CC BY
22
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Изучение эффективности лекарственных препаратов при экспериментальной форме геморрагической лихорадки с почечным синдромом
Логинова С.Я., Ковальчук А.В., Щукина В.Н., Савенко С.В., Борисевич С.В.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации, 141306, г. Сергиев Посад-6, Российская Федерация
Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) - зоонозная природно-очаговая вирусная инфекция, вызывающая у людей заболевание разной степени тяжести в зависимости от серотипа возбудителя.
Цель - оценка протективной эффективности комбинированного применения высокомолекулярного индуктора интерферона (ИФН) ридостина и виразола при экспериментальной форме хантавирусной инфекции у белых мышей.
Материал и методы. Эксперименты по оценке эффективности препаратов выполняли с использованием 12-дневных белых мышей, подкожно инфицированных вирусом Хантаан в дозе 10 ЛД50. Инфекционный титр вируса определяли методом негативных колоний на постоянной культуре клеток почки африканской зеленой мартышки GMK-AH-1(D). Уровни малонового диальдегида, аланин- и аспартатаминотрансферазы, креатинина и мочевины оценивали с использованием стандартных тест-наборов. Уровни циркуляторного ИФН, продуцируемых лейкоцитами ИФН-а и -у, определяли по подавлению цитоксичной активности вируса везикулярного стоматита по общепринятому методу.
Результаты и обсуждение. При сочетанном применении препаратов отмечено уменьшение поражения почек (снижение уровней креатинина на 65,8%, мочевины - на 100% в группе леченых животных по отношению к контролю). У инфицированных леченых животных отмечена нормализация функции печени (уровни аланин- и аспартатаминотрансферазы в пределах нормальных значений) и снижение нарушения в системе перекисного окисления липидов (уменьшение уровня малонового диальдегида на 41,8%). В результате применения препаратов наблюдается практически полная нормализация гематологических показателей у животных (содержание лейкоцитов, лейкоцитарная формула), происходит более выраженная активация системы интерферона, что является благоприятным прогностическим моментом в развитии инфекции.
Ключевые слова:
вирус Хантаан,
геморрагическая
лихорадка
с почечным
синдромом,
креатинин,
мочевина, лечение,
профилактика,
ридостин,
рибавирин, белые
мыши
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования, сбор данных литературы, написание текста, сбор и обработка материала, редактирование - Логинова С.Я.; сбор и обработка материала, статистический анализ, написание текста - Ковальчук А.В.; сбор и обработка материала, статистический анализ, написание текста - Щукина В.Н.; сбор и обработка материала - Савенко С.В.; написание текста, редактирование - Борисевич С.В.
Для цитирования: Логинова С.Я., Ковальчук А.В., Щукина В.Н., Савенко С.В., Борисевич С.В. Изучение эффективности лекарственных препаратов при экспериментальной форме геморрагической лихорадки с почечным синдромом // Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2021. Т. 10, № 3. С. 98-105. DOI: https://doi.org/10.33029/2305-3496-2021-10-3-98-105 Статья поступила в редакцию 13.04.2021. Принята в печать 11.06.2021.
С1 Логинова С.Я., Ковальчук А.В., Щукина В.Н., Савенко С.В., Борисевич С.В.
ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ФОРМЕ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ
The study of the efficacy of drugs in experimental form of hemorrhagic fever with renal syndrome
Loginova S.Ya., KovalchukA.V., Shchukina V.N., Savenko S.V., Borisevich S.V.
48 Central Scientific Research Institute of the Ministry of Defens of the Russian Federation, 141306, Sergiev Posad-6, Russian Federation
Hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) - is a zoonotic natural focal viral infection that causes disease in people of different severity depending on the serotype of the pathogen.
The aim of this work was to evaluate the protective effectiveness of the combined use of high-molecular interferon inducer Ridostin and Virazol in relation to an experimental form of Hantavirus infection in white mice.
Material and methods. Experiments to evaluate the effectiveness of the drugs were performed using 12-day-old white mice subcutaneously infected with the Hantaan virus at a dose of 10 LD50. The infectious titer of the virus was determined by the method of negative colonies on a permanent culture of African green monkey kidney cells GMK-AH-1(D). The levels of MDA, AlAT, AsAT, creatinine, and urea were evaluated using standard test kits. The level of circulatory IFN (clFN) produced by the white blood cells IFN-a and y was evaluated by suppressing the cytoxic activity of the vesicular stomatitis virus according to the generally accepted method.
