CC BY
107
Вестник ДВО РАН. 2005. № 4
В.А.СТОНИК
Изучение природных соединений в ТИБОХ ДВО РАН
Изучение природных соединений (низкомолекулярных биорегуляторов) с момента основания Института являлось одним из главных его научных направлений. Академик Г.Б.Еляков инициировал соответствующие работы еще в конце 1950-х годов, когда начал выделение и установление химического строения биоактивных вторичных метаболитов легендарного женьшеня Panax ginseng. С начала 1970-х годов в ТИБОХ ДВО РАН осуществляются химические исследования морских организмов, которые привели к открытию разнообразных природных соединений. На основе некоторых из них удалось создать новые лекарственные препараты и биологически активные пищевые добавки. В настоящее время научное направление, связанное с изучением природных соединений из морских организмов и дальневосточных наземных растений, интенсивно развивается учениками и последователями Г.Б.Елякова. Оно ежегодно приводит к открытию десятков новых соединений, установлению особенностей их таксономического распространения, биосинтеза и биологического действия
Studies of natural compounds in the PIBOC, FEB RAS. V.A.STONIK (Pacific Institute of Bioorganic
Chemistry, FEB RAS, Vladivostok).
Studies of natural compounds (low molecular weight bioregulators) has been one of the major areas of research in the Pacific Institute of Bioorganic Chemistry from the very foundation. Academician G.B.Elyakov initiated the research in this field as early as in the late 1950s, when he started to isolate and characterise the chemical composition of bioactive secondary metabolites from the famous far-eastern herb ginseng Panax ginseng. Since the early 1970s, a wide range of natural compounds from marine organisms have been discovered in the Institute. Some of these substances were used to produce new medicines and biologically active food additives. Nowadays, disciples and followers of G.B.Elyakov perform extensive research that focuses on natural compounds from marine organisms and far-eastern terrestrial plants. As a result, dozens of new natural compounds are discovered every year being studied in terms of taxonomic distribution, biosynthesis, and biological activity.
В Тихоокеанском институте биоорганической химии (ТИБОХ) ДВО РАН уже более сорока лет ведутся фундаментальные химические исследования природных соединений, тесно связанные с биохимией, таксономией соответствующих ор-ганизмов-продуцентов, а также с экспериментальной и клинической медициной. Эти исследования вносят важный вклад в развитие органической химии, поскольку для природных соединений, в особенности биоактивных, вскоре после их открытия обычно разрабатываются и осуществляются химические синтезы. Хорошо известно, что изучение природных соединений имеет большое значение для укрепления здоровья и увеличения продолжительности жизни людей. Действительно, либо сами эти биомолекулы, химические структуры и биологические функции ко -торых изучает биоорганическая химия, используются в качестве лекарств и ценных
СТОНИК Валентин Аронович — академик, директор Тихоокеанского института биоорганической химии ДВО РАН (Владивосток).
пищевых компонентов, либо такие препараты разрабатываются на основе их синтетических аналогов и производных. Так, более 50% всех новых лекарственных препаратов, разрешенных в течение последних 25 лет для клинического использования в странах Европы и в США, были созданы с применением знаний, полученных при изучении природных соединений [22].
На протяжении многих десятков лет и до настоящего времени основными источниками новых природных соединений были высшие наземные растения. Излюбленными объектами исследований для химиков-природников до сих пор остаются так называемые лекарственные растения.
Женьшень Panax ginseng C.A.Meyer - это дальневосточное реликтовое растение, которое широко используется в медицине Китая, Кореи и других стран восточной Азии. Первым упоминаниям о его целебных свойствах около 5000 лет. Настойки из женьшеня применяются также в России и европейских странах, в основном в качестве стимулирующего, противовоспалительного и противострессорного средства. Поиск дикорастущего женьшеня в дебрях уссурийской тайги и его использование для увеличения устойчивости человеческого организма к неблагоприятным воздействиям овеяны легендами и описаны в многочисленных художественных произведениях. Биологически активные вещества женьшеня всегда привлекали внимание, но только в начале 1960-х годов появились возможности для выделения и установления строения этих сложных природных соединений. Г.Б.Еляков был первым из отечественных ученых, который поставил, а затем вместе со своими сотрудниками и решил эту трудную задачу. Одновременно в Японии профессором С.Шибата были начаты работы, направленные на решение той же проблемы.
