CC BY
46
УДК 579.222 : 543. 422.23
П. П. Суханов, А. Ю. Крыницкая, Е. В. Петухова,
П. П. Крыницкий
ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРНО-ДИНАМИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ
ДРОЖЖЕВОГО ПРЕПАРАТА МЕТОДОМ ЯМР РЕЛАКСОМЕТРИИ.
СООБЩЕНИЕ 1. ВЛИЯНИЕ ПРОЦЕССА ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ
Ключевые слова: дрожжевой препарат, обезвоживание, центрифугирование, плазмолиз, ЯМР релаксометрия, структурнодинамическое состояние.
Методом ЯМР релаксометрии показано, что при достаточно интенсивном и(или) длительном воздействии механических сил на дрожжевой препарат при его центрифугировании происходит не только концентрирование микробиологического осадка, но и насыщение внутриклеточного пространства дрожжей физиологически избыточным количеством жидкости (воды), что приводит к частичному повреждению клеточной стенки и последующему плазмолизу дрожжевых клеток.
Keywords: yeast preparation, dewatering, centrifugation, plasmolysis, NMR relaxometry, structural-dynamical state.
It is shown by NMR relaxation methods, that during the centrifugation in case of intensive and(or) long enough impact of mechanical forces on the yeast preparation there take place not only the process of microbiological pellet concentration, but the saturation of intracellular yeasts space with a physiologically surplus quantity of а liquid (water) too, which leads to а partial cell walls damage and forthcoming yeast cells plasmolysis.
Введение
Присутствие различных форм несвязанной воды в исследуемых образцах меняет как состояние и активность микробиологической системы (МБС) [1], так и методики получения и интерпретации данных ЯМР-релаксо-метрии [2]. Это особенно существенно для иссле-дований
микробиологических препаратов, содержа-щих свободную воду в количествах, подавляющих полезный сигнал ЯМР от микроорганизмов (МКО) и связанных с ними молекул воды. Поэтому одним из способов повышения информативности релаксационных методик в исследованиях разбавленных микробиологических препаратов является их обезвоживание в пределах, при которых эта процедура лишь несущественно искажает структурно-динамическое и функциональное состояние данной МБС. Отсюда возникает необходимость в предварительном
анализе характера воздействия физико-
механических факторов (центрифугирования и сушки при повышенных темпера-турах),
используемых для концентрирования водных суспензий, на структурно-динамическое состояние микро-организмов в составе микробиологических препаратов и соответствующие им параметры ЯМР.
Экспериментальная часть
Дрожжевой препарат (содержавший 3
грамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae (раса 509), используемых в хлебопекарной
промышленности, на литр воды) цент-рифугировали при частотах вращения n = 3000 и n2 = 6000 об/мин (центрифуга ОПН-8) в течение 5 - 20 минут, после чего удалялась надосадочная жидкость (> 90% первоначального объема). При проведении структурно-динамического анализа МБС в качестве опорных меток использовались дистиллированная вода и дрожжевая масса (размороженная, но не обезвожен-
ная музейная культура дрожжей) [3].
Все релаксационные измерения
проводились при комнатных температурах (23±20С) на резонанс-ной частоте 19 МГц. Длительность 90о-ного им-пульса в протонном датчике лабораторного ЯМР-релаксометра составляла 3,5 мкс, время парализации (нечувствительности) приемо -
передающего тракта - 7 мкс. Времена продольной ядерной магнитной релаксации (Т-|) находились из инвертированных кривых восстановления намагниченности, представ-ляющих собой
огибающие амплитуд, получаемых методом автоматизированной (бегущей) импульс-ной последовательности (БП) 180о - т -[90о- 2т -]п. Определение времен поперечной релаксации (Т2) осуществлялось из спадов намагниченности, как наблюдаемых после 90о-ного импульса (из спадов свободной индукции (ССИ)), так и построенных в виде огибающих точек, полученных после прохождения последовательности Карра-Парселла-Мей-бума-Гилла (КПМГ) [2]. При этом вычисление релаксационных параметров из кривых восстановления продольной или спадов поперечной намагниченности (СПН), полученных с помощью мульти-импульсных последовательностей, проводилось по стандартным процедурам в экспоненциальном приближении, а из неэкспоненциальных начальных участков релаксационных спадов или из полностью неэкспоненциальных ССИ - по времени уменьшения амплитуды сигнала в е раз. Для определения коэффициентов молекулярной диффузии (Б) использовалась методика ЯМР ИГМП (ЯМР с импульсным градиентом магнитного поля) [4] с максимальной амплитудой градиента 0,2 Тл/м. Число накоплений (N8), в зависимости от методики измерения и амплитуды сигнала ЯМР, варьировалось от N8 = 4 (БП, ИГМП, КПМГ) до N8 = 400 (ССИ). Задание условий эксперимента и обработка экспериментальных данных (включая накопление сигналов ЯМР)
осуществлялись с помощью ЭВМ.
