CC BY
5Абдуллоходжаева Ганджина Абдуазаловна - научный сотрудник НИИ АПиП Министерства здравоохранения РТ; Садикова Гульнора Низомиддиновна - ассистент кафедры акушерства и гинекологии №2 ТГМУ им. Абуали ибни Сино, соискатель кафедры, e-mail: gulya_1990@bk.ru
Information about the authors: Rafieva Zarina Khamdamovna - doctor of medical sciences, professor of the department of Gynecology and Obstetrics №2, Avicenna Tajik State Medical University; Tagoeva Fakhriya Melsovna - assistant at the department of Gynecology and Obstetrics №2, Avicenna Tajik State Medical University; Abdullokhojaeva Ganjina Abduazalovna - Scientific worker of the Scientific Research Institute of MoH SPP RT; Sodikova Gulnora Nizomiddinovna - assistant at the department of Gynecology and Obstetrics №2, Avicenna Tajik State Medical University. Scientific worker at the department
ИЗУЧЕНИЕ КОНТАКТНОГО ВОЗДЕЙСТВИЕ ГЛИЦИРИНА, СПИРТА,
ГИПЕРТОНИЧЕСКОГО РАСТВОРА И ПЕРГИДРОЛЯ НА ПАРЕНХИМУ ПЕЧЕНИ КРЫС (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ I)
Амонов Ш. Ш., Прудков М. И., Мещерякова Е. Ю.
Республиканский научный центр сердечно-сосудистой хирургии, г. Душанбе Уральский государственный медицинский университет, г. Екатеринбург
Введение. Эхинококкоз - эндемическое паразитарное заболевание, частота инвазии печени при котором составляет от 44,2 до 84,2% [1, 9, 3]. Медикаментозные средства лечения пока недостаточно эффективны, а прогрессирование паразитарной инвазии сопровождается развитием осложнений в 22-53% наблюдений [5, 4], способных приводить к смерти пациента [7, 6].
Эхинококкэктомия представляет собой намного более щадящий и менее рискованный подход к лечению эхинококкоза печени [6]. Степень радикализма подобных вмешательств определяется риском интраоперационной диссеминации зародышевых элементов паразита при вскрытии кисты, полноценностью их удаления из ее просвета, качеством антипаразитарной обработки.
Выбор способа антипаразитарной обратотки внутренней поверхности остаточной фиброзной капсулы продолжает оставаться предметом обсуждения. Для этих целей предлагается использовать гипертонический раствор, глицерин, спирт, электрокоагуляцию в режиме «спрей», аргон-усиленную электрокаогуляцию, криовоздействие [2, 10], расфокусированный луч лазера [9]. Все эти методы достаточно эффективны, но не лишены недостатков. Их трудно регулировать по глубине деструкции, что может привести к повреждению протоков и сосудов. Труднодоступность кист некоторых локализаций, наличие изгибов и карманов снижает полноценность обработки фиброзной капсулы.
Целью экспериментального исследования было изучение стандартных воздействия (глицерина, спирта, гипертонического раствора и пергидроля) на паренхиму печени прилежащие протоки, сосуды, которые применяют для обработки остаточных полостей эхинококкоза печени.
Основные задачи: 1) определить параметры - время воздействия, глубина деструкции печени; 2) изучить глубину поражения печени в зоне стандартных воздействий - глицерина, спирта, гипертонического раствора и пергидроля по 5 минут; 3) оценить местные последствия контактного воздействия глицерина, спирта, гипертонического раствора и пергидроля, на паренхиме печени.
