CC BY
34УДК 619:616-001.28/.29-085
изыскание противолучевых средств из класса
индукторов цитокинов
Н.Б.Тарасова - доктор биологических наук, зав. лабораторией; К.Н.Вагин - кандидат биологических наук, ст.н.с.; Г.В.Конюхов - доктор биологических наук, профессор, зав. отделом;
Р.Н.Низамов - доктор ветеринарных наук, профессор, гл.н.с.
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», г.Казань (420075, г.Казань, Научныйгородок-2, тел. +7(843) 239-53-19, e-mail: vnivi@mail.ru).
Впервые теоретически обоснована и практически подтверждена возможность использования средств из класса индукторов цитокинов зоогенного, микробного и фитогенного происхождения для лечения животных при острой лучевой болезни. Для первичной оценки цитокининдуцирующей активности отобрана оптимальная тест-система, обеспечивающая экстренное определение содержание медиаторов иммуногемопоэза в условиях ex vivo. Впервые изучено радиозащитное действие индукторов цитокинов и цитокинстимулированных сывороток. Получены новые данные о механизме радиозащитного действия гемостимулированной сыворотки. Установлена возможность усиления радиозащитной активности гемостимулированной сыворотки и уменьшения её лечебных доз с помощью препаратов «Эра-Н» и «Вита-Форце». В опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных установлен высокий терапевтический эффект гемостимулированной сыворотки и препарата «Эра-Н», обеспечивающие 60-80%-ную защиту при экспериментальной острой лучевой болезни.
КЛючЕВЫЕ СЛОВА: лучевая болезнь, профилактика, лечение, индукторы цитокинов, механизм действия.
Глобальное загрязнение радионуклидами биосфе-
I ры, вредные последствия радиационных воздействий на организм, перспективы дальнейшего усиления радиоэкологического кризиса, все это ставит проблему противолучевой защиты в число важнейших задач современной биологии и медицины. Особенную актуальность эта проблема приобрела после Чернобыльской радиационной катастрофы, которая сделала ее одной из основных для ветеринарной радиобиологии.
Полувековые исследования в области разработки методов и средств противорадиационной защиты привели к созданию препаратов от острой лучевой болезни из многих тысяч соединений, снижающих радиобиологический эффект живых систем [1, 2, 6, 7, 8, 9, 10, 11].
В последние годы при изучении различных аспектов механизма противолучевого действия, отечественными исследователями наметились новые перспективы в области терапии радиационных поражений - использование иммуномодуляторов - веществ из классов зоогенной и микробной природы, обеспечивающих повышение радиорезистентности организма в условиях летального облучения. Авторы полагают, что радиозащитное действие таких препаратов связано со способностью индуцировать в организме медиаторы гемо- и иммунопоэза (интерлейки-ны, интерферон и т.д.).
Целью настоящих исследований является изыскание противолучевых средств из класса индукторов цитокинов.
Материалы и методы. В экспериментальных исследованиях использованы 824 белые мыши живой массой 18-20 г, 210 белые крысы живой массой 180-
200 г, 48 кроликов породы "Шиншилла" живой массой 3,5-5,0 кг, 16 овец породы "Прекос" средней живой массой 42,5 кг.
Моделирование лучевой болезни легкой, средней и тяжелой степени тяжести у животных осуществляли путем равномерного облучения их на гамма-установке «Пума» с источником излучения 137Св, неравномерность гамма-поля не превышала 10 %.
Клинико-гематологические исследования проводили до начала радиационного воздействия и через 1, 3, 10, 20 и 30 сут после облучения и применения радиозащитных средств. На каждом сроке исследования использовали от 3 до 10 животных.
Изучение массы тела, температуры, общего состояния, содержание гемоглобина, числа лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитарной формулы, белковых фракций сыворотки, соотношения субпопуляций Т- и В-лимфоцитов, числа миелокариоцитов в костном мозге, клеточности селезенки и тимуса, эндогенных колоний в селезенке, бактерицидности и лизоцимной активности, активности нейтрофилов в НСТ-тесте и фагоцитарного индекса нейтрофилов, активности ка-талазы у облученных и подвергнутых лечению животных проводили по общепринятым методам [3, 4, 5].
В качестве индукторов цитокинов использовали 4 нативных и 4 облученных варианта вакцинных препаратов, а также 10 продуктов метаболизма микробов (про-дигиозан, эндотоксин, анатоксин, протектан и трианти-генный комплекс Е.соИ, радиотоксин Е.соИ, эндотоксин и белково-полисахаридный комплекс сальмонелл, экстракт микобактерий и сибиреязвенный экзотоксин).
