CC BY
25
DOI:10.23888/PAVLOVJ2020282135-142 ORIGINAL STUDY
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРОГЕСТЕРОНА НА АКТИВНОСТЬ ГЛИКОПРОТЕИНА-Р IN VITRO
© П.Д. Ерохина, Ю.В. Абаленихина, А.В. Щулькин, И.В. Черных, Н.М. Попова, А.А. Слепнев, Е.Н. Якушева
ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России, Рязань, Россия
Актуальность. Гликопротеин-Р (Pgp, АВСВ1) - белок-транспортер, участвующий в фармакокинетике лекарственных веществ, а также развитии резистентности опухолевых клеток к химиотерапии.
Цель. Изучить влияние прогестерона на активность Pgp in vitro на клеточной модели эпителия тонкого кишечника человека.
Материалы и методы. Исследования выполнены на линии клеток Caco-2. Активность Pgp оценивали по транспорту фексофенадина в специальной трансвелл-системе. Концентрацию фексофенадина анализировали методом ВЭЖХ. Количество Pgp определяли методом ИФА. Были выполнены четыре серии экспериментов: контроль - клетки, которые преинкуби-ровали с чистой транспортной средой без добавления каких-либо веществ; влияние рифампи-цина на активность и синтез Pgp в концентрации 10 мкмоль/л при преинкубировании в течение 3 сут (контроль индукции); влияние прогестерона на активность Pgp в концентрациях 1, 10 и 100 мкмоль/л при преинкубировании в течение 30 мин; влияние прогестерона на активность и синтез Pgp в концентрациях 1, 10 и 100 мкмоль/л при преинкубировании в течение 3 сут.
Результаты. Прогестерон в концентрациях 1 и 10 мкМ при инкубации с клетками в течение 30 мин достоверно не влиял на активность Pgp, однако в концентрации 100 мкМ снижал активность белка-транспортера.
При инкубировании клеток линии Caco-2 с прогестероном в концентрациях 1, 10 и 100 мкМ в течение 3 сут активность Pgp не изменялась. Прогестерон в концентрации 100 мкМ при инкубировании в течение 3 сут значимо повышал синтез Pgp в энтероцитах на 114,3% по сравнению с показателями контроля, а в остальных используемых концентрациях (1 и 10 мкМ) достоверного эффекта не оказал.
Заключение. Прогестерон в эксперименте in vitro на клетках линии Caco-2 в концентрации 100 мкМ оказывает прямое ингибирующее действие на активность Pgp, однако при инкубации в течение 3 сут повышает синтез белка-транспортера, что нивелирует его инги-бирующую активность.
Ключевые слова: гликопротеин-Р; линия клеток Сасо-2; прогестерон.
A STUDY OF INFLUENCE OF PROGESTERONE ON ACTIVITY OF GLYCOPROTEIN-P IN VITRO
P.D. Erokhina, Yu.V. Abalenikhina, A.V. Shchulkin, I.V. Chernykh, N.M. Popova, A.A. Slepnev, E.N. Yakusheva
Ryazan State Medical University, Ryazan, Russia
Background. Glycoprotein-P (Pgp, ABCB1) is a transporter protein participating in pharma-cokinetics of medical drugs, and also in development of resistance of tumor cells to chemotherapy.
(£) ©
РОССИЙСКИЙ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ ВЕСТНИК имени академика И.П. Павлова. 2020. Т. 28. №2. С. 135-142 135 I.P. PAVLOV RUSSIAN MEDICAL BIOLOGICAL HERALD. 2020;28(2):135-42
ORIGINAL STUDY DOI:10.23888/PAVLOVJ2020282135-142
Aim. To study the influence of progesterone on the activity of Pgp in vitro on a cell model of human small intestinal epithelium.
Materials and Methods. The work was conducted on Caco-2 cells. The activity of Pgp was evaluated by transport of fexofenadine in a special transwell-system. Concentration of fexofenadine was analyzed by HPLC method. The amount of Pgp was determined by EIA method. Four series of experiments were conducted: control - cells preincubated with clean transport medium without addition of any substances; influence of rifampicin on the activity and synthesis of Pgp in the concentration 10 |imol/l in preincubation for 3 days (induction control); influence of progesterone on the activity of Pgp in concentrations 1, 10 and 100 |imol/l in preincubation for 30 min; influence of progesterone on the activity and synthesis of Pgp in concentrations 1, 10 and 100 ^mol/l in preincubation for 3 days.
