CC BY
122
МЕДИЦИНА
НЕОТЛОЖНЫХ СОСТОЯНИЙ
Оригинальные исследования
УДК 616-008.12-98
ФИРА Л.С.1, НИКОЛАЕВ В.Г.2, КЛИЩ И.Н.1, ОЛЕЩУК О.М.1, ЛИХАЦКИЙ П.Г.1 1Тернопольский государственный медицинский университет им. И.Я. Горбачевского 2Институт экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины, г. Киев
ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА ЭНТЕРОСГЕЛЬ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ
Резюме. На модели экспериментальной почечной недостаточности изучена эффективность применения энтеросорбента Энтеросгель с целью коррекции нарушений функционального состояния почек. Показано, что применение Энтеросгеля положительно влияет на процессы фильтрации и реабсорбции, нормализует показатели азотистого обмена, снижает эндогенную интоксикацию. Сделан вывод о целесообразности применения Энтеросгеля при почечной недостаточности.
Ключевые слова: экспериментальная почечная недостаточность, энтеросорбция, Энтеросгель.
Введение
Почечная недостаточность относится к одной из наиболее опасных патологий, которая встречается достаточно часто. Тяжелые нарушения водно-электролитного и азотистого обмена являются основными патогенетическими факторами, которые определяют высокую летальность при почечной недостаточности [1, 4]. Фармакологическая коррекция этих нарушений остается важнейшим заданием медицины и обусловливает необходимость поиска новых подходов к лечению [6, 8, 10].
Целью исследования было изучение влияния энтеросорбента Энтеросгель, паста для перорального применения, производства ПрАО «ЭОФ «Креома-Фарм» (г. Киев, Украина), на функцию почек у крыс в условиях экспериментальной почечной недостаточности.
Материалы и методы исследования
В эксперименте использованы 40 белых крыс, которые содержались на стандартном рационе вивария [2]. Животные были разделены на три группы: 1-я — интактные (п = 8); 2-я (контрольная) — животные с почечной недостаточностью (п = 16); 3-я — животные, которые получали Энтеросгель на фоне экспериментальной почечной недостаточности (п = 16).
Для моделирования острой почечной недостаточности (ОПН) крыс выдерживали 24 часа без еды, после чего внутримышечно вводили 50% водный раствор глицерола в дозе 10 мл/кг массы тела животного [11]. Третьей группе животных вводили Энтеросгель за 1 час до введения им глицерола. В дальнейшем сорбент животные получали ежедневно интрагастрально в дозе 650 мг/кг массы тела на протяжении 14 суток.
Всех животных помещали в обменные клетки, собирали мочу в условиях спонтанного диуреза в
течение 24 часов и изучали функциональное состояние почек [1]. Определяли суточный диурез, скорость клубочковой фильтрации (СКФ), реабсорб-цию воды в почечных канальцах и на основании этих показателей рассчитывали относительный диурез. В пробах мочи определяли белок, креатинин, мочевину [1] и рассчитывали суточную экскрецию белка, креатинина и мочевины. В пробах крови определяли содержание белка, креатинина, мочевины и молекул средней массы [3, 6, 8].
Опыты были проведены в 2 этапа. Первый этап состоял в исследовании функциональных показателей почек на 3-и сутки после введения глицерола (фаза полиурии). При этом суточную мочу собирали в обменных клетках, кровь для исследования креа-тинина забирали из хвостовой вены. На 2-м этапе для выяснения эволюции патологического процесса при глицероловом поражении почек у крыс, в частности возможности формирования хронической почечной недостаточности (ХПН), была выполнена отдельная серия опытов на этих же животных через 45 суток после введения им глицерола. Для этого тоже собирали суточную мочу, после чего животных умерщвляли путем декапитации под тиопенталовым наркозом. В крови определяли содержание белка, креатинина, мочевины и молекул средней массы.
Результаты исследования и их обсуждение
Результаты проведенных исследований приведены ниже. В ходе эксперимента зафиксирована гибель животных: до проведения 1-го этапа исследований во 2-й группе погибло 2 особи, до проведения 2-го этапа во 2-й группе погибло 4 особи, в 3-й группе — 2 особи.
При изучении суточного диуреза, который исследовали в полиурической стадии ОПН, установ-
неотложных состояний
р
лено повышение этого показателя по сравнению с интактными животными в 2,9 раза (табл. 1). Отчасти это может быть связано с тем, что глицерол является осмотическим диуретиком, что согласовывается с данными литературы [8].