В качестве веществ растительного происхождения использовали 4 природных фитоадаптогена: Эра-Н,
Эраконд, Вита-Форце и фитогемагглютинин (ФГА).
Для определения спонтанной и индуцированной продукции цитокинов 0,6 мл свежей гепаринизирован-ной крови (20 МЕ/мл) смешивали с 2,4 мл среды 199 с добавлением 2 мМ глутамина, 80 мкг/мл гентамицина. В планшет для культивирования клеток в лунки каждого ряда вносили по 100 мкл среды 199, от 1 до 10 мкг/ мл потенциальных индукторов цитокинов, содержимое лунок тщательно перемешивали и инкубировали при 370С в течение 24 ч, после чего супернатанты исследовали на наличие цитокинов иммуноферментным методом с использованием коммерческих тест-систем ТОО «Протеиновый контур» (С.-Петербург).
Для изучения цитокининдуцирующей активности испытуемых веществ зоогенные, микробные антигены и фитогенные агенты однократно, подкожно вводили кроликам и через 1 сут после иммунизации брали пробы крови для определения в сыворотке содержания цитокинов в ИФА.
С целью изучения влияния испытуемых индукторов цитокинов на апоптозную гибель клеток суспензию лимфоцитов в концентрации 4106 кл/мл разливали по 1 мл во флаконы со средой 199, инкубировали 24 ч при температуре 370С и облучали в дозе 5,0 Гр, повторно инкубировали 24 ч в присутствии изучаемых индукторов цитокинов и без них. По истечении указанной экспозиции из осадка лимфоцитов готовили мазки, фиксировали их в 70%-ной метанол-уксусной кислоте, окрашивали и проводили цитометрию, определяя количество окрашенных (нежизнеспособных) и неокрашенных (жизнеспособных) клеток.
Радиозащитную эффективность испытуемых препаратов изучали на 3 видах лабораторных (белые крысы, белые мыши, кролики) животных, которые были разделены на 7 групп и подвергнуты гамма-облучению в дозах 7,7 Гр (белые мыши), 9,0 Гр (белые крысы) и 11,0 Гр (кролики). Через 24 ч после облучения животным 1-й группы однократно подкожно вводили гемостимулиро-ванную сыворотку, 2-й группы - иммунную сыворотку, полученную на 15 сут после вакцинации радиозащитным микробным полиантигеном; 3-й группы - 4%-ный раствор фитопрепарата «Эра-Н», 4-й группы - 4% экстракт «Вита-Форце», 5-й группы - нормальную лошадиную сыворотку крови (контроль препаратов), животные 6-й группы служили контролем облучения, 7-й группы - служили биологическим контролем. Дозы вводимых препаратов для мышей составляла 0,1 мл, для белых крыс - 0,25, для кроликов - 1,0 мл.
Опыты по изучению возможности усиления радиозащитной эффективности сывороточных препаратов при сочетанном применении их с фитопрепаратами проводили на 54 белых мышах, разделенных на 18 групп по 3 особи в каждой и на 16 овцах, разделенных на 4 группы по 4 животных в каждой. Через 24 ч после облучения в дозе 7,7 Гр (мыши) и 6,0 Гр (овцы) животным однократно подкожно вводили композиции на основе гемостимулированной сыворотки и фитопре-
паратов «Эра-Н» и «Вита-Форце».
Для изучения антиоксидантной защиты организма в условиях лучевого воздействия опыты проводили на 63 белых крысах, разделенных на 7 групп по 9 животных в каждой.
Результаты исследований. Установлено, что из испытанных 48 потенциальных индукторов цитокинов, наиболее активными усилителями оказались восемь препаратов зоогенного происхождения (экстракт облученного костного мозга, периферическая кровь, облученная in vitro в дозе 250 Гр, экстракты облученных селезенки, тимуса, лимфатических узлов, лимфы, лимфоцитов и тонкого отдела кишечника), три препарата микробного (соматический антиген, эндотоксин и триантигенный радиозащитный комплекс E.coli) и два - фитогенного (Эра-Н и Вита-Форце) происхождения. Содержание интерлейкина-1 при этом для облученных зоогенных индукторов колебалось в пределах от 1389±198 нг/мл (экстракт из тонкого отдела кишечника) до 1670±279 нг/мл (экстракт костного мозга). По концентрации колониестимулирующего фактора (КСФ), использованные индукторы занимали идентичный убывающий ряд по активности, лишь с той разницей, что содержание данного цитокина было в 18-20 раз меньше, чем интерлейкина-1.
