CC BY
99
УДК 615.322
ИЗУЧЕНИЕ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ЛИСТЬЕВ ШИПОВНИКА МАЙСКОГО (HOSAMAJAIISM МЕТОДОМ ВЭЖХ
И.Д. САФОНОВА1 В.Я.ЯЦЮК1 И.А. СИНЕНИИ1 АД. САФОНОВ2
'' Курский государственный медицинский университет
Лицей №6, г. Курск
e-mail: [email protected]
Методом ВЭЖХ проведен анализ фенольных соединений листьев шиповника майского. В спиртовых извлечениях найдено 41 вещество, 15 из которых идентифицированы: среди них фенолкар-боновые кислоты, кумарины, флавоны, флавонолы, флаваноны и их производные. 11 соединений (эскулин, хлорогеновая, кофейная, п-кумаровая, розмариновая кислоты, витексин-О-рамнозид, робинии, нарингенин, гиперозид, цпннарознд, арабеннн, астрагалнн, рутин) в листьях этого растения идентифицированы впервые.
Ключевые слова: фенольные соединения, флавоноиды, фе-нолкарбоновые кислоты, ншповнпк майский, розоцветные, ВЭЖХ.
Введение. С конца прошлого века резко возрос интерес к традиционным методам лечения, к которым относится фитотерапия. Около 40% фармацевтической продукции в мире изготавливается на основе лекарственного растительного сырья. Содержащиеся в растениях вторичные метаболиты, в особенности фенольные соединения, являются источником получения лекарственных средств различных фармакологических групп: противовоспалительных, антиаритмических, антиоксидантных, гастро-и гепатопротективных, гемореологических и др. [4]. Одним из перспективных растений, обладающих значительными сырьевыми ресурсами на территории центральной России, является шиповник майский (Rosa majalis L.). По антиоксидантной активности он лидирует среди растений семейства Rosaceae, а также среди растений, предназначенных для лечения и профилактики воспалительных заболеваний печени [i, 3]. Из данных литературы известно, что в растении содержится целый комплекс биологически активных веществ. Наиболее полно изучены плоды шиповника майского, которые давно и широко используются в официальной и народной медицине как источники витамина С. Кроме того, установлено наличие в них углеводов, витаминов (Е, каротина), кумаринов, дубильных веществ, флавоноидов (рутина, авикуля-рина, кверцитрина, изокверцитрина); антоцианов, высших алифатических углеводородов. В семенах содержатся стероиды и жирное масло, компонентами которого являются пальмитиновая, стеариновая, олеиновая, линолевая и другие высшие карбоновые кислоты. Другие части этого растения до настоящего времени современными научными методами изучены недостаточно и не используются официнальной медициной. В народной медицине их издавна применяют при малокровии, гастритах с пониженной кислотностью желудочного сока, язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки. Листья прикладывают к коже при экземах. Отвары из корней рекомендуют при камнях в почках и мочевом пузыре [5].
В многогранном использовании шиповника в народной медицине во многом прослеживается связь с биологическим действием не только витаминов С и Р, но и других БАВ ( в том числе фенольных соединений), обладающих широким спектром фармакологической активности. Для изучения различных групп фенольных соединений, выделяемых из растений, применяется метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), который отличается высокой чувствительностью и точностью, позволяет достоверно судить о составе изучаемой группы биологически активных веществ [2]. В связи с этим, целью нашей работы было исследование фенольных соединений листьев шиповника майского методом ВЭЖХ.
Материалы и методы исследования. В качестве объектов исследования были использованы листья шиповника майского (Rosa majalis L.), собранные в фазу цветения - начала плодоношения на территории Курской области в 2008 и 2009 годах. Изучение фенольных соединений листьев шиповника проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «Waters» с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для «Windous».
Для разделения компонентов была использована колонка INERTSILODS-2.5 mkm 150x4,6 мм; метод - градиентного элюирования. В качестве подвижной фазы - система растворителей ацето-нитрил-вода-кислота ортофосфорная. Градиент линейный: от 8% до 40% ацетонитрила в 0,1% растворе кислоты ортофосфорной. Скорость подвижной фазы i мл/мин. Объем вводимой пробы -10 мкл. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора при длине волны 254 нм. Продолжительность анализа - 70 мин.
Для приготовления извлечения воздушно-сухое сырье измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм. В 2 колбы помещали по 1,0 г измельченного сырья и прибавляли по 24 мл 70% спирта этилового. Одну колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 30 мин. от момента закипания спирто-водной смеси. Обе колбы оставляли на сутки в темном месте, после чего извлечения фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объем 70% спиртом этиловым до метки.
Параллельно готовили серии 0,05% растворов стандартных образцов (PCO) в этаноле. Время удерживания определяли для каждого вещества в отдельности и на модельных смесях. По ю мкл исследуемого раствора и PCO вводили в хроматограф и хроматографировали по выше приведенной методике.