Общая характеристика экспериментального материала. Для проведения экспериментального исследования использовали 32 белых беспородных крыс-самцов массой 200-250г. Лабораторные животные были разделены на 4 групп по времени стандартных воздействий: глицерина, спирта, гипертонического раствора и пергидроля
с различным воздействием с целью изучение глубины поражения печени и прилегающих структур. Под эфирным наркозом при соблюдении правил асептики и антисептики проводили лапаротомию. На поверхности печени участке 3х3мм каждой экспериментальной животных в ходе одной вскрытие было произведено 4 типа контактного воздействия: I группа - глицерина, II группа - спирта 95%, III -гипертонический раствор 10%, IV группа - пергидроль по 5 минут. Вывод лабораторных животных из эксперимента проводили сразу после окончания воздействия методом передозировки препаратов для наркоза (Золетил и Ксилазин). Все исследования проводили в соответствии с "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных", утверждёнными Приказом МЗ СССР №75 от 12.08.1977г. Печень экспериментальных животных фиксировали в 10% нейтральном формалине, проводили вырезку материала, выявленные макроскопические изменения фотографировались. Далее тканевые образцы проводили по спиртам возрастающей концентрации, заливали в парафин. Для приготовления гистологических срезов использовался микротом НМ-450 MICROM. Гистологические срезы печени окрашивали гематоксилином эозином и реактивом Шиффа для оценки содержания ШИК-позитивного материала в цитоплазме гепатоцитов (гликоген). Микропрепараты исследовались на микроскопе Olympus СХ41с применением стандартных объективов при увеличении 50, 100, 200, 400. Проводилось морфометрическое исследование для определения максимальной глубины поражения ткани печени в зоне аппликации микрометрах (мкм) в группах сравнения. Измерение максимальной глубины повреждения проводили на серийных срезах печени с последующим вычислением среднего значения для каждой группы. Измерения выполнялись с помощью программы CellSens Olympus. Полученные морфометрические показатели (глубина поражения в мкм) проанализированы с помощью программного обеспечения Exсel 2007. (соисполнитель - зав. виварием ЦНИЛ, к.м.н. А.И.Исайкин, консультант морфологической части работы в.н.с. ЦНИЛ, к.м.н. Е.Ю.Мещерякова).
Результаты экспериментальных исследований:
Группа I (глицерин): При гистологическом исследовании капсула печени очагово и умеренно утолщена за счет отека и геморрагического пропитывания, субкапсулярные кровоизлияния разной степени выраженности, в зоне кровоизлияния гепатоциты в состоянии некробиоза или тяжелой вакуольной дистрофии. Вне кровоизлияний синусоиды неравномерно расширены, полнокоровны, гепатоциты субкапсулярного отдела относительно сохранны, в части гепатоцитов определяется ШИК-позитивный материал (рис.1). В глубоких отделах печени - тяжелые дистрофические изменения в гепатоцитах, вплоть до некробиоза, из-за тяжелых дисциркуляторных нарушений, резкое обеднение гепатоцитов гликогеном. Портальные тракты расширены за счет отека стромы и лимфогистиоцитарной умеренной инфильтрации. Уменьшение содержания ШИК-позитивного материала в гепатоцитах субкапсулярного отдела и резкое обеднение в глубоких отделах ткани печени (рис.2).
Группа II. Контактное воздействие на печени крыс 95% спиртом. При гистологическом исследование отмечается выраженное геморрагическое пропитывание капсулы и субкапсулярного отдела печени в зоне аппликации. Умеренно выраженная дистрофия гепатоцитов, преимущественно гиалиново-капельная, фокально в гепатоцитах определяется гидропическая дистрофия, некробиоз гепатоцитов (рис.3).
кИИ
• *
р
3
_ 2
V > -у
/
»
г
. % • ..»л
Рисунок 1. Субкапсулярное кровоизлияние (1), полнокровие синусоидов (2), вакуольная дистрофия гепатоцитов (3). Окраска Гематоксилин-Эозин, увеличение 400
Рисунок 2. Уменьшение ШИК-реакции в субкапсулярном отделе (1), более выражено снижение ШИК в глубоких отделах (2) печени. Окраска реактивом Шиффа (ШИК-реакция), увеличение 50.
В глубоких отделах ткань печени относительно сохранна, встречаются небольшие участки кровоизлияний, по периферии и в центральной частях печеночных долек в гепатоцитах - дистрофические изменения. Синусоиды неравномерно расширены и полнокровны (рис.4). Снижение ШИК-позитивного материала в гепатоцитах преимущественно в субкапсулярном отделе (рис.5)
Рис. 3. Группа II. Спирт. В субкапсулярном отделе гепатоциты уменьшены в объеме, цитоплазма интенсивно окрашивается эозином, пикноз ядер (стрелка). Неравномерное полнокровие синусоидов. Окраска Гематоксилин-Эозин, увеличение 50
Рис. 4. Вакуольная дистрофия гепатоцитов (стрелка) в субкапсулярном отделе. Окраска Гематоксилин-Эозин, увеличение 400
Рис. 5. Снижение ШИК-реакции преимущественно субкапсулярно.
