CC BY
10ФАРМАКОГНОЗИЯ И БОТАНИКА
Н. С. Фурса1, Г. Н. Бузук2, Н. А. Кузьмичева2, А. С. Горькова1, Ю. А. Коновалова1
ИЗУЧЕНИЕ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ЛИСТЬЕВ И ЦВЕТКОВ ХАМЕДАФНЕ ПРИЦВЕТНИЧКОВОЙ МЕТОДОМ ВЭЖХ
Ярославский государственный медицинский университет, г. Ярославль, Россия
2Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет
В результате ВЭЖХ-анализа листьев и цветков хамедафне прицветничко-вой Chamaedaphne calyculata отмечено, что фенольные соединения представлены в большей мере гидроксикоричными и гидроксибензойными кислотами и значительно меньше флавоноидами, кумаринами и фенологликозидами. Каждый анализируемый орган характеризуется индивидуальным набором и накоплением отдельных соединений. В листьях доминировали коричная, хлорогеновая, неохлорогеновая и п-анисовая кислоты, дикумарин, лютеолин-7-глюкозид; в цветках — о-кумаровая и феруловая кислоты, эпигаллокатехиногаллат, кумарин, лютеолин-7-глюкозид.
Ключевые слова: Chamaedaphne calyculata, фенольные соединения, листья, цветки, ВЭЖХ.
ВВЕДЕНИЕ
Хамедафне прицветничковая (болотный мирт обыкновенный) Chamaedaphne calyculata (L.) Moehch семейства вересковые Ericaceae Juss. - распространенное растение в лесной зоне на сфагновых болотах и в заболоченных лесах в Республике Беларусь и Российской Федерации. Отвары и настои цветущих облиственных побегов и листьев используют в народной медицине при расстройствах центральной нервной системы, головных и невралгических болях, при радикулитах, простудных заболеваниях [1].
При фармакологическом изучении выявлена противосудорожная, противовоспалительная, ранозаживляющая и противогрибковая активность суммарного извлечения надземной части хамедафне прицветничковой. Оно оказалось малотоксичным. При его внутрижелудочном введении не отмечена гибель подопытных животных. У них не нарушалась координация движений и сохранялись реакции на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители [2].
При исследовании листьев хамедафне прицветничковой, собранных в условиях лесоболотного комплекса гидрологического заказника «Ельня» (Миорский район Витебской области), обнаружены различные группы фенольных соединений: фе-нологликозиды (4,07-9,12%), гидроксико-
ричные кислоты (1,35-2,67%), флавоноиды (1,60-3,40%), проантоцианидины (5,3010,42%) и катехины (6,22-9,70%). Выявлены взаимосвязи между морфологическими и химическими признаками листьев, а также градациями экологических факторов. Установлено, что наиболее устойчивые связи содержания действующих веществ с параметрами листьев и средой обитания выявлены для флавоноидов и гидроксико-ричных кислот. На формирование листьев и накопление в них биологически активных соединений в наибольшей мере сказывался уровень трофности, освещенности и увлажнения болотных биотопов. Наиболее высокая сырьевая продуктивность воздушно-сухого сырья отмечена в низкополнот-ных сосняках кустарниково-сфагновых и частично восстановленных пушицево-ве-ресково-политрихово-сфагновых постпи-рогенных растительных сообществах [3].
Известно, что В.Л. Шелюто с соавторами выделил из листьев болотного мирта два гликозида кверцетина, охарактеризованные как гиперозид и гвайяверин [4, 5]. М.В. Белоусов с сотрудниками установил наличие в них арбутина (до 9,5%), протока-теховой (34,5 мкг/г), п-гидроксибензойной (7,1 мкг/г), ванилиновой (5,3 мкг/г), сиреневой (2,6 мкг/г), салициловой (67,7 мкг/г), кофейной (2,5 мкг/г), п-(10,5 мкг/г) и о-кумаровой (44,1 мкг/г), феруловой (50,8 мкг/г), синаповой (50,8 мкг/г) и коричной (4,5 мкг/) кислот [6, 7].