После введения крысам с острой почечной недостаточностью препарата Энтеросгель суточный диурез снизился на 16 % по сравнению с животными контрольной группы, но значительно превышал уровень интактных (в 2,5 раза). Введение глицерола сопровождалось достоверным снижением СКФ, рассчитанным по клиренсу эндогенного креатинина (в 1,9 раза), что свидетельствует о глубокой степени поражения клубочкового аппарата. Энтеросгель оказывал умеренное положительное действие на этот показатель — зафиксировано увеличение СКФ на 12,5 %, что, однако, достоверно не отличалось от контроля.
Потребление воды животными с экспериментальной ОПН было достоверно выше (на 45,2 %), чем интактными, и составляло 13,5 мл/100 г за сутки, что можно объяснить дегидратирующим действием глицерола. Введение Энтеросгеля сопровождалось снижением данного показателя на 15 %. Рассчитанный нами показатель реабсорбции воды в почечных канальцах демонстрировал положительное влияние сорбента на этот важный показатель канальцевого аппарата почек.
Основываясь на показателях суточного диуреза и потребления воды, рассчитывали относительный диурез. У животных с ОПН этот показатель возрос в 2,1 раза по сравнению с интактными. Применение Энтеросгеля также приводило к снижению диуреза, однако результаты были недостоверными по сравнению с контролем.
Одним из показателей, характеризующих функциональное состояние почек, является креатинин, который не реабсорбируется в почечных канальцах, поэтому его содержание в моче является пока-
зателем фильтрационной способности почек [38]. При нарушении функции почек достоверно увеличивается содержание креатинина в крови. После развития у животных ОПН его концентрация повысилась в 4,5 раза, а введение Энтеросгеля вызывало снижение содержания креатинина на 32 % по сравнению с нелеченными животными, хотя оно в 1,24 раза превышало уровень интактных животных.
Мы наблюдали увеличение содержания креа-тинина в моче, что может быть следствием значительного увеличения его в крови. После введения крысам с почечной недостаточностью Энтеросгеля наблюдалось снижение содержания креатинина в моче на 31 % по сравнению с уровнем животных контрольной группы.
Проведено исследование суточного выделения белка с мочой (табл. 1). Выделение белка животными контрольной группы увеличивается в 1,3 раза, что может быть связано с повышением проницаемости почечного фильтра. Энтеросгель оказал положительное влияние на этот показатель — наблюдалась тенденция к снижению повышенного содержания белка в моче, отмеченного после развития почечной недостаточности.
Опыты, выполненные через 45 суток после моделирования глицероловой ПН, показали, что у крыс сформировалось хроническое нарушение выделительной функции почек (табл. 2). Об этом свидетельствовали значительное — почти двукратное — снижение СКФ, гиперкреатининемия (концентрация креатинина превышала показатель интактных животных почти в 4 раза, р < 0,01) и сохраняющаяся протеинурия (суточная экскреция белка превышала аналогичный показатель интакт-ных животных более чем в 3,3 раза, р < 0,01).
Коррекция Энтеросгелем существенно влияла на основные показатели функционального состояния почек. Нами зафиксировано достоверное
Таблица 1. Показатели функционального состояния почек у животных с ОПН после введения Энтеросгеля (М ± m)
Показатели Группы животных
Интактные, п = 8 ОПН, п = 14 ОПН + Энтеросгель, п = 16
Суточный диурез, мл/100 г 1,24 ± 0,32 3,65 ± 0,15* 3,15 ± 0,12
СКФ, мл/мин 0,15 ± 0,01 0,08 ± 0,01* 0,10 ± 0,02
Потребление воды, мл/100 г за сутки 9,3 ± 1,2 13,5 ± 0,9* 11,8 ± 0,6
Реабсорбция воды,% 98,9 ± 0,3 95,1 ± 0,5* 96,2 ± 0,4**
Относительный диурез, % 13,3 ± 2,4 27,1 ± 3,2* 26,7 ± 2,9
Экскреция белка, мг/100 г за сутки 0,16 ± 0,02 0,21 ± 0,03* 0,18 ± 0,03**
Экскреция креатинина, мкмоль/100 г за сутки 11,2 ± 1,1 26,4 ± 3,8* 18,3 ± 2,8**
Креатинин крови, мкмоль/л 62,9 ± 4,3 286,0 ± 20,0* 197,0 ± 22,0**
Мочевина, ммоль/за сутки 33,20 ± 1,50 40,50 ± 2,10* 34,75 ± 1,60
Примечания: здесь и в табл. 2,3: * — различие достоверно между интактными животными и животными с острой почечной недостаточностью; ** — различие достоверно между животными с ОПН и получавшими Энтеросгель.