Результаты и их обсуждение
Из рис. 1а видно, что вследствие низкой концен-трации МКО в дрожжевом препарате (ДП) значения релаксационных параметров ДП и водного дистиллята, использованного для его получения, оказались прак-тически одинаковыми (Т1(ДП) = 2,50 с, Т1(Н2О) = 2,51 с; Т2СДП) = 1,72 с, Т2(Н2О) = 1,71 с), но закономерно отли-чающимися от значений для дрожжевой массы (ДМ): Т1(ДМ) = 0,12 с, Т2(ДМ) = 0,036 с. В то же время диффу-зионная подвижность молекул Н2О в присутствии малого количества твердофазных частиц (МКО) оказалась выше, чем в их отсутствие (Б(ДП) = 2,4 х 10-9 м2/с, Б(Н20) = 1,5 х 10-9 м2/с), и близкой к литературным данным для дрожжей (Б = 2 х 10-9 м2/с [5]).
Времена продольной ЯМР-релаксации (рис. 1а) пасты (то есть осадка, полученного после центри-фугирования дрожжевого препарата) в исследован-ном диапазоне условий
центрифугирования практи-чески не зависят от частоты вращения центрифуги (п) и числа ее оборотов (Ы), при этом Т1 пасты (1,1 ± 0,15 с) минимум вдвое меньше значений Т1 как дрожжевого препарата до центрифугирования, так и Т молекул индивидуальной («свободной») воды (~2,5 с). Отмеченные закономерности можно объяснить изменением соотношения компонентов в микробиологической системе (МБС) после удаления из нее надосадочной жидкости, когда содержание твердой (осадочной) фазы (МКО) в образцах возрастает не менее, чем на порядок (от ~ 3 %% до 3% вес. и более). С другой стороны, значения Т1 пасты на порядок больше Т1 дрожжевой массы (0,12 с). Поэтому наблюдаемые соотношения между временами продольной релаксации в первом приближении соответствуют быстрому обмену молекулами и(или) протонами [6 - 8] между молекулами воды в свободном состоянии и молекулами, заторможенными в результате взаимодействия с биомассой.
Анализ времен поперечной ядерной магнитной релаксации Т2 и коэффициентов молекулярной диф-фузии Б микробиологической системы позволяет получать более детальную информацию о струк-турно-динамическом поведении компонентов МБС (то есть о характере упаковки и относительных пере-мещений протоносодержащих структур в областях меньшего, чем в случае Ть микроскопического масштаба, но в более широком диапазоне спектра времен (частот) корреляции).
При увеличении числа оборотов центрифуги N до 15000 (рис. 1) в пастах выделяются две области: первая, коэффициент диффузии которой (Б2) на порядок меньше Б индивидуальных (свободных) молекул воды (Б(Н2О)), и вторая область, для которой характерно значение Б1, в полтора раза превосходящее значение Б(Н2О) и близкое к коэффициенту диффузии исходного ДП. Последнее обстоятельство обусловлено разрушением и(или)
перестроением сетки водородных связей, образуемой водной средой суспензии, под воздействием твердоподобных частиц МКО [6 - 8].
Данные о поперечной релаксации (рис. 1) подтверждают возникновение в концентрированном
Рис. 1 - Зависимость ЯМР параметров пасты дрожжевого препарата от числа оборотов центрифуги N при различной частоте ее вращения (111 = 3000 об/мин (°'Л), пг = 6000 об/мин (□)) по данным поперечной релаксации (0*п) и диффузионной методики (^). Значок с более затемненным полем описывает менее подвижную СД фазу. Прерывистые линии соответствуют ЯМР параметрам указанных на рисунке компонентов МБС; а - времена релаксации Т (левая шкала) и коэффициенты диффузии Б' (правая шкала); б - населенности ЯМР фаз
осадке двух неоднородных по молекулярной подвижности структурно-динамических (СД) областей («фаз» [7]). Они описываются не только различными коэффициентами диффузии в них, но и временами релаксации Т2 и Т2 (рис. 1а), а также населенностями (рис. 1б) различных компонент СПН (то есть соотношением числа протонов в СД фазах, которое может быть определено по форме как релаксационного (Р21 и Р22), так и диффузионного (Рс/, рЛ сигнала [2, 4 - 8]). При этом единое время Т1 можно считать признаком отсутствия макроскопически выделенных фаз (с относительно фиксированной (устойчивой) границей (поверхностью)
3 2 7
раздела с линейными размерами > 10 А (10 м)) в системе [6] (что неудивительно для МКО с размерами ~5х10-6 м [1]), а неоднородность параметров поперечной релаксации свидетельствует о формировании различных СД - областей микроскопического масштаба по всему объему образца.
