Изучение полифенольных соединений рябины обыкновенной флоры Башкортостана Текст научной статьи по специальности «Химические науки»

УДК 615.322.074: [582.711.712:634.18]

ИЗУЧЕНИЕ ПОЛИФЕИОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ РЯБИНЫ ОБЫКНОВЕННОЙ ФЛОРЫ БАШКОРТОСТАНА

©2011 Д.Ф. Галимова, Г.М. Латыпова

ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет», г. Уфа

Поступила 07.07.2011

Изучен качественный состав фенольных соединений смеси цветков и листьев рябины обыкновенной флоры Башкортостана методами ТСХ и ВЭЖХ.

Ключевые слова: рябина обыкновенная, качественный состав, полифенолные соединения.

В настоящее время фитотерапия занимает особое место в лечении и профилактике многих хронических и длительно протекающих заболеваний. Применение лекарственных средств растительного происхождения, особенно в комплексном лечении хронических заболеваний, имеет ряд достоинств, к которым относятся: поливалентность действия, весьма незначительное число противопоказаний, малая токсичность, возможность длительного применения.

Рябина обыкновенная БогЪш аисирапа Ь. - небольшое листопадное дерево сем. розоцветных Яовасеае, высотой до 20 м, реже кустарник с неплотной кроной. Входит в состав 2-3-древесных ярусов, встречается в хвойных, мелколиственных и широколиственных лесах на равнине и в горах [4]. По 1-2 т плодов рябины заготавливают ежегодно в РБ. По подсчетам Министерства лесного хозяйства РБ, биологические запасы плодов и ягод в республике составляют около 12 тыс. т, 50% которых составляют промысловые запасы [5].

В научной медицине используются плоды, химический состав которых изучен достаточно подробно и представлен разнообразными группами биологически активных веществ. Они применяются в качестве поливитаминных, мочегонных, желчегонных средств для профилактики и лечения гипо-и авитаминозов, гипертонии и атеросклероза. Однако исследования по изучению новых видов сырья представляют интерес, т. к. позволяют расширить ассортимент и область применения рябины обыкновенной в медицине. В этом плане перспективными объектами изучения являются цветки и листья рябины обыкновенной.

Целью настоящего исследования является изучение качественного состава фенольных соединений рябины обыкновенной.

Объектом исследования служила смесь цветков и листьев рябины обыкновенной, собранных в различных районах РБ.

Для проведения качественного анализа был приготовлен водно-спиртовый экстракт смеси цвет-

Галимова Дина Фирусовна, e-mail: [email protected], Латыпова Гузелъ Минулловна, канд. фарм. наук, e-mail: primulal [email protected]

ков и листьев рябины обыкновенной на 70% спирте этиловом. Наличие флавоноидных соединений определяли в этилацетатных фракциях и водных извлечениях из исследуемых объектов с помощью качественных реакций [3]: цианидиновая реакция (основана на восстановлении их в кислой среде с образованием окрашивания. К 2 мл извлечения добавляли 5-7 капель концентрированной хлористоводородной кислоты и 10-15 мг металлического цинка, нагревали на водяной бане в течение 2-3 мин до появления розовой окраски), цианидиновая реакция по Брианту (позволяет определить аглико-новую или гликозидную природу исследуемого вещества. К окрашенному продукту цианидиновой реакции добавляли 1/3 часть бутанола по объему, разбавляли водой, встряхивали. При этом пигменты гликозидов обнаруживались в воде, а агликоны - в слое органического растворителя. При добавлении к извлечению 1-2 капли 10 % спиртоводного раствора натрия гидроксида раствор желтел). В результате проведенных качественных реакций в исследуемых образцах были обнаружены флавоно-идные соединения.