Окраска реактивом Шиффа, увеличение 50
Группа III. Контактное воздействие на печени крыс 10% гипертоническим раствором. При гистологическом исследовании место воздействия капсула печени очагово и умеренно утолщена, разволокнена в зоне аппликации за счет отека и геморрагического пропитывания, субкапсулярно имеется кровоизлияния (рис.6). Вне кровоизлияний гепатоциты субкапсулярного отдела с признаками белковой дистрофии, шик-реакция снижен (рис.7). Синусоиды расширены, полнокровны (рис.8). В глубоких отделах печени дольковое строение не нарушено, в гепатоцитах определяется ШИК-позитивный материал.
ifi Дт> иДг .А * ш • ^ GS*- л»Нг »£
• * \ * v ■«>•■: j*
■ » г*4 - v.; •*« •
•
о
т л
Ф
# •
S,
р -V 0 *
п . г. Щ-
: Л г, f. ¿¿А.*, 'j ш ' •
V, Т. "„•
Рисунок 6. Очаговое субкапсулярное кровоизлияние в зоне аппликации (1). Окраска Гематоксилин-Эозин, увеличение 100
ь
* «г «ЭкРЯКЗ
% • » ® «» «*. Ч: X V яв
ф _ Ф
* _'" - 'о ■ ® ^Зйяяймс
2
ф, а ■ С • ^ „--
о « и»
1
^^■КК' - " • • а (в^^т
** V ' " вь ^ «
Рисунок 7. Белковая (вакуольная) дистрофия гепатоцитов (1)в синусоидах - сладж эритроцитов (2). Окраска Гематоксилин-Эозин, увеличение 400
Рисунок 8. Полнокровие в центральном отделе печеночной дольки (1), полнокровие в центральной вене (2). Окраска Гематоксилин-Эозин, увеличение 50
Группа IV. Контактное воздействие на печени крыс 33% пергидролем. При гистологическом исследовании капсула печени не утолщена. В субкапсулярном отделе определяется кистозная трансформация, при этом кистозные полости по размеру, геморрагическое содержимое отсутствует; перифокально зона кистозной трансформации окружена гепатоцитами, находящийся в состояние некробиоза (рис.9). Глубже определяются фокальные очаги коагуляционного некроза и дистрофические изменения в гепатоцитах (рис.10). Полнокровие синусоидов умеренно выраженное. Портальные тракты расширены незначительно, в основном за счет инфильтрации портальной стромы.
Рис.9. Кистозная трансформация (1) в субкапсулярном отделе, некробиоз (2) гепатоцитов. Участки кровоизлияния в ткань печени (3). Окраска Гематоксилин-Эозин, увеличение 100
1
2
Для объективизации полученных при гистологическом исследовании результатов и для сравнения эффектов разных воздействий было проведено морфометрическое исследование. Измеряли глубину повреждения ткани печени, начиная измерение с геморрагического пропитывания капсулы, зоны некроза и некробиоза гепатоцитов, тяжелых дисциркуляторных нарушений. Результаты морфометрического исследования приведены в таблице №1.
Рис.10. Участок коагуляционного некроза гепатоцитов (стрелка), окружающие гепатоциты в состоянии некробиоза (уменьшены в размерах, с ярко оксифильной цитоплазмой, пикнотичными ядрами). Окраска Гематоксилин-Эозин, увеличение 200
Таблица № 1.
Морфометрия глубины поражения печеночной ткани при стандартных контактных воздействий (М±т), мкм
Группы Группа I Группа II Группа III Группа IV
(по времени Глицерин спирт 95% №С1 10% 33% пергидр.
