CC BY
116
Химия растительного сырья. 1999. №4. С. 81-84.
УДК 615:322
ИЗУЧЕНИЕ ФЛАВОНОИДОВ КРАСНЫХ ЛИСТЬЕВ БАДАНА ТОЛСТОЛИСТНОГО (BERGENIA CRASSIFOLIA (L.) FITSCH., ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО НА АЛТАЕ
© Л.М. Федосеева', Е.В. Тимохин Алтайский государственный медицинский университет, пр-т Ленина, 40, Барнаул, 656099 (Россия) e-mail: [email protected]
Целью работы является изучение и идентификация флавоноидов красных листьев бадана толстолистного. В результате проведенных исследований на основании цветных реакций, бумажной хроматографии и спектрофотометрического определения установлена сумма флавоноидов, идентифицированы апигенин, кемпферол, кверцетин и рутин. Количественное содержание суммы флавоноидов определено спектрофотометрическим методом и в пересчете на рутин составило 1.30%.
Введение
Флавоноиды являются одной из самых распространенных групп фенольных соединений, производные бензо-у-пирона, в основе которых лежит фенилпропановый скелет. Большинство из них можно рассматривать как производные хромона или хромана, содержащие в положении 2, 3 или 4 арильный радикал.
Флавоноиды в большем или меньшем количестве содержатся почти во всех растениях. Многие являются растительными пигментами и выполняют роль фильтров, защищая ткани от вредного влияния ультрафиолетовых лучей. Они участвуют в дыхании растений, а совместно с аскорбиновой кислотой - в энзиматических окислительно-восстановительных процессах.
Флавоноидам присуща высокая биологическая активность, обусловленная присутствием в молекуле активных фенольных гидроксильных и карбонильных групп, которые подвергаются различным биохимическим изменениям, принимают участие в ряде физиологических процессов и обладают широким спектром фармакологической активности. Флавоноиды оказывают мочегонное, антимикробное, противовоспалительное, противоопухолевое действие и др. [1].
Нами установлено, что листья бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fitsch.) семейства камнеломковых (Saxifragaceae) и препараты из них обладают мочегонной, антимикробной и противовоспалительной активностью [2-4].
В результате фитохимических исследований бадана толстолистного, изучен комплекс фенольных соединений, состоящий из простых фенолов, дубильных веществ, кумаринов, флавоноидов. Целью настоящей работы является изучения флавоноидов в красных листьях бадана.
Для исследований использовали красные листья бадана, собранные в Шеболинском районе республики Алтай в 1996-1998 гг.
Автор, с которым следует вести переписку.
Экспериментальная часть
Для получения извлечения 1 г измельченного сырья помещали в колбу вместимостью 25 мл и заливали 70%-ным этиловым спиртом. Проводили настаивание на водяной бане в течение 10 мин. После охлаждения полученное извлечение фильтровали через бумажный фильтр и проводили качественные реакции на флавоноиды (5). С целью подтверждения результатов качественных реакций дальнейшую идентификацию флавоноидов проводили бумажной хроматографией восходящим способом в системах растворителей: бутанол-уксусная кислота-вода (БУВ) (4 : 1 : 5), 60% уксусная кислота. Извлечение готовили следующим образом: 5 г измельченного сырья экстрагировали трижды по 50 мл 70% этанолом на водяной бане по 1 час. Затем извлечение обрабатывали диэтиловым эфиром. Эфирное извлечение упаривали и наносили на хроматограмму. В качестве свидетелей использовали растворы стандартов рутина, кверце-тина, кемпферола, апигенина. Полученные хроматограммы высушивали при комнатной температуре и просматривали при дневном свете, затем в ультрафиолетовом свете до и после обработки хромогенными реактивами, отмечая изменение окраски зон флуоресценции [6].
Количественное определение флавоноидов провели спектрофотометрическим методом [7].
Обсуждение результатов
На основании проведенных качественных реакций сделали предположение о наличии в красных листьях бадана флавонов, флавонолов, 5-оксифлавонолов, 5-оксифлавонов. Результаты качественных реакций приведены в таблице 1 .
В результате проведения бумажной хроматографии в системе БУВ (4:1:5) обнаружены два пятна, в УФ свете имеющие коричневую флуоресценцию. После обработки парами аммиака первое пятно приобрело желто-оранжевую флуоресценцию, после обработки 5%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида - желтую флуоресценцию, значение Rf - 0,71; второе пятно после обработки парами аммиака и 5%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида имело желтую флуоресценцию, Rf - 0.58, совпало с раствором свидетеля рутина. Установлено, что флавоноиды находятся в виде гликозидов. Для определения агликонов гликозидов проведен кислотный гидролиз с 10%-ным раствором соляной кислоты и последующей обработкой этиловым эфиром. Эфирное извлечение хроматографировали со стандартным раствором кверцетина. При изучении хроматограммы в УФ свете наблюдали несколько пятен, одно из них по окраске (зеленая флуоресценция) и величине Rf - 0.75 совпало со «свиделелем» кверцетина.
