CC BY
9
^^[jtegmpfe [pox^friM^ ==
УДК 615.2.03
ИЗУЧЕНИЕ КУМУЛЯТИВНЫХ СВОЙСТВ ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ФОРМЫ НОВОГО ПРОТИВОМИГРЕНОЗНОГО СРЕДСТВА РУ-31
В.И. Корнилов1, Д.С. Яковлев1'2, В.В. Багметова1, Л.И. Бугаева1, А.А. Спасов12, А.Ю. Гетманенко1
ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации; 2ГБУ «Волгоградский медицинский научный центр»
Изучены кумулятивные свойства готовой лекарственной формы (ГЛФ) - таблеток 8 мг производного 2-метоксифенил-имидазобензимидазола (РУ-31) для лечения и профилактики мигрени, серотонинозависимых нарушений мозгового кровообращения. Четырехнедельные эксперименты проведены на белых беспородных крысах обоего пола, при внутрижелудочном введении водного раствора ГЛФ РУ-31 в дозах 10 и 100 мг/кг. На 29-й день животным была введена разрешающая доза водного раствора ГЛФ, равная ЛД50. Согласно расчетам, коэффициент кумуляции (КК) составил более 20 у.е., что указывает на отсутствие кумулятивных свойств.
Ключевые слова: мигрень, кумуляция, производное 2-метоксифенил-имидазобензомидазола, РУ-31.
DOI 10.19163/1994-9480-2020-4(76)-46-49
CUMULATIVE PROPERTIES OF THE NEW ANTI-MIGENOUS COMPOUND
IN THE TABLET MEDICAL FORM
V.I. Kornilov1, D.S. Yakovlev12, V.V. Bagmetova1, L.I. Bugaeva1, A.A. Spasov1, A.Yu. Getmamenko1
1
FSBEI HE «Volgograd State Medical University» of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation;
2SBI «Volgograd Medical Scientific Centre»
Cumulative properties of 2-metoxifenil-imidazobenzimidazole derivative (RU-31) in tablet medical form (8 mg) were studied for development of new drug for migraine treatment. Four-week experiments were carried out on white rats of both sex, with intragastral administration of RU-31 water solution in the doses of 10 mg/kg and 100 mg/kg. On the 29th day the dose of tested compound equal to LD50 was administered to the animals. Due to the calculation of accumulation coefficient (more than 20 units) the tablet form of RU-31 shows the lack of cumulative properties.
Key words: migraine, cumulation, 2-methoxyphenyl-imidazobenzimidazole derivative, RU-31.
Наиболее распространенной формой головной боли является мигрень, которой страдают около 15 % населения [9].
Для купирования приступов мигрени в настоящее время применяются препараты, частота эффективности которых не превышает 60-65 %.
Высокоэффективных профилактических средств этого заболевания на данный момент не существует [2, 6].
Установлено, что на начальной стадии развития приступа мигрени в сыворотке крови увеличивается концентрация медиатора 5-гидрокси-триптамина (серотонина, 5-НТ), высвобождение и его действие на кровеносные сосуды является одним из основных факторов в развитии патологии [8]. Учитывая существенную триггерную роль серотонинового компонента, разрабатывают новый класс лекарственных препаратов - антагонистов 2А подтипа серотониновых рецепторов.
В результате исследований, проведенных ранее в ВолгГМУ, было получено соединение, производное 2-метоксифенила-имидазобензими-д азо л а (РУ-31) с 5-НТ2А-антагонистическим механизмом действия, обладающее противомигреноз-ными свойствами [1, 5, 7].
На основе субстанции РУ-31 разработана твердая пероральная лекарственная форма -«РУ-31, таблетки по 8 мг» (готовая лекарственная форма, ГЛФ), способная устранять серотониновое влияние на сосуды головного мозга [8]. Возможные кумулятивные свойства разрабатываемого лекарственного средства необходимо учитывать для последующего выбора доз при изучении хронической токсичности в рамках расширенного доклинического исследования [6].
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Изучить кумулятивные свойства готовой табле-тированной лекарственной формы разрабатываемого противомигренозного средства РУ-31.
Исследование выполнялось при поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации в рамках государственного контракта №14.N08.11.0159.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
В исследовании использовали опытный образец ГЛФ РУ-31: таблетки содержащие по 8 мг дигидрохлорида 9-(2-диэтиламиноэтил)-2-(4-мет-оксифенил)имидазо[1,2-а]бензимидазола (РУ-31), произведенные в ПМФИ-филиале ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России 01.2018 г. (протокол анализа № 1 от 23.01.18 г. о проверке качества образца и соответствии лабораторному регламенту № 011962942-005-2017).