воздействия) 5минут 5минут 5минут 5минут
Глубина 8039,38 2630,74 3536,34 4522,19
повреждения ткани 8523,17 3230,36 3704,11 3851,9
печени, 5059,79 2382,75 3552,18 3605,17
(микрометр) 6582,18 2339,17 3020,52 3497,61
6012,10 2017,82 6032,14 4078,59
5512,78 3013,45 6334,18 4615,47
8105,11 3897,34 5793,75 5861,05
7816,52 4119,26 5563,22 4841,36
9223,16 4095,12 5214,88 3993,27
8817,52 3937,58 3389,06 3984,24
среднее значение, 7053±64 3166±36 4791±90 4204±178
мкм (М±m)
р Pi.iv <0,01 Pii.iv <0,05 Рш-гс <0,01 Pi.iv <0,01
Выводы: При аппликации глицерина (группа I) изменения ткани печени в месте воздействия минимальны (умеренное очаговое утолщение капсулы за счет геморрагического пропитывания и небольшие геморрагии в субкапсулярном отделе), дистанционно определялась тяжелая вакуольная дистрофия гепатоцитов вплоть до некробиоза гепатоцитов в связи выраженными дисциркуляторными нарушениями. При аппликации спирта 95% (группа II) преимущественно формировалось геморрагическое пропитывание капсулы и гепатоцитов, очаговые кровоизлияния и выраженное
полнокровие синусоидов (дисциркуляторные нарушения). Для аппликации NaCl 10% (группа III) характерно преимущественно местное воздействие - белковая (вакуольная) дистрофия гепатоцитов, снижение ШИК-реакции в цитоплазме гепатоцитов, косвенно свидетельствующее об уменьшении содержания гликогена в гепатоцитах; в глубоких отделах дольковое строение печени сохранено.
Глубина этих изменений была различна глицерин 7053±64мкм, (Pi-iv<0,01), 95% спирт 3166±36мкм, (Pii-iv<0,01), 10% гипертонический раствор 4791±90мкм (Piii-iv<0,05), 33% пергидроль 4204±178мкм (Pi-iv<0,01).
Таким образом, на основании полученных результатов морфологического и морфометрического исследования биоптатов печени лабораторных животных после воздействие глицерина, спирта, гипертонического раствора происходит геморрагическое пропитывания, субкапсулярном отделе печени отмечается дистрофия гепатоцитов, геморрагическое пропитывание капсулы. Перифокально балочное строение печени не нарушено.
При гистологическом исследовании капсула печени после контактной воздействия пергидролем не утолщена. В субкапсулярном отделе определяется кистозная трансформация, при этом кистозные полости по размеру, геморрагическое содержимое отсутствует, стенки кист толще, чем в группах, подвергшихся воздействию глицерина, спирта, гипертонического раствора (группа I, II и III); перифокально зона кистозной трансформации окружена гепатоцитами, находящихся в состояние некробиоза. Глубже определяются фокальные очаги коагуляционного некроза и дистрофические изменения в гепатоцитах. Полнокровие синусоидов умеренно выраженное. Портальные тракты расширены незначительно, в основном за счет инфильтрации портальной стромы. Дисциркуляторные нарушения менее выражены, чем в группах - I, II и III.
При этом при 5-минутном контакте пергидроля с тканью средняя глубина повреждения не превышает 4204±178мкм (Pi-iv<0,01), и отмечается формирование прослойки газа (вследствие проникновения кислорода в ткань), защищающей от повреждения глубжележащие слои. Следует отметить, что границы контакта перекиси водорода с тканью печени легко контролируемы вследствие окрашивания ткани в ярко-белый цвет.
Результаты проведенного исследования на животных, свидетельствующий об эффективности и безопасности использования пергидроля для контактной воздействия на ткань печени, является теоретическим обоснованием для разработки методики обработки эхинококковых кист печени в клинической практике.
Литература:
1. Агаев Р.М. Диагностика и хирургическое лечение эхинококкоза печени с поражением желчных путей / Р.М.Агаев // Хирургия. - 2002. - №9. - С.58-63.
2. Альперович Б.И., Мерзликин Н.В., Сало В.Н. Применение низких температур в лечении кист печени. // Анн.хир.гепатол.- 2004.-Т.9. №2. - С.70.
3. Ахмедов И.Г. Классификация эхинококковых кист, выявленных после хирургического лечения / И.Г.Ахмедов, А.О. Османов // Хирургия. - 2002. - №9. - С.27-30.
