Изучение некоторых фенольных соединений крапивы коноплевой травы, произрастающей на территории Алтайского края Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Химия растительного сырья. 2012. №2. С. 133-138.

УДК 615.345:299

ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ КРАПИВЫ КОНОПЛЕВОЙ ТРАВЫ, ПРОИЗРАСТАЮЩЕЙ НА ТЕРРИТОРИИ АЛТАЙСКОГО КРАЯ

© Л.М. Федосеева , В.О. Кирьякова

Алтайский государственный медицинский университет, пр. Ленина, 40,

Барнаул, 656038 (Россия), e-mail: [email protected]

Методами ТСХ и ВЭЖХ в крапиве коноплевой (Urtica cannabina L.), траве, семейство Urticaceae, идентифицированы флавоноиды: кемпферол, гиперозид, кверцетрин, робинии; производные фенолкарбоновых кислот: феруловой, коричной, кумаровой; а также компоненты танина и резорцин. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетрин составило 1,17%.

Ключевые слова: Urtica cannabina, фенольные соединения, флавоноиды, кверцетрин.

Флавоноиды, дубильные вещества, фенолкарбоновые кислоты - наиболее распространенные группы фенольных соединений, которые содержатся в лекарственных растениях. Данные вещества обладают биологической активностью за счет находящихся в молекуле гидроксильных и/или карбонильных групп, принимающих участие в биохимических процессах организма и обусловливают широкий спектр их фармакологической активности [1, 2].

В настоящее время большое внимание уделяют изучению растений рода ЦМса. В Алтайском государственном медицинском университете проводится комплексное исследование трех видов крапивы (Ц1тйса), семейство Птйсасеае: двудомная (Пт. ёююаЬ.), коноплевая (Пт. саппаЬтаЬ.), жгучая (Пт. итвтЬ.).

Цель настоящей работы - изучение фенольных соединений крапивы коноплевой травы.

Объектами исследования служили образцы Пт^сае саппаЫпае травы, собранные в период цветения в окрестностях Барнаула в 2010 г.

Экспериментальная часть

Сырье измельчали до размера не более 2 мм, подвергали экстракции в соотношении сырья и экстрагента 1 : 10, в качестве экстрагента использовали воду очищенную, спирт этиловый 70%, диэтиловый эфир, этилацетат, бутанол. Извлечение готовили с использованием водяной бани.

Схема выделения фенольных соединений из крапивы коноплевой травы на рисунке 1.

Качественные реакции на фенольные соединения проводили по общепринятой методике. С целью

Введение

Федосеева Людмила Михаиловна - заведующая кафедрой фармацевтической химии с курсом органической и токсикологической химии, доктор фармацевтических наук, профессор, e-mail: [email protected]

Кирьякова Виктория Олеговна - аспирант кафедры фармацевтической химии, e-mail: [email protected]

подтверждения результатов качественных реакций для идентификации флавоноидов использовали метод тонкослойной хроматографии в системах растворителей: бутанол - уксусная кислота - вода (БУВ) (4 : 1 : 5), уксусная кислота 60% [3].

В качестве свидетелей использовали растворы стандартов рутина (Sigma, кат. №С235), кверцетрина (Sigma, кат. №H4357), кемпферола (Sigma, кат. №M3251).

* Автор, с которым следует вести переписку.

5 ч. этилацетста

Рис. 1. Схема выделения фенольных соединений Пт^сае саппаЫпае травы

Полученные хроматограммы высушивали при комнатной температуре, рассматривали при дневном свете, в УФ свете до и после обработки спиртовым раствором алюминия хлорида 5%, отмечая изменение окраски зон флуоресценции и рассчитывали И.

Дальнейшую идентификацию БАС Пт^сае саппаЫпае травы проводили методом ВЭЖХ. Исследования проводили с помощью жидкостного микроколоночного хроматографа марки «Миллихром А-02», хроматографическая колонка РгоШоБШ 120-5С18АР, 2,0*75 мм. Подвижная фаза: элюент А водный раствор кислоты трифторуксусной 0,01%; элюент Б - ацетонитрил 100%. Скорость подачи элюента 100 мкл/мин, объем пробы - 2 мкл, температура колонки 35 °С; градиент 5 - 55% элюента Б за 30 мин. Параллельно проводили исследование растворов стандартных образцов в концентрации 0,05%. Детектирование веществ проводили при длинах волн 220, 254, 300, 360 нм, идентификацию осуществляли по временам удерживания и УФ спектрам, снятым в процессе хроматографирования при остановке потока элюентов, путем сравнения со спектрами стандартных образцов [4].