Эксперименты проведены на здоровых, беспородных 30 крысах - самцах массой 220-260 г и 30 крысах-самках массой 180-220 г. Животные с учетом пола содержались в стандартных условиях вивария университета, имели доступ к воде и еде ad libitum. Условия обращения и содержания используемых в эксперименте животных соответствовали общепринятым этическим нормам и стандартам.
Для проведения исследований были сформированы равнозначные группы контрольных и опытных животных по 10 особей в каждой, в качестве критерия использовали массу тела, так, чтобы индивидуальное значение массы не отклонялось от среднего значения более чем на ±10 %.
Работа по определению возможной способности ГЛФ РУ-31 к кумуляции проведена в соответствии с рекомендациями, изложенными в действующем руководстве по проведению доклинических исследований лекарственных средств [4] с использованием метода Кагана Ю.С. и соавт. [3].
С учетом предполагаемого перорального применения исследуемая ГЛФ РУ-31 вводилась животным ежедневно в утреннее время, в виде водного раствора - внутрижелудочно, с использованием атравматического металлического зонда. Для приготовления раствора навеску тестируемой ГЛФ РУ-31 растворяли в дистиллированной воде непосредственно перед введением экспериментальным группам животных в дозах: 10 мг/кг (соответствует экспериментально доказанной терапевтической дозе), 100 мг/кг (соответствует десятикратной терапевтической дозе и приблизительно 1/10 от ЛД50). По окончании курса введения на 29-й день эксперимента тестируемая ГЛФ РУ-31 была введена экспериментальным и контрольным животным в разрешающей дозе, равной ЛД50: 932 мг/кг - для самцов; 627,5 мг/кг - для самок. Контрольной группе животных проводилось ежедневное внутри-желудочное введение дистиллированной воды в объеме 5 мл/кг в течение 4 недель (28 дней).
В ходе эксперимента наблюдали за общим состоянием и поведением животных, приемом корма и воды, состоянием шерстяного покрова, массой тела.
Результаты исследований оценивались на следующий день после введения разрешающей дозы ГЛФ РУ-31. При этом учитывалось количество погибших и выживших животных в период 4-недель-ного курса введения, а также после введения дозы ГЛФ РУ-31, равной величине ЛД50.
Критерием эффективности в исследовании являлся коэффициент кумуляции (КК), который рассчитывался с учетом суммарных данных гибели животных, зафиксированной в период 4-недельного курса введения тестируемой ГЛФ, а также на второй день после введения ГЛФ РУ-31 в разрешающей дозе, с использованием формулы [3]:
КК = ^ / ЛД50) * (50 / N * А),
где КК - коэффициент кумуляции;
DS - суммарная доза ГЛФ для павших и выживших животных;
ЛД50 - уровень среднесмертельной дозы ГЛФ РУ-31;
N - число животных в группе;
А - процент погибших животных.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета прикладных программ STATISTICA 6.0. Значимость различий определяемых показателей в экспериментальных группах от соответствующих показателей в контрольной выборке оценивали с помощью ^критерия Стью-дента - Фишера.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
По результатам проведенных исследований установлено, что общее состояние животных, получавших ГЛФ РУ-31 в дозах 10 и 100 мг/кг внутрижелудочно в течение 4 недель, существенно не различалось с состоянием животных контрольной группы.
Шерстный покров у животных в экспериментальных и контрольных группах был чистый и гладкий, кожные покровы и видимые слизистые чистые, физиологической окраски. В поведении животных каких-либо изменений не зафиксировано.
Измерения массы тела у животных (табл. 1) в о п ытных и контрольных группах показали положительную динамику прироста данного показателя. Прирост массы тела у животных в экспериментальных группах не имел статистически значимых различий с данным показателем контрольных животных.
Результаты исследования кумулятивных свойств ГЛФ РУ-31 представлены в табл. 2.
Как видно из приведенных данных, у животных по окончании 4-недельного курса гибель
крыс (1 самка) была единичной и фиксировалась лишь во 2-й экспериментальной группе.
У крыс в 1-й экспериментальной группе и у контрольных - погибших особей не обнаружено.