Результаты исследований показали, что в условиях in vivo и in vitro наиболее активными усилителями цитокинов (ИЛ-1 и КСФ) оказались облученная in vitro (250 Гр) периферическая кровь, экстракты костного мозга, тимуса, селезенки, лимфатических узлов, три-антиген E.coli, Вита-Форце и Эра-Н, в антисыворотках к которым обнаружены наибольшие концентрации интерлейкина-1 (ИЛ-1) и колониестимулирующего фактора (КСФ).
Результаты световой и флуоресцентной цитоме-трии показали, что внесение в инкубационную среду испытуемых средств оказывало антиапоптогенный (радиозащитный) эффект, предохраняя от радиационной гибели до 63,3 % облученных в летальной дозе лимфоцитов. Степень радиозащиты зависела от вида использованного средства и их цитокининдуцирую-щей способности, т.е. установлена корреляционная зависимость между выживаемостью летально облученных лимфоцитов и способности индукторов синтезировать цитокины in vitro. Наиболее высокий процент выживаемости облученных лимфоцитов отмечен при внесении в инкубационные среды гемостимулиро-ванной сыворотки (63,3±4,0%), антисыворотки против радиозащитного триантигена E.coli - (65,7±17,3 %), Эра-Н (61,3±13,5%) и Вита-Форце (62,9±1,7%). При внесении в культивируемые лимфоциты среды остальных индукторов цитокинов и цитокинстимулированных сывороток выживаемость лимфоцитов составляла от 15,1±2,3 до 55,5±5,7%.
Установлено, что наиболее высокая выживаемость для всех трех видов животных отмечена при применении гемостимулированной сыворотки и ан-
тисыворотки против радиозащитного полиантигена E.coli - 70 и 60% соответственно. Достаточно высокий радиозащитный эффект (50-55%) был достигнут при изолированном применении фитопрепаратов «Эра-Н» и «Вита-Форце».
У всех облученных животных характерным нарушением системы крови была панцитопения, выражавшаяся в снижении уровня циркулирующих лейкоцитов, лимфоцитов, нейтрофилов, тромбоцитов и эритроцитов, то динамика этих показателей у животных, получавших лечебные препараты, практически по всем срокам была выше, чем у облученных животных.
Опыты на белых мышах показали, что на пике депрессии гемопоэза (7-9 сут), в группах, получавших гемостимулированную и иммунную (против трианти-гена E.coli) сыворотку, клеточность костного мозга, селезенки и тимуса была выше, чем в группе контроле облучения.
Снижение летального эффекта при использовании лечебных препаратов сопровождалось одновременным снижением эффекта постлучевой токсемии. Определение хиноидных радиотоксинов в РНГА, показало, что под действием лечебных препаратов происходило значительное снижение их концентрации, восстановление скорости гемолиза эритроцитов.
Предотвращение снижения количество макрофагов (моноцитов) и микрофагов (нейтрофилов), а также иммунных эффекторов (Т- и В-лимфоциты) на фоне применения лечебных средств отражалось и на резистентности животных к аутоинфекции. Так, динамика аутомикрофлоры, определяемая в пробах из тонкого отдела кишечника облученных и леченых животных, была зеркальным отражением динамики цитопении (макрофагов, микрофагов, Т-киллеров): явный микробный рост в чашках с пробами от облученных животных и существенное (более чем в 2 раза) снижение количества условно-патогенной микрофлоры.
Результаты следующей серии опытов по изучению изменения уровня геморегуляторных цитокинов (ИЛ-1, КСФ) у облученных животных показали, что уже через 3 сут после радиационного воздействия последовало резкое (в 3,6 и 4,1 раза) снижение содержания обоих цитокинов, которое в дальнейшем прогрессировало и к периоду разгара ОЛБ они в тестируемой системе не обнаруживались. Однократное подкожное введение гемо-стимулированной сыворотки предотвращало снижение содержания цитокинов - концентрация их у леченых животных была в 10 и более раз выше, чем у облученных.
Было установлено, что сочетанное применение гемостимулированной сыворотки и фитопрепаратов «Эра-Н» и «Вита-Форце» обеспечивало сохранение стабильного уровня активности фермента во все сроки исследования, оставаясь практически на уровне биологического контроля и уступая последнему не более чем в 1,14-1,16 раза.