Results and discussion. With the combined use of drugs, there was a decrease in kidney damage (a decrease in creatinine levels by 65.8%, urea-by 100% in the group of treated animals in relation to the control). The infected treated animals showed normalization of liver function (levels of AlAT and AsAT within normal values) and a decrease in the violation of the POL system (a decrease in the level of MDA by 41.8%). As a result of the use of drugs, there is almost complete normalization of hematological parameters in animals (the content of white blood cells, white blood cell formula), there is a more pronounced activation of the interferon system, which is a favorable prognostic moment in the development of infection.
Funding. The study had no sponsorhip.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Contribution. Research concept and desigh, literature data collection, material collection and processing, text writing, text editing - Loginova S.Ya.; material collection and processing, text writing, statistic analysis - Kovalchuk A.V.; material collection and processing, text writing, statistic analysis - Shchukina V.N.; material collection and processing - Savenko S.V.; text writing, text editing - Borisevich S.V.
For citation: Loginova S.Ya., Kovalchuk A.V., Shchukina V.N., Savenko S.V., Borisevich S.V. The study of the efficacy of drugs in experimental form of hemorrhagic fever with renal syndrome. Infektsionnye bolezni: novosti, mneniya, obuchenie [Infectious Diseases: News, Opinions, Training]. 2021; 10 (3): 98-105. DOI: https://doi.org/10.33029/2305-3496-2021-10-3-98-105 (in Russian)
Received 13.04.2021. Accepted 11.06.2021.
Keywords:
Hantaan virus, hemorrhagic fever with renal syndrome, creatinine, urea, treatment, prevention, ridostin, ribavirin, white mouse
Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛ ПС) - зоонозная природно-очаговая вирусная инфекция. К настоящему времени известно более чем о 500 штаммах хантавирусов, включая 120, выделенных на территории бывшего СССР [1-3]. Все они объединены в 8 серотипов, входящих в род Hantavirus, семейство Bunyaviridae, и только 4 из них (Хантаан, Пуумала, Сеул, Добрава/Белград) вызывают заболевание людей, объединенное названием ГЛПС [2, 4].
Вирус Хантаан чаще других вызывает тяжелые и средне-тяжелые формы течения ГЛПС [5, 6]. Клиническая картина ГЛПС отличается разнообразием проявлений. Выраженный полиморфизм симптоматики, безусловно, связан с генерализованным повреждающим действием вируса на эндотелий сосудов микроциркулярного русла, влекущим за собой нарушение внутриорганной гемодинамики, развитие диссемини-рованного внутрисосудистого свертывания (ДВС-синдром) и острую почечную недостаточность [7, 8]. Кроме клинических проявлений, характеристикой тяжести течения болезни служит степень изменения биохимических показателей,
характеризующих нарушения функции почек и печени, нарушения в системе перекисного окисления липидов (ПОЛ), гематологических показателей, а также показателей интер-феронового статуса организма [9, 10].
В настоящее время для лечения ГЛПС рекомендовано использование рибавирина. Клинические исследования с использованием рибавирина для лечения пациентов с ГЛПС показывают, что он обеспечивает улучшение прогноза при назначении на ранних стадиях заболевания [11]. Однако, учитывая тяжесть течения ГЛПС, существует потребность в оценке эффективности схем применения противовирусных препаратов для лечения тяжелых форм заболевания.
Достижения молекулярной биологии вирусов позволили выявить общие пути направленного вмешательства в репродукцию вирусов, найти основные мишени, на которые нацелены противовирусные вещества. При этом оптимально использование нескольких групп противовирусных препаратов с синергидным или аддитивным эффектом. Ранее нами была изучена эффективность комбинированного применения индуктора интерферона амик-
син и химиопрепарата виразол (рибавирин) в отношении экспериментальной хантавирусной инфекции у белых мышей [12].
Цель настоящей работы - оценка протективной эффективности комбинированного применения высокомолекулярного индуктора интерферона (ИФН) ридостина и виразола в отношении экспериментальной формы хантавирусной инфекции у белых мышей.
Материал и методы
Вирус. В работе использовали возбудитель ГЛ ПС вирус Хантаан, штамм 76-118, полученный из Института вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН и хранящийся в музее «48 ЦНИИ» Минобороны России.