помощью программы «Мультихром» для Windows. Металлическая колонка размером 4,6x250 мм KROMASIL С 18, размер частиц 5 мкм; подвижная фаза - метанол-вода-фосфорная кислота концентрированная в соотношении 400:600:5. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента равнялась 0,8 мл/ мин. Продолжительность анализа 60 мин. Детектирование проводили с помощью УФ-детектора «GILSTON» UV/VIS модель 151 при длине волны 254 нм. Методика анализа изложена ранее [8].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Результаты анализа листьев и цветков хамедафне прицветничковой представлены на рисунках 1 и 2 и отражены в таблицах 1 и 2.
Рисунок 1 - Хроматограмма фенольных соединений 70%-ного этанольного извлечения листьев хамедафне прицветничковой (номера идентифицированных веществ соответствуют приведенным в таблице 1)
Таблица 1 - Фенольные соединения листьев хамедафне прицветничковой
№ Вещество Время, мин Высота пика, mV Площадь пика, mV* сек Содержание^
1 Арбутин 3,168 66,29 747,29 1,14
2 Танин 3,381 120,50 1368,87 2,08
3 Не идентифицировано 3,608 187,55 2544,63 3,88
4 Галловая кислота 3,792 212,09 2572,82 3,92
5 Не идентифицировано 3,986 210,90 3929,37 5,98
6 Эпигаллокатехингаллат 4,299 171,30 1544,05 2,35
7 Дикумарин 4,465 172,15 4239,93 6,46
8 Хлорогеновая кислота 4,985 126,75 4784,93 7,29
9 Не идентифицировано 5,691 93,56 2124,41 3,24
10 Кофейная кислота 6,061 71,57 15,72,23 2,39
11 Ванилиновая кислота 6,492 66,05 2127,91 3,24
12 Цикориевая кислота 7,082 50,91 1626,99 2,48
13 Неохлорогеновая кислота 7,798 54,21 2995,39 4,56
14 Дигидрокверцетин 9,032 40,03 1481,07 2,26
15 Феруловая кислота 9,634 35,83 1896,45 2,89
Основная цель исследования - провести анализ листьев и цветков хамедафне прицветничковой методом ВЭЖХ для выявления флавоноидов, гидроксикоричных кислот и других групп фенольных соединений.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Для исследования в мае 2012 г. нами собраны листья и цветки растения, произрастающего в окрестностях пос. Некрасовское Ярославской области.
Изучение фенольных соединений 70%-ного этанольного извлечения анализируемых органов осуществляли на жидкостном хроматографе фирмы «GILSTON», модель 305 (Франция); инжектор ручной, модель Rheodyne 7125 (США) с последующей компьютерной обработкой результатов с
Продолжение. Таблица 1
№ Вещество Время, мин Высота пика, mV Площадь пика, mV* сек Содержание^
16 Вератровая кислота 11,230 25,14 1586,90 2,42
17 Не идентифицировано 11,900 19,53 1287,38 1,96
18 Не идентифицировано 13,660 18,04 1583,59 2,41
19 Лютеолин-7-глюкозид 15,370 49,72 3518,30 5,36
20 Не идентифицировано 17,920 41,75 2190,92 3,34
21 П-анисовая кислота 18,710 48,86 3284,32 5,00
22 Не идентифицировано 20,400 14,62 573,48 0,87
23 Не идентифицировано 21,44 42,53 1582,06 2,41
24 Коричная кислота 22,78 73,47 6329,13 9,64
25 Не идентифицировано 24,09 35,44 2035,09 3,10
26 Не идентифицировано 26,12 52,38 6129,93 9,34
Рисунок 2 - Хроматограмма фенольных соединений 70%-ного этанольного извлечения цветков хамедафне прицветничковой (номера идентифицированных веществ соответствуют приведенным в таблице 2)
Как следует из данных, приведенных в таблице 1, в листьях хамедафне прицветничковой обнаружено 26 веществ, из которых идентифицировано 16 (до 65% от общей суммы веществ). Десять из них представлены гидроксибензойными и ги-дроксикоричными кислотами (около 70% от общей суммы идентифицированных веществ). По мере убывания суммарное содержание отдельных групп фенольных соединений может быть расположено в сле-
дующем ряду: гидроксикоричные кислоты > гидроксибензойные кислоты > флавоно-иды > кумарины > сумма танина и эпигал-локатехингаллата > фенологликозиды.