Биоактивные соединения из корней женьшеня оказались так называемыми глико-зидами, т.е. соединениями, содержащими полициклический спирт в качестве так называемого агликона и присоединенный к нему олигосахаридный фрагмент (углеводную цепь). Первые индивидуальные гликозиды - панаксозиды А и В (современное название гинзенозиды) - были выделены ГБ.Еляковым и его молодой сотрудницей Л.И.Стригиной в 1962 г. [6]. Одной из проблем, с которыми столкнулись специалисты, изучавшие гликозиды из женьшеня, была высокая лабильность этих веществ. Тем не менее им удалось установить полное строение как нативных агликонов, так и углеводных цепей гинзенозидов. Это стало возможным во многом благодаря широкому применению физико-химических методов исследования органических веществ, таких как спектроскопия ядерного магнитного резонанса и масс-спектрометрия. В результате было показано, что агликонами многих гинзенозидов являются так называемые даммарановые тритерпеноиды или продукты их внутримолекулярной циклизации [2, 20]. Гликозиды женьшеня в основном и определяют свойства его экстрактов и являются действующими началами этого уникального растения [2].
Г.Б.Еляков обратил внимание на то, что по своему химическому строению аг-ликоны гинзенозидов (панаксозидов) близки к некоторым вторичным метаболитам из листьев таких очень доступных растений, как березы. Их даммарановые тритер-пеноиды из отечественных видов были тщательно изучены [15]. При этом было найдено более 20 ранее неизвестных тритерпеноидов этой серии. Одновременно изучались и компоненты коры берез, среди которых также были обнаружены новые вещества. Некоторые из исследованных вторичных метаболитов берез затем были использованы в качестве исходных веществ в синтезе гинзенозидов и их аналогов [14, 18, 19, 23].
Наконец, еще одним важным продолжением работ по биоактивным компонентам женьшеня стало создание клеточных культур женьшеня и исследование их химического состава [1, 7]. В результате штаммы клеточных культур женьшеня,
продуцирующие в больших количествах нативные гликозиды, были созданы в Био-лого-почвенным институте ДВО РАН (совместно с нашим институтом).
В последние годы интенсивно изучается новый источник природных соединений - морские организмы. Во многом благодаря усилиям Г.Б.Елякова ТИБОХ ДВО РАН стал основным в стране научным центром, работающим в области морской биоорганической химии. Исследования морских природных соединений были начаты в институте еще в конце 1960-х годов, когда несколько очень немногочисленных групп ученых в США, Японии, Италии и Испании только приступали к выделению первых метаболитов морских растений и животных, а какой-либо прогресс в этой области был достигнут к тому времени только в пяти-шес-ти лабораториях мира.
Из морских источников природных соединений прежде всего привлек внимание дальневосточный трепанг ЗйсИориБ ]аротсиБ 8е1епка, который, как и женьшень, с глубокой древности был известен народам юго-восточной Азии своими целебными свойствами. Более того, его нередко называли «морским женьшенем».
История химических исследований дальневосточного трепанга во многом напоминает историю изучения биоактивных веществ из женьшеня. Во-первых, природные соединения из 8. ]аротсиБ (современное название АроБЙсИориБ ]арот-сиБ), впервые выделенные Т.А.Кузнецовой под руководством Г.Б.Елякова [5], также оказались гликозидами, имеющими довольно сложные химические структуры. Во-вторых, они, как и гинзенозиды, были весьма лабильными и не давали нативного агликона в условиях обычного кислотного гидролиза. Наконец, в-третьих, одновременно с нашей группой (в полной аналогии с работами по женьшеню) их изучение осуществлялось группой японского профессора И.Китагавы, а позднее и группой знаменитого американского химика К.Джерасси.
Биоактивные соединения из дальневосточного трепанга оказались, подобно гликозидам из женьшеня, продуктами так называемого смешанного биогенеза, состоящими из тритерпенового агликона и углеводного фрагмента. Однако химически они отличались от метаболитов женьшеня весьма значительно. Они не являлись даммарановыми производными, а в основе их агликона лежал так называемый голостановый углеродный скелет, характерный только для гликозидов голотурий. В достаточно сложную углеводную цепь этих веществ были включены остатки четырех различных моносахаридов: глюкозы, ксилозы, хиновозы и 3 -О-метилглюкозы.