Results. Progesterone in the concentrations 1 and 10 |iM in incubation with cells within 30 minutes did not show any reliable influence on the activity of Pgp, however, in concentration 100 |iM it reduced the activity of the transporter protein.
In incubation of Caco-2 cells with progesterone in concentrations 1, 10 and 100 |iM within 3 days the activity of Pgp remained unchanged. Progesterone in concentration 100 |iM in incubation within 3 days significantly increased synthesis of Pgp in enterocytes by 114.3% as compared to control, and in other used concentrations (1 and 10 |iM) it produced no reliable effect.
Conclusion. In in vitro experiments on Caco-2 cells progesterone in concentration 100 |iM produces a direct inhibiting effect on the activity of Pgp; however, in incubation within 3 days it increases synthesis of the transporter protein, which cancels out its inhibitory activity.
Keywords: glycoprotein-P; Caco-2 cells; progesterone.
Гликопротеин-Р (Pgp, ABCB1) - белок-транспортер, экспрессирующийся в би-липидной мембране клеток. Pgp обеспечивает защиту органов и тканей от ксенобиотиков, являющихся его субстратами, выводя их из клеток во внеклеточное пространство и биологические жидкости. Например, экс-прессируясь в опухолевых клетках он формирует развитие их резистентности к химиотерапии, в энтероцитах кишечника препятствует всасыванию веществ, в гепатоци-тах и эпителии почечных канальцев выводит вещества в желчь и мочу соответственно, в эндотелиальных клетках гистоге-матических барьеров препятствует проникновению веществ в забарьерные органы [1].
Показано, что некоторые вещества способны влиять на функционирование Pgp. Индукторы (рифампицин) повышают активность белка-транспортера, а ингибиторы (верапамил, хинидин) ее снижают [2].
Установлено регулирующее влияние половых гормонов на функционирование Pgp [3,4]. При изучении действия прогестерона на активность и синтез Pgp были получены противоречивые результаты.
На клеточной линии карциномы яичника человека (NCI-ADR-RES), содержащей значительное количество рецепторов к прогестерону, установлено, что экспрессия гена MDR1, увеличивалась после 8 ч инкубации с прогестероном в концентрации 10-7 М. Влияние прогестерона на клеточную линию карциномы плаценты человека (JAR) с низким уровнем прогестероновых рецепторов не привело к повышению экспрессии гена MDR1. При этом использование прогестерона в течение 24 и 72 ч дозозависимо (в концентрациях более 10-8 М) увеличивало экспрессию белка Pgp в клетках линии NCI-ADR-RES и JAR. Повышение экспрессии транспортера сопровождалась увеличением его активности, которую оценивали по накоплению клетками субстратов Pgp -саквинавира и паклитаксела [5].
На линии клеток L-MDR1, образованной трансфекцией линии эпителиоцитов почки свиньи LLC-PK1 геном MDR1 человека, и доксорубицинорезистентной клеточной линии моноцитарной лейкемии мышей с повышенной экспрессией mdr1a/1b (P388/dx) выявлено, что прогестерон сни-
ORIGINAL STUDY
жал активность Pgp в концентрации 13,3±3,2 мкМ на линии клеток L-MDR1 и в концентрации 30,2±9,8 мкМ - на клеточной линии P388/dx [6].
Анализ литературы показал, что исследований на линиях клеток основных органов, отвечающих за фармакокинетику лекарственных веществ (кишечном и почечном эпителии, гепатоцитах, эндотелии ги-стогематических барьеров), практически не проводилось.
Ранее нами в экспериментах in vivo на кроликах было показано, что прогестерон повышает активность и синтез Pgp в энте-роцитах кишечника [4].
Целью настоящего исследования явилось изучение влияние прогестерона на активность Pgp in vitro на клеточной модели эпителия тонкого кишечника человека.
Материалы и методы
Исследования in vitro выполнены на линии клеток карциномы ободочной кишки человека - Caco-2, полученной из ФГБУН ИНЦ РАН, Санкт-Петербург.
