Научная статья на тему 'Изучение цитотоксичности сесквитерпеновых лактонов на культуре клеток HepG2'

Изучение цитотоксичности сесквитерпеновых лактонов на культуре клеток HepG2 Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
321
36
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Сейдахметова Р. Б., Смагулов М. К., Кишкентаева А. С., Шаймерденова Ж. Р., Атажанова Г. А.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Изучение цитотоксичности сесквитерпеновых лактонов на культуре клеток HepG2»

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

71

пор 20—40 мкм (1-я фракция клеток); 2-й этап — 1-ю фракцию клеток пропускали через фильтр с диаметром пор 10 мкм (2-я фракция); 3-й этап — 2-ю фракцию пропускали через фильтр с диаметром пор 8 мкм (3-я фракция). Полученные фракции клеток С6 вносили в лунки 12-луночного планшета объемом 1 мл и инкубировали в СО2 инкубаторе. Спустя 72 ч клетки снимали 0,25 % трипсином и подсчитывали в камере Горяева. Во всех фракциях рассчитывали индекс пролиферации: число клеток окончательного роста/число клеток изначально посеянных 100 %. Статистический анализ данных проводили с помощью программ MS Excel и Statisticа 6.0.

Результаты. Перевиваемая линия клеток глиомы крысы С6 характеризуется 85—90 % астроглиальных клеток (протоплазматические и волокнистые астроциты) и около 10 % олигодендроцитов. Протоплазматические астроциты имеют относительно крупные размеры (15—25 мкм) и многочисленные ветвистые отростки. У волокнистых астроци-тов небольшое тело (7—11 мкм) и длинные малоразветвлен-ные отростки. Олигодендроциты — мелкие (размеры тела около 5—6 мкм) клетки со слаборазветвленными, относительно короткими и немногочисленными отростками. Результаты исследований показали, что пропускание клеток через кварцевый фильтр не вызывает их гибели. Субпопуляции клеток во фракциях различаются не только морфологией клеток, но и пролиферацией. Первая фракция про-топлазматических астроцитов размером в диапазоне 20—40 мкм характеризуется высоким индексом пролиферации по сравнению с контролем. Пролиферация волокнистых астроцитов во 2-й (10 мкм) и олигодендроцитов в 3-й (8 мкм) фракциях не отличаются от контрольного уровня.

Заключение. Разработана новая тест-система, включающая кварцевые фильтры с различным диаметром пор и позволяющая выделить из гетерогенной популяции субпопуляции опухолевых клеток по размеру. Тест-система не является цитотоксичной и может использоваться для скрининга противоопухолевых средств с целью дифференцированного подхода в выборе тактики лечения опухолей головного мозга.

Р.Б. Сейдахметова, М.К. Смагулов, Ж.С. Нурмаганбетов, А.Ж. Турмухамбетов, С.М. Адекенов ОЦЕНКА ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ АЛКАЛОИДОВ И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ IN VITRO

АО «Международный научно-производственный холдинг «Фитохимия», Караганда, Казахстан

Введение. В последние годы эффективные цитостати-ки на основе природных соединений находят все более широкое применение в современной медицине. Особые надежды возлагаются на природные соединения из растений, действие которых направлено на новые клеточные мишени для решения одной из основных проблем современной клинической онкологии — множественной лекарственной резистентности опухолей. Особое внимание среди них вызывают растительные алкалоиды. Механизмы действия алкалоидов и их производных на опухолевую клетку отличаются от известных противоопухолевых гено-токсических препаратов. Этим фактом можно объяснить высокую эффективность алкалоидов при действии на от-

дельные виды опухоли, что открывает перспективы для создания нового поколения химиотерапевтических средств.

Цель исследования — изучить цитотоксичность образцов алкалоидов и их производных (гармин, гидрохлорид гармина, 8-ацетилгармина, 2,3,4-триметоксихалконпроиз-водное гармина, 2,4-диметоксихалконпроизводное гарми-на, 2^-халконпроизводное гармина, стахидрин, эхиноп-син, делькозин) на клеточных линиях с применением МТТ-теста.