4. Кахаров М.А. Обоснованное удаление фиброзной капсулы при эхинококкэктомии из печени / М.А. Кахаров [и др.] // Хирургия. - 2003-. №1. - С.31-35.
5. Комилов Т.С. Особенности диагностики и пути улучшения результатов хирургического лечения эхинококкоза печени / Т.С.Комилов, И.А.Мирходжаев // Анналы хирургической гепатологии. - 2004. - Т. 9, № 2.
6. Мусаев Г.Х. Гидатидозный эхинококкоз: диагностика и комплексное лечение: автореф. дис. ... д-ра мед. Наук : 14.01.17 / Г.Х. Мусаев. - М., -2000. -35с.
7. Назыров Ф.Г. Лучевые методы исследований в диагностике и лечении гнойных осложнений эхинококкоза печени / Ф.Г. Назыров [и др.] // Анналы хирургической гепатологии. - 2001-.Т.6, №1. - С. 47-51.
8. Насиров М.Я. Хирургическое лечение осложнённого эхинококкоза печени / М.Я.Насиров, Д.М.Панахов, Г.С.Мамедханов // Анналы хирургической гепатологии. - 2001.- Т.6, №2. С. 54-56.
9. Нартфлакова М.А. Хирургия печени и желчных путей / М.А. Нартфлакова // Ростов н/Д: Феникс. -2007.- С-188-197.
10. Чиган А.В. Видеоэндоскопическая криохирургия кист печени: автореф. дис. ... канд. мед. Наук : 14.01.17 / А.В. Чиган . Томск. - 2006.- С. -23.
ИЗУЧЕНИЕ КОНТАКТНОГО ВОЗДЕЙСТВИЕ ГЛИЦИРИНА, СПИРТА, ГИПЕРТОНИЧЕСКОГО РАСТВОРА И ПЕРГИДРОЛЯ НА ПАРЕНХИМУ ПЕЧЕНИ КРЫС (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ I)
Экспериментальное исследования было изучение стандартных воздействия (глицерина, спирта, гипертонического раствора и пергидроля) на паренхиму печени прилежащие протоки, сосуды, которые применяют для обработки остаточных полостей эхинококкоза печени. При этом при 5-минутном контакте пергидроля с тканью отмечается формирование прослойки газа (вследствие проникновения кислорода в ткань), защищающей от повреждения глубжележащие слои. Авторы отметили, что границы контакта перекиси водорода с тканью печени легко контролируемы вследствие окрашивания ткани в ярко-белый цвет.
Результаты проведенного исследования на животных, свидетельствующий об эффективности и безопасности использования пергидроля для контактной воздействия на ткань печени, является теоретическим обоснованием для разработки методики обработки эхинококковых кист печени в клинической практике.
Ключевые слова: глицерин, спирт, гипертонический раствор, пергидроль, паренхима печени крыс.
THE STUDY OF CONTACT IMPACT GLYCERINE, ALCOHOL, HYPERTONIC SOLUTION AND PERHYDROL THE LIVER PARENCHYMA OF RATS
(EXPERIMENTAL PART I)
Experimental study of the standard exposure (glycerin, alcohol, hypertonic solution and perhydrol) in the liver parenchyma adjacent ducts, vessels that are used for the treatment of residual cavities of hepatic echinococcosis. When the 5-minute contact perhydrol with cloth marked the formation of a layer of gas (due to the penetration of oxygen into the tissue), which protects from damage more deep superficial layers. It should be noted that the boundaries of the contact of hydrogen peroxide with the tissue of the liver is easily controllable due to dyeing fabric in a bright white color.
The results of animal studies showing the effectiveness and safety of the use of perhydrol for contact effects on the liver tissue, which is a theoretical basis for development of methods of processing if Echinococcus cysts of the liver in clinical practice.
Key words: glycerol, alcohol, hypertonic solution, perhydrol, the liver parenchyma of
rats.