При введении животным композиции «сыворотка + «Эра-Н» в соотношениях компонентов 0,6+0,4 и ком-
позиции «сыворотка + «Вита-Форце» в соотношении компонентов 0,4+0,6 был достигнут достаточно высокий радиозащитный эффект - 66,6%.
Лучевая болезнь облученных овец протекала в крайне тяжелой форме. При этом период первичных реакций у некоторых животных проявлялся с момента облучения и продолжался до 2-3 сут, сопровождаясь кратковременным возбуждением или угнетением. Со стороны сердечно-сосудистой системы отмечали резкое ослабление ее деятельности и тонуса сосудов. В первые двое суток после облучения наблюдали кратковременное повышение температуры тела на 0,5-0,70С. У части животных отмечали усиление перистальтики кишечника, разжижение каловых масс, снижение аппетита. В дальнейшем отмеченные явления прогрессировали, животные были вялыми, малоподвижными, аппетит понижен, на 7-8-й день у животных начиналась эпиляция в области спины и шеи, регистрировали уменьшение массы тела. В дальнейшем (через 10-15 сут после облучения) отмеченные признаки лучевой болезни прогрессировали. У некоторых животных наблюдалась полная адинамия и отказ от корма, у большинства овец наблюдали полную эпиляцию за исключением лицевой части и конечностей, множественные кровоизлияния, болезненность. Видимые слизистые оболочки были гиперемированные и синюшные, отмечались разлитые множественные кровоизлияния, катаральный ринит, язвенно-некротический стоматит. За 1-3 дня до смерти животные полностью отказывались от корма, наблюдали понос с примесью крови и слизи в кале. Со стороны органов дыхания отмечали одышку, истечения из носа, хрипы, бронхопневмонию. Пульс у животных был резко учащен, слабого наполнения. На фоне указанных патологических симптомов животные погибали от острой лучевой болезни на 16-18 дни после облучения.
У овец, подвергнутых лечению гемостимулированной сывороткой и при сочетании её с препаратом «Эра-Н», в отличие от облученных, течение острой лучевой болезни носило более легкий характер, что нашло отражение и на выживаемости облученных и леченных препаратами животных.
Результаты гематологических исследований показали, что лучевая болезнь у нелеченых овец сопровождалась значительными нарушениями гемопоэза, которые характеризовались кратковременной (в течение первых 3 сут) гипергемоглобинемией, сменяющейся в дальнейшем стойкой гипогемоглобинемией, эритропенией и лейкопенией. У леченых овец лучевая болезнь протекала в более легкой форме - указанные изменения были менее выраженными.
При изучении лейкоцитарного профиля у леченых овец после облучения существенно уменьшалась выраженность лейкопении, наблюдалось более быстрое восстановление числа лейкоцитов в крови. Указанные положительные сдвиги были в равной мере характерны как для нейтрофилов, так и для лимфоцитов.
Результаты проведенных опытов показали, что ге-мостимулированная сыворотка, как при изолированном, так и в сочетанном применении с фитопрепаратом «Эра-Н» способствовала более интенсивному восстановлению пула миелокариоцитов в костном мозге облученных животных, причем отмечались более высокие значения (на 10-14 сут после облучения) как грануло-цитов, так и лимфоцитов. Нарушения костномозгового кроветворения у облученных животных, которые сопровождались более чем 2,1-2,4-кратным снижением лей-коэритробластического и костномозгового индексов, при применении испытанных средств уже к 10-14 сут претерпевали существенные изменения в сторону увеличения указанных показателей, которые уступали таковым контрольных (необлученных) животных в 1,11,2 раза. Уменьшение указанных индексов под воздействием ионизирующего излучения свидетельствует о гиперплазии эритроцитарного и гиперпластическом поражении белого ростков, характерной для пострадиационной панцитопении. Использованные лечебные средства оказывают стимулирующее воздействие на темпы восстановления гемопоэза.
Гемостимулирующий эффект антисыворотки к аутокрови и фитоадаптогена у овец сопровождался значительными изменениями системы иммунитета, затрагивая как клеточные, так и гуморальные факторы иммунного реагирования.
Заключение. Однократное подкожное введение облученной in vitro в дозе 250 Гр аутокрови оказывает
Литература
гемостимулирующее действие на иммунную систему, усиливая синтез гемо- и иммунорегуляторных цитокинов (в 2,5-3,0 раза по сравнению с необлученной кровью) и антирадиотоксических антител в титрах РНГА -в 4,5-6,0 log2 на 3-8-е сут после введения.