Материалы и методы. Исследования проводили на клеточной линии HepG2 и на перевиваемой клеточной культуре гепатомы линии НТС, полученной из банка клеточных культур ФГБУН Института цитологии РАН (Санкт-Петербург, Россия). Для оценки цитотоксического действия исследуемых веществ на монослойной клеточной культуре НТС in vitro использовали МТТ-тест. Принцип метода основан на способности живых клеток восстанавливать с помощью ферментов дегидрогеназ митохондри-альной дыхательной цепи желтые соли 3- [4,5-диметилти-азол-2-ел] -2,5-дифенилтетразолиум бромида (МТТ) до нерастворимых в воде темно-фиолетовых гранул фор-мазана. После растворения кристаллы формазана дают окрашивание, определяемое спектрофотометрически.

Результаты. В концентрации 5,0 мкг/мл цитотоксич-ность на культуру клеток HepG2 проявили следующие образцы алкалоидов: гидрохлорид гармина, 8-ацетилгар-мина, 2,3,4-триметоксихалконпроизводное гармина, 2,4-диметоксихалконпроизводное гармина,

2^-халконпроизводное гармина, стахидрин, эхинопсин, делькозин. Установлено, что все исследуемые образцы алкалоидов в концентрациях 10 мкг/мл оказывали цитоток-сическое действие на культуру клеток гепатомы линии НТС.

Заключение. Таким образом, изученные нами алкалоиды и их производные проявляют цитотоксическое действие на культуры клеток HepG2 и НТС.

Р.Б. Сейдахметова, М.К. Смагулов, А.С. Кишкентаева, Ж.Р. Шаймерденова, Г.А. Атажанова, С.М. Адекенов ИЗУЧЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ СЕСКВИТЕРПЕНОВЫХ ЛАКТОНОВ НА КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК HEPG2

АО «Международный научно-производственный холдинг «Фитохимия», Караганда, Казахстан

Введение. Направленный поиск новых биологически активных соединений предусматривает прежде всего разработку молекул, способных активно воздействовать на патологические клетки организма и их рост. Перспективным и потенциальным источником новых лекарственных веществ считаются природные соединения, в частности сес-квитерпеновые лактоны.

Цель исследования — определить цитотоксичность 10 образцов сесквитерпеновых лактонов ф-эпоксиарглабин, цитизинил-эпоксиарглабин, анабазинил-эпоксиарглабин, эпоксиарголид, 3в-гидроксиархалин, анабазиниларголид, эстафиатин, 4-пиридинпроизводное арглабина, 3-пири-динпроизводное арглабина, 3-пиридин-6-метоксипроиз-водное гроссгемина) в концентрациях 3,0 и 5,0 мкг/мл на культуре клеток HepG2.

Спецвыпуск/ том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

72

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

Материалы и методы. В работе использовали клеточную линию HepG2 (гепатоцеллюлярная карцинома). Оценку результатов МТТ-теста проводили путем сопоставления оптической плотности в опытных и контрольных лунках после инкубации клеток карциномы с образцами сесквитерпеновых лактонов в течение 72 ч.

Результаты. По результатам MTT-анализа выявлено, что в концентрации 3,0 и 5,0 мкг/мл изучаемые образцы сесквитерпеновых лактонов оказались цитотоксичными в отношении культуры клеток HepG2. Однако при микроскопическом исследовании в лунках с соединениями цити-зинил-эпоксиарглабин, 3р-гидроксиархалин, 4-пиридин-производное арглабина, 3-пиридинпроизводное арглабина, 3-пиридин-6-метоксипроизводное гроссгемина обнаружены жизнеспособные клетки в меньшем количестве, чем в контроле. Поэтому были проведены дополнительные исследования оставшихся образцов, показавших высокую цитотоксичность (ß-эпоксиарглабин, анабазинил-эпокси-арглабин, эпоксиарголид, анабазиниларголид, эстафиатин) в меньших концентрациях (0,1; 0,5; 1,0; 1,5 мкг/мл).

Заключение. Образцы сесквитерпеновых лактонов (ß-эпоксиарглабин, анабазинил-эпоксиарглабин, эпокси-арголид, анабазиниларголид, эстафиатин) показали высокую цитотоксичность в отношении клеток гепатоцеллюляр-ной карциномы HepG2. Полученные результаты свидетельствуют о том, что данные образцы сесквитерпеновых лактонов являются перспективными для углубленного изучения их противоопухолевой активности в условиях in vivo.