Сведения об авторах: Амонов Шухрат Шодиевич - к.м.н., врач-хирург эндохирургического отделения Республиканского научного центра сердечно-сосудистой хирургии г. Душанбе, e-mail: shuhrat.amonov@yandex.ru; Прудков Михаил Иосифович -д.м.н., профессор, зав. кафедрой хирургических болезни ФПК и ПП ГБОУ ВПО Уральского государственного медицинского университета г. Екатеринбург, e-mail: miprudkov@gmail.com; Елена Юрьевна Мещерякова - к.м.н., ведущий научный сотрудник ЦНИЛ ГБОУ ВПО Уральского государственного медицинского университета г. Екатеринбург, e-mail: katusha-ugma@rambler.ru
Information about the authors: Amonov Shukhrat Shodievich - candidate of medical sciences, surgeon endosurgical Department of the Republican scientific center for cardiovascular surgery, Dushanbe; Prudkov Michael I. - doctor of medical sciences, рrofessor,
279
head. the Department of surgical diseases FPC and PP state budgetary educational institution of higher professional education Ural state medical University, Ekaterinburg; Elena Yurievna Meshcheryakova - candidate of medical sciences, senior researcher at the Central research laboratory of the state budgetary educational institution of higher professional education Ural state medical University, Ekaterinburg
КОНТАКТНОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ МОНОПОЛЯРНОЙ, АРГОНОВОЙ КОАГУЛЯЦИИ И ПЕРГИДРОЛЯ НА ПАРЕНХИМУ ПЕЧЕНИ КРЫС (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ II)
Амонов Ш. Ш., Прудков М. И., Мещерякова Е. Ю.
Республиканский научный центр сердечно-сосудистой хирургии, г. Душанбе Уральский государственный медицинский университет, г. Екатеринбург
Введение. Эхинококкоз - эндемическое паразитарное заболевание, частота инвазии печени при котором составляет от 44,2 до 84,2% [1, 9, 3]. Медикаментозные средства лечения пока недостаточно эффективны, а прогрессирование паразитарной инвазии сопровождается развитием осложнений в 22-53% наблюдений [5, 4], способных приводить к смерти пациента [7, 6].
Эхинококкэктомия представляет собой намного более щадящий и менее рискованный подход к лечению эхинококкоза печени [6]. Степень радикализма подобных вмешательств определяется риском интраоперационной диссеминации зародышевых элементов паразита при вскрытии кисты, полноценностью их удаления из ее просвета, качеством антипаразитарной обработки.
Выбор способа антипаразитарной обратотки внутренней поверхности остаточной фиброзной капсулы продолжает оставаться предметом обсуждения. Для этих целей предлагается использовать гипертонический раствор, глицерин, спирт, электрокоагуляцию в режиме «спрей», аргон-усиленную электрокаогуляцию, криовоздействие [2, 10], расфокусированный луч лазера [9]. Все эти методы достаточно эффективны, но не лишены недостатков. Их трудно регулировать по глубине деструкции, что может привести к повреждению протоков и сосудов. Труднодоступность кист некоторых локализаций, наличие изгибов и карманов снижает полноценность обработки фиброзной капсулы.
Целью экспериментального исследования было изучение стандартных воздействия (аргоновой и монополярной коагуляции, пергидроль) на паренхиму печени прилежащие протоки, сосуды, которые применяют для обработки остаточных полостей эхинококкоза печени.
Основные задачи главы: 1) определить параметры - время воздействия, глубина деструкции печени; 2) изучить глубину поражения печени в зоне стандартных воздействий - аргоновой и монополярной коагуляции по 2 минут и пергидроля по 5 минут; 3) оценить местные последствия контактного воздействия аргоновой и монополярной коагуляции, пергидроля на паренхиме печени.
Общая характеристика экспериментального материала. Для проведения экспериментального исследования использовали 32 белых беспородных крыс-самцов массой 200-250г. Лабораторные животные были разделены на 4 групп по времени стандартных воздействий: контрольная (I группа) и три групп с различным воздействием с целью изучение глубины поражения печени и прилегающих структур. Под эфирным наркозом при соблюдении правил асептики и антисептики проводили лапаротомию. На поверхности печени участке 3х3мм каждой экспериментальной животных в ходе одной вскрытие было произведено 4 типа контактного воздействия: II группа - аргоновая коагуляция, III группа - монополярная коагуляция по 2 минут, IV группа - пергидроль по 5 минут. Вывод лабораторных животных из эксперимента проводили сразу после окончания воздействия методом передозировки препаратов для