Культура клеток. Использована перевиваемая культура клеток почек зеленых мартышек - GMK-AH-l(D). В качестве среды поддержания использовали полусинтетическую среду (ПС-4) на растворе Хенкса, содержащую 2% сыворотки крупного рогатого скота. Перед применением препараты растворяли в физиологическом растворе.
Исследуемые препараты. Ридостин (инъекционный) -дрожжевая двуспиральная РНК производства ЗАО «Вектор-Медика» (Кольцово, Россия), виразол (Pharmacia Inc, США). Препараты растворяли в стерильном физиологическом растворе, вводили животным внутримышечно.
Оценка биологических свойств вируса. Биологическую активность вируса Хантаан оценивали титрованием в культуре клеток GMK-AH-l(D) по формированию негативных колоний (Lg БОЕ/мл).
Оценка противовирусной эффективности экспериментальных субстанций осуществлена в соответствии с рекомендациями ФГБУ НЦЭСМП Минздрава России [13].
Лабораторные животные. В работе использовали 12-суточных нелинейных белых мышей, полученных из вивария ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России. Мышей инфицировали подкожно вирусом Хантаан в дозе 10 ЛД50 (106 БОЕ).
Наблюдение за инфицированными животными проводили в течение 21 сут, при этом контролировали гибель дважды в течение дня. Через 3, 8 и 12 сут после заражения отбирали кровь для оценки уровня сывороточного интерферона, активности аланин- и аспартатаминотрансферазы, концентрации креатинина и мочевины, подсчета количества лейкоцитов в единице объема крови и лейкоцитарной формулы.
Коэффициент изменения значения показателя (Киз, процент) рассчитывали по формуле:
Киз = -
А - А
нелеч леч
А - А
нелеч интактн
х 100%,
где А - значение показателя в группе нелеченных живот-
т нелеч Г~'
ных; А - значение показателя в группе леченных живот-
леч
ных; А - значение показателя у интактных животных.
интактн
Основным критерием оценки эффективности был показатель защиты животных от гибели (%). Дополнительными
критериями служили показатель среднего времени жизни животных в группе, снижение уровня вирусной нагрузки в тканях головного мозга (A, Lg), нормализация биохимических и гематологических показателей крови.
Результаты и обсуждение
Схема сочетанного применения включала введение виразола через 2 ч после заражения животных, далее 5 сут 1 раз в день, и ридостина через 6 ч, далее на 3, 6 и 9-е сутки 1 раз в день.
При изучении клинико-вирусологических показателей экспериментальной инфекции у мышей 12-суточного возраста, инфицированных подкожно вирусом Хантаан, установлено, что инфекция протекает манифестно и приводит к гибели животных в период с 6-х по 12-е сутки после инфицирования. Началом инфекции является активная репродукция вируса в легких с последующей диссеминацией возбудителя. Начиная с 5-х суток отмечается накопление возбудителя в возрастающей концентрации в головном мозге животных, которое достигает максимального уровня в период с 8-х до 12-х суток после инфицирования, т.е. совпадает со временем наивысшей частоты гибели зараженных животных.
Результаты, представленные в табл. 1, свидетельствуют о том, что при сочетанном применении препараты виразол и ридостин оказывают выраженный защитный эффект в отношении экспериментальной хантавирусной инфекции мышей. Протективная эффективность составила 72%, увеличение среднего времени жизни - 10,1 сут. Уровень накопления возбудителя в тканях головного мозга погибших животных снижался на 2,8 1g БОЕ/г. Выживаемость инфицированных животных при комбинированном применении препаратов статистически достоверно выше, чем при монотерапии, достоверно ниже уровень репродукции вируса в тканях головного мозга (р<0,05).
Были изучены вспомогательные показатели эффективности сочетанного применения препаратов. Изменения биохимических, гематологических показателей и показателей интерферонового статуса при экспериментальной хантавирусной инфекции мышей выявляют патологические сдвиги, которые имеют схожесть с таковыми при заболевании человека, что позволяет рассматривать данных животных в качестве лабораторной модели, адекватной заболеванию человека по данным патологическим изменениям.