Результаты исследования и их обсуждение. Данные, полученные при помощи ВЭЖХ, свидетельствуют о том, что в листьях шиповника майского содержится богатый набор фе-нольных соединений: производные бензо-гамма-пирана (флаваноны, флавоны, флавонолы, их О-моногликозиды, 0-биозиды и метилированные производные), бензо-альфа-пирона (кумарины), а также фенолкарбоновые кислоты. Всего в составе проанализированных извлечений определено 41 соединение (рис. 1, 2) Причем при данных режимах экстракции - качественный состав извлечений отличается незначительно.
Содержание ю веществ уменьшается при нагревании, что говорит об их термолабильности.
По времени удерживания PCO, отдельных компонентов модельных смесей PCO и исследуемых растворов установлено, что качественный состав фенольных соединений извлечения представлен фенолкарбоновыми кислотами (хлорогеновой, кофейной, розмариновой, п-кумаровой), кумаринами (эскулином), флавонами и их производными (витексина-О-рамнозидом, цинарозидом, байкалином), флавонолами и их производными (робинином, рутином, гиперози-дом, астрагалином, арабенином), флаваноном (нарингенином).
Количественное соотношение веществ полифенольной природы в изучаемом извлечении установлено методом внутренней нормализации [6]. Количественное содержание веществ определено в пересчете на рутин, (табл. l)
По данным ВЭЖХ все вещества, содержащиеся в извлечении, можно разделить на 3 подгруппы в зависимости от относительного содержания каждого.
1-я группа - вещества, площадь индивидуального пика которых составляет более 1% от суммарной площади всех пиков, 2-я группа - 0,5-1,0%, 3-я группа - менее 0,5%. В 1-ю группу входят 16-17 веществ ( в извлечении без нагревания и полученного с кипячением соответственно). Их суммарная доля среди всех детектированных веществ составляет 90,43%. 6 из них идентифицированы.
Au 0,65 0,60 0,55 0,50 0,45 0,40 0.35 0,30 0,25 0,20 0,15 0,10 -0,05 0,00
• I ' ' I ' ' I ' ' ' I ' ' ! [■■■['■■ | ' ' I ' I i I ' ' Г ' I
2,00 4,00 6,00 8,00 10,0012,00 14,00 16,00 18,00 20,00 22,00 24,00 26,00 26,00 30,00 32,00 34,00 36,00
minutes
Рис. 1. Хроматограмма фенольных соединений листьев шиповника майского (Rosa majalis L.) (проба после кипячения)
Аи
0.550,500,450,400,350,30 -0,250,200,150,100,050,00-
2,00
6,00
10,00
14,00
18,00 22,00 minutes
26.00
30,00
34,00
Рис. 2. Хроматограмма фенольных соединений листьев шиповника майского (Rosa majalis L.) (проба без кипячения)
Во 2-ю группу входят 7 веществ, з из них идентифицированы. В 3-й группе - 19 веществ, 5 из них идентифицированы. Доля идентифицированных соединений составляет 36,56% от всех детектированных.
Таблица
Результаты исследования фенольных соединений в листьях шиповника майского
(Rosa majalis L.) методом ВЭЖХ
№ Соединения RT Количественное содержание (в пересчете на рутин) Количественное соотношение, % (по площади пика)
1* 2* 1 2 1 2
1 2 3 4 5 6 7 8
1 Неизв. - 2Д44 - 0,008
2 Неизв. 2,305 2,308 0,063 0,068 1,10 0,90
3 Неизв. - 2,480 - 0,052
4 Неизв. 2,590 2,589 0,309 0,340 5,44 4,50
5 Неизв. 3,086 3,083 0,041 0,041 0,73 0,54
6 Неизв. 3,2 77 3,257 0,053 0,039 9,93 0,51
7 Неизв. 4,127 4,125 0,227 ОД99 4,оо 2,63
8 Неизв. 4,502 4,496 0,176 0,053 3,ю 0,71
9 Неизв. 5,347 5,347 0,042 0,026 о,74 о,34
9 Неизв. 6,432 6,413 0,008 0,008 - 0,10
10 Неизв. 6,839 6,827 0,010 0,011 - 0,14
11 Неизв. 8,067 8,052 0,256 0,381 4,51 5,05
12 Esculin 8,708 8,716 0,007 0,008 0,11 0,11
13 Неизв. - 9,342 - 0,013 - 0,17
14 Неизв. 10,637 0,012 - 0,21
15 Неизв. 10,991 11,002 0,026 0,117 0,46 1,55
16 Неизв. п,499 - 0,013 - 0,23
17 Неизв. 11,982 11,986 0,037 0,066 0,65 0,88
18 Chlorogenic Acid 12,897 12,874 0,132 0,178 2,32 2,35
19 Неизв. 13,454 13,496 0,074 ОД39 1,30 1,84
20 Caffeic Acid 15,317 15,210 0,013 0,015 0,23 0,23
21 Неизв. 15,845 15,842 0,040 0,123 0,70 1,63
22 Неизв. 16,330 16,376 0,014 0,028 0,25 0,37
Окончание табл.