Одним из существенных шагов в установлении их строения была идентификация, а затем и выделение так называемого нативного (т.е. неизмененного, или природного) агликона [4, 17]. Что касается полных структур этих гликозидов, названных сначала стихопозидами, а затем голотоксинами, то они первоначально были сообщены японской группой, но позднее в нашем институте эти структуры были пересмотрены и приведены в работе [21].
Изучение биоактивных соединений из дальневосточного трепанга стало началом впечатляющей серии работ. К настоящему времени только в лаборатории химии морских природных соединений ТИБОХ ДВО РАН выделено более 100 новых соединений этой группы. Вклад российских химиков в изучение гликозидов голотурий, несомненно, является самым большим по сравнению с вкладом зарубежных ученых. Как эксперты в этой области специалисты из ТИБОХ ДВО РАН устанавливали химическое строение подобных соединений из биологического материала, присланного из США, Италии и Новой Зеландии.
Кроме того, было показано, что тритерпеновые гликозиды обладают таксономической специфичностью и, следовательно, могут быть использованы в качестве
хемотаксономических маркеров. Применение этих маркеров совместно с тщательным морфологическим анализом позволило уточнить таксономический статус целого ряда голотурий. Так, была выполнена ревизия рода Bohadschia, установлена конгенеричность голотурий Apostichopus japonicus и Parastichopus californicus, а недавно было изменено таксономическое положение новозеландского трепанга Stichopus mollis, который был переведен во вновь образованный род Australostichopus.
На основе тритерпеновых гликозидов голотурий в нашем институте создан новый ветеринарный препарат, защищающий животных от ряда заболеваний и обладающий адъювантными свойствами, т.е. способностью усиливать действие вакцин. В настоящее время ведется разработка на этой основе медицинского препарата.
Г.Б.Еляков инициировал также изучение нейротоксинов морского происхождения. Эти вещества нашли самое широкое применения в качестве молекулярных инструментов для изучения механизма и особенностей проведения нервных импульсов. При этом особое значение имеют молекулярные инструменты, которые специфически взаимодействуют с натриевыми каналами возбудимых биологических мембран. К подобным агентам относятся токсины актиний (или, как их иначе называют, морских анемон).
Известно, что в зависимости от длины аминокислотной цепи пептидные токсины морских анемон подразделяются на две группы: «короткие» (27-30 аминокислотных остатков) и «длинные» (47-50). Сотрудниками лаборатории химии пептидов ТИБОХ ДВО РАН были выделены из тропической актинии Radianthus macro-dactylus пять новых «длинных» нейротоксинов [8, 9]. Сравнение их аминокислотных последовательностей между собой и с ранее известными токсинами показало, что они относятся к двум различным структурным группам. Было установлено, что в анемонотоксинах имеется по три внутримолекулярных дисульфидных мостика, которые у всех этих вторичных метаболитов расположены идентично.
Для анемонотоксинов, полученных сотрудниками нашего института, была изучена пространственная структура, рассчитан индекс гидрофобности аминокислотных последовательностей. Были найдены общие черты в механизме действия с так называемыми постсинаптическими токсинами змей и а-токсинами из яда скорпионов. Было показано, что анемонотоксины из R. macrodactylus селективно подавляют функцию натриевых каналов электровозбудимых тканей [11]. Г.Б.Елякова интересовали и другие морские токсины, в частности палитоксин из шестилучевых кораллов. В институте выполнено изучение антигенной активности палитоксина, изучение механизма его действия на биологические и модельные липидные мембраны.
В последние годы особенно интенсивное развитие получили в ТИБОХ ДВО РАН работы, связанные с изучением других биологически активных соединений морского происхождения. В самом деле, морские организмы как существенная часть биоразнообразия нашей планеты содержат тысячи новых вторичных метаболитов. Из морских организмов всеми работающими в этой научной области исследователями уже описаны около 15 тысяч природных соединений, из них более 400 - в нашем институте. Большое число найденных новых соединений свидетельствует о своеобразии процессов вторичного обмена в морских животных и растениях. Это своеобразие, очевидно, связано с таксономическими особенностями морской биоты [3].