Исходя из данных, обобщенных в таблице 2, в цветках, как и в листьях, отмечено 26 веществ, из них идентифицировано 15, содержание которых в сравнении с листьями несколько больше (около 80% от общей суммы веществ). В ряду идентифицированных веществ, как и в
Таблица 2 - Фенольные соединения цветков хамедафне прицветничковой
№ Вещество Время, мин Высота пика, тУ Площадь пика, тУ* сек Содержание, %
1 О-кумаровая кислота 3,024 766,13 10028,65 17,51
2 Галловая кислота 3,458 120,39 1274,48 2,23
3 Эпигаллокатехингаллат 3,647 1109,91 8765,24 15,31
4 Катехин 3,853 73,96 708,91 1,24
5 Не идентифицировано 4,346 15,95 388,12 0,08
6 Хлорогеновая кислота 4,992 15,20 462,72 0,81
7 Не идентифицировано 5,266 14,67 251,57 0,44
8 Эпикатехин 5,708 16,60 674,74 1,18
9 Неохлорогеновая кислота 6,809 14,11 636,72 1,11
10 Цикориевая кислота 7,378 12,64 402,90 0,70
11 Не идентифицировано 8,205 13,78 290,73 0,51
12 Не идентифицировано 8,985 21,53 942,50 1,65
13 Изоферуловая кислота 9,420 20,46 621,54 1,09
14 Не идентифицировано 10,47 23,94 1210,05 2,11
15 Витексин 11,430 25,42 1265,37 2,21
16 Феруловая кислота 13,010 30,46 4533,05 7,92
17 Лютеолин-7-глюкозид 16,660 33,18 4461,42 7,79
18 Кумарин 18,530 75,23 6154,56 10,75
19 Рутин 20,85 26,00 2001,76 3,50
20 Не идентифицировано 21,44 26,88 948,23 1,66
21 Не идентифицировано 21,91 53,52 4113,65 7,18
22 Коричная кислота 25,37 19,54 1979,80 3,46
23 Не идентифицировано 27,91 40,12 3603,94 6,29
24 Не идентифицировано 29,93 19,45 1286,51 2,25
листьях, наиболее разнообразен состав п-гидроксибензойных и гидроксикорич-ных кислот. Среди флавоноидов выявлены не только известные для вересковых вещества (рутин, дигидрокверцетин, лютеолин-7-глюкозид), но и впервые витексин. В порядке убывания суммы отдельных групп фенольных соединений могут быть представлены в следующем ряду: гидроксико-ричные кислоты > флавоноиды > эпигал-локатехингаллат > кумарины > гидрокси-бензойные кислоты.
Общими для анализируемых образцов являлись 8 соединений (галловая, хлоро-геновая, цикориевая, неохлорогеновая, феруловая и коричная кислоты, эпигалло-катехингаллат и лютеолин-7-глюкозид). Большинство из них в большей мере накапливалось в листьях, и, наоборот, эпи-галлокатехингаллат, феруловая кислота и лютеолин-7-глюкозида - в цветках. В последних выявлены также о-кумаровая кислота, катехин, эпикатехин, изоферуловая кислота, витексин, кумарин, рутин, в листьях - арбутин, танин, дикумарин, кофейная, ванилиновая, вератровая и п-анисовая
кислоты, дигидрокверцетин, то есть цветки характеризуются более разнообразным набором гидроксибензойных кислот.
В анализируемых органах наиболее значима доля (до 30% от общей суммы) гидроксикоричных кислот, среди которых в цветках доминировали о-кумаровая и феруловая кислоты, в листьях - коричная и хлорогеновая кислоты. В цветках больше содержалось флавоноидов, кумаринов, эпигаллокатехингаллата, не выявлен в свободном состоянии арбутин; в листьях больше содержалось гидроксибензойных кислот.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, при ВЭЖХ-анализе спиртовых извлечений листьев и цветков хамедафне прицветничковой идентифицировано 23 вещества, большинство из которых обнаружено впервые, с преобладанием гидроксикоричных и гидроксибен-зойных кислот и значительно меньшим содержанием флавоноидов, кумаринов, фенологликозидов.