Расслоение по релаксационным параметрам наблюдается начиная с N = 15000 оборотов, когда значение коэффициента эффективной диффузии в пасте совпадает с величиной Б(Н20), а времена ее поперечной релаксации минимальны. При N = 30000
об. значения населенностей, полученных по релаксационной и диффузионной методикам, практически одинаковы (Р2' ~ Рс'). Но с ростом интенсивности и времени центрифугирования (п и N постепенно увеличивается доля заторможенной СД фазы (Р22, Рс2), и, соответственно, уменьшается количество более мобильных протонов (Р21, Р^), причем подвижность протоносодержащих компонентов в обеих фазах непрерывно возрастает (Т2'(М), Б'(№)). Характерно, что при N = 30000 об. значение Б1 для п1 сравнивается с величиной соответствующего параметра для исходного ДП, не подвергнутого центрифугированию, а молекулярная подвижность той же пасты усредняется по объему (общее (единственное) время Т2). В итоге заторможенная фаза как бы «поглощает» более подвижную фазу, остатки которой, судя по значениям Т21 при N ~ 120000 об., стремятся к плато Т-^) и величине Т2 для дистиллированной воды. Одновременно параметры заторможенной фазы при N ~ 120000 об. приближаются к уровню подвижной фазы при значениях N < 15000 об., соответствующих начальному этапу структурно-динамического расслоения МБС.
Таким образом, после резкого перераспреде-ления масштаба фаз (Р2', Рй') в интервале 15000 < N < 30000 и плавного завершения этого процесса при 30000 < N < 60000 об., в области N > 60000 об. наблюдается явление, аналогичное (но не эквива-лентное !) инверсии фаз. По-видимому, на опреде-ленной стадии центрифугирования происходит пре-образование «фазовой»
организации МБС, причем не только структурнодинамической (магнитно-резонансной [6 - 8]), но и в предельном случае - термодинамической.
Для дальнейшего анализа этой ситуации обратимся к особенностям поведения функции Т2 (М), которая, в отличие от Т22^), не строго линейно зависит от времени и скорости вращения центрифуги (М и п соответственно). Кроме того, значения населенностей Р22 растут симбатно N а начальные значения Т^^), как и времен Т1, приблизительно соответствуют быстрому протонному обмену между молекулами воды в свободном и связанном с МКО состоянии. Это позволяет объяснить дальнейший рост Т2'(^ при увеличении интенсивности (п) и длительности (^ механического воздействия на ДП изменением режима (механизма и(или) масштаба) обменных процессов [5 - 9] между неэквивалентными молекулами Н2О, а не влиянием магнитно-резонансных факторов, например, уменьшением концентрации в выделенных
осадках (пастах) парамагнитных примесей (молекул и радикалов кислорода, ионов железа, марганца, и так далее [2, 8, 9]). При этом, как показали исследования интенсивности протонного обмена и зависимости времен Т2 от рН среды [10, 11], подвижность молекул воды зависит от характера (пере)распределения водородных связей, что может быть обусловлено, в том числе, присутствием твердой поверхности МКО и ее особенностями. Кроме того, известно, что разрыв водородных связей ведет к падению Т2 (вследствие уменьшения времени жизни протона в составе Н - связи), но несущественно влияет на Т и диффузию. Однако с изменением концентрации воды в системе меняются скорости обменных процессов [7 - 9]. Тогда независимость Т от параметров (интенсивности и времени) центрифугирования (n и N) в случае преимущественного вклада диполь-дипольного механизма в процесс продольной релаксации может быть связан с конкуренцией различных СД факторов, например, с ростом ширины спектра времен корреляции молекулярной подвижности (4 Т1) на фоне падения скорости обменных (межмолеку-лярных и(или) межпротонных) процессов в системе (t Т-|). Кроме того, форма кривых P22 (N) при N < 60000 об. аналогична типичной кривой зависимости веса образовавшегося осадка от времени центрифугирования МБС [3]. В совокупности это позволяет предположить, что по мере центрифугирования происходит ослабление интенсивности обменных процессов, обусловленное нарастанием плотности твердоподобного осадка суспензии и соответствующим снижением поверхности для обменных протонных и(или) молекулярных потоков. Однако дальнейший (N > 60000) рост
релаксационных параметров более заторможенной
22
фазы (Т2 (N), Р2 (N)) не может быть обусловлен только процессами образования и(или) уплотнения осадка, уже проявившим себя на начальном этапе.