Известно, что многие морские природные соединения привлекают значительное внимание своей высокой физиологической активностью. Среди них - суперак-тивные противоопухолевые, противовоспалительные и противовирусные агенты. На основе морских природных соединений уже разработаны новые лекарственные препараты арабиноцитозин, арабиноаденин, джонделис для лечения опухолевых и
вирусных заболеваний, циконитид, обладающий обезболивающими свойствами, и др. В результате исследований морских природных соединений только в странах Европы, США и Японии было подготовлено и получено свыше 300 патентов, касающихся биомедицинских свойств этих веществ, около 100 патентов было получено и в нашем институте. Более 20 новых препаратов находятся на различных этапах клинического изучения в России и за рубежом.
Учеными ТИБОХ были выделены новые природные соединения самой различной химической природы: стероиды, терпеноиды, алкалоиды, новые липиды, хи-ноидные соединения, полисахариды, ферменты и др. В качестве примеров могут быть названы: необычный стероидный спирт из голотурии Сисишапа ]аротса [10], сесквитерпеноид из моллюска Ар1уБ1а Бр. [16], биологически активные полисахариды из водорослей и морских трав [12], новые антибиотики из морских микроорганизмов [13] и многие другие, в изучении которых участвовал Г.Б.Еляков. Было установлено химическое строение всех этих веществ, включая в ряде случаев и абсолютную стереохимию.
Фундаментальные исследования, направленные на изучение природных соединений как морского, так и наземного происхождения, их структуры, биогенеза, биологической активности и механизма действия, послужили основой для разработки ряда лекарственных препаратов. Так, в результате долговременных исследований нафтохиноидных пигментов морских ежей, обладающих антиоксидантны-ми, противомикробными и противовоспалительными свойствами, были разработаны, испытаны, а позднее и разрешены к практическому применению в России два новых лекарственных препарата: «Гистохром для офтальмологии» и «Гистохром для кардиологии» [3]. Основной компонентой активной субстанции обоих препаратов является известное природное соединение - эхинохром. В результате систематического поиска был найден доступный природный источник эхинохрома, один из видов так называемых плоских морских ежей, а также разработаны препаративные способы полного синтеза эхинохрома, дающие целевое соединение с высоким выходом.
Способы изготовления активной субстанции, лекарственных форм и способы медицинского применения этих препаратов были защищены патентами, в том числе зарубежными, описаны в многочисленных публикациях и нескольких диссертациях, защищенных медиками.
В основе многих клинических эффектов «Гистохромов» лежат их антиоксидант-ные свойства и способность хелатировать ионы железа. Известно, что активные формы кислорода и окислительный стресс играют важную роль в этиологии и развитии многих заболеваний, а природные антиоксиданты, прежде всего токоферолы (витамин Е), применяются в медицине для профилактики и в качестве вспомогательного средства при лечении различных патологий. Накапливающаяся в последнее время информация показывает, что кроме антиоксидантной активности препараты серии «Гистохром» обладают и другими полезными свойствами. Все это указывает на необходимость дальнейшего изучения механизмов их физиологического действия. Перспективны и исследования, направленные на расширение области клинического использования этих лекарственных средств.
Г.Б.Еляков много внимания уделял изучению ферментов морских беспозвоночных. Поиск новых источников высокоактивных ферментов, в частности протеиназ, среди доступных морских организмов привел к установлению того факта, что отходы переработки камчатского краба (так называемый гепатопанкреас) могут быть использованы для получения ферментов, разрушающих некротизированные участки тканей человека и животных. Дальнейшее изучение свойств таких ферментов
привело к созданию нового медицинского препарата «Коллагеназа КК», содержащего в качестве активной субстанции комплекс коллагенолитических протеаз из гепатопанкреаса камчатского краба. После выполнения доклинических и клинических исследований препарат был разрешен Фармацевтическим комитетом России к применению. Он был рекомендован как средство ферментативного очищения ран при изъязвлениях и некрозах, включая ожоги, отморожения, гангрены, хронический остеомиелит, варикозные язвы и т.п. [3].
Еще один запатентованный медицинский препарат ранозаживляющего действия был создан в нашем институте на основе высокомолекулярного хитозана - полисахарида, который также получают из отходов переработки камчатского краба, а именно из его панциря. Он назван «Линимент Полимед». Препарат включает также антисептики и стимуляторы регенеративных процессов.