Клеточную линию Caco-2 культивировали при 37°С и 5% концентрацией СО2 в Дульбекко модифицированной среде Игла (DMEM), содержащей глюкозу (4500 мг/л) («Sigma-Aldrich», Германия), L-глутамин (4 мМ) («Sigma-Aldrich», Германия), 15% бычьей сыворотки («Sigma-Aldrich», Германия), 100 ЕД/мл пенициллина («Sigma-Aldrich», Германия) и 100 мкг/мл стрептомицина. При достижении 70-90% кон-флюентности клетки снимали с фласка за счет добавления раствора трипсин-ЭДТА (0,25% трипсина и 0,2% эДтА, «Sigma-Aldrich», Германия) и высеивали в транс-велл-систему для оценки активности Pgp или в 6 луночные планшеты для определения влияния прогестерона на синтез белка-транспортера. Клетки культивировали в течение 21 сут, когда происходит их спонтанная дифференцировка в клетки, подобные кишечному эпителию [7].
Трансвелл-система представлена апикальной (a) и базолатеральной (b) камерами. Дном апикальной камеры является полупроницаемая мембрана, на которую высеивали
клетки с плотностью 105/см2 (33 000 клеток/ячейка). В исследовании применяли 12-луночный планшет с полупроницаемой мембраной (12 mm Transwell® with 0.4 |im Pore Polycarbonate Membrane Insert, Sterile, Corning, США). При достижении трансэпителиального сопротивления выше 500 мОм*см2 выполняли транспортные эксперименты. Интервал между транспортными экспериментами в одной и той же транс-велл-системе составлял не менее 7 дней.
Функционирование Pgp оценивали по транспорту его маркерного субстрата -фексофенадина («Sigma-Aldrich», Германия) в трансвелл-системе. Для этого питательную среду заменяли на транспортную -раствор Хэнкса («Sigma-Aldrich», Германия), забуференный 25 мМ Хепес при рН 7,4 («Sigma-Aldrich», Германия) с содержанием 1% диметилсульфоксида («ПанЭко», Россия). Далее в апикальную камеру добавляли фексофенадин в конечной концентрации 150 мкМ [7], а через 1, 2 и 3 ч осуществляли забор образцов транспортной среды (50 мкл) из базолатеральной камеры для определения содержания маркерного субстрата (a-b транспорт, за счет пассивной диффузии против функционирования Pgp).
Затем в других трансвелл-системах оценивали транспорт фексофенадина из базолатеральной камеры в апикальную (b-a транспорт за счет пассивной диффузии и белка-транспортера). Для этого фексофена-дин в концентрации 150 мкМ добавляли в базолатеральную камеру, а через 1, 2 и 3 ч забирали образцы транспортной среды (50 мкл) из апикальной камеры для определения концентрации маркерного субстрата.
Транспорт фексофенадина из камеры a в камеру b и обратно оценивали по формуле [8]:
dQ 1
Papp=dtХ (AxCO) где Рарр - коэффициент кажущейся проницаемости (apparent permeability coefficient), dQ/dt - изменение концентрации субстрата в камере реципиенте за время инкубации, A - площадь полупроницаемой мембраны лунки в трансвелл-системе, на которой
ORIGINAL STUDY
культивировали клетки, C0- начальная концентрация субстрата в камере-доноре.
Далее определяли отношение коэффициентов кажущейся проницаемости: ba к ab.
Данный параметр, являясь интегральным, показывает общий вклад белка-транспортера Pgp в перенос маркерного субстрата фексофенадина через билипидную мембрану.
Содержание фексофенадина в транспортной среде определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ детектированием на хроматографе «Стайер» (Россия) по разработанной нами методике [2]. Полученную пробу транспортной среды (50 мкл), содержащую фексофенадин, разводили в 150 мкл подвижной фазы, и 100 мкл полученного раствора вводили в хроматограф.
Для оценки влияния прогестерона на активность Pgp in vitro его добавляли в обе камеры (апикальную и базолатеральную) вне зависимости от направления транспорта фексофенадина.
Для изучения влияния прогестерона на синтез Pgp клетки снимали с лунок 6 луночного планшета добавлением раствора трипсин-ЭДТА (0,25% трипсина и 0,2% ЭДТА, «Sigma-Aldrich», Германия). Полученные клетки лизировали трехкратным циклом замораживания-размораживания. В полученном лизате определяли содержание Pgp методом ИФА с помощью набора Human Permeability glycoprotein ELISA kit («Blue gene», Китай). Количество белка в пробах анализировали методом Бредфорда (Pierce Coomassie Plus (Bradford) Assay Kit, «ThermoFisher», США).