Подкожное применение гемостимулированной сыворотки в дозе 40-50 мг/кг через 1-10 сут после летального облучения обеспечивает 70-80%-ную защиту лабораторных и сельскохозяйственных животных от радиационной гибели.
Сыворотка, полученная от иммунизированных радиозащитным микробным полиантигеном на 14-20 сут после вакцинации, по своим лечебным свойствам не уступает гемостимулированной сыворотке.
Сочетанное применение гемостимулированной или иммунной сывороток с фитопрепаратом «Эра-Н» в соотношении 2:1 обеспечивает снижение дозы сыворотки при сохранении их лечебной эффективности.
Радиозащитный (лечебный) эффект гемостиму-лированной сыворотки и фитопрепарата достигается за счет снижения титров радиотоксинов (в 2,5 раза по сравнению с облученным контролем), повышения активности фермента антирадикальной защиты - ката-лазы (в 1,9 раза), задержки проявления панцитопении (в 1,4-6,7 раза) и миелосупрессии (сохранности пула миелокариоцитов в 3,11 раза, тимоцитов в 2,5 раза и спленоцитов в 3,6 раза по сравнению с контролем облучения), усиления антимикробной активности макрофагов (в 3,1 раза).
1. Будагов, Р.С. Влияние средств микробного происхождения на уровень цитокинов в сыворотке крови, гематологический статус и выживаемость мышей при комбинированных радиационных поражениях / Р.С.Будагов // Радиационная биология. Радиоэкология - 2001. - Т. 41, № 1. - С. 38-42.
2. Васин, М.В. Противолучевые лекарственные средства / М.В.Васин. - М, 2010. - 180 с.
3. Гончаренко, Е.Н. Метод определения перекисного окисления липидов / Е.Н.Гончаренко, А.М.Латинова // Лабораторное дело. - 1985. - № 1. - С. 60-61.
4. Жербин, Е.А. Радиационная гематология / Е.А.Жербин, А.Б.Чухловин. - М.: Медицина, 1989. - 176 с.
5. Кондрахин, И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник / И.П.Кондра-хин, А.В.Архипов; под. ред. И.П.Кондрахина. - М.: Колос, 2004. - 520 с.
6. К проблеме поиска средств защиты при поражении животных ионизирующим излучением / Г.В.Конюхов, Р.Д.Гареев, Р.М.Асланов [и др.] // Ветеринарный врач. - 2012. - № 6. - С. 20-23.
7. Новые подходы к терапии острой лучевой болезни / Г.В.Конюхов, Н.Б.Тарасова, Р.Н.Низамов [и др.] // Ветеринарный врач. - 2005. - № 1. - С. 40-43.
8. Применение лечебно-профилактического иммуноглобулина для коррекции иммунодефицитов животных / Г.В.Конюхов, Р.Н.Низамов, Н.Б.Тарасова, К.Х.Папуниди // Ветеринарный врач. - 2007. - № 4. - С. 53-56.
9. Изучение радиопротекторных свойств антигенов микробного происхождения / Р.Н.Низамов, Г.В.Конюхов, А.С.Титов [и др.] // Материалы IV съезда по радиационным исследованиям. Т. 2. - М., 2001. - С. 457.
10. Сургучева, Л.И. Эффективность биологически активных препаратов при гамма-облучении / Л.И.Сургуче-ва, В.А.Бударков // Проблемы противорадиационной защиты: материалы конф. - М., 1998. - С. 31-32.
11. Использование лечебно-профилактического иммуноглобулина для коррекции клинико-гематологиче-ских сдвигов, вызванных ионизирующим излучением / Н.Б.Тарасова, Г.В.Конюхов, Р.Н.Низамов [и др.] // Ветеринарный врач. - 2017. - № 1. - С. 16-20.
searching radioprotective means from the class of inducers of cytokines
Tarasova N.B. - Doctor of Biological Sciences; Vagin K.N. - Candidate of Biological Sciences; Konyukhov
G.V. - Doctor of Biological Sciences, professor; Nizamov R.N. - Doctor of Veterinary Sciences, professor.
Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety, Kazan (e-mail: vnivi@mail.ru).