А.В. Сергеев1, Н.Л. Чебан1, Ю.М. Букреев1, И.М. Лученко1, Н.Ю. Соколов2, В.В. Решетникова1, И.Ж. Шубина ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ НАБЛЮДЕНИЯ ПРИМЕНЕНИЯ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ СРЕДСТВ ХИМИОПРОФИЛАКТИКИ РАКА ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия;

ФГБУ ЦКБ с поликлиникой управления делами Президента РФ, Москва, Россия

Введение. Разработаны лечебно-профилактические препараты «Каскатол» (КС, бета-каротин, витамины Е и С), «Чаголюкс» (ЧЛ) на основе экстракта чаги, «Розола-крит» (РОЗ) на основе экстракта корня солодки, плодов шиповника и травы тысячелистника. Препараты разработаны в виде БАДов и поступили в аптечную сеть.

Цель исследования — изучить антиканцерогенную активность препаратов и дать оценку возможности их использования в группах онкологического риска.

Материалы и методы. Антиканцерогенную активность препаратов изучали на модели химического канцерогенеза ЖКТ и печени, индуцированного у крыс ^метил-^ бензилнитрозамином (МБН), N-нитрозодиэтиламином (НДЭА) или ^метил-^нитрозомочевиной (МНМ). Препараты давали вместе с кормом на протяжении всего эксперимента.

Результаты. КС и ЧЛ при систематическом введении животным уменьшали на 35—50 % частоту образования опухолей пищевода, желудка, печени, индуцированных МБН и НДЭА и на 25—35 % опухолей молочной железы,

индуцированных МНМ. Препараты удлиняли латентный период появления опухолей и степень их злокачественности. Препараты обладали антимутагенным и иммуномоду-лирующим действием. Систематический прием КС и РОЗ в группе «злостных курильщиков» (175 человек) в течение 1,5—2,5 лет уменьшал проявления хронического бронхита, повышал антиоксидантный потенциал организма и объективно снижал тягу к табакокурению. Прием КС и ЧЛ у женщин с мастопатиями (115 пациенток) объективно улучшал самочувствие, уменьшал проявления мастолгии, снижал интенсивность климактерических расстройств. Прием КС, РОЗ и ЧЛ в течение 1—1,5 лет больными с хроническим простатитом и аденомой простаты (68 участников) приводил к сокращению никтурии, уменьшению болей и дневной дизурии, отмечено полное опорожнение мочевого пузыря, благоприятная динамика PSA.

Заключение. Препараты КС, ЧЛ и РОЗ можно рассматривать в качестве потенциальных средств химиопрофи-лактики рака.

Ю.Г. Симаков1, В. А. Пурцхванидзе2 ИЗМЕНЕНИЕ СТРУКТУРЫ ДНК ПРИ МОДЕЛЬНОЙ ЛАЗЕРНОЙ МОДИФИКАЦИИ КРОВИ С ФОТОДИТАЗИНОМ

1ФГБОУ ВО «МГУТУ» им. К.Г. Разумовского, Москва, Россия;

2МЦВТ«ЛазерВита», Москва, Россия

Введение. Лазерная модификация крови часто применяется для стимуляции иммунитета у пациентов с онкологическими и другими формами заболеваний. Однако ранее почти не изучалось действие лазерной модификации крови на структуру ДНК в гетерохроматине клеточных элементов крови.

Цель исследования — изучить структуру ДНК в ядрах эритроцитов рыб при модельной лазерной модификации с применением фотодитазина.

Материалы и методы. Работа проведена на молоди рыб Brachydanio rerio, размером около 2 см, которая в настоящее время широко используется в онкологических исследованиях. Опыт проведен на 30 особях. Две партии рыб были контрольные, они подвергались действию либо лазера, либо фотодитазина. В 3-й партии рыб модельную модификацию крови проводили путем экспозиции рыб в растворе фотодитазина с концентрацией 3,0 мг/л в течение 5 мин и облучения красным лазером с длиной волны 630 нм в течение 3 мин при мощности 50 Дж/см2-. ДНК в ядрах эритроцитов окрашивали акридиновым оранжевым и исследовали на препаратах «давленая капля» в поле зрения люминесцентного микроскопа МБМ 3 Л (Пирс., 1969). При этом гашение зеленой флуоресценции ДНК указывает на разрыв нитей ДНК, а оранжевая люминесценция говорит о расхождении ДНК до одноцепочных нитей (Кар-ноухов, 2002). Препараты крови исследовались через 1, 24 и 48 ч после проведения модельной модификации.

Результаты. Отдельное воздействие лазера или фотодитазина не вызывает изменения флуоресценции ядер эритроцитов, а при проведении модельной модификации уже через час наблюдается гашение зеленой флуоресценции в некоторых участках ядер, где происходит разрыв нитей

Спецвыпуск / том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.