В ходе исследования были выполнены следующие серии экспериментов:
1) Контроль - клетки, которые преин-кубировали с чистой транспортной средой без добавления каких-либо веществ;
2) Влияние рифампицина на активность и синтез Pgp в концентрации 10 мкмоль/л при преинкубировании в течение 3 сут - контроль индукции;
3) Влияние прогестерона на активность Pgp в концентрациях 1, 10 и 100 мкмоль/л при преинкубировании в течение 30 мин;
4) Влияние прогестерона на активность и синтез Pgp в концентрациях 1, 10 и 100 мкмоль/л при преинкубировании в течение 3 сут.
Полученные результаты обрабатывали с применением программы «Stat Soft Statistica 13.0» (США, лицензия JPZ811I52 1319AR25ACD-W) и Microsoft Excel for MAC ver. 16.24 (ID02984-001-000001). Для оценки статистической значимости различий использовали дисперсионный анализ (ANOVA), попарные сравнения выполняли с помощью критерия Ньюмена-Кейлса. Статистически значимыми считали различия при p<0,05.
Результаты и их обсуждение
Результаты эксперимента представлены в таблице 1 и на рисунке 1.
Культивирование клеток линии Caco-2 c 10 мкМ рифампицина в течение 3 сут приводило к повышению активности Pgp, что проявлялось в снижении Papp ab на 31,7% (p<0,05) и повышении отношения Papp ba к Papp ab на 93,2% (p<0,05).
Прогестерон в концентрациях 1 и 10 мкМ при инкубации с клетками Caco-2 в течение 30 мин достоверно не влиял на активность Pgp. В то же время в концентрации 100 мкМ снижал отношение Papp ba к Papp ab на 26,2% (p<0,05), что свидетельствует о снижении активности белка-транспортера.
При инкубировании клеток линии Caco-2 с прогестероном в течение 3 сут в концентрациях 1, 10 и 100 мкМ изучаемые показатели Papp ba, Papp ab и их отношение достоверно не изменялись по сравнению со значениями контроля.
В следующей серии экспериментов было изучено влияние прогестерона и ри-фампицина на синтез белка-транспортера Pgp в клетках линии Caco-2.
Рифампицин в концентрации 10 мкМ при инкубировании в течение 3 сут вызывал повышение количества Pgp в энтероци-тах на 52,7% (p<0,05), что подтверждает корректность эксперимента, т.к. рифампи-цин является классическим индуктором белка-транспортера, повышающим его активность за счет увеличения синтеза [2].
DOI:10.23888/PAVLOVJ2020282135-142 ORIGINAL STUDY
Прогестерон в концентрации 100 мкМ сравнению с показателями контроля, а в при инкубации в течение 3 сут повышал син- остальных концентрациях (1 и 10 мкМ) до-тез Pgp в энтероцитах на 114,3% ф=0,018) по стоверного эффекта не оказал (рис. 1).
Таблица 1
Влияние прогестерона на транспорт фексофенадина через билипидную мембрану клеток линии Caco-2 (M±SD, Х10-6 см/сек)
Papp ba Papp ab Papp bal Papp ab
Контроль, п=5 2,32+0,66 0,82+0,15 2,79+0,36
Рифампицин 10 мкМ 3 сут, п=3 2,9+0,31 0,56+0,09* 5,39+1,24*
Прогестерон 1 мкМ 30 мин, п=3 1,96+0,18 0,72+0,17 2,83+0,76
Прогестерон 10 мкМ 30 мин, п=3 2,4+0,24 0,89+0,25 2,93+1,23
Прогестерон 100 мкМ 30 мин, п=3 2,03+0,42 0,99+0,19 2,06+0,17*
Прогестерон 1 мкМ 3 сут, п=3 1,95+0,46 0,63+0,31 3,36+0,83
Прогестерон 10 мкМ 3 сут, п=3 2,13+0,18 0,71+0,15 3,1+0,71
Прогестерон 100 мкМ 3 сут, п=3 2,32+0,42 0,76+0,66 3,1+0,84
Примечание: * p<0,05 - статистически значимые различия по сравнению с показателями контроля
ев И
о -
p
M
P
о sa н о и Т S Ч о
и
p=0,018
4OO 35O 3OO 25O 2OO 15O 1OO 5O O
Примечания: 1 - контроль (п=7), 2 - рифампицин 10 мкМ 3 сут (п=4), 3 - прогестерон 1 мкМ 3 сут (п=3), 4 - прогестерон 10 мкМ 3 сут (п=3), 5 - прогестерон 100 мкМ 3 сут (п=3)
Рис 1. Количество Pgp в клетках линии Caco-2 при воздействии прогестерона (M±SD, нг/мг белка)
1
2
3
4
5
Полученные результаты показывают, что прогестерон является прямым ингибитором Pgp, то есть способен подавлять его активность при непосредственном взаимо-
действии с его молекулой, что было установлено в опытах при инкубировании гормона в концентрации 100 мкМ с клетками Caco-2 в течение 30 мин.
