CC BY
29
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
логической диагностики чумы, которые могут быть использованы при проведении эпизоотологическо-го обследования в природных очагах. В РосНИПЧИ «Микроб» сконструирована экспериментальная иммуноферментная тест-система для выявления антител (АТ) к чумному микробу («ИФА-Ат-Ф1 Yersinia pestis»), предназначенная для обнаружения АТ к капсульному Ф1 антигену в сыворотках, суспензиях крови и смывах с органов грудной полости грызунов. Данная тест-система обладала высокой диагностической ценностью и специфичностью при исследовании материала, взятого непосредственно перед проведением анализа (Девдариани с соавт., 2011). Однако при работе в полевых условиях нередко отсутствует возможность немедленного исследования антителосодержащего биологического материала серологическими методами, в связи с чем их либо предварительно замораживают, либо наносят на фильтровальную бумагу, пропитанную мертиолатом натрия (ФБ-М) (СП 1.3.1285-03). Целью настоящей работы стало изучение эффективности обнаружения анти-Ф1 антител с помощью вышеназванной тест-системы в образцах антитело-содержащих жидкостей до и после замораживания, а также нанесенных на ФБ-М. Были исследованы образцы крови лабораторных мышей, вакцинированных живой чумной вакциной (г. Ставрополь), взятые на 21-й день эксперимента, когда у животных наблюдался максимальный антительный ответ. Параллельно тестировали предварительно замороженные при минус 20°С и не подвергавшиеся замораживанию пробы крови, обработанные натрия цитратом, суспензии крови в фосфатно-солевом буфере, смывы с органов грудной полости и образцы крови, нанесенные на ФБ-М. Жидкие пробы обрабатывали метриолатом натрия (СП 1.3.1285-03). Оказалось, что значения титров специфических АТ в образцах биологических жидкостей до и после замораживания были сходными и значительно превышали диагностический титр, достигая значений 1:10 240. Не менее эффективным было исследование образцов крови на ФБ-М — титры антител практически полностью коррелировали с таковыми при исследовании не подвергавшихся замораживанию проб крови. Таким образом, применение тест-системы «ИФА-Ат-Ф1 Yersinia pestis» является информативным при исследовании антителосодержащего биоматериала, обработанного различными способами.
ОСОБЕННОСТИ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЫ ГЕНОТИПОВ 4 И 5 ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА
Т.В. Демина1, Ю.П. Джиоев2, И.В. Козлова12, М.М. Верхозина3, С.Е. Ткачев4, Е.К. Дорощенко2, О.В. Лисак2, А.И. Парамонов2, В.И. Злобин1
1Иркутский государственный медицинский университет Росздрава, г. Иркутск; 2НЦпроблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН, г. Иркутск; 3ФБУЗ «Центр эпидемиологии и гигиены в Иркутской области», г. Иркутск; 4Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, г. Новосибирск
На основе сравнения полногеномных структур 54 штаммов, фрагментов гена Е (160 н.о.) 643 штаммов и изолятов РНК вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) подтверждено ранее высказанное нами по-
ложение (Злобин В.И. и др., 2001) о существовании, наряду с тремя основными генотипами, генотипов 4 (штамм 178-79) и 5 (штамм 886-84). В настоящее время нами обнаружено 13 и другими авторами — 4 штамма (или изолята РНК), гомологичных последнему и сформировавших «группу 886».
