CC BY
8
ствия вещества может быть обнаружено в течение первых 15 дней, а именно с 3—8-х суток.
Таким образом, изученные нами скрытые стадии имеют определенное значение в оценке «критериев вредности». Предложенный комплекс чувствительных методов и нагрузочных проб позволяет выявлять действие яда в ранние скрытые стадии интоксикации, что весьма перспективно для прогнозирования пороговых и подпороговых уровней воздействия химических веществ в более сокращенном токсикологическом эксперименте.
ЛИТЕРАТУРА. Люблина Е. И., Минкина Н. А., Рыло-в а М. Л. Адаптация к промышленным ядам как фаза интоксикации. Л., «Медицина», 1971. — Насонов Д. Н., Александров В. Я. Реакция живого вещества на внешние воздействия. М.— Л., 1940. — Павленко С. М. Метод электротонических воздействий на головной мозг животных в токсикологическом эксперименте. — «Гиг. и сан.», 1973, № 8, с. 71—73. — Р ос и н Я. А. Перспективы развития исследований по физиологии гисто-гематических барьеров.— В кн.: Структура и функция гисто-гематических барьеров. М., «Наука», 1971, с. 5—15.—Саноцкий И. В. О границах стадии первичной декомпенсации при минимальных химических воздействиях на организм. — В кн.: Актуальные вопросы гигиенической токсикологии. М., 1972, с. 47— 48. — Он же. Некоторые аспекты проблемы адаптации в возрастной токсикологии. — «Гиг. и сан.», 1971, с. 87—90. — Штерн Л. С. Непосредственная питательная среда органов и тканей. Физиологические механизмы, определяющие ее состав и свойства. М., 1960. — Юдина Т. В., Новиков Ю. В., Павленко С. М. и др. Оценка адаптивных сдвигов при изучении проницаемости гисто-гематических барьеров. — «Гиг. труда», 1974, № 1, с. 44—47.
Поступила 5/V 1975 г.
УДК 613-07:616.631.3-073.537
Г. Л. Туровец, Ю. А. Владимиров
К МЕТОДИКЕ РЕГИСТРАЦИИ ИНИЦИИРОВАННОЙ
ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ МОЧИ В ГИГИЕНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
Институт гигиены детей и подростков Министерства здравоохранения СССР, II Московский медицинский институт им. Н. И. Пирогова
Чувствительным показателем сдвигов в организме, происходящих под воздействием ряда физических и химических факторов, служит содержание свободных радикалов (СР) в органах и тканях. Относительно простым и в то же время наиболее чувствительным способом регистрации пере-кисных радикалов липидов и других соединений является метод хемилю-минесценции (В. Я. Шляпинтох и соавт.), который дает возможность определять содержание СР в тканях, плазме крови и даже в таком доступном биологическом материале, как моча.
При нормальных условиях в организме наблюдается довольно низкий уровень свободнорадикального окисления и сопровождающего его сверхслабого свечения. Поэтому регистрация спонтанной хемилюминесценции (Б. Н. Тарусов и соавт.; А. И. Журавлева и соавт., и др.) требует особо чувствительной аппаратуры, а получаемая при этом информация ограничивается лишь одним показателем (импульсы в единицу времени).
Нами была предпринята попытка усилить крайне низкий уровень хемилюминесценции мочи с помощью ионов двухвалентного железа, которое, как показано ранее Ю. А. Владимировым и соавт., является катализатором свободнорадикальных реакций и усиливает свечение биологических субстратов. К важнейшим факторам, определяющим характер протекания реакции инициирования, относится количество добавляемого железа — различное для разных биологических субстратов. Например, для плазмы крови оптимальная концентрация вводимого раствора железа равна Ю-2 М. Применительно к моче установлено, что максимальное усиление ее сверхслабого свечения (в 50 раз и более) достигается добавлением раствора сер-
Показатели хемилюминесценции мочи у здоровых (в условных единицах; средняя=Ьошибка)
Пол Число об-сл едуеиых Л, Л, Светосуы-. на
Мужчины Женщины 78 82 186—9 196^12 40—5 62— 11 31 — 4 38^5
УелсЗ
200 ■
180
Ре-
МО
100
во
го
- 1 Г? Ш 1
шт - К тть. шт
О г 4 Б 8 Ю ^2 мин
Типичная кривая'хемилюмине-сценции мочи в" присутствии ионов двухвалентного железа (шт— открытие ^шторки; шт —
г *
закрытие шторки; Ие2* — вве-I
дение раствора сернокислого железа).
Остальные обозначения — в тексте.
нокислого железа в концентрации 5- Ю-2 М. При этом графическая регистрация свечения дает возможность следить за кинетикой процесса.
Регистрацию инициированной хемилюминесценции мочи проводили на установке типа, описанной ранее (Ю. А. Владимиров и соавт.). Один из основных узлов установки — стеклянная термостатируемая кювета, которая снабжена стеклянной мешалкой и поливиниловыми трубочками диаметром 3 мм для введения в кювету растворов и отбора проб для анализа. Кювета помещена в светонепроницаемый кожух. К узлам установки относится высокочувствительный торцовый фотоумножитель ФЭУ-37 с хорошим соотношением: сигнал — шум. Область максимальной спектральной чувствительности этого ФЭУ — 300—600 нм. Чувствительность ФЭУ-37 устанавливали по урановому стеклу ЖС-19 и ежедневно контролировали. Окно ФЭУ отделено от дна кюветы задвигающейся шторкой. Другие узлы установки следующие: высоковольтный источник стабилизированного напряжения ВС-22, широкополосный усилитель, самописец для регистрации хемилюминесценции КСП-4 (скорость лентопротяжного механизма 600 мм/ч), ультратермостат.