У больных ГЛ ПС развиваются значительное нарушение функции почек и печени. В частности, биохимическими показателями, характеризующими степень поражения данных органов, являются концентрация креатинина, мочевины, аланин- (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ) в сыворотке крови. Увеличение этих показателей у больных ГЛПС является одной из характеристик степени тяжести заболевания [9, 10]. При экспериментальной хантавирусной инфекции у мышей также отмечается увеличение уровня данных показателей (на 8-е сутки после инфицирования уровень креатинина увеличивается в 2,6 раза, мочевины - в 1,6 раза, АЛТ и АСТ - в 2,4 и 1,9 раза соответственно), что свидетельствует о развитии у животных поражения почек и печени.
Таблица 1. Результаты изучения протективной эффективности сочетанного применения виразола и ридостина в отношении экспериментальной инфекции мышей, инфицированных подкожно вирусом Хантаан, штамм 76-118 в дозе 10 ЛД50 (п=3)
Препарат Схема введения Разовая доза Коэффициент Среднее время Накопление вируса в головном
препарата препарата, защиты (КЗ), жизни, сутки, мозге погибших животных,
мг/кг %, Х±5х X±Sx 1g БОЕ/г Х±8х
Виразол +2 ч, далее 5 сут -1 раз в день 50 40±2 13,7±0,8 5,4±0,4
Ридостин +6 ч, далее 3, 6 и 9-е сутки - 1 раз в день 5 27±3 13,2±0,6 5,8±0,4
Виразол и +2 ч, далее 5 сут -1 раз в день 50 72±3 18,7±0,4 4,2±0,4
ридостин +6 ч, далее 3, 6 5
и 9-е сутки - 1 раз в день
Контроль(без препарата) - - - 8,6±0,5 7,0±0,3
Примечание. (+) - время после инфицирования.
В патогенезе вирусных заболеваний важную роль играют процессы дестабилизации клеточных мембран. В последние годы установлено, что среди механизмов повреждения мембран наиболее важное значение имеют нарушения в системе ПОЛ. Комплексное изучение интенсивности процессов ПОЛ и состояния антиоксидантной системы у больных ГЛПС позволило выявить наличие прямой корреляционной зависимости между степенью тяжести заболевания и степенью увеличения интенсивности процессов ПОЛ, сопровождающееся снижением компенсаторной возможности антиоксидантной системы [14]. Одним из наиболее часто используемых в практической медицине показателей, характеризующих нарушения в системе ПОЛ, является уровень малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови.
Изучение в динамике уровня МДА в сыворотке крови мышей 12-суточного возраста позволило установить, что в процессе развития экспериментальной инфекции нарушения в системе ПОЛ появляются в начальный период заболевания и сохраняются вплоть до гибели животных.
Результаты изучения влияния сочетанного применения виразола и ридостина на изменение биохимических показателей, характеризующих нарушение функции почек, печени и нарушения в системе ПОЛ в процессе развития экспериментальной инфекции у мышей, инфицированных подкожно вирусом Хантаан, представлены в табл. 2.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что в группе животных, леченных виразолом в комбинации
с ридостином, отмечается статистически достоверное снижение по отношению к контролю уровня всех изученных биохимических показателей. Наибольшая выраженность изменений зафиксирована на 8-е сутки после инфицирования, что соответствует пику инфекции.
Снижение уровней креатинина в группе лечения по отношению к контролю на 8-е сутки после инфицирования составляет 142,7 мкМ/л, мочевины - 4,5 мМ/л, АЛТ -11,03 мкМ/(чхл), АСТ - 0,84 мкМ/(чхл), МДА - 7,4 мкМ/л. Таким образом, в результате комбинированного применения препаратов отмечена нормализация функции почек и печени, а также изменений в системе ПОЛ, вызываемых развитием экспериментальной инфекции мышей при подкожном инфицировании вирусом Хантаан.