Структуры каждого из пяти генотипов ВКЭ представляют собой последовательности нуклео-тидов, состоящие из чередований участков, одни из которых являются специфичными для каждого из них, другие — общими. Частота их чередований у штамма 178-79 и «группы 886» выражена сильнее, чем у представителей трех основных генотипов. При сопоставлении полипротеинов 54 штаммов выявлено три аминокислотных остатка, характерных только для генотипов 4 и 5: изо-лейцин (I) в позиции 109 (на конце белка С), лизин (^ в позиции 2074 (белок NS3) и аспарагиновая кислота в позиции 2515 (начало белка NS5). Установлено, что надежным генотипспецифиче-ским признаком является определенное сочетание аминокислот в 22 позициях, в 12 из которых обнаружены аминокислотные остатки строго консервативные для каждого из трех основных генотипов: ^3, E-206, Ш1-54, Ш1-285, NS2A-127, NS2A-175, NS2A-225, Ш3-376, NS4B-28, NS4B-96, NS5-18, NS5-671. В указанных выше 22 позициях у генотипа 4 чередуются аминокислоты, характерные для генотипов 1 и 3, у генотипа 5 — наряду с аминокислотами, присущими трем основным генотипам, отмечается чередование уникальных замен (С-108А, NS2A-127S и NS3-258G).
Возможно, приведенные факты косвенно указывают на такое явление, как множественная рекомбинация и демонстрируют ее значительную роль в процессе видообразования у флавивирусов млекопитающих, передающихся клещами.
ИЗУЧЕНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ ТРЕТИЧНЫХ АЛКИЛАМИНОВ НА СТРУКТУРНУЮ ОРГАНИЗАЦИЮ БИОПЛЕНОК ФОРМИРУЕМЫХ ПАТОГЕННЫМИ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ И ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫМИ БАКТЕРИЯМИ Л.В. Диденко1, Г.Г. Кардаш2, Э.Р. Толордава1, Д.А. Куршин2, О.В. Емшанов2
ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи Минздравсоцразвития РФ; 2Научно-производственная компания ООО «ИНТЕРСЭН-плюс»
В настоящее время дезинфицирующие средства на основе третичных алкиламинов получают широкое распространение, поскольку обладают бактерицидной активностью в отношении грамполо-жительных и грамотрицательных бактерий, грибов и вирусов и низкими показателями токсичности.
Оценка антимикробной активности дезинфицирующих средств проводится по традиционным микробиологическим методикам, в результате которых регистрируется способность микроорганизмов к росту на питательных средах после воздействия микробиоцидами.
Применение традиционных микробиологических методов оценки микробиоцидной активности в отношении образуемых бактериями в неблагоприятных для них условиях биопленок неэффективно, поскольку ростовые свойства бактерий в составе биопленок изменены. Отсутствие роста бактерий
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
из биопленок после их обработки дезсредством нельзя считать критерием утраты ими жизнеспособности. Устойчивость микроорганизмов в составе биопленок обусловлена также защитными свойствами эк-зоклеточного полисахаридного матрикса, наличие которого является основным признаком сформированной биопленки. Микробиологическими методами не представляется возможным оценить действие дезсредства на экзоклеточный матрикс биопленок.
Использование микроскопических методов существенно расширяет возможности объективизации оценки действия микробиоцидных препаратов на микроорганизмы, поскольку при использовании этих методов визуализируется процесс ориентированного действия молекул биоцидного вещества на структурные компоненты микроорганизмов и биопленок. По степени дезорганизации тех или иных структурных компонентов микроорганизмов можно судить об их жизнеспособности.
В данном исследовании методами световой и электронной микроскопии было изучено действие третичных алкиламинов (дезинфицирующее средство «Оптимакс») на структурно-функциональную организацию вегетативных форм грамотрицатель-ных и грамположительных бактерий (Escherichia coli, Pseudomonas aureginosa, Salmonella typhimurium и Staphylococcus aureus) и образуемых ими биопленок.
Показано, что под воздействием третичных ал-киаминов на вегетативные (планктонные) бактерии происходит флокуляция с образованием много -клеточных конгломератов, разрушение клеточной стенки и цитоплазматической мембраны, дезорганизация цитоплазмы и рибонуклеопротеидного комплекса. Степень выраженности повреждений бактерий зависела от концентрации препарата — чем выше концентрация, тем более были изменены клетки. Бульонные культуры бактерий, обработанные средством «Оптимакс» в концентрации 2,5% в течение 60 мин, биопленки не образовывали.