Следующим этапом работы было обнаружение полифенольных соединений в этилацетатной фракции водно-спиртового экстракта смеси листьев и цветков методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках «БогЬШ», «5ПиГо1». Наилучшее разделение полифенольных соединений наблюдалось в системах «н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5)» и «этилацетат-уксусная кислота-вода (5:1:1)». Детектирование зон флавоноидов проводили как по собственной флюоресценции веществ в УФ-свете, так и с помощью проявителей: 5% спиртовый раствор алюминия хлорида, пары аммиака. Для сравнения использовали имеющиеся в наличии достоверные образцы свидетелей флавоноидов. Хроматографический анализ флавоноидов свидетельствовал, что зоны адсорбции соединений данной группы в видимом свете имели бледно-желтую окраску, а в УФ-свете - коричневую, которая усиливалась после проявления хромогенными реактивами. В смеси листьев и цветков рябины были обнаружены зоны адсорбции, совпадающие по окраске и расположению пятен со свидетелями флавоноидов: рутина (Яг - 0,45), кверцетина (Яг -0,97) (рис. 1).

Природопользование

Фронт —Ж-

Rf- 0,97

Rf- 0,45

Старт

Рис. 1. Схема хроматограммы этилацетатной фракции из смеси цветков и листьев рябины обыкновенной. А - смесь цветков и листьев рябины обыкновенной, Б -рутин, В - кверцетин.

Хроматографический анализ этилацетатной фракции на присутствие фенолкарбоновых кислот проводили методом ТСХ на пластинках «Sorbfil», «Silufol». При этом хорошее разделение наблюдалось в системе «хлороформ-метанол-вода (62:32:7)». Кислоты обнаруживали по ярко-голубой, зеленовато-голубой, фиолетовой флюоресценции, которая становилась интенсивнее после обработки проявляющими реактивами. В смеси листьев и цветков обнаружены зоны адсорбции, совпадающие по окраске и расположению пятен со свидетелями фенолкарбоновых кислот: кофейная кислота (Rf - 0,95), галловая кислота (Rf - 0,97).

В ходе дальнейших исследований качественного состава фенольных соединений был применен метод ВЭЖХ на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «Gilston», модель 305 (Франция); инжектор ручной, модель «Rheodyne 7125» (США), с последующей компьютерной обработкой результатов с помощью программы «Мультихром для «Windows». В качестве неподвижной фазы использована металлическая колонка размером 4,6x250 мм «Kromasil С 18», размер частиц 5 мк, в качестве подвижной фазы - метанол-вода-кислота фосфорная концентрированная, в соотношении 400:600:5. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 0,8 мл\мин. Продолжительность анализа 120 мин. Детектирование с помощью УФ-детектора «Gilston UV/VIS» модель 151, при длине волны 254 нм. Для исследования сырьё измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм по ГОСТ 214-83.

Около 3,8 г сырья помещали в колбу вместимостью 200 мл, прибавляли 40 мл 70 % этилового спирта, присоединяли к обратному холодильнику и

нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 ч с момента закипания спиртоводной смеси в колбе.

После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу объёмом 50 мл и доводили спиртом этиловым 70 % до метки (раствор А, исследуемый раствор).

Параллельно готовили серию 0,02 % растворов стандартных образцов в 70% спирте этиловом: рутина, кверцетина, лютеолина, лютеолин-7-гликозида, кемпферола, кумарина, гиперозида, гес-передина, апигенина, галловой кислоты, кофейной кислоты, хлорогеновой кислоты, неохлорогеновой кислоты, коричной кислоты, феруловой кислоты, арбутина катехина, умбеллиферона, о-кумаровой кислоты, эпигаллокатехингаллата, эпикатехина, дикумарина. По 50 мкл исследуемых растворов и растворов сравнения вводили в хроматограф и хроматографировали в вышеприведенных условиях. Идентификацию разделенных веществ проводили путем сопоставления времен удерживания пиков, полученных на хроматограмме пробы, с временами удерживания стандартных растворов. Результаты проведенных исследований приведены в таблице и на рис. 2.