Обсуждениерезультатов

Положительные результаты проведенных качественных реакций дают возможность предположить наличие в Шсае саппаЫпае траве флавоноидов группы: флавонола, флавона, 5-оксифлавона и флавононола.

В результате проведения тонкослойной хроматографии оптимальной системой для идентификации флавоноидов является БУВ (4 : 1 : 5), обнаружены два пятна желтого цвета, в УФ свете имеющие голубую флюоресценцию, после обработки спиртовым раствором алюминия хлорида 5% выделены пятна со значением Я/0,85 и 0,86, что соответствует значению Я/ стандартов кверцетрина и кемпферола (табл. 1).

Таблица 1. Результаты идентификации флавоноидов Пт^сае саппаЫпае травы методом ТСХ

№ п/п Значения ИГ рутина Значения ИГ кверцетрина Значения ИГ кемпферола Значения ИГ извлечения из травы

1 0,55±0,05 0,85±0,05 0,86±0,05 0,85±0,05

2 0,56±0,05 0,86±0,05 0,87±0,05 0,86±0,05

3 0,56±0,05 0,85±0,05 0,86±0,05 0,85±0,05

Методом ВЭЖХ изучены эфирная, этилацетатная, бутанольная и водная фракции извлечения Пт^сае саппаЫпеа травы.

При изучении эфирной фракции обнаружены ряд пиков. Анализ их спектров поглощения, свидетельствует об отсутствии флавоноидов-гликозидов в извлечении (рис. 2, 3). Обнаружены пики ряда веществ фенольной природы, соответствующие стандартным растворам с временами удерживания: 8,4 мин, Хтах 200, 220, 280 нм - резорцин; 13 мин, Хтах 200, 225, 280 нм - эфир коричной кислоты; 14,5-15 мин, Хтах 218, 220 нм - эфир галловой кислоты; 22,8 мин, Хтах 220, 330 нм - кислота фенилпропановая; 26,5 мин, Хтах 300, 320 нм - метоксикумаровая кислота (табл. 2).

Рис. 2. Хроматограмма эфирной фракции извлечения Пт^сае саппаЫпае травы

0.70.60.50.40.30.20.1 -0.0

190 210 230 250 270 290 310 330 350 Длина волны, нм

Дгмна вогнь, нм

Б

Длина волны, нм

в

Рис. 3. Спектры абсорбции:

А - резорцин; Б - эфир коричной кислоты; В - эфир галловой кислоты; Г - кислота фенилпропановая;

Д - метоксикумаровая кислота

Дплна волны, нм

Г

0.120.10-ш 0.08-

О

0.06

0.04-

0.02

190 210 230 250 270 290 310 330 350 Дгина волны, нм

Д

При исследовании этилацетатной фракции на хроматограмме обнаружены три пика (рис. 4), соответствующие флавоноидам-монозидам группы флавона Хтах 360 нм.

Вещества со временем удерживания:15 мин - гиперозид, 17 мин - кверцетрин, 23 мин - флавоноид-моногликозид, информация о строении которого в доступной литературе не обнаружена.

Из бутанольной фракции на хроматограмме обнаружены четыре пика флавоноидов-гликозидов группы флавона со временами удерживания 12 мин, Хтах 200, 215, 270, 330 нм - шафтозид; 14,7 мин, Хтах 220, 270, 335 нм - робинин; 17 мин, Хтах 200, 260, 350 нм - кверцетрин; 18,4 мин, Хтах 200, 220, 270, 330 нм - флавоноид группы апигенина (рис. 5). Можно полагать, что бутанолом извлекаются не только биозиды и триозиды, но и флавоноиды-монозиды. Обнаруженные флавоноиды и их спектральные характеристики представлены в таблице 3. Кроме того идентифицированы: резорцин, время удерживания 8,4 мин, Хтах 220 нм; вещества с временами удерживания 9 и 11 мин, Хтах 220 и 270 нм, имеющие одинаковый спектр с фенольным поглощением - дигидроксикислоты; время удерживания 29,5 мин, Хтах 300, 320 - метоксикумаровая кислота (рис. 6).

В результате ВЭЖХ водной фракции Пт^сае саппаЫпае травы обнаружены фенолокислоты: время удерживания 9 мин, Хтах 220, 270 нм - дигидроксибензойная кислота; вещество со временем удерживания 12 мин, Хтах 360 нм, соответствующее спектру С-гликозида апигенина (рис. 7, 8).