Известно, что в системах, находящихся в центробежном поле в состоянии равновесия (то есть при n = const), концентрация растворенного вещества увеличивается пропорционально радиусу вращения (расстоянию от оси центрифуги), а градиент концентрации растет пропорционально ~ n [12]. В результате при больших частотах вращения n и малых концентрациях твердофазных компонентов в суспензии большинство твердых частиц достаточно быстро окажутся «размазанными» тонким слоем по значительной поверхности ротора центрифуги, образуя подобие «фильтрующего» слоя, давление на поверхность которого (т. е. на клеточные стенки МКО) способно достигать 10-15 атм. [13, 14]. Тогда наблюдаемые при N > 60000 закономерности можно связать не только с явлениями протонного и молекулярного обмена по диффузионному механизму в пределах и между компонентами гетерогенной МБС (что являлось основным СД фактором при N < 60000), но и с нарастанием в спектре молекулярной подвижности вклада от направленного (конвективного) движения молекул воды через клеточные стенки МКО [15, 16] вплоть до установления определенного уровня подвижного равновесия микро-
потоков в обоих направлениях. В этом случае следует ожидать постепенного насыщения клеток микроорганизмов избыточной для их физиологии водой (начиная с периплазматического пространства) и роста внутреннего давления (тургора) в замкнутом внутриклеточном пространстве.
Отсюда эволюция дрожжевого препарата под воздействием центробежной силы может быть описана как прохождение следующих условных СД интервалов:
I - область разгона (формирования осадка)
МКО (0 < N < 15000),
II - область концентрирования осадка
(15000 < N < 60000),
III - область набухания МКО (К > 60000).
На первом этапе происходит разгон консорциума микроорганизмов дрожжевого препарата (то есть диспергирование твердофазной компоненты суспензии и ее концентрирование на поверхности ротора центрифуги), что при N = 15000 заканчивается формированием СД фаз двух типов -водных и водосодержащих. Предположительно фазы второго типа представляют собой отдельные мелкодисперсные агломераты (микроконсорциумы) микроорганизмов с молекулами воды, адсорбированными и на внешней, и на внутренней поверхности клеточной стенки (последние формально можно считать абсорбированными в пределах КС), которые через клеточную стенку достаточно быстро взаимодействуют друг с другом и с протоплазмой клетки, в совокупности образуя менее подвижную ЯМР-фазу (описываемую параметрами Т22, Р22, Б2, Рс2). Одновременно по мере концентрирования осадка в пределах агломератов локализуются молекулы воды, образующие между слоями микроорганизмов подобие подвижного порового пространства (водонаполненные пороподобные прослойки). При этом «поровая» вода контактирует с формально несвязанными (но по крайней мере сте-рически ограниченными) молекулами воды (условно «свободной» водой). Отсюда к СД фазам первого типа следует отнести и «поровую», и «свободную» воду, молекулы которых также относительно быстро взаимодействуют друг с другом и в совокупности образуют более подвижную ЯМР-фазу (описываемую параметрами Т21, Р21, Б1, Рй1).
Кроме того, фазы обеих типов взаимодействуют (обмениваются молекулами Н2О и(или) протонами в их составе) друг с другом с переменной скоростью, зависящей от параметров центрифугирования ДП. В области разгона соответствующая скорость обмена внутри ассоциированных фаз небольшого размера максимальна, а между ними - минимальна, вследствие чего наблюдаемые времена релаксации также минимальны, а населенности, хотя и не совпадают, но достаточно близки к истинному составу фаз различного типа (Р21 и Р22) [6 - 8]. В области концентрирования осадка (15000 < N < 60000) с ростом интенсивности и времени центрифугирования ^ и п) размеры агломератов МКО увеличиваются вследствие уплотнения порового прос-
транства, а поверхность контакта водных и водосодержащих фаз соответственно сокращается, в результате чего скорость обмена падает как внутри, так и между микрофазами. Это приводит к наблюдаемому росту времен релаксации и сближению значений населенностей («обобществлению») фаз различного типа [6 - 8].