ORIGINAL STUDY
В тоже время, прогестерон при длительной инкубации (3 сут) повышает синтез белка-транспортера в культуре клеток. При этом активность Р§р достоверно от показателей контроля не отличается, что видимо связано с прямым ингибированием гормоном молекулы Р§р, которое, по-видимому, компенсаторно активирует синтез транспортера.
Прямое ингибирующее действие прогестерона на активность Р§р и при этом его способность повышать синтез белка-транспортера вероятно лежат в основе противоречивых результатов, описанных в литературе.
Механизмы повышения синтеза Р§р под действием прогестерона могут быть связаны с влиянием на экспрессию гена МОШ, кодирующего белок-транспортер, при взаимодействии со специфическими прогестеро-новыми рецепторами, или с транскрипцион-
ными факторами, например, прегнан-Х-ре-цептором (PXR) или конститутивным андро-становым рецептором (CAR) [5,9].
Прогестероновые рецепторы в линии клеток Caco-2 не описаны, хотя их экспрессия обнаружена в кишечнике человека [10].
Таким образом, механизм активации синтеза Pgp под влиянием прогестерона требует дальнейшего изучения и уточнения.
Заключение Прогестерон в эксперименте in vitro на клетках линии Caco-2 в концентрации 100 мкМ оказывает прямое ингибирующее действие на активность Pgp, однако при инкубировании в течение 3 сут повышает синтез белка-транспортера, что нивелирует его ин-гибирующую активность. Видимо, прямое ингибирующее действие прогестерона на активность Pgp в энтероцитах сопровождается компенсаторной активацией его синтеза.
Литература
1. Якушева Е.Н., Щулькин А.В., Попова Н.М., и др. Структура, функции гликопротеина-Р и его значение для рациональной фармакотерапии // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. 2014. №2. С. 3-11.
2. Якушева Е.Н., Черных И.В., Щулькин А.В., и др. Методика определения принадлежности лекарственных средств к числу субстратов гликопроте-ина-P // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2015. №3. С. 49-53.
3. Гацанога М.В., Черных И.В., Щулькин А.В., и др. Можно ли оценивать принадлежность лекарственных веществ к субстратам гликопротеина-P на самках кроликов породы шиншилла // Наука молодых (Eruditio Juvenium). 2016. №3. С. 5-10.
4. Щулькин А.В, Черных И.В., Якушева Е.Н., и др. Влияние прогестерона на функциональную активность гликопротеина-Р в эксперименте // Химико-фармацевтический журнал. 2018. Т. 52, №7. С. 3-8. doi: 10.30906/0023 -1134-2018-52-7-3-8
5. Coles L.D., Lee I.J., Voulalas P.J., et al. Estradiol and progesterone-mediated regulation of P-gp in Pgp overexpressing cells (NCI-ADR-RES) and placental cells (JAR) // Molecular Pharmaceutics. 2009. Vol. 6, №6. P. 1816-1825. doi:10.1021/mp900077q
6. Fröhlich M., Albermann N., Sauer A., et al. In vitro and ex vivo evidence for modulation of P-glycopro-tein activity by progestins // Biochemical Pharmacology. 2004. Vol. 68, №12. P. 2409-2416. doi:10. 1016/j.bcp.2004.08.026
7. Petri N., Tannergren C., Rungstad D., et al. Transport characteristics of fexofenadine in the Caco-2 cell model // Pharmaceutical Research. 2004. Vol. 21, №8. P. 1398-1404. doi:10.1023/ b:pham.0000036913.90332.b1
8. Elsby R., Surry D.D., Smith V.N., et al. Validation and application of Caco-2 assays for the in vitro evaluation of development candidate drugs as substrates or inhibitors of P-glycoprotein to support regulatory submissions // Xenobiotica. 2008. Vol. 38(7-8). P. 1140-1164. doi: 10.1080/00498250802050880
9. Kliewer S.A., Moore J.T., Wade L. An orphan nuclear receptor activated by pregnanes defines a novel steroid signaling pathway // Cell. 1998. Vol. 92, №1. P. 73-82. doi:10.1016/s0092-8674(00)80900-9
10. Watanabe K., Jinriki T., Sato J. Effects of progesterone and norethisterone on cephalexin transport and peptide transporter PEPT1 expression in human intestinal cell line Caco-2 // Biological & Pharmaceutical Bulletin. 2006. Vol. 29, №1. P. 90-95. doi: 10.1248/bpb.29.90
References
1. Yakusheva EN, Shulkin AV, Popova NM, et al. Structure, functions, of P-glycoprotein and its role in rational pharmacotherapy. Reviews on Clinical Pharmacology and Drug Therapy. 2014;(2):3-11. (In Russ).
