CC BY
104
УДК 636.4.085
Изучение свойств пробиотика для птицеводства
Т. В.Олива
Проведенные исследования позволили создать пробиотик направленного действия для использования в птицеводстве. При изучении культурально-морфологических и биохимических свойств лактобактерий (Lactobacillus amy-lovorus) было отобрано десять наиболее перспективных по ряду свойств штаммов.
Ключевые слова: цыплята-бройлеры; кормовые антибиотики; лактобактерии; пробиотик.
Исследования последних лет свидетельствуют о возрастающем интересе ученых к использованию микробных препаратов в сельскохозяйственном производстве в качестве кормовых средств как альтернативы антибиотикам для стимуляции роста и развития сельскохозяйственной птицы [1; 4]. Согласно СанПиН 2.3.2.2354-2008 (Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов), «для пищевых продуктов, произведенных с использованием технологий, обеспечивающих их получение из сырья, полученного без применения <...> стимуляторов роста и откорма животных, антибиотиков, гормональных и ветеринарных препаратов, ГМО, <...> указывается информация: «органический продукт» [2, с. 1]. Пробиотические препараты применяются с целью регуляции метаболических процессов в интенсивно растущих организмах цыплят-бройлеров, а также для развития у них неспецифического иммунитета, профилактики желудочно-кишечных болезней, повы-
шения эффективности использования корма и увеличения продуктивности птицы [6; 7].
Поиск новых микроорганизмов, пригодных для приготовления пробиотиков, не теряет актуальности. Как известно, пробиотический эффект бактерий определяется суммой специфических активностей этих организмов.
Лактобактерии, являясь представителями индигенной микрофлоры кишечника, незаменимы во взаимодействии между макроорганизмом, микроорганизмами и окружающей средой. Они способны продуцировать антибиотики, органические кислоты, снижать величину рН содержимого кишечника, изменять окислительно-восстановительный потенциал и оказывать благоприятное действие на организм посредством конкурентного антагонизма с различными условно-патогенными бактериями [8]. Поэтому нами была поставлена задача выделить из кишечника цыплят-бройлеров кросса Hubbard ISA ассоциацию молочнокислых бактерий, изучить их свойства и создать пробиотик направленного действия для по -вышения продуктивности сельскохозяйственной птицы без применения кормовых антибиотиков с целью производства органической продукции.
Для выделения ассоциации кишечных лактобактерий в лабораторных условиях Центра биотехнологических исследований ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» имени В. Я. Горина была сформирована группа цыплят-бройлеров. В течение первых дней жизни (максимум семи) цыплята дополнительно к рациону получали пребиотический препарат лактусан, содержащий лактулозу, из расчета 1,5 мг на 1 кг живой массы. Он использовался нами в качестве стимулятора индигенной нормофлоры кишечника здоровых цыплят. Затем были произведены вскрытия цыплят в возрасте трех, семи и двенадцати суток. При ревизии органов грудной и брюшной полости визуальной патологии выявлено не было. В качестве опытных образцов в асептических условиях были взяты участки
двух слепых отростков и толстой кишки. Так как состав просветной микрофлоры зависит от характера кормления и функционального состояния кишечника, наибольшее значение имеет изучение пристеночной микрофлоры. Поэтому в стерильных условиях были произведены соскобы со слизистых поверхностей слепых и толстой кишок, осуществлено селективное выращивание бактерий, их выделение и изучение свойств ассоциаций кишечной нормофлоры [5].
При изучении культурально-морфологических и биохимических свойств тех штаммов лактобактерий (Lactobacillus amylovorus), которые были выделены из кишки цыплят, для дальнейших исследований отобрали десять штаммов, наиболее перспективных по ряду свойств. Все изучаемые штаммы были обозначены нами ЛАКТО-1, ЛАКТО-2 ... ЛАКТО-10. Штаммы инкубировали в питательной среде в интервале рН от 5,5 до 6,2 при оптимальной температуре роста 40° С. На МРС-агаре был отмечен рост тестируемых штаммов до 87 %, на среде Квасниковой — до 76 %. Критериями для отбора новых штаммов лактобактерий служили:
• способность бактерий к кислотообразованию,
• противомикробная активность,
• устойчивость к действию наиболее часто применяемых в сельскохозяйственном производстве антибиотиков.
Биохимическая активность изучалась с помощью систем индикаторных бумажных для идентификации лактобактерий (СИБ). Антибиотическую активность определяли методом последовательных разведений по Н. А. Красильникову, модифицированным для молочнокислых бактерий М. С. Полонским. В качестве тест-культуры использовали Е. coli (лат. Escherichia coli). Дополнительно изучали антибиотическую активность на поверхности плотной питательной среды, когда микробы не находятся в непосредственном контакте, а решающее значение имеют вещества, которые они выделяют в окружающую среду.