При обработке дезинфицирующим средством «Оптимакс» в концентрации 2,5% в течение 60 мин зрелых биопленок вывлены ярко выраженные изменения структуры экзополисахаридного матрикса и деструкция бактериальных клеток внутри биопленки. Разрушение бактерий внутри биопленок свидетельствует о преодолении препаратом экзополиса-харидного барьера, и является важным показателем биоцидной активности третичных алкиламинов.
Таким образом, на основании проведенного исследования можно рассматривать дезинфицирующие средства на основе третичных алкиламинов как перспективные препараты для борьбы с биологическими пленками, которые образуют наиболее эпидемиологически значимые штаммы возбудителей госпитальных инфекций.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ К АНТИБИОТИКАМ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ИЗОЛИРОВАННЫХ КОЛОНИЙ СТРЕПТОКОККА
Е.В. Диц
ГБОУ ВПО ««Тюменская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, г. Тюмень
В стационарах России ежегодно регистрируется около 2,5 млн больных с внутрибольничными инфекциями (ВБИ), а ежегодный экономический ущерб, причиняемый инфекциями связанными
с оказанием медицинской помощи (ИСМП) составляет более 5 млрд рублей (Концепция. Минздрав России, 2011). Проблема снижения заболеваемости стептококковыми инфекциями остается актуальной до настоящего времени в связи со сложностью лабораторной диагностики, низкой устойчивостью возбудителей во внешней среде, селекцией и формированием госпитальных штаммов с множественной лекарственной устойчивостью. Задачей настоящих исследований явилось совершенствование методов лабораторной диагностики стрептококковых инфекций на основании изучения чувствительности к антибиотикам сопутствующей микрофлоры стрептококковым инфекциям. За период 1997—2011 гг. микробиологическими методами обследовано 5300 больных. Чувствительность выделенных бактерий к антибиотикам определяли диско-диффузионным методом. Использовали следующие антибиотики: стрептомицин, эритромицин, гентамицин, ами-кацин, линкомицин, бензилпенициллин, олеан-домицин, цефаклор, цефуроксим, цефатоксим, цефалексин. На основании проведенного анализа установлено, что сопутствующая микрофлора стрептококковым инфекциям чувствительна к ген-тамицину, а стрептококки в присутствии данного антибиотика формировали изолированные колонии. В мазках из зева сопутствующая микрофлора была чувствительна к гентамицину в 90—96% случаев, а стрептококки были резистентны к гентами-цину. Поэтому предложен способ получения изолированных колоний стрептококков с использованием дисков с гентамицином. Для накопления стрептококков, обладающих анаэробными свойствами, предварительно делали посев исследуемого материала на печеночный бульон Китта—Тароцци.
Предложенный способ позволяет сократить время проведения лабораторных исследований, уменьшить расход питательных сред и повысить процент выделения стрептококков из исследуемого материала, что позволяет в более полном объеме проводить противоэпидемические мероприятия при возникновении ИСМП, вызываемых стрептококком.
МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ЛОВУШЕК И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ
И.И. Долгушин, А.Ю. Савочкина, Ю.С. Шишкова
ГБОУ ВПО ЧелГМА Минздравсоцразвития России, г. Челябинск
Открытие V. Brinkmann и соавт. в 2004 г. ней-трофильных внеклеточных ловушек и установление их антимикробного эффекта, является началом нового этапа в изучении нейтрофильных грануло-цитов. Весьма актуальной является разработка информативных и доступных методов обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек и их применения в клинической и диагностической практике.
Нейтрофильные гранулоциты, содержащиеся в крови, тканях и на поверхности слизистых оболочек, могут обладать неодинаковыми свойствами. Изначально была отработана методика определения ловушек, образованных нейтрофилами, выделенными из периферической крови. Показано, что для ней-трофилов чистой фракции, окраска: акридиновым оранжевым, Sytox Green и по Романовскому—Гимзе могут быть использованы для определения внеклеточных ловушек.