Однако при N > 60000 (в области
набухания) ситуация качественно меняется: наблюдаются также две, но, исходя из их предистории, более сложные по составу СД фазы. Поскольку процедура изме-рения проводилась уже после центрифугирования, то дополнительное значительное изменение СД параметров (Т2', Р2'), наблюдаемое после завершения процесса нарастания веса (насыщения) осадка (К < 60000), не может определяться только мгновенным действием центробежной силы, которое прекра-щается после остановки центрифуги. Оно должно быть связано, как и насыщение осадка, со структурнодинамическими последствиями дейст-вия
центробежной силы - например, с результатами механического воздействия на поверхность контакта твердой и жидкой фаз. Тогда, для согласования экспериментальных данных, необходимо предположить, что дальнейший рост СД параметров при N > 60000 должен быть обусловлен продолжающимся поглощением воды клетками микроорганизма [17], равновесный уровень которого определяется свойствами клеточной стенки и параметрами центрифугирования (п и ^, а также геометрическими и гидравлическими характеристиками порово-клеточного канала («трубопровода»), формирующегося под воздействием центробежной силы.
Модель центрифугирования дрожжевого препарата
Таким образом, феноменологическая картина (модель) центрифугирования выглядит следующим образом. Под первоначальным воздействием цент-робежных сил не только формируется и уплотняется твердотельный осадок, но ив каждом МКО в сос-таве осадка возникает внутриклеточное давление (тургор), сжимающее содержимое клетки (прото-пласт) и создающее относительный вакуум у внут-ренней поверхности клеточной стенки, при одновре-менном нарастании (симбатно п) внешнего давления на нее со стороны свободных молекул Н2О в сус-пензии. В результате в интервале 15000 < N < 60000 об. создаются условия не только для насыщения осадка, но и для принудительного повышения кон-центрации воды в МКО за счет освободившегося внутриклеточного пространства. На фоне центро-бежной силы это приводит к дополнительному рос-ту
внутриклеточного давления, что способствует инициации процесса разрушения КС.
На заключительном этапе (при N > 60000) на фоне продолжающегося набухания происходит дальнейшее разрушение клеточной стенки и образование в ней крупномасштабных дефектов (дыр), что способно со временем привести по
крайней мере к частичной потере ее способности выполнять функции структурно-динамического
барьера между клеткой и внешней средой. В результате по мере разрушения КС насыщение клеток водой прекращается и инициируется обратный поток, состоящий из внутриклеточной воды и содержащихся в ней различных компонентов протопласта (белков, липидов, нуклеиновых кислот, олиго-(поли)сахаридов, и т.д.), которые и образуют разнообразные по подвижности ассоциаты с молекулами поровой, вытекшей внутриклеточной и(или) свободной воды. Именно эти закономерности проявляются и закрепляются в виде роста значений Р22 и соответствующего падения Р2:.
Полученные результаты могут быть полезны при анализе состояния и функций любых подверг-нутых процедуре центрифугирования микробио-логических систем [18-20].
Литература
1. Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение./Б. Глик, Дж. Пастернак. - М.:Мир, 2002. -589 с.
2. Фаррар, Т. Импульсная и Фурье-спектроскопия ЯМР: пер. с англ. под ред. Э.И. Федина. / Т. Фаррар, Э. Беккер. - М.: Мир, 1973.- 164 с.
3. Методы общей бактериологии. В трех томах. Т. 2. / Под ред. Ф. Герхардта и др.- М.: Мир, 1984. - 470 с.
4. Stejskal, E.D. Self-Diffusion Measurements: Spin Echoes in Presence of а Time Dependent Field Gradient / E.D. Stej-skal, J.E. Tanner // J. Chem. Phys., 1965.- V. 42.- № 1
- P. 288 - 292.
5. Tanner, J.E. Restricted Self-Diffusion of Protons in Colloidal Systems by the Pulsed-Gradient Spin-Echo Method / J.E. Tanner, E.O. Stejskal // J. Chem. Phys., 1968.
- V. 49. - P. 1768.