The possibility of using means from the class of inducers of cytokines of zoogenic, microbial and phytogenic origin to treat animals at acute radiation sickness has been theoretically proved and practically confirmed for the first time. For initial evaluating the cytokine induced activity, an optimal test-system providing an immediate determination of the immunohemopoiesis mediators content in conditions ex vivo has been selected. The radioprotective effects of inducers of cytokines and cytokine stimulated sera has been studied for the first time. The new data of radioprotective action of the hemostimulated serum are obtained. The drugs "Era-N" and "Vita-Force"are found to possibly increase the radioprotective activity of hemostimulated serum and reduce its curative doses. /4s a result of experiments on laboratory and farm animals, the hemostimulated serum and the drug "Era-N" are found to have high therapeutic effects providing 60-80% protection in experimental acute radiation sickness.
KEYWORDS: radiation sickness, prevention, treatment, cytokine inducers, mechanism of action.
References
1. Budagov, R.S. Vliyanie sredstv mikrobnogo proiskhozhdeniya na uroven tsitokinov v syvorotke krovi, gematologicheskiy status I vyzhivaemost myshey pri kombinirovannykh radiatsionnykh porazheniyakh [The effect of using means of microbial origin on the level of cytokines in blood serum, hematological status, and mice survival rate in combined radiation injuries] / R.S.Budagov // Radiatsionnaya biologiya. Radioecologiya. - 2001. - Vol. 41, № 1. - P. 38-42.
2. Vasin, M.V. Protivoluchevye lekarstvennye sredstva [Radioprotective drugs] / M.V.Vasin. - M., 2010. - 180 p.
3. Goncharenko, E.N. Metod opredeleniya perekisnogo okisleniya lipidov [Method for determination of lipid peroxidation] / E.N.Goncharenko, A.M.Latinova // Laboratornoe delo. - 1985. - № 1. - P. 60-61.
4. Zherbin, E.A. Radiatsionnaya gematologiya [Radiation Hematology] / E.A.Zherbin, A.B.Chukhlovin. - M.: Meditsina, 1989. - 176 p.
5. Kondrakhin, I.P. Metody veterinarnoy klinicheskoy laboratornoy diagnostiki: spravochnik [Methods of veterinary clinical laboratory diagnostics: reference book] / I.P.Kondrakhin, V.A.Arkhipov; edited by I.P.Kondrakhin. - M.: Kolos, 2004. - 520 p.
6. K probleme poiska sredstv zaschity pri porazhenii zhivotnykh ioniziruyuschim izlucheniem [About the problem of searching protective remedies from animals ionizing radiation injury] / G.V.Konyukhov, R.D.Gareev, R.M.Aslanov [et al.] // Veterinarny vrach. - 2012. - № 6. - P. 20-23.
7. Novye podkhody k terapii ostroy luchevoy bolezni [New approaches to therapy of acute radiation disease] / G.V.Konyukhov, N.B.Tarasova, R.N.Nizams [et al.] // Veterinarny vrach. - 2005. - № 1. - P. 40-43.
8. Primenenie lechebno-profilakticheskogo immunoglobulina dlya korrekcii immunodefitsitov zhivotnykh [The use of therapeutic immunoglobulin for the correction of immunodeficiency in animals] / G.V.Konyukhov, R.N.Nizamov, N.B.Tarasova, K.H.Popunidi // Veterinarny vrach. - 2007. - № 4. - P. 53-56.
9. Izuchenie radioprotektornykh svoystv antigenov mikrobnogo proiskhozhdeniya [Studying radioprotective properties of antigens of microbial origin] / R.N.Nizamov, G.V.Konyukhov, A.S.Titov [et al.] // Materialy. IV kongressa po radiatsionnym issledovaniyam. Tom 2 [Procceedings from the IV Congress on radiation research. Vol. 2]. - M., 2001. - P. 457.
10. Surgucheva, L.I. Effektivnost biologicheski aktivnykh preparatov pri gamma-obluchenii [The efficacy of biologically active preparations at gamma-irradiation] / L.I.Surgucheva, V.A.Budakov // Problemy protivoradiatsionnoy zaschity: materialy konf. [The problems of radiation protection: proceedings from the conf.]. - M., 1998. - P. 31-32.
11. Ispolzovanie lechebno-profilakticheskogo immunoglobulina dlya korrekcii kliniko-biologicheskikh sdvigov, vyzvannykh ioniziruyuschim izlucheniem [The use of therapeutic and prophylactic immunoglobulin to correct the clinical and hematological changes caused by ionizing radiation] / N.B.Tarasova, G.V.Konyukhov, R.N.Nizamov [et al.] // Veterinarny vrach. - 2017. - № 1. - P. 16-20.