1 2 3 4 5 6 7 8
23 Неизв. 17,592 17,653 0,015 0,018 0,27 0,24
24 Неизв. 18,265 18,285 0,006 0,006 0,11 0,10
25 Неизв. 18,924 18,931 0,011 0,006 0,18 0,08
26 Неизв. 19,473 19,444 0,429 0,077 7,74 1,02
27 p-Cumaric Acid 20,807 20,810 0,007 0,045 0,12 0,59
28 Неизв. - 21,292 - 0,023 - 0,30
29 Vilexin-o-Rhamnosid 23,210 23,492 - 0,008 - 0,11
30 Robinin 23,730 23,735 0,032 0,026 0,56 0,34
31 Naringenin 24,778 24,753 0,040 0,101 0,70 1,34
32 Rutin 25,566 25,574 0,183 ОД94 6,46 5,16
33 Hyperosid 26,009 25,950 0,130 0,247 2,28 3,2 7
34 Cinnarozid 26,767 26,757 0,051 0,219 0,90 2,90
35 Неизв. 27,237 27,225 0,104 0,124 1,83 1,64
36 Неизв. 28,825 28,805 0,660 0,700 11,76 13,78
37 Arabenin 1 29Д59 29,156 1,874 3,244 32,98 37,01
38 As tragahn 30,800 30,792 0,024 0,016 0,42 0,21
39 Arabenin 2 31,807 31,789 0,056 0,873 0,35 11,58
40 Rosmarinic Acid 33,890 33,885 0,323 0,232 5,68 3,07
41 Baicalin 35,892 36,250 0,063 0,061 1,11 0,81
Примечание: 1 - данные для извлечения, приготовленного без нагревания, 2 - данные для извлечения, приготовленного с кипячением.
Из идентифицированных флавоноидов преобладают гликозиды кверцетина - рутин и ара-бенин, из фенолкарбоновых кислот - розмариновая и хлорогеновая кислоты.
Фенолкарбоновые кислоты (хлорогеновая, розмариновая), кумарин (эскулин), флавоны и их производные (витексин-О-рамнозид, цинарозид, байкалин), флавонолы и их производные (робинии, гиперозид, астрагалин, арабенин, рутин), флаванон (нарингенин) в данном растении идентифицированы впервые.
Выводы. На основании полученных результатов можно сделать вывод, что листья шиповника майского являются перспективным объектом исследований по поиску биологически активных веществ фенольного характера с целью создания новых лекарственных препаратов и БАД.
Литература
3
1. Антиоксидантная и антирадикальная активность видов Rosa L. флоры Приморского края. / И.В. Мельникова, Н.И. Кулеш, Е.А. Кольцова, П.Е. Горовой // Растительные ресурсы. - 2002. - Т.38. - С. 25-33.
2. Жукова, О.Л. Изучение фенольного состава подземных органов сабельника болотного / О.Л. Жукова, A.A. Абрамов, Т.Д. Даргаева, A.A. Маркарян // Вестник Московского университета. Сер. 2. Химия. -2006. - Т. 47, № 5. - С. 342-346.
3. Лубсандоржиева, П.Б. Содержание биологически активных веществ в некоторых растениях Забайкалья и их антиоксидантная активность / П.Б. Лубсандоржиева // Химия растительного сырья. - 2009. -№ 3. - С. 133-137.
4. Лубсандоржиева, П.Б. Методика стандартизация антиязвенного растительного сбора / П.Б. Лубсандоржиева, Т.А. Ажунова, Л.Н. Шантанова, Л.Х. Муханова, A.A. Унагаева, С.М. Николаев // Сибирский медицинский журнал. - 2005. - Т. 51, № 2. - С. 64-67.
5. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Hydrangeaceae - Haloragaceae. - Л.: Наука, 1987. - 326 с.
6. Стыскин, ЕЛ. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография / Е.Л.Стыскин, Л.Б. Ициксон, Е.В. Брауде,- М.,1986. -204 с.
STUDIYNG OF PHENOLIC COMPOUNDS OF ROSA MAJAIIS (L) BY HIPC-METHOO
I.A.SAF0N0VA1, V.Y.YATCUK1 I.A.SILENIN1 AJI.SAF0N0V2
l} Kursk State Medical University *>Lyceum № 6, Kursk e-mail: [email protected]
The High-performance liquid chromatography was the method of the analysis of phenolic compounds of Rosa majalis leaves. 41 compounds are found in the alcohol extract. 15 of them are identified: there are phenolcar-boxylic acids, coumarines, flavones, flavonoles, flavanones and their derivatives there. 11 compounds (esculin, chlorogenic,caffeic, p-cumaric, rosma-rinic acids, vitexin-o-rhamnosid, robinin, naringenin, hyperosid, cinnaro-zid, arabenins, astragalin in this plant have been identified for the first time. Rutin has been identified in this plant leaves for the first time.
Keywords: phenolic compounds, flavonoides, phenolcarboxylic acids, Rosa majalis, Rosaceae, HPLC.