Многолетние фундаментальные исследования природных соединений из дальневосточных наземных растений, которые исторически связаны еще с первыми работами наших ученых во главе с Г.Б.Еляковым, также привели к практически важным результатам. В частности, сотрудниками лаборатории хиноидных метаболитов в реликтовом растении Мааск1а ашигеш1Б, единственном древесном представителе семейства бобовых во флоре Дальнего Востока, было найдено 20 ароматических соединений. Их сумма обладала антиоксидантной, желчегонной и другими видами физиологической активности. На основе этих веществ был создан медицинский препарат «Максар» (аббревиатура от фамилий руководителей коллективов-разработчиков О.Б.Максимова и А.С.Саратикова), рекомендованный для лечения хронического гепатита, цирроза и других заболеваний печени. Препарат обладает гепатозащитным, противовоспалительным и желчегонным действием, превосходящим эффект импортных препаратов этого типа действия. Он был зарегистрирован и внесен в список лекарств, разрешенных к медицинскому применению в России. В настоящее время готовится к выпуску первая опытно-промышленная партия «Максара».
Различные лечебно-профилактические средства и пищевые добавки приобрели в последнее время большую популярность в нашей стране. Некоторые из них действительно весьма полезны и способны восполнить дефицит витаминов, антиоксидантов, пищевых волокон, различных других биоактивных веществ, характерный для питания значительной части населения России. К таковым относятся и безалкогольные лечебно-профилактические бальзамы серии «Гербамарин» (в настоящее время в ТИБОХ ДВО РАН создано четыре различных варианта таких бальзамов -общеукрепляющий, гепатозащитный, кардиопротекторный и противодиабети-ческий), выпуск которых организован на ОАО «Уссурийский бальзам». Одним из авторов этих бальзамов является академик Г.Б.Еляков.
Таким образом, фундаментальные исследования природных соединений из дальневосточных наземных растений и морских организмов, которые проводятся в ТИБОХ ДВО РАН с начала 1960-х годов, создали надежную базу для разработки и внедрения новых лекарств и лечебно-профилактических средств.
В настоящее время выделение, установление строения и свойств новых природных соединений морского и наземного происхождений продолжаются и затрагивают все новые и новые аспекты биоорганической химии, в частности изучение биологической роли и молекулярных механизмов действия этих веществ. Многочисленные недавно открытые вещества обладают противомикробным, противоопухолевым, антиоксидантным и другими видами физиологического действия. Среди этих веществ - первые представители ранее неизвестных структурных групп, такие как биполярные сфинголипиды, гибридные соединения, названные нами алкалоидостероидами, липидоалкалоидами, новые ферменты и др. Развитие
в Институте новых методов биотестирования позволяет вести поиск и выделение новых природных соединений с параллельным определением физиологической активности соответствующих фракций (так называемое биоэссэй-гайдидид выделение). Не вызывает сомнений, что научное направление, связанное с изучением природных соединений, приведет к новым интересным находкам.
ЛИТЕРАТУРА
1. Булгаков В.П., Журавлев Ю.Н., Козыренко М.М., Бабкина Э.Н., Уварова Н.И., Маханьков В.В. Содержание даммарановых гликозидов в различных каллусных линиях Panax ginseng C.A.Mey. // Раст. ресурсы. 1991. T. 27. C. 94-100.
2. Еляков Г.Б., Оводов Ю.С. Гликозиды аралиевых // Химия природ. соединений. 1972. C. 697-710.
3. Еляков Г.Б., Стоник В.А. Морская биоорганическая химия - основа морской биотехнологии // Изв. Акад. наук. Сер. хим. 2003. C. 1-18.
4. Еляков ГБ., Стоник В. А., Аффиятуллов Ш.Ш., Калиновский А.И., Шарыпов В.Ф., Коротких Л.Я. Нативные агликоны из гликозидов голотурий // Докл. АН СССР. 1981. Т. 259. С. 1367-1369.
5. Еляков Г.Б., Кузнецова Т.А., Васьковский В.Е. О составе гликозидной фракции из Stichopus japonicus // Химия природ. соединений. 1968. С. 253-254.
6. Еляков Г.Б., Стригина Л.И., Хорлин А.Я., Кочетков Н.К. Панаксозиды А и В из женьшеня Panax ginseng Mey. // Изв. АН СССР Сер. хим. 1962. C. 1121.
7. Журавлев Ю.Н., Булгаков В.П., Мороз Л.А., Уварова Н.И., Маханьков В.В., Малиновская Г.В., Артюков А.А., Еляков ГБ. Накопление панаксозидов в культуре клеток женьшеня Panax ginseng С.A.Mey., трансформированных с помощью Agrobacterium rhizogenes // Докл. АН СССР. 1990. T. 311. C. 1017-1019.