Установлено, что лактобактерии, добавленные в нижний слой агара, оказывали ингибирующее действие на рост эшерихий. Степень выраженности антагонистической активности пробиотических штаммов нарастала по мере увеличения их концентрации и продолжительности инкубации до засева индикаторной культуры. Лактобактерии разных штаммов обладали неодинаковой способностью ингибировать рост Е. coli, что нами учитывалось при создании нового пробиотического препарата для профилактики желудочно-кишечных нарушений у птицы. Показатели минимальной ингибирующей концентрации (МИК) для разных штаммов лактобактерий варьировали от 4,91 до 2,75 Lg KOE/мл. Нами обнаружено, что отдельные штаммы лактобактерий были устойчивы к действию желчи при повышении ее концентрации до 40 %. Были определены параметры устойчивости данных бактерий к щелочной реакции среды. Рост отмечался только при рН не выше 8,3. Выделенные лактобактерии обладали разной устойчивостью к терапевтическим дозам ряда антибиотиков (табл. 1). Созданный микробный консорциум был назван ЛАКТО-11.
Таблица 1
Чувствительность пробиотика из лактобактерий к антибиотикам
№ п/п Противомикробные препараты в диске Диаметр зон лизиса (мм) Интерпретация результата
1 Бензилпенициллин < 20 устойчив
2 Оксациллин < 15 устойчив
3 Цефалотин <14 устойчив
4 Канамицин <14 устойчив
5 Гентамицин <23 чувствителен
6 Эритромицин <14 устойчив
7 Рифампицин <12 устойчив
8 Ампициллин <9 устойчив
9 Левомицетин <15 устойчив
10 Стрептомицин <16 устойчив
11 Норфлоксацин > 21 умеренно чувствителен
12 Ципрофлоксацин > 21 чувствителен
13 Цефатоксим > 21 чувствителен
14 Пефлоксацин > 21 чувствителен
Итак, созданный пробиотик ЛАКТО-11, способный ингибировать рост в питательных средах бактерий группы кишечной палочки и обладающий рядом перспективных свойств, может быть эффективно использован для терапии дисбактериозов цыплят-бройлеров.
Литература
1. Бузлама С. В. Перспективная замена кормовых антибиотиков / С. В. Бузлама, Н. Ю. Лазарева, О. А. Сапронов // Промышленное и племенное свиноводство. — 2007. — № 2. С. 36—43.
2. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов: Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. СанПиН 2.3.2.1078-01. — Москва: Министерство здравоохранения Российской Федерации, 2002. — 164 с. (СанПиН 2.3.2.2354-08. Санитарноэпидемиологические правила и нормативы. Дополнения и изменения № 8).
3. Квасников Е. И. Молочнокислые бактерии и пути их использования / Е. И. Квасников [и др.]. — Москва : Наука, 1975. — 389 с.
4. Олива Т. В. Влияние пробиотического препарата на резервы роста, развития и продуктивности птицы / Т. В.Олива // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия: Ветеринарные науки. № 1 (ч. 1.). - 2009. - С. 284-286.
5. Определитель бактерий Берджи / Под ред. Дж. Хоулта. — Москва : Мир, 1997. - 800 с.
6. Тараканов Б. В. Достижения и перспективы использования пробиотиков и микробных препаратов направленного действия в сельскохозяйственном производстве / Б. В. Тараканов // Биологическая наука на службе животноводства. Калуга : ВНИИФБиП с.-х. животных. - 1995. -С. 28-30.
7. Тараканов Б. В. Новые препараты для ветеринарии / Б. В. Тараканов, Т. А. Николичева // Ветеринария. — 2000. — № 7. — С. 45.
8. Шендеров Б. А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том III: Пробиотики и функциональное питание / Б. А. Шендеров. - Москва : ГРАНТЪ, 2001. - 288 с.
© Олива Т. В., 2012
Studying of probiotic properties for poultry farming
T. Oliva
The conducted researches have allowed to create the probiotic for use in poultry farming. 10 most perspective properties for a number of strains were selected in the study of culture-morphological and biochemical properties of lactobacilli (Lactobacillus amylovorus).
Keywords: broiler chicken; feed antibiotics; Lactobacillus amylovorus; probiotic.
Олива Тамара Владимировна, кандидат биологических наук, доцент, начальник аккредитованной испытательной лаборатории, ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В. Я. Горина (Белгород), olivatv@mail.ru.
Oliva, T., PhD in Biology, associate professor, head of an Accredited testing Laboratory, Belgorod State Agriculture Academy named after Gorin V.J. (Belgorod), olivatv@mail.ru.
