.007—76), не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистые, не проникает через неповрежденную кожу и не является потенциальным аллергеном. 2. На основании данных научной литературы о токсичности и опасности близких аналогов триазавирина, результатов собственных экспериментальных исследований, средней геометрической величины расчетных значений ОБУВ триазавирина, рекомендована
величина ОБУВ для воздуха рабочей зоны равная 0,5 мг/м3.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Буров Ю.В. Проблемы экологической безопасности человека в химико-фармацевтической промышленности.
М., 1995.
2. Камера для ингаляционной затравки мелких лабораторных животных. А.С. № 1183102 кл. А 61 G 10/02 // Г.И. Сидорин, Л.С. Дубейковская, Г.Я. Крупкин, М.И. Михеев, Е.Н. Соболева.
3. Козырева Ф.У. Сидорин Г.И., Семенова В.В. // Вестн. С.-Пб. ГМА им. И.И. Мечникова. 2003. № 3. С. 71—73.
4. МУ 1.1.726—98 Гигиеническое нормирование лекарственных средств в воздухе рабочей зоны, атмосферы населенных мест и воде водных объектов.
Поступила 26.02.09
С
Ю Б h Л Е h
J
ГЕННАДИИ ИВАНОВИЧ СИДОРИН
(к 70-летию со дня рождения)
Восьмого апреля 2009 г. исполнилось 70 лет со дня рождения и 35 лет научной деятельности Геннадия Ивановича Сидорина, заведующего лабораторией токсикологии, доктора медицинских наук, профессора. Выпускник 1970 г. Ленинградского санитарно-гигиенического медицинского института, он в 1973 г. окончил аспирантуру в Институте биофизики МЗ СССР, а в 1974 г. был принят в Ленинградский НИИ гигиены труда и профзаболеваний. Начав свой научный путь младшим научным сотрудником в лаборатории промышленной токсикологии, основанной заслуженным деятелем науки РСФСР Н.В. Лазаревым, Г.И. Сидорин активно включился в работу творческого коллектива, проявив себя трудолюбивым и талантливым исследователем. Основными направлениями его научной деятельности стали изучение связи физико-химических свойств и характера биологического действия, метаболизм и механизм повреждающего действия ядов, механизмы адаптации к действию химических веществ, поиск критериев ранних признаков интоксикаций, проблемы математического прогнозирования вредного действия химических веществ.
В 1980 г. Г.И. Сидорин защитил кандидатскую диссертацию «Токсиколого-гигиеническая
характеристика сложных эфиров нитрокарбоно-вых кислот», в 1994 г. — докторскую на тему «Метаболические нарушения как показатель вредного действия ядов в проблеме профилактической токсикологии», в 2000 г. ему присвоено ученое звание профессора.
Уже 20 лет Геннадий Иванович руководит лабораторией, успешно продолжая и развивая научные традиции исследовательской школы Н.В. Лазарева. Г.И. Сидорин является одним из ведущих токсикологов страны. Под его руководством и при непосредственном участии обосновано более трех десятков гигиенических нормативов содержания вредных веществ в среде обитания человека, разработаны методические документы, утвержденные на федеральном уровне, получено 3 авторских свидетельства на изобретения. По результатам исследований опубликовано более 180 работ, в том числе Г.И. Сидорин — соавтор многотомного справочно-энциклопедического издания «Вредные вещества в промышленности» (1985), справочников «Гигиенические нормативы химических веществ в окружающей среде» (2007), «Вредные вещества в окружающей среде» (2008), Энциклопедии по охране труда (2003), Энциклопедии по медицине труда (2005), ряда учебно-методических пособий.