Вестник фармации №2 (72) 2016 SUMMARY
N. S. Fursa, G. N. Buzuk, N. A. Kuzmichova, A. S. Gorkova, Y. A. Konovalova STUDY OF PHENOLIC COMPOUNDS OF CHAMAEDAPHNE CALYCULATA LEAVES AND FLOWERS BY HPLC METHOD
As a result of HPLC analysis of Chamaedaphne calyculata leaves and flowers it was revealed, that phenolic compounds were represented mostly by hydroxycinnamic and hydroxybenzoic acids and significantly less by flavonoids, coumarins and phenolic glycosides. Each analyzed organ was characterized by its individual composition and amount of particular compounds. In leaves cinnamic, chlorogenic, neochlorogenic and p-anisic acids, dicoumarin, luteolin-7-glucoside prevailed; in flowers - o-coumaric and feru-lic acids, epigallocatechin gallate, coumarin, luteolin-7-glucoside.
Keywords: Chamaedaphne calyculata, phenolic compounds, leaves, flowers, HPLC.
ЛИТЕРАТУРА
1. Мазнев, Н. И. Высокоэффективные лекарственные растения. Большая энциклопедия / Н. И. Мазнев. - М.: Эксмо, 2012. - 608 с.
2. Биологическая активность видов семейства Ericaceae флоры Сибири и Дальнего Востока / М. В. Белоусов [и др.] // Растит. ресурсы. - 2006. - Т. 42, № 2. - C. 90-101.
3. Созинов, О. В. Ценопопуляция мирта болотного (Chamaedaphne calyculata
(L.) Moehch): взаимосвязь морфологии, фитохимического состава листьев и факторов среды / О. В. Созинов, Г. Н. Бузук, Н. А. Кузьмичева // Вестник фармации. -2009. - № 3 (45). - С. 1-10.
4. Шелюто, В. Л. Гвайаверин из Chamaedaphne calyculata / В. Л. Шелюто, В. И. Глызин // Химия природ. соед. -1975. - № 4. - С. 515.
5. Шелюто, В. Л. Флавоноиды Chamaedaphne calyculata / В. Л. Шелюто, В. И. Глызин, Т. А. Сафронова // Химия природ. соед. - 1973. - № 5. - С. 669.
6. Содержание арбутина в сибирско-дальневосточных видах сем. Ericaceae / М. В. Белоусов [и др.] // Растит. ресурсы. - 1992. - Т. 28, № 4. - C. 53-55.
7. Свободные фенолкарбоновые кислоты видов сем. Ericaceae / М. В. Белоусов [и др.] // Растит. ресурсы. - 1999. - Т. 35, № 3. - C. 74-81.
8. Таланов, А. А. Фармакогности-ческое изучение голубики болотной (Vaccinium uliginosum (L.): дис. ... канд. фармац. наук / А. А. Таланов. - Ярославль, 2013. - 176 с.
Адрес для корреспонденции:
210023, Республика Беларусь, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», кафедра фармакогнозии c курсом ФПК и ПК, тел. раб.: 8(0212) 37-09-29, Бузук Г. Н.
Поступила 18.05.2015 г.
Г. Н. Бузук
ГРИДИНГ В БОТАНИЧЕСКОМ РЕСУРСОВЕДЕНИИ: МОДЕЛЬНЫЙ ЭКСПЕРИМЕНТ И МЕТОДИКА
Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет
Предложена методика определения продуктивности растений, в том числе лекарственных, с помощью компьютерного моделирования с применением геостатистического метода кригинга в сочетании со средствами анализа изображений. Методика основана на построении поверхности отклика на основе параметров растительности в ограниченном числе точек методом геостатической интерполяции с последующей оценкой полученной поверхности после фрагментации средствами анализа изображений.