Хемилюминесценцию мочи определяют в утренние часы, желательно натощак. Для анализа берут 10 мл мочи, помещают в кюветное отделение и включают мешалку. Затем открывают шторку, отделяющую дно кюветы от окна фотоумножителя, в течение 1—2 мин регистрируют спонтанное свечение мочи, затем в кювету вводят 1 мл раствора сернокислого железа (Ре504-7Н20) в концентрации 5-10~2 М при постоянном перемешивании. Через 8 мин после первого добавления железа вводят снова 1 мл раствора Ре2+ той же концентрации. Запись ведут еще 4 мин и затем закрывают шторку. Свечение мочи изучают при 23—25°, либо в случае необходимости при 37°.
В результате возникает кривая хемилюминесценции, которую могут охарактеризовать такие параметры (см. рисунок): а — интенсивность спонтанной хемилюминесценции до введения железа; А1 — амплитуда быстрой вспышки свечения, возникающей в ответ на введение железа; А 2 — амплитуда второй быстрой вспышки при повторном добавлении ионов Ре; 2/гУ — светосумма (площадь диаграммы, ограниченная кривой хемилюминесценции за определенный промежуток времени; на рисунке она заштрихована). Это интегральный показатель, который характеризует общее количество радикалов, появляющихся в системе в ответ на введение солей железа с учетом квантового выхода хемилюминесцентной реакции.
Воспроизводимость результатов при повторных исследованиях мочи по изучаемым показателям была довольно высокой — колебания составляли ±1-^2,5%. Хранение мочи в холодильнике в течение 1 сут существенно не меняло картину ее хемилюминесценции. При более длительном хранении в этих условиях свечение мочи уменьшалось.
Обнаружено, что в пределах физиологических колебаний хемилюмн-несценция существенно не зависит от рН, удельного веса и оптической плотности мочи. В течение 1 сут наблюдаются определенные изменения интенсивности хемилюминесценции мочи. У здоровых суточная кривая хе-милюминесценции имеет характерный вид — постепенное нарастание свечения днем (с максимумом между 12 и 15 ч), затем постепенное снижение к минимальному уровню ночью.
На основании анализов мочи у 160 лиц разного возраста определены нормальные параметры ее хемилюминесценции (см. таблицу). Отмечается выраженное усиление хемилюминесценции мочи в период полового созревания.
Результаты, полученные при использовании настоящего метода в комплексной оценке влияния на организм некоторых факторов различной интенсивности: инфракрасное терло, физические нагрузки и др. (Г. Л. Ту-ровец) свидетельствуют о его высокой чувствительности и перспективности для целей гигиенического нормирования.
ЛИТЕРАТУРА. Владимиров Ю. А.,, Суслова Т. Б., Олене в В. И. Хемилюминесценция, сопряженная с образованием липидных перекисей в биологических мембранах. II. Роль железа в развитии цепного окисления липидов и сверхслабого свечения. — «Биофизика», № 5, с. 836—841. — Журавлева А. И., Журавлев А. И., Асанов В. А. Хемилюминесценция мочи больных с заболеваниями периферических сосудов. — В кн.: Сверхслабые свечения в медицине и сельском хозяйстве. М., «МГУ», 1971, с. 14—15. — Т а р у с о в Б. Н., Поливода А. И., Журавлев А. И. Изучение сверхслабой спонтанной хемилюминесценции животных клеток. — «Биофизика», 1961, Л1» 4, с. 490—496. — Туровец Г. Л. Использование биофизических показателей в оценке функциональных и адаптивных возможностей детей и подростков. — В кн.: Функциональные и адаптивные возможности детей и подростков. Т. 1. М., «АПН СССР», с. 48—49. — Ш л я п и н то х В. Я., Карпухин О. Н., Постников Л. М. и др. Хемилюминесцентные методы исследования медленных химических процессов. М., «Наука», 1966.
Поступила 14/11 1974 г.
УДК 613.632:547.563.131-074
Е. А. Друян
РАЗДЕЛЬНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОМЕРОВ ТРИКРЕЗИЛФОСФАТА, ТРИФЕНИЛФОСФАТА, ФЕНОЛА, OPTO-, МЕТА- И ПАРА-КРЕЗОЛА С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Нашей задачей было определение в воздухе изомеров трикрезилфосфа-та (ТКФ), выделяемых полимерными материалами, и разделение этих изомеров в присутствии трифенилфосфата (ТФФ), фенола и изомеров крезола.
В литературе приведены сведения о различных исследованиях по идентификации отдельных пластификаторов, находящихся в пластмассах, в том числе и ТКФ (Т. Г. Липина; Haslam и соавт.; Gude). Однако ни в одной из работ перечисленных авторов не указывается на разделение ТКФ на его изомеры.
При разработке метода определения изомеров ТКФ мы использовали метод тонкослойной хроматографии с последующей элюацией окрашенных продуктов из слоя силикагеля и спектрофотометрическим их исследованием. В основу работы была положена реакция омыления ТКФ с образованием изомеров крезола. В результате омыления ТКФ получают фенол. После омыления и получения соответствующих изомеров крезола и фенола мы использовали способность их давать окрашенные продукты с пара-нитрофенилдиазонием.
Проведены специальные исследования по выявлению оптимальных условий полноты разложения ТКФ и получению азосоединений. Изучали