Таблица 2. Спектральные характеристики веществ, обнаруженных в эфирной фракции П^сае саппаЫпае

№ пика Время удерживания, мин Максимумы поглощения, нм Идентифицированное вещество

1 8,4 200, 220, 280 резорцин

2 13 200, 225, 280 эфир коричной кислоты

3 14,5-15 218,220 эфиры галловой кислоты, соответствующие по

спектрам китайскому танину

4 22,8 220, 330 фенилпропановая кислота

5 26,5 300, 320 метоксикумаровая кислота

Рис. 4. Хроматограмма этилацетатной фракции извлечения Пгґісае саппаЫпае травы:

6 - гиперозид; 7 - кверцетрин

Рис. 5. Хроматограмма бутанольной фракции извлечения Пгґісае саппаЫпае травы

Дгмна волны, нм

А

Рис. 6. Спектры абсорбции: А, Б - дигидроксикислоты

Длина вогнщ нм

Б

Таблица 3. Спектральные характеристики веществ, обнаруженных в бутанольной фракции игКеае саппаЬтае травы

№ пика Время удерживания, мин Максимумы поглощения, нм Идентифицированное вещество

І 8,4 200, 220, 2S0 резорцин

2 ІІ,0 220, 270 дигидроксибензойная кислота

3 І2,0 200, 2І5, 270, 330 флавонод апигениновой структуры, шафтозид

4 І2,2 200, 220, 3І0 гликозид кумаровой кислоты

5 І4,7 220, 270, 335 робинии

6 І4,9 230, 320 кумаровая кислота

7 І7,0 200, 260, 350 кверцетрин

S І8,4 200, 220, 270,330 флавоноид группы апигенина

9 29,5 300, 320 метоксикумаровая кислота

Рис. 7. Хроматограмма водной фракции извлечения Пг^сае саппаЫпае травы после извлечения БАВ: 1 - апигенин; 2 - С-гликозид апигенина

Длина вогны, нм

А

Длина волны, нм

Б

Рис. 8. Спектры абсорбции пика. А - апигенин; Б - С-гликозид апигенина

Количественное содержание суммы флавоноидов Пг^сае саппаЫпае травы определяли методом дифференциальной спектрофотометрии с использованием алюминия хлоридом 5%, экстрагент - этиловый спирт 70%. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетрин составило 1,17 ±0, 02%.

Выводы

В результате исследования методами тонкослойной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии Пгґісае саппаЬіпае травы идентифицировали флавоноиды: кемпферол, гиперозид, кверцетрин, робинин; производные фенолкарбоновых кислот: феруловой, коричной, кумаровой; а также компоненты танина и резорцин. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетрин - 1,17%.

Список литературы

1. Телятьев В.В. Полезные растения Центральной Сибири. Иркутск, 1985. С. 79-80.

2. Akbay P. In vitro immunomodulatory activity of flavonoid glycosides from Urtica dioica L. // Phytother Res. 2003. Vol. 17. Pp. 34-37.

3. Гринкевич Н.И. Химический анализ лекарственных растений. М., 1983. 85 с.

4. Geissman T.A. The flavonoid compounds. Oxford, 1962. 666 p.

Поступилов редакцию 10 ноября 2011 г.

Fedoseeva L.M.*, Kiryakova V.O. STUDY OF SOME PHENOLIC COMPOUNDS URTICA CANNABINA HERBS GROWING IN THE ALTAI TERRITORY

Altai State Medical University, pr. Lenina, 40, Barnaul, 656038 (Russia), e-mail: [email protected]

Methods TLC and HPLC methods in the Urticae cannabinae herbs (Urticaceae family) identified flavonoids: kaempferol, hyperoside, kvertsetrin, robinin; derivatives phenol carbonic acids: ferulic, cinnamic, coumaric, as well as components of resor-cinol and tannin. The content of flavonoids amounts in terms of kvertsetrin was 1.17%.

Keywords: Urtica cannabina, phenolic compounds, flavonoids, kvertsetrin.

References

1. Teliat'ev V.V. Poleznye rasteniia Tsentral’noi Sibiri. [Useful plants of Central Siberia]. Irkutsk, 1985, pp. 79-80. (in Russ.).

2. Akbay P. Phytother Res, 2003, vol. 17, pp. 34-37.

3. Grinkevich N.I. Khimicheskii analiz lekarstvennykh rastenii. [Chemical analysis of medicinal plants]. Moscow, 1983, 85 p. (in Russ.).

4. Geissman T.A. The flavonoid compounds. Oxford, 1962. 666 p.

Received November 10, 2011

* Corresponding author.