Таблица 1
Динамика прироста массы тела у крыс, получавших ГЛФ РУ-31 внутрижелудочно в течение 28 дней (г, M ± т)
Период измерения, дни Группа контроля Группы, п ол учавшие ГЛФ РУ-31, мг/кг
10 100
Крысы-самцы
1 (исходные значения) 248,30 ± 6,78 245,80 ± 7,35 248,80 ± 6,97
7 249,80 ± 6,59 251,80 ± 7,82 254,00 ± 6,98
14 258,00 ± 6,57 257,80 ± 7,46 259,80 ± 6,87
21 268,60 ± 7,11* 266,40 ± 6,29* 263,60 ± 7,03
28 278,60 ± 7,02** 273,80 ± 7,31* 272,80 ± 6,59*
Общий прирост массы тела, % 14,3 11,4 9,65
Крысы-самки
1 (исходные значения) 224,40 ± 5,14 219,20 ± 3,44 222,20 ± 7,03
7 227,80 ± 4,98 221,2 ± 3,8 226,80 ± 7,42
14 235,40 ± 5,05 229,60 ± 4,17 232,80 ± 7,59
21 241,20 ± 5,19* 237,40 ± 4,06** 238,20 ± 7,17
28 249,80 ± 5,57** 242,00 ± 4,93** 243,40 ± 7,12*
Общий прирост массы тела, % 11,3 10,4 9,54
*p < 0,05; **р < 0,01 - различия статистически значимы по сравнению с исходными значениями.
По окончанию 4-недельного курса, на 29-й день эксперимента всем оставшимся в живых животным было проведено введение ГЛФ РУ-31 в дозе, равной ЛД50.
На 30-й день эксперимента отмечено наличие 50%-й гибели у крыс в контрольной группе и у крыс в 1-й экспериментальной группе, а также 50%-я гибель у крыс самцов и 40%-я гибель у крыс самок во 2-й экспериментальной группе.
Таблица 2
Выживаемость животных при кумулятивном введении ГЛФ РУ-31
Гибель животных
Дн и н аблюдений в исследуемых группах, п погибших/всего в группе, мг/кг
Контрольная группа Группа-1, ГЛФ РУ-31, 10 Группа-2, ГЛФ РУ-31, 100
Крысы-самцы
1-7 0/10 0/10 0/10
8-14 0/10 0/10 0/10
15-21 0/10 0/10 0/10
22-28 0/10 0/10 0/10
Суммарная гибель - 28 дней 0/10 0/10 0/10
Введение
разрешающей дозы ГЛФ РУ-31 932 мг/кг
на 29-й день
Гибель в группах от введения 5/10 5/10 5/10
разрешающей дозы
Суммарная гибель - 30 дней 5/10 5/10 5/10
Коэффициент кумуляции, у. е. 27,86 27,77 94,83
Крысы-самки
1-7 0/10 0/10 0/10
8-14 0/10 0/10 0/10
15-21 0/10 0/10 1/10
22-28 0/10 0/10 0/9
Суммарная гибель - 28 дней 0/10 0/10 0/9
Введение
разрешающей дозы ГЛФ РУ-31 627,5 мг/кг
на 29-й день
Гибель в группах от введения 5/10 5/10 3/9
разрешающей дозы
Суммарная гибель - 30 дней 5/10 5/10 4/10
Коэффициент кумуляции, у. е. 24,98 33,09 91,79
В результате анализа полученных данных выявлено, что значения КК, рассчитанные для самцов и самок крыс контрольных и экспериментальных групп, оказались более 20 у. е., что согласно использованному методу определения [3] и позволяет считать, что у исследуемой ГЛФ РУ-31 отсутствуют кумулятивные свойства.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
По результатам проведенных исследований можно сделать заключение, что суммарная гибель животных по окончанию 4-недельного внутрижелу-дочного введения ГЛФ РУ-31 по кумулятивной
[ЩсохпГПГО^Я^!
схеме в дозах 10 и 100 мг/кг не различается с данными контроля. Суммарная гибель животных в опытных и контрольной группах после введения разрешающей дозы ГЛФ РУ-31, равной ЛД50, существенно не различается.
Таким образом, установлено, что для ГЛФ РУ-31 при внутрижелудочном введении крысам не характерно наличие кумулятивных свойств.
ЛИТЕРАТУРА
1. Агацарская Я.В., Яковлев Д.С., Мальцев Д.С. и др. Нейрорецепторные эффекты антимигренозного агента 9-диэтиламиноэтил-2-(4-метоксифенил)имидазо[1,2-a] бензимидазола // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. - 2019. - Т.69, № 1. - С. 120-124.
2. Дубенко О.Е., Сотников Д.Д. Профилактическое лечение мигрени: вчера, сегодня, завтра // Головная боль (тематический номер). - 2009.
3. Каган Ю.С. Общая токсикология пестицидов. -Киев: Здоров'я, 1981. - 210 с.
4. Миронов А.Н., Бунатян Н.Д., Бондарев В.П. и др. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Ч. 1. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 c.
