CC BY
38
ИЗУЧЕНИЕ ФЕНО- И ГЕНОТИПОВ PSEUDOMONAS AERUGINOSA, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В ОТДЕЛЕНИИ РЕАНИМАЦИИ И ИНТЕНСИВНОЙ ТЕРАПИИ
НОВОРОЖДЕННЫХ
Т.И. Карпунина, М.В. Кузнецова, В.И. Сергевнин
ГОУ ВПО ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава ул. Куйбышева, 39, Пермь, Россия, 614000
Н.И. Маркович
МЗ Пермского края ул. Ленина, 51, Пермь, Россия, 614000
Н.С. Авдеева
Баклаборатория МУЗ ГКБ № 7
ул. Г. Хасана, 24, Пермь, Россия, 614000
В результате фено- и генотипического изучения штаммов P. аeruginosa, циркулирующих в отделении реанимации и интенсивной терапии акушерского стационара и неонатальных отделениях детской клиники, выявлена неблагоприятная эпидемиологическая ситуация по синегнойной инфекции, осложнившаяся формированием и распространением госпитального штамма P. aeruginosа за пределы ОРИТ. Высокая эффективность молекулярно-генетического анализа подтверждает востребованность его применения в мониторинге внутрибольничных инфекций.
Ключевые слова: госпитальный штамм, P. aeruginosa, антибиотикоустойчивость, генотипи-рование, ОРИТ новорожденных
Учреждения родовспоможения традиционно считаются объектами высокого риска по возникновению и распространению внутрибольничных инфекций (ВБИ). По данным выборочных исследований, ВБИ переносят 10—15% новорожденных [1, 2].
Отделения реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ) новорожденных представляют собой особую экологическую среду, где наиболее быстро происходит формирование госпитальных штаммов, что связано с преобладанием пациентов с незрелой иммунной системой, подвергающихся разнообразным медицинским манипуляциям и массивной антибиотикотерапии [3]. Новорожденные, имеющие различные гнойно-септические инфекции (ГСИ), госпитализируются в детские больницы по поводу заболеваний, генез которых часто связан с акушерскими стационарами [4]. Зачастую это обусловлено недоучетом малосимптомных форм и носительством условно патогенных микроорганизмов. Неоднократно ведущими специалистами подчеркивалась необходимость регистрации не только клинически выраженных, но и субклинических форм, которых в таких стационарах зна-
чительно больше и которые могут служить своевременным индикатором эпидемиологического неблагополучия в лечебно-профилактических учреждениях (ЛПУ) [5].
Другой проблемой, требующей скорейшего решения при выявлении ГСИ у новорожденных, является оценка принадлежности изолируемого штамма к внут-рибольничному, а в случае заноса — мониторинг возможной трансформации вне-больничных возбудителей в нозокомиальные. Чаще всего о госпитальной природе судят по устойчивости бактерий к антибактериальным и дезинфицирующим средствам. Учитывая высокую гетерогенность популяций условно патогенных микроорганизмов, в том числе и по признаку устойчивости к антибактериальным препаратам, дезинфектантам и бактериофагам, использование молекулярно-генети-ческих методов исследования для подтверждения госпитальной природы таких бактериальных культур может быть приоритетными. С помощью методов гено-типирования штаммов, выделенных из разных экологических ниш и очагов инфекции, можно определить источник и путь колонизации/инфицирования пациентов, иначе говоря, установить эпидемические связи, подтвердить или исключить природу внутрибольничного заражения [6].
Цель данного исследования — фенотипическое и генотипическое изучение штаммов P. аег^тоза, циркулирующих в отделении реанимации и интенсивной терапии акушерского стационара и неонатальных отделениях детской клиники.
Материалы и методы. Проведено микробиологическое и молекулярно-ге-нетическое исследование культур P. aeruginosa, выделенных от новорожденных и с объектов больничной среды. Идентификацию бактерий проводили согласно нормативным документам, регламентирующим работу бактериологических лабораторий [7]. Антибиотикорезистентность определяли стандартным диско-диффузионным методом. Генетическое типирование штаммов осуществляли посредством полимеразной цепной реакции с праймером М13 (RAPD-ПЦР), как описано ранее [8].
Результаты и их обсуждение. Поводом для углубленного динамического исследования культур P. aeruginosa послужило широкое распространение носитель-ства синегнойной палочки среди новорожденных, переведенных в первые часы после рождения из акушерского отделения в ОРИТ того же ЛПУ, где проходили роды, а в последующем госпитализированных в неонатальные отделения (второй этап выхаживания новорожденных). Большинство детей были недоношенными, имели синдром дыхательных расстройств, помощь им оказывалась с использованием аппаратов искусственной вентиляции легких.
В мае-октябре 2008 г. было изучено 114 культур P. aeruginosa, изолированных от новорожденных, и 12 культур с объектов больничной среды ОРИТ.
Прежде всего изучили чувствительность к антибиотикам и дезинфектантам изолятов P. aeruginosa, т.е. определили те фенотипические характеристики патогена, которые традиционно используются как маркеры в эпидемиологических исследованиях. Изучение профиля антибиотикорезистентности показало, что более
70% изолятов псевдомонад проявляли устойчивость к цефалоспоринам 3—4-го поколения, сохраняя чувствительность только к карбапенемам и ципрофлоксацину. Продуцентов металло-бета-лактамаз не выявлено, как и штаммов, резистентных к 4 антибиотикам и более. Чувствительность к различным дезинфектантам колебалась в широких пределах — от 19,3% к амиксану до 78,9% к тримициду.
Сравнение антибиотикограмм P. aeruginosа, выделенных от новорожденных и с объектов госпитальной среды, выявило, что 80,7% штаммов имели сходные фенотипические характеристики. При этом во времени наблюдали тенденцию к расширению уровня и спектра их резистентности.