Изучение в динамике таких гематологических показателей, как уровень лейкоцитов крови и лейкоцитарная формула, позволяет более объективно судить о патологических процессах, развивающихся при экспериментальной ханта-вирусной инфекции. Увеличение уровня лейкоцитов крови наблюдается в начальный период инфекции и достигает максимальной степени выраженности на 8-е сутки после инфицирования. Степень выраженности изменения показателя позволяет судить о реактивности организма в ответ на развитие инфекции. Однако при значительном лейкоцитозе прогноз заболевания не всегда может быть благоприятным. В этой связи большое значение имеет соотношение различных групп клеток в лейкоцитарном пуле - лейкоцитар-
Таблица 2. Результаты определения в динамике биохимических показателей в сыворотке крови белых мышей, подкожно инфицированных вирусом Хантаан, штамм 76-118 в дозе 10 ЛД50, при сочетанном применении ридостина и виразола (п=3)
Показатель Концентрация исследуемого показателя в сыворотке крови после инфицирования по суткам (Х±8х)
интактные на 3-и сутки на 8-е сутки на 12-е сутки
животные I контроль I опыт I контроль I опыт I контроль1 1 опыт I
Креатинин, мкМ/л 139,8±2,1 185,7±1,5 184,7±1,4 357,0±2,0 214,3±3,7 Н.д. 195,4±3,7
Мочевина, мМ/л 7,6±0,1 7,6±0,0 6,1±0,1 11,9±0,0 7,2±0,1 Н.д. 8,2±0,0
АЛТ, мкМ/(ч*л) 0,71±0,01 1,07±0,02 0,60±0,01 1,59±0,02 0,56±0,03 Н.д. 0,71±0,01
АСТ, мкМ/(ч*л) 0,68±0,02 1,06±0,01 0,23±0,01 1,27±0,04 0,43±0,01 Н.д. §0,48±0,02
МДА, мкМ/л 3,6±0,1 16,6±0,3 14,3±0,3 21,3±0,6 13,9±0,0 Н.д. 5,7±0,0
1 Н.д. - нет данных, животные погибли до 12 сут. Расшифровка аббревиатур дана в тексте.
Таблица 3. Результаты определения в динамике показателей крови белых мышей, подкожно инфицированных вирусом Ханта-ан, штамм 76-118 в дозе 10 ЛД50, при сочетанном применении ридостина и виразола (п=3)
Показатель
Количество форменных элементов крови после инфицирования, %, (Х±5 )
интактные на 3-и сутки на 8-е сутки на 12-е сутки
животные контроль опыт контроль опыт контроль 1 опыт
Лимфоциты 58,0±0,3 43,7±0,0 50,0±0,0 35,3±0,3 56,3±0,3 Н.д. 58,3±0,2
Бластные формы 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 Н.д. 0,0±0,0
Нейтрофилы сегментоядерные 37,3±0,3 50,0±0,0 38,7±1,3 49,0±1,7 32,7±0,3 Н.д. 35,0±2,9
Нейтрофилы палочкоядерные 2,3±0,3 4,0±0,0 3,3±0,3 9,3±0,3 2,3±0,3 Н.д. 2,3±0,7
Базофилы 0,7±0,3 0,0±0,0 1,0±0,0 1,3±0,3 1,3±0,3 Н.д. 1,0±0,0
Эозинофилы 1,0±0,0 2,0±0,0 1,3±0,3 4,0±0,0 0,7±0,3 Н.д. 1,0±0,0
Моноциты 0,7±0,3 0,7±0,3 1,3±0,3 1,0±0,0 1,0±0,0 Н.д. 1,0±0,0
Лейкоциты, клеток/мкл (5,8±0,4) (9,1±0,2) (7,1±0,2) (1,7±0,4) (6,6±0,2) Н.д. (6,3±0,1)
х103 х103 х103 х104 х103 х103
1 - гибель 100% животных.
ная формула. При анализе лейкоцитарной формулы крови у белых мышей, инфицированных вирусом Хантаан, отмечается увеличение по отношению к интактным животным относительного количества нейтрафильных гранулоцитов и эозинофилов на фоне снижения относительного количества лимфоцитов. В соответствии с данными литературы, схожие изменения изученных гематологических показателей наблюдаются у больных ГЛПС [15]. Максимальные изменения гематологических показателей отмечаются в олигу-рической стадии заболевания, и их выраженность является одной из характеристик степени тяжести болезни.
С целью оценки влияния сочетанного применения препаратов на изменение в динамике гематологических показателей, характеризующих систему иммунитета в процессе развития экспериментальной инфекции, проведено сравнительное изучение в динамике общего содержания лейкоцитов в 1 мкл крови, а также лейкоцитарной формулы. Для этого у животных на 3, 8, и 12-е сутки после инфицирования отбирали пробы крови и проводили подсчет количества лейкоцитов в единице объема крови и лейкоцитарной формулы. Результаты представлены в табл. 3.