Оригинальные исследования_МЕДИЦИНА
Таблица 2. Показатели функционального состояния почек у животных с ХПН после введения Энтеросгеля (М ± m)
неотложных состояний
Показатель Контроль(п = 8) ХПН (П = 10) ХПН + Энтеросгель (п = 14)
Выживание, % 100 63 87
Суточный диурез, мл/100 г 1,67 ± 0,27 2,11 ± 0,18 1,79 ± 0,21
СКФ, мл/мин 0,16 ± 0,02 0,081 ± 0,002 0,15 ± 0,02**
Реабсорбция воды,% 98,5 ± 0,2 96,4 ± 0,4 98,3 ± 0,2
Относительный диурез, % 16,6 ± 2,2 22,7 ± 1,2 19,6 ± 1,7
Суточное потребление воды, мл/100 г 10,1 ± 0,7 9,5 ± 0,8 9,1 ± 0,9
Протеинурия, мг/100 г 0,14 ± 0,02 0,46 ± 0,04* 0,28 ± 0,03**
Экскреция креатинина, мкмоль/100 г 10,9 ± 1,2 22,1 ± 1,8* 23,5 ± 2,1
Креатинин крови, мкмоль/л 68,1 ± 2,3 272,8 ± 18,6* 156,7 ± 16,8**
Таблица 3. Биохимические показатели крови у животных с ХПН после введения Энтеросгеля (М ± m)
Показатели Группы животных
Интактные ХПН ХПН + Энтеросгель
Белок, г/л 65,00 ± 2,50 53,00 ± 1,85* 62,00 ± 2,30**
Мочевина, ммоль/л 6,15 ± 0,25 12,30 ± 0,40* 9,20 ± 0,35**
МСМ1, усл.ед/л 30,20 ± 1,20 44,50 ± 1,70* 36,75 ± 1,45**
МСМ2, усл.ед/л 33,50 ± 1,60 67,25 ± 2,10* 44,85 ± 1,15**
увеличение СКФ, которая в 1,9 раза превосходила аналогичный показатель пораженных животных и почти приближалась к уровню интактных. Достоверно снижались показатель суточного выделения белка с мочой и содержание креатинина в крови, что указывает на существенное увеличение фильтрационной способности почек. Увеличивалась также реабсорбция воды почечными канальцами.
При изучении биохимических показателей крови (табл. 3) установлено существенное снижение концентрации белка в плазме крови животных с ХПН: у интактных животных этот показатель составлял 65,00 ± 2,50 г/л, а у животных с почечной недостаточностью — в 1,2 раза ниже (53,00 ± 1,85 г/л).
Одной из причин снижения содержания белка, кроме повышенной экскреции с мочой, может быть распад белковых молекул с образованием молекул средней массы, что подтверждается полученными результатами исследований. Это указывает на развитие эндогенной интоксикации в пораженном организме, поскольку именно молекулы средней массы являются критерием эндогенной интоксикации [9].
Исследование содержания молекул средней массы (МСМ), в частности фракции МСМ1, в которой преобладают цепочечные аминокислоты, показало, что оно повышается в пораженном организме в 1,5 раза через 45 дней от начала введения глицерола. Аналогичная тенденция наблюдалась и относительно фракции МСМ2 (с преобладанием ароматических аминокислот) — содержание ее увеличилось в 2 раза. Введение Энтеросгеля привело к снижению содержания молекул средней массы обеих фракций: для МСМ1 на 26 % по срав-
нению с пораженными животными, для МСМ2 — на 66 %.
При изучении содержания мочевины в сыворотке крови крыс с почечной недостаточностью обнаружено, что на 45-е сутки после введения глицеро-ла содержание мочевины повышается в 2 раза, что свидетельствует о развитии уремии в исследуемый период. Введение Энтеросгеля привело к достоверному (р < 0,05) снижению этого показателя, что указывает на положительное влияние энтеросор-бента на белковый обмен.
Определение содержания мочевины в моче опытных животных выявило повышение ее содержания в 1,2 раза после введения крысам глицерола. Применение Энтеросгеля на 17 % снижало повышенное содержание мочевины в моче, и через 45 суток ее уровень превышал показатель интактных животных всего на 5 %.
Выводы
Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что энтеросор-бент Энтеросгель положительно влияет на функциональное состояние почек и показатели белкового обмена, эффективно снижает эндогенную интоксикацию в пораженном организме.
Список литературы
1. Берхин Е.Б., Иванов Ю.И. Методы экспериментального исследования почек и водно-солевого обмена. — Барнаул: Алтайское книжн. изд-во, 1972. — 199 с.
2. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захарин Е.А. Лабораторные животные, их разведение, содержание и использование в эксперименте. — К., 1982. — 351 с.
неотложных состояний
р
3. Комаров Ф.И., Коровкин Б.Ф., Меншиков В.В. Биохимические исследования в клинике. — Элиста: АПП «Джан-гар», 1988. — 250 с.
4. Нечаев Э.А., Раевский А.К., Савицкий Г.Г. Синдром длительного сдавливания. — М.: Медицина, 1993. — 208 с.
5. Носкова А.П. Влияние фуросемида и маннитола на выживаемость крыс при острой почечной недостаточности// Фармакологическая регуляция функции почек / Под ред. А.А. Лебедева. — Куйбышев, 1981. — С. 40-44.
6. Осадчая О.И., Багдасарова И.В., Шейман Б.С., Семенов В.Г. Влияние энтеросорбции на показатели иммунологической реактивности и антитоксической резистентности у детей с пиелонефритом//Нова медицина. — 2003. — № 3. — С. 68-69.
7. Скрининговый метод определения средних молекул в биологических жидкостях: Метод. рекоменд. / Н.И. Габ-риэлян, Э.Р. Левицкий, А.А. Дмитриев и др. — М., 1985.
8. Тарабаренко Н.В., Онищенко Н.А., Балкаров А.Г. и др. Использование перфторана в реперфузионном периоде для
профилактики острой недостаточности почечного трансплантанта // Перфторорганические соединения в биологии и медицине: Сб. науч. тр. / Под ред. Г.Р. Иваницкого, В.В. Мороза. - Пущино: ОНТИПНЦ РАН, 2001. - С. 146151.
9. Тогайбаев А.А., Кургузкин А.В., Рикун И.В., Карибжа-нова Р.М. Способ диагностики эндогенной интоксикации // Лаб. дело. - 1988. - № 9. - С. 22-24.
10. Штрыголь С.Ю., Борисова И.В. Ренальные и нейро-протекторные эффекты перфторана на модели токсического поражения почек у крыс // Российский биомедицинский журнал. - Т. 5. - С. 136-139.
11. Bidani A., Al-Hawasli A., Churchill P. The effect of denervation diuresis on the severity of glycerol-induced acute renal failure in rats // J. Lab. Clin. Med. - 1983 Dec. -102(6). - P. 1000-1009.
Получено 07.02.11 □
0ipa A.C.1, Миколаев В.Г.2, Кл1щ I.H.1, Олещук О.М.1, Лихацький П.Г.1
1Терноп1льський державний медичний ун1верситет im. I.ß. Горбачевського
21нститут експериментальноI патологи, онкологП Iрадюбюлогн im. P.C. Кавецького HAH Укра'ни, м. Ки!в
ВИВЧЕННЯ ЕФЕКТИВНОСП ПРЕПАРАТУ ЕНТЕРОСГЕЛЬ ПРИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬЖЙ НИРКОВШ НЕДОСТАТНОСТ
Резюме. На моделi експериментально! нирково! недостат-носп вивчено ефектившсть застосування ентеросорбенту Ентеросгель з метою корекци порушень функционального стану нирок. Показано, що застосування Ентеросгелю позитивно впливае на процеси фшьтраци i реабсорбци, нор-малзуе показники азотистого обмшу, знижуе ендогенну штоксикацш. Зроблено висновок про доцшьшсть застосування Ентеросгелю при нирковш недостатноста.
Kro40Bi слова: експериментальна ниркова недостат-шсть, ентеросорбцш, Ентеросгель.
Fira L.S.1, Nikolayev V.G.2, Klisch I.N.1, Oleschuk O.M.1, Likhatsky P.G.1
1Ternopil State Medical University named
after I.Ya. Gorbachevsky
2Institute of Experimental Pathology, Oncology
and Radiobiologynamed afterR.Ye. Kavetsky of NAS
of Ukraine, Kyiv, Ukraine
STUDY OF EFFICIENCY OF ENTEROSGEL AT EXPERIMENTAL RENAL FAILURE
Summary. On the model of experimental renal failure there was studied the efficiency of enterosorbent Enterosgel application with the purpose of correction of disorders of the renal functional status. It is determined that application of Enterosgel has positive effect on the processes of filtration and reabsorption, normalizes the indexes of nitrogen metabolism, reduces endogenous intoxication. There was drawn a conclusion about expedience of Enterosgel application at renal failure.
Key words: experimental renal failure, enterosorption, Enterosgel.