Учитывая сходство фенотипических характеристик штаммов P. aeruginosа, дающее повод считать их внутрибольничными, были предприняты попытки установить источник, резервуар и возможные пути передачи синегнойной инфекции в ОРИТ. Известно, что среди изолятов в ЛПУ одновременно могут присутствовать различные штаммы одного вида [6]. В этой связи важной клинической и эпидемиологической задачей явилось определение генотипа различных штаммов синегнойной палочки, изолированных в ограниченный период времени в одном и том же отделении. Такой подход наиболее целесообразен, поскольку при фенотипическом сходстве установить биологическую вариабельность или идентичность этиопатогенов другим способом не представляется возможным.
В результате генотипирования с произвольным праймером М13 67 штаммов P. aeruginosa выделено три геноварианта (рис.). Штаммы оценены как близкородственные и скорее всего являлись результатом персистирования «модального» штамма в ОРИТ. Пять штаммов, изолированных от новорожденных, имели другие генетические профили, большинство изолятов из окружающей среды также различались по фено- и генотипическим характеристикам. В то же время необходимо отметить значительное (до 20%) обсеменение объектов окружающей среды, и, что особенно важно, реанимационной аппаратуры, используемой при выхаживании недоношенных детей (шланг электроотсасывателя), а также рук медицинского персонала в ОРИТ. Электроотсасыватель, а в последующем руки персонала, скорее всего послужили факторами передачи синегнойной инфекции, поскольку штаммы, изолируемые от новорожденных, имели сходные фено- и генотипы. Распространение P. aeruginosa произошло не только в пределах ОРИТ данного стационара. Так, вариантом, условно отнесенным ко второй клональной линии «модального штамма», был инфицирован ребенок, поступивший в детскую больницу из другого акушерского отделения.
Известна способность бактерий P. aeruginosa быстро трансформироваться в госпитальный штамм. Учитывая сроки персистирования в ОРИТ, устойчивость штаммов к антибактериальным препаратам и дезинфектантам, колонизацию возбудителем не только кожи и слизистых оболочек пациентов и медперсонала, но и объектов внешней среды, можно полагать, что в ОРИТ отмечались признаки эпидемиологического неблагополучия по синегнойной инфекции. Ситуация осложнилась формированием и распространением госпитального штамма P. aerugi-nosа за пределы ОРИТ.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 М
Рис. Пример электрофоретического анализа продуктов RAPD-ПЦР с использованием праймера М13; 1 — 17 изоляты, выделенные от новорожденных в ОРИТ, М-маркер.
На основании результатов анализа эпидемиологических данных, фено- и генетического типирования культур P. aeruginosa, выделенных от пациентов ОРИТ и детской больницы, был разработан комплекс противоэпидемических мероприятий, осуществление которых позволило предупредить эпидемическую вспышку синегнойной инфекции.
ЛИТЕРАТУРА
[1] Коршунова Г. С. О состоянии заболеваемости внутрибольничными инфекциями в Российской Федерации // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. — 2007. — № 1. — С. 4—5.
[2] Покровский В.И., Семина Н.А., Ковалева Е.П., Акимкин В.Г. Эпидемиология и профилактика внутрибольничных инфекций в Российской Федерации // Стерил. и госпит. инфекции. — 2006. — № 1. —С. 8—11.
[3] Абаев Ю.К. Госпитальная инфекция у новорожденных // Детская хирургия. — 2006. — № 5. — С. 36—41.
[4] Генчиков Л.А., Торчинский Н.В., Бусуек Г.П. Эпидемиология и профилактика внутри-больничных инфекций в акушерских и педиатрических стационарах // ЖМЭИ. — 2000. — № 4. — С. 110—113.
[5] Яфаев Р.Х., Зуева Л.П. Эпидемиология внутрибольничных инфекций. — Л.: Медицина, 1989. — 168 с.
[6] Шагинян И.А. Роль и место молекулярно-генетических методов в эпидемиологическом анализе внутрибольничной инфекции // КМАХ. — 2000. — Т. 2. — № 3. — С. 82—95.
[7] Приказ МЗ СССР № 535 от 22.04.1985 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».
[8] Соломенный А.П., Максимов А.Ю., Мочалова Т.И. ПЦР-генотипирование госпитальных изолятов Acinetobacter // ЖМЭИ. — 2004. — № 6. — С. 26—30.
EXAMINATION OF PHENO- AND GENOTYPES OF PSEUDOMONAS AERUGINOSA CIRCULATING IN RESUSCITATION UNIT AND INTENSIVE CARE FOR NEWBORNS
T.I. Karpunina, M.V. Kuznetsova, V.I. Sergevnin
Ac. Eu.A. Vagner's Perm State Medical Academy Kuibishev str., 39, Perm, Russia, 614000
N.I. Markovich
Perm Krai Ministry of Public Health
Lenin str., 51, Perm, Russia, 614000
N.S. Avdeeva
Bacteriological Laboratory Regional Clinical Hospital No. 7
Geroev Khasana str., 24, Perm, Russia, 614000
As a result of pheno- and genotypic examination of P. aeruginosa strains circulating in resuscitation and infection therapy unit (RITU) of the obstetric hospital and neonatal units of the children's hospital the unfavorable epidemiological situation was revealed related to the pseudomonas infection that was complicated with the formation and circulation of nosocomial strain of P. aeruginosa beyond the RITU environment. High efficacy of molecular-genetic assay confirms its relevance in monitoring of nosocomial infections.
Key words: nosocomial strain, P. aeruginosa, antibiotic resistance, genotyping, RITU for new-borns.