Результаты исследования свидетельствуют, что в группе животных, получавших виразол в сочетании с ридостином, отмечается статистически достоверное (р<0,05) уменьшение изменений исследуемых показателей по отношению к контролю. Наибольшую выраженность изменений показателей отмечали на 8-е сутки после инфицирования (на пике развития инфекции). Снижение концентрации лейкоцитов на 8-е сутки после инфицирования составляет 10,4 х 103 клеток/мкл, относительного количества сегменто-
ядерных и палочкоядерных нейтрофилов - 16,3 и 7,0% соответственно, эозинофилов - 3,3%, относительное количество лимфоцитов - более на 21,0%.
Таким образом, в результате сочетанного применения виразола и ридостина отмечается нормализация изменений гематологических показателей, возникающих в результате развития экспериментальной инфекции у мышей, инфицированных подкожно вирусом Хантаан, штамм 76-118.
Одним из выраженных показателей острой вирусной инфекции являются специфические изменения в системе ИФН. В связи с тем что мыши 12-суточного возраста не являются половозрелыми, изучение в динамике показателей интерфе-ронового статуса в процессе развития экспериментальной инфекции у данных лабораторных животных имеет особое значение. В результате проведенных исследований было установлено, что в процессе развития экспериментальной инфекции у мышей происходит значительное увеличение уровня цИФН (в 70 раз на пике инфекции) и одновременно с этим снижается интерферон-продуцирующая способность лейкоцитов крови в ответ на стимуляцию in vitro (ИФН-а - в 7 раз, ИФН-у -в 2 раза на 8-е сутки после инфицирования) (табл. 4). Данные изменения в системе интерферона характерны для острых вирусных инфекций, которые, в соответствии с данными литературы, также наблюдаются и у больных ГЛПС [16].
С целью оценки влияния сочетанного применения препаратов на изменение показателей интерферонового статуса у инфицированных животных по отношению к контролю, проведено определение в динамике уровня цИФН, а также уровня продукции ИФН-а и -у лейкоцитами крови, индуцированными in vitro.
Таблица 4. Результаты определения в динамике показателей интерферонового статуса белых мышей, инфицированных подкожно вирусом Хантаан, штамм 76-118 в дозе 10 ЛД50 при сочетанном применении виразола и ридостина (п=3)
Время наблю- Уровень цИФН1, Уровень продукции ИФН лейкоцитами крови, индуцированными
дения от мо- Х±8х, ЕД/мл in vitro, X±8x, ЕД/мл
мента инфици- ИФН-а ИФН-у
рования, сут контроль опыт контроль опыт контроль опыт
0 3,8±0,8 2235,4±12,1 128,6±1,5
3 6,1±1,3 Ц 156,4±1,3 580,6±7,9 || 964,6±2,1 128,2±1,1 И 96,4±1,3
8 266,4±2,4 988,6±9,8 320,4±6,4 624,4±3,1 64,3±1,1 84,2±1,1
9 275,9±3,1 || 796,4±8,8 300,6±9,9 || 600,6±2,6 30,8±1,2 || 42,6±1,1
- цИФН - циркуляторный интерферон. Здесь и в табл. 5: расшифровка аббревиатур дана в тексте.
i
Таблица 5. Результаты изучения влияния сочетанного применения виразола и ридостина на изменения биохимических, гематологических показателей и показателей интерферонового статуса у мышей, инфицированных подкожно вирусом Хантаан в дозе 10 ЛД50 (п=3)
Показатель Значение показателя в группе животных, Х±8у Достоверность отличий значе- Коэффици-
интактные | 8-е сутки после инфицирования ний показателя в группах неле- ент изме-
нелеченные леченые ченных и леченых животных1 нения, %
1 2 3 4 5 6
Биохимические
Содержание в сыворотке крови:
креатинина, мкМ/л 139,8±2,1 357,0±2,0 214,3±3,7 + 65,80
мочевины, мМ/л 7,6±0,1 || 11,9±0,1 Ц 7,2±0,1 + >100,0
АЛТ, мкМ/(чхл) 0,71±0,01|| 1,59±0,02 Ц 0,56±0,03 + >100,0
АСТ, мкМ/(чхл) 0,68±0,02|| 1,27±0,04 || 0,43±0,01 + >100,0
МДА, мкМ/л 3,6±0,1 21,3±0,6 13,9±0,0 + 41,80
Гематологические
Содержание лейкоцитов в (5,8±0,4) (1,7±0,4) (6,6±0,2) + 92,9 сыворотке крови, клеток/мкл *103 х104 *103
Лейкоцитарная формула, %:
лимфоциты 58,0±0,3 35,3±0,3 56,3±0,3 + 92,50
нейтрофилы
- сегментоядерные 37,3±0,3 49,0±1,7 32,7±0,3 + >100,0
- палочкоядерные 2,3±0,3 9,3±0,3 2,3±0,3 + >100,0
базофилы 0,7±0,3 И ■■ 1,3±0,3 отсутствует
эозинофилы 1,0±0,0 4,0±0,0 0,7±0,3 + >100,0
Интерферонового статуса
Уровень циркуляторного интерферона, ЕД/мл 3,8±0,8 266,4±2,4 988,6±9,8 + >100,0
Уровень продукции лейкоцитами ИФН, ЕД/мл:
ИФН-а 624,4±3,1 + 15,90
ИФН-у 84,2±1,1 + 30,90
1 (+) - достоверные различия, р<0,05; (-) - отсутствуют достоверные различия, р<0,05.