2. Yakusheva EN, Chernykh IV, Shulkin AV, et al. Methods of identification of drugs as P-glycoprotein substrates. I.P. Pavlov Russian Medical Biological Herald. 2015;(3):49-53. (In Russ).
3. Gatsanoga MV, Chernykh IV, Shchulkin AV, et al. The method of assessment of drugs belonging to the substrates of P-glycoprotein on female rabbits.
Nauka Molodykh (Eruditio Juvenium). 2016;(3):5-10. (In Russ).
4. Shchulkin AV, Chernykh IV, Yakusheva EN, et al. Influence of progesterone on P-glycoprotein functional activity in experiment. Khimiko-Farma-tsevticheskii Zhurnal. 2018;52(7):3-8. (In Russ). doi: 10.30906/0023-1134-2018-52-7-3-8
5. Coles LD, Lee IJ, Voulalas PJ, et al. Estradiol and progesterone-mediated regulation of P-gp in P-gp overexpressing cells (NCI-ADR-RES) and placental cells (JAR). Molecular Pharmaceutics. 2009;6(6): 1816-25. doi:10.1021/mp900077q
6. Fröhlich M, Albermann N, Sauer A, et al. In vitro and ex vivo evidence for modulation of P-glycoprotein activity by progestins. Biochemical Pharmacology. 2004;68(12):2409-16. doi:10.1016/j.bcp.2004.08.026
ORIGINAL STUDY
7. Petri N, Tannergren C, Rungstad D, et al. Transport characteristics of fexofenadine in the Caco-2 cell model. Pharmaceutical Research. 2004;21(8):1398-404. doi:10.1023/b:pham.0000036913.90332.b1
8. Elsby R, Surry DD., Smith VN, et al. Validation and application of Caco-2 assays for the in vitro evaluation of development candidate drugs as substrates or inhibitors of P-glycoprotein to support regulatory submissions. Xenobiotica. 2008;38(7-8):1140-64. doi:10.1080/00498250802050880
9. Kliewer SA, Moore JT, Wade L. An orphan nuclear receptor activated by pregnanes defines a novel steroid signaling pathway. Cell. 1998;92(1):73-82. doi:10.1016/s0092-8674(00)80900-9
10. Watanabe K, Jinriki T, Sato J Effects of progesterone and norethisterone on cephalexin transport and peptide transporter PEPT1 expression in human intestinal cell line Caco-2. Biological & Pharmaceutical Bulletin. 2006;29(1):90-5. doi:10.1248/bpb.29.90
Дополнительная информация [Additional Info]
Информация о финансировании. Исследование выполнено при финансовой поддержке гранта РФФИ 18-415-623001. [Financing of study. The work is supported by the grant of the Russian Foundation for Basic Research № 18-415-623001.]
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, о которых необходимо сообщить в связи с публикацией данной статьи. [Conflict of interests. The authors declare no actual and potential conflict of interests which should be stated in connection with publication of the article.]
Участие авторов. Ерохина П.Д., Абаленихина Ю.В., Попова Н.М. - культивирование клеток линии Caco-2, Ерохина П.Д., Черных И.В. -выполнение транспортных экспериментов, Щулькин А.В., Ерохина П.Д., Попова Н.М. - выполнение ИФА-анализа, написание статьи, Слепнев А.А. - статистическая обработка полученных результатов, Якушева Е.Н. - написание статьи, научное редактирование. [Participation of authors. P.D. Erokhina, Yu.V. Abalenikhina, N.M. Popova - Caco-2 cell cultivation, P.D. Erokhina, I.V. Chernykh - performance of transport experiments, A.V. Shchulkin, P.D. Erokhina, N.M. Popova - ELISA analysis, writing the text, A.A. Slepnev - statistical processing of the results, E.N. Yakusheva - writing the text, scientific editing.]