5. Спасов А.А., Анисимова В.А., Яковлев Д.С. и др. Средства, проявляющие свойства антагонистов серотониновых 5-НТ2Арецепторов: пат. 2465901 РФ; № 2011104264, заявл. 07.02.11. - Опубл. 10.11.12. -Бюл. № 31.
6. Спасов А.А., Яковлев Д.С., Бригадирова А.А. и др. Современные направления разработки новых средств для лечения мигрени. Акцент на антагонисты 5-НТ2А-рецепторов // Биоорганическая химия. - 2019. -Т. 45, № 3. - С. 238-251.
7. Степанова Э.Ф., Курегян А.Г., Спасов А.А. и др. Фармацевтическая композиция противомигренозного действия в твердой лекарственной форме в виде таблеток: пат. 26968866 РФ; № 219106339, заявл. 05.03.19. -Опубл. 07.08.19. - Бюл. № 22.
8. Adams J.W., Ramirez J., Ortuno D., et al. Anti-thrombotic and vascular effects of AR246686, a novel 5-HT2A receptor antagonist // European Journal of Pharmacology. - 2008. - Vol. 586, Issue 1-3. - P. 234-243.
9. Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 310 diseases and injuries, 1990-2015: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2015 // Lancet. - 2016. - Vol. 388. -P. 1545-1602.
REFERENCES
1. Agacarskaya Ya.V., Yakovlev D.S., Mal'cev D.V., et al. Nociceptive effects of antimigraine agent 9-diethlaminoethil-2-(4-metoxifenil)imidazo[1,2-a]benzimidazole [Nejrorecep-tornye effekty antimigrenoznogo agenta 9-dietilaminoetil-2-(4-metoksifenil)imidazo[1,2-a]benzimidazola]. Vestnik Vol-gogradskogo gosudarstvennogo medicinskogo universiteta [Journal of the Volgograd State Medical University], 2019, no. 1 (69), pp. 120-124. (In Russ.; abstr. in Engl.).
2. Dubenko O.E., Sotnikov D.D. Profilakticheskoe lechenie migreni: vchera, segodnya, zavtra [Prophylactic treatment of migraine: yesterday, today, tomorrow]. Golovnaya bol' (tematicheskij nomer) [Headache (thematic issue)], 2009. (In Russ.; abstr. in Engl.).
3. Kagan Yu.S. Obshchaya toksikologiya pesticidov [Basic toxicology of pesticides]. Kiev: Zdorov'ya, 1981. 210 p. (in Russ.; abstr. in Engl.).
4. Mironov A.N. Rukovodstvo po provedeniyu doklinicheskih issledovanij lekarstvennyh sredstv. Ch. 1 [Preclinical Drug Research Guide. Part 1]. Moscow: Grif i K, 2012. 944 p. (In Russ.; abstr. in Engl.).
5. Spasov A.A., Anisimova V.A., Yakovlev D.S., et al. Sredstva, proyavlyayushchie svojstva antagonistov serotonin-novyh 5-HT2A-receptorov [Compounds demonstrating 5-HT2A-antagonistic properties]: patent 2465901 RF; No. 2011104264, application 07.02.11. Published on November 10, 2012. Bulletin No. 31. (In Russ.; abstr. in Engl.).
6. Spasov A.A., Yakovlev D.S., Brigadirova A.A., et al. Sovremennye napravleniya razrabotki novyh sredstv dlya lecheniya migreni. Akcent na antagonisty 5-HT2A-receptorov [Novel Approaches to the Development of Antimigraine Drugs: A Focus on 5-HT2A Receptor Antagonists]. Bioorganicheskaya himiya [Bioorganic chemistry], 2019, vol. 3, no. 45, pp. 238-251. (In Russ.; abstr. in Engl.).
7. Stepanova E.F., Kuregyan A.G., Spasov A.A., et al. Farmacevticheskaya kompoziciya protivomigrenoznogo dejstviya v tverdoj lekarstvennoj forme v vide tabletok [Pharmaceutical composition of antimigraine drug in medical form of tablets]: patent 26968866 RF; No. 219106339, application 05.03.19. Published on 08/07/19. Bulletin No. 22. (In Russ.; abstr. in Engl.).
8. Adams J. W. Anti-thrombotic and vascular effects of AR246686, a novel 5-HT2A receptor. European Journal of Pharmacology, 2008, no. 1-3, Issue 586, pp. 234-243.
9. Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 310 diseases and injuries, 1990-2015: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2015. Lancet, 2016, vol. 388, pp. 1545-1602.
Контактная информация Яковлев Дмитрий Сергеевич - д. м. н., доцент кафедры фармакологии и биоинформатики, Волгоградский государственный медицинский университет, е-таП: dypharm@list.ru