8. Зыкова Т. А., Винокуров Л.М., Козловская Э.П., Еляков Г.Б. Аминокислотная последовательность нейротоксина III из актинии Radianthus macrodactylus // Биоорган. химия. 1985. T. 11. C. 302-310.
9. Зыкова ТА., Козловская Э.П., Еляков Г.Б. Аминокислотная последовательность нейротоксинов IV и V из актинии Radianthus macrodactylus // Биоорган. химия. 1988. T. 14. C. 1489-1494.
10. Калиновская Н.И., Калиновский А.И., Кузнецова Т. А., Стоник В. А., Еляков ГБ. Необычный стероидный спирт из голотурии Cucumaria japonica // Докл. АН СССР. 1984. Т. 278. С. 630-633.
11. Козловская Э.П., Иванов А.С., Мольнар А.А., Григорьев П.А., Монастырная М.М., Халилов Э.М., Еляков Г.Б. Ионные каналы в мембранах, индуцированные гемолизином из актинии Radianthus macrodactylus // Докл. АН СССР. 1984. Т. 277. С. 1491-1493.
12. Лоенко Ю.Н., Лямкин ГП., Артюков А.А., Еляков Г.Б. Биологически активные полисахариды морских водорослей и морских цветковых растений // Раст. ресурсы. 1991. T. 27. C. 150-160.
13. Мальцев И.И., Кузнецова ТА., Михайлов В.В., Еляков Г.Б. Новый антибиотик из морского стрептомицета // Химия природ. соединений. 1991. C. 298-299.
14. Уварова Н.И., Ошиток Г.И., Дзизенко А.К., Исаков В.В., Еляков Г.Б. Синтез гликозидов панак-садиола ортоэфирным методом // ЖОХ. 1976. Т. 12. С. 984-988.
15. Уварова Н.И., Малиновская Г.В., Елькин Ю.Г., Исаков В.В., Дзизенко А.К., Еляков Г.Б. Тритер-пеноиды из листьев Betula costata // Химия природ. соединений. 1976. С. 757-762.
16. Федоров С.Н., Решетняк М.В., Щедрин А.П., Ильин С.Г., Стручков Ю.Т., Стоник В.А., Еляков Г.Б. Новый галогенированный хамиграновый сесквитерпеноид из моллюска Aplysia sp.: структура и абсолютная конфигурация // Докл. АН СССР. 1989. Т. 305. С. 877-879.
17. Шарыпов В.Ф., Калиновский А.И., Стоник В.А., Авилов С.А., Еляков Г.Б. Выделение нативных агликонов из тритерпеновых гликозидов тихоокеанской голотурии Cucumaria japonica // Химия природ. соединений. 1985. C. 55-59.
18. Anufriev V.Ph., Malinovskaya G.V., Denisenko V.A., Uvarova N.I., Elyakov G.B., Kim S.Il., Baek N.I. Synthesis of ginsenoside Rg3, a minor constituent of ginseng radix // Carb. Res. 1997. Vol. 304. P. 179-182.
19. Atopkina L.N., Uvarova N.I., Elyakov G.B. Simplified preparation of the ginsenoside-Rh2 minor saponin from ginseng // Carbohydrate Res. 1997. Vol. 303. P. 449-451.
20. Elyakov G.B., Strigina L.I., Shapkina E.V., Aladyina N.T., Kornilova S.A., Dzizenko A.K. The probable structure of the true aglycones of ginseng glycosides // Tetrahedron. 1968. Vol. 24. P. 5483-5491.
21. Maltsev I.I., Stonik V.A., Kalinovsky A.I., Elyakov G.B. Triterpene glycosides from sea cucumber Stichopus japonicus Selenka // Comp. Biochem. Physiol. 1984. Vol. 78B. P. 421^26.
22. Newman D.J., Cragg G.M., Snader K.M. Natural products as sources of new drugs over the period 1981-2002 // J. Nat. Prod. 2003. Vol. 66. P. 1022-1037.
23. Uvarova N.G., Atopkina L.N., Elyakov G.B. Synthesis of triterpene and steroid glycosides // Carb. Res. 1980. Vol. 83. P. 33-42.