Информация об авторах [Authors Info]
Ерохина Пелагея Дмитриевна - студент, ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России, Рязань, Россия. [Pelageya D. Erokhina - Student, Ryazan State Medical University, Ryazan, Russia.] ORCID ID: 0000-0003-4802-5656.
Абаленихина Юлия Владимировна - к.б.н., доцент кафедры биологической химии с курсом КЛД ФДПО, ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России, Рязань, Россия. [Yulia V. Abalenikhina - PhD in Biological Sciences, Assistant Professor of the Department of Biological Chemistry, Ryazan State Medical University, Ryazan, Russia.] SPIN: 4496-9027, ORCID ID: 0000-0003-0427-0967, Researcher ID: L-8965-2018.
Щулькин Алексей Владимирович - к.м.н., доцент кафедры фармакологии с курсом фармации ФДПО, ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова Минздрава России, Рязань, Россия. [Alexey V. Shchulkin - MD, PhD, Assistant Professor of the Department of Pharmacology with a Course of Pharmacy of Continuing Professional Education Faculty, Ryazan State Medical University, Ryazan, Russia.]
SPIN: 2754-1702, ORCID ID: 0000-0003-1688-0017, Researcher ID: N-9143-2016.
Черных Иван Владимирович - к.б.н., зав. кафедрой фармацевтической химии, ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России, Рязань, Россия. [Ivan V. Chernykh - PhD in Biological Sciences, Head of the Department of Pharmaceutical Chemistry, Ryazan State Medical University, Ryazan, Russia.] SPIN: 5238-6165, ORCID ID: 0000-0002-5618-7607, Researcher ID: R-1389-2017.
"Попова Наталья Михайловна - к.м.н., доцент кафедры фармакологии с курсом фармации ФДПО, ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России, Рязань, Россия. [Natalia M. Popova - MD, PhD, Assistant Professor of the Department of Pharmacology with a Course of Pharmacy of Continuing Professional Education Faculty, Ryazan State Medical University, Ryazan, Russia.]
SPIN: 7553-9852, ORCID ID: 0000-0002-5166-8372, Researcher ID: B-1130-2016. E-mail: p34-66@yandex.ru
ORIGINAL STUDY DOI:10.23888/PAVLOVJ2020282135-142
Слепнев Александр Александрович - к.б.н., доцент кафедры фармакологии с курсом фармации ФДПО, ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России, Рязань, Россия. [Alexandr A. Slepnev - PhD in Biological Sciences, Assistant Professor of the Department of Pharmacology with a Course of Pharmacy of Continuing Professional Education Faculty, Ryazan State Medical University, Ryazan, Russia.] ORCID ID: 0000-0003-0696-6554.
Якушева Елена Николаевна - д.м.н., профессор, зав. кафедрой фармакологии с курсом фармации ФДПО, ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова Минздрава России, Рязань, Россия. [Elena N. Yakusheva - MD, PhD, Professor, Head of the Department of Pharmacology with a Course of Pharmacy of Continuing Professional Education Faculty, Ryazan State Medical University, Ryazan, Russia.]
SPIN: 2865-3080, ORCID ID: 0000-0001-6887-4888, Researcher ID: T-6343-2017.
Цитировать: Ерохина П.Д., Абаленихина Ю.В., Щулькин А.В., Черных И.В., Попова Н.М., Слепнев А.А., Якушева Е.Н. Изучение влияния прогестерона на активность гликопротеина-Р in vitro // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2020. Т. 28, №2. С. 135-142. doi:10.23888/PAVL0VJ2020282135-142
To cite this article: Erokhina PD, Abalenikhina YuV, Shchulkin AV, Chernykh IV, Popova NM, Slepnev AA, Yakusheva EN. A study of influence of progesterone on activity of glycoprotein-P in vitro. I.P. Pavlov Russian Medical Biological Herald. 2020;28(2):135-42. doi:10.23888/PAVL0VJ 2020282135-142
Поступила/Received: 10.12.2019 Принята в печать/Accepted: 01.06.2020