Таблица. Результаты исследования фенольных веществ смеси цветков и листьев рябины обыкновенной методом ВЭЖХ

Наименование PCO Время удерживания, мин Количественное соотношение, %

Аскорбиновая кислота 3,08 2,58

Никотиновая кислота 3,29 11,65

Галловая кислота 3,97 33,33

Цикориевая кислота 5,31 4,93

Рутин 7,93 1,73

Феруловая кислота 10,40 7,57

Эпикатехин 12,24 4,74

Гиперозид 16,07 0,77

Лютеолин-7-гликозид 21,27 0,09

Коричная кислота 24,33 0,61

Дигидрокверцетин 34,45 0,79

Кверцетин 39,06 2,50

Кемпферол 59,02 0,10

Лютеолин 70,16 0,86

В результате проведенных исследований методом ВЭЖХ в смеси цветков и листьев идентифицировано 12 соединений фенольной природы, которые в основном представлены флавоноидами (рутин, гиперозид, лютеолин-7-гликозид, дигидрок-верцетин, кверцетин, кемферол, лютеолин), производными фенолкарбоновых кислот (галловая, ци-коревая, феруловая, коричная) и эпикатехином. Установлено, что из флавоноидных соединений в наибольшем количестве содержится рутин и кверцетин, из производных фенолкарбоновых кислот -галловая кислота. Также в исследуемом сырье идентифицированы органические кислоты - аскорбиновая, никотиновая.

О О

О о

ООО

PP о и s e—I о iri PP о =1

s П| :

5=2-, s

e—i tri ¡=r s •e s e—i И С—i 5=2-, s ¡=r ¡=2-, 5=2-,

pp S 5=2-, о tri s s F El s! E-H 5=^ tri b=! PP О « И s X e—i tri S •e s t—i к s со О 5=2-, tri S « И S « ¡=Г t-H isj tri S t BB s ¡=Г s •e s С—i И ¡=r | 5=2-, ! PP tri ; О !

a Ц f 1=1 Г r 1=1 S f4 о e—i 2 r S 5=2-, О r S * s F »=C ! S ! S i r

---1-

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 Рис. 2. Хроматограмма ВЭЖХ смеси цветков и листьев рябины обыкновенной.

Изученный качественный состав полифеноль-ных соединений методами ТСХ и ВЭЖХ показал разнообразный состав и перспективность дальнейших исследований новых источников сырья рябины обыкновенной.

Наличие рутина в исследуемых объектах и его доступность позволило рекомендовать его в качестве рабочего стандартного образца для дальнейших исследований.

28 30

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

мин

1.

3.

Беликов В.В. Методы анализа флавоноидных соединений // Фармация. 1970. № 1. С. 68.

Государственная фармакопея СССР. Вып. 1: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗСССР. 11-е изд., доп. М., 1989. С. 199. Практикум по фармакогнозии / под общ. ред. В.Н. Ковалева. Харьков: Изд. НФаУ, 2004. 512 с. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства: Ровасеае. Л.: Наука, 1985. 460 с.

Кучеров Е.В., Галеева АЛ". Ресурсы основных видов дикорастущих лекарственных растений в Башкирии. Уфа: Башкирский НЦ УрО РАН, 1991. 114 с.

THE STUDY OF COMPOSITION OF PHENOL COMPOSITION IN SORBUS AUCUPARIA GROWING IN BASHKORTOSTAN

©2011 D.F. Galimova, G.M. Latypova

Bashkir State Medical University, Ufa

Qualitative composition of phenolic compounds contained mixture of the leaves and flowers of Sorbus aucuparia growing on the territory of Bashkortostan has been studied by means of thin-layered chromatography and highly effective liquid chromatography.

Key words: Sorbus aucuparia, composition, phenolic compounds.

Galimova Dina Firusovna, e-mail: di.galimova(S)yandex.ru, Latypova Guzel Minullovna, Candidate of Pharmacy, e-mail: primulal 7®)rambler.ru