6. Resing, H.A. Apparent Phase-Transition Effect in the NMR Spin-Spin Relaxation Time Caused by a Distribution of Correlation Times. / H.A. Resing // J. Chem. Phys., 1965. -V. 43. - № 2. - P. 669.
7. Zimmerman, J.R. Nuclear Magnetic Resonance Studies in multiple phase Systems: lifetime of a water molecule in an absorbing phase on silicagel. / J.R. Zimmerman, W.E. Britten. // J. Phys. Chem., 1957. - V.61. - № 9 - P. 1328 -1333.
8. Скирда, В. Д. Влияние динамики межфазного обмена на ЯМР-релаксацию./В.Д. Скирда, А.В. Севрюгин, А.И. Мак-лаков // Хим. Физика, 1983. - №11. - С. 1499.
9. Вашман, А.А. Ядерная магнитная релаксационная
спектроскопия. / А.А. Вашман, И.С. Пронин // М.:
Энергоатомиздат, 1986. - 232 с.
10. Meiboom, S. Proton Relaxation in Water / S. Meiboom, Z. Luz, D. Gill // J. Chem. Phys., 1957.-V. 27 -№ 6.-P. 1411.
11. Migchelsen, C. Proton exchange and molecular orientation of water in hydrated collagen fibers. An NMR study of H2O and D2O / C. Migchelsen and H.J.C. Berendsen // J. Chem. Phys., 1973. - V. 59. - № 1. - P. 296.
12. Мюнстер, А. Химическая термодинамика: пер. с нем. к.х.н. Е.П. Агеева под ред. чл.-корр. АН СССР Я.И. Герасимова / А. Мюнстер. - М.: Мир, 1971. - 295 с.
13. Касаткин, А.Г. Основные процессы и аппараты химической технологии / А.Г. Касаткин. - М.: Альянс, 2005. - 753 с.
14. Романков, П.Г. Гидромеханические процессы химической технологии / П.Г. Романков, М.И. Курочкина. -Л.: Химия, 1974. - 288 с.
15. Сибгатуллин, Т. А. Совместный анализ диффузионного и релаксационного поведения воды в клетках мякоти яблока./Т.А. Сибгатуллин, А.В. Анисимов, P.A. de Jager и др.// Биофизика. - 2007. -Т. 52. - № 2. - С. 268 - 276.
16. Сибгатуллин, Т. А. Трансляционная динамика воды в цитоплазме клеток паренхимы плода Malus domestica. Исследование импульсным методом ЯМР./Т.А. Сибгатул-лин, Ф.Дж. Вергельт, А.В. Анисимов, Х. Ван Ас. // Доклады РАН. - 2006. - Т. 411. - № 3. -С. 427 - 429.
17. Комаревцева, И. А. Ядерно-магнитно-резонансная релаксометрия протонов тканевой воды кожи. / И.А. Ко-маревцева, Э.Н. Попов, А.В. Заика, В.Н. Комаревцев // Украинский журн. клинической и лабор. медицины, 2008. - Т. 3. - № 1.
18. Крыницкая, А.Ю. Особенности индивидуального и совместного действия комплексона ОЭДФ и КВЧ -излучения на рост хлебопекарных дрожжей Saccharomyces cerevisiae. / А.Ю. Крыницкая, П.П. Суханов, Т.А.Опалева и др. // Вестник Казан. технол. ун-та .- 2004- № 1-2.- С. 138 - 147.
19. Крыницкая, А.Ю. Влияние ЭМИ КВЧ на активность препарата «Фитоспорин» / А.Ю. Крыницкая, П.П. Суханов, Е.В. Петухова и др. // Вестник Казан. технол. ун-та .- 2011. - № 7. - С. 181-184.
20. Крыницкая, А.Ю. Изучение ксантана, полученного при культивировании xanthomonas campestris на модифицированных средах методами ИК-спектроскопии и ЯМР-релаксометрии / А.Ю. Крыницкая, П.П. Суханов, М.Р. Хисаметдинов и др. // Вестник Казан. технол. ун-та .- 2009 - № 6. - С. 135 - 140.
© П. П. Суханов - д.х.н., проф. КНИТУ, Paulpost3@yandex.ru; А. Ю. Крыницкая - к.б.н., доц. КНИТУ, Paulalla@yandex.ru; Е. В. Петухова - к.б.н., доц. КНИТУ, Petel07@yandex.ru; П. П. Крыницкий - студ. КНИТУ.