Таблица 1. Результаты цветных реакций на флавоноиды красных листьев бадана толстолистного
Реактивы Соединение, вступающее в реакцию, результат Результат реакции с извлечением из листьев бадана
НС1 Флавонолы, флавоны, флавононы - красное Оранжевое окрашивание
Mg окрашивание
НС1 Халконы, ауроны - красное окрашивание -
Реактив Вильсона 5-оксифлавоны, 5-оксифлавонолы - желтое Желтое окрашивание, с желто-
окрашивание, с желто-зеленой флуоресценцией зеленой флуоресценцией
10% раствор аммиака Халконы, ауроны - красное; флавоны, флавонолы, флавононолы - желтое; антоцианы - синее Желтое окрашивание
5% раствор алюминия Флавоны, флавононолы, халконы - желтая Желтая флуоресценция
хлорида флуоресценция
Таблица 2. Результаты обнаружения флавоноидов в красных листьях бадана толстолистного хроматографией на бумаге с 60%-ной уксусной кислотой
№ пятна Дневной свет УФ свет После обработки аммиаком После обработки 5% р-ром алюминия хлорида ЗнaчeниeRf
1. — коричневое желтое желтое с красным желтое 0.66
2. желтое желтое оттенком желто-зеленое 0.28
3. желтое желтое желтое желтое 0.41
4. - желтое желтое желтое 0.50
5. - сине-фиолетовое желтое оранжевое 0.61
6. - коричневое коричневое - 0.75
7. - желто-зеленое коричневое розовое 0.98
В результате проведения бумажной хроматографии установили лучшую разделяющую способность имеет 60% уксусная кислота, выявлено 7 пятен (табл. 2).
Первое пятно в УФ свете имело коричневую флуоресценцию, которая после обработки парами аммиака и 5%-ным спиртовым раствором хлорида алюминия перешла в желтую, Ш" - 0.66 и совпало со “свидетелем” апигенина.
Третье пятно имело желтую окраску в видимой области и в УФ свете, сохраняющуюся после обработки парами аммиака и 5%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида, значение И" - 0.41 и совпало со «свидетелем» кверцетина.
Четвертое пятно имело желтую флуоресценцию пятна в УФ-свете и после обработки хромогенными реактивами, И" - 0.50 и совпало со “свидетелем” кемпферола.
Шестое пятно имело коричневую флуоресценцию в УФ-свете, переходящую в коричнево-красную после обработки парами аммиака, И" - 0.75 и совпало со «свидетелем» рутина.
Проведя бумажную хроматографию, полученные пятна элюировали этиловым спиртом и снимали спектральные кривые поглощения в УФ областях спектра в диапозоне длин волн от 190 до 380 нм. Параллельно снимали спектры стандартных образцов апигенина, кемпферола, кверцетина, рутина. В результате получили спектральные кривые с максимумами поглощения: апигенина - 268, 337 нм; кемпферола - 269, 329 нм; кверцетина - 256, 303 нм; рутина - 260, 372 нм. Максимумы поглощения спектральных кривых исследуемых растворов и стандартных образцов совпали.
Количественное содержание флавоноидов красных листьев бадана проводили спектрофотометрическим методом. В пересчете на рутин сумма флавоноидов составила 1.30±0.04%.
Выводы
В результате проведенных исследований на основании цветных реакций, бумажной хроматографии и спектрофотометрического определения установлена сумма флавоноидов красных листьев бадана толстолистного, идентифицированы апигенин, кемпферол, кверцетин и рутин.
Количественное содержание суммы флавоноидов проведено спектрофотометрическим методом, в пересчете на рутин составило 1.30%.
Список литературы
1. Растительные лекарственные средства / Под ред. Н.П. Максютиной. Киев, 1985.
2. Брюханов В.М., Федосеева Л.М. Влияние бадана и толокнянки на функцию почек у крыс // Регуляция водносолевого обмена. Вып. VII. Барнаул, 1987. С. 56-61.
3. Федосеева Л.М. Фармакологическая активность препаратов из листьев бадана // Тез. докл. Всероссийской научно-практической конф. молодых ученых. Куйбышев, 1988. С. 212-213.
4. Федосеева Л.М.. Воробьева В.М., Юрова В.А, Госсен И.Е. Разработка лекарственнной формы для фиксации съемных протезов // Актуальные проблемы медицины и фармации: Мат. 64-й науч. конф. Курск, 1999. С. 249251.
5. Шинкоренко А.Л., Бандюкова В.А., Казаков А.Л. Методы исследования природных флавоноидов. Пятигорск, 1 977.
6. Георгиевский В.П., Рыбаченко А.И., Казаков А.Л. Физико-химические и аналитические характеристики флавоноидных соединений. Ростов, 1 988.
7. Смирнова Л.П., Первых Л.Н. Количественное определение суммы флавоноидов в цветках бессмертника песчаного // Химико-фармацевтический журнал. №6. 1998. С. 35-38.
Поступило в редакцию 9 ноября 1999 года