Полученные результаты свидетельствуют, о том, что в группе животных, принимавших виразол в комбинации с ридостином, отмечается статистически достоверное (р<0,05) увеличение по отношению к контролю уровня цИФН и снижение уровня продукции ИФН-y лейкоцитами крови, индуцированными in vitro, на ранние сроки развития инфекции. Наибольшая выраженность изменений показателей отмечается на 8-е и 9-е сутки после инфицирования, на пике развития инфекции у животных. Такого рода изменения показателей интерферонового статуса обусловливают более благоприятное развитие инфекции.
По результатам изучения влияния сочетанного применения препаратов на изменения биохимических, гематологических показателей и показателей интерферонового статуса был определен коэффициент изменения значения показателя (Киз, %).
Анализ полученных данных свидетельствует, что в результате сочетанного применения препаратов отмеча-
ется значительное уменьшение поражения почек (уменьшение уровней креатинина на 65,8% и мочевины - на 100% в группе леченых животных по отношению к контролю). Также у леченых животных нормализуются биохимические показатели концентрации АЛТ и АСТ и значительно уменьшаются нарушения в системе ПОЛ (уменьшение уровня МДА на 41,8%).
Следовательно, в результате комбинированного применения препаратов наблюдается практически полная нормализация гематологических и биохимических показателей крови, более выраженная активация системы ИФН, что является благоприятным прогностическим моментом в развитии инфекции.
Таким образом, исследования по изучению комбинированного применения препаратов с различным механизмом действия свидетельствуют о перспективности использования комбинированного использования виразола и ридостина для терапии ГЛПС.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ
ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России, Сергиев Посад-6, Российская Федерация:
Логинова Светлана Яковлевна (Svetlana Ya. Loginova) - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник
Е-таН: 48cnii@miL.ru
http://orcid.org/0000-0001-6732-8404
Ковальчук Алексей Валерьевич (Alexey V. Kovalchuk) - кандидат биологических наук, начальник отдела
E-mail: 48cnii@miL.ru
http://orcid.org/0000-0002-9681-9891
Щукина Вероника Николаевна (Veronika N. Shchukina) - кандидат биологических наук, научный сотрудник
E-mail: 48cnii@mil.ru
http://orcid.org/0000-0002-5461-3641
Савенко Сергей Вадимович (Sergey V. Savchenko) - научный сотрудник
E-mail: 48cnii@mil.ru
https://orcid.org/0000-0002-5175-916X
Борисевич Сергей Владимирович (Sergey V. Borisevich)* - член-корреспондент РАН, доктор биологических наук, профессор, начальник ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России E-mail: 48cnii@mil.ru http://orcid.org/0000-0002-5742-3919
ЛИТЕРАТУРА
1. Chu J.-K., Jennings G.B., Schmaljohn C.S. A vaccinia virus-vectored Hantaan virus vaccine protects hamsters from challenge with Hantaan and Seoul virus but not Puumala virus // J. Virol. 1995. Vol. 69, N 10. P. 6417-6423.
2. Деконенко А.Е., Ткаченко Е.А., Липская Г.Ю. и др. Генетическая дифференциация хантавирусов с помощью полимеразной реакции и секвенирования // Вопросы вирусологии. 1996. №1. С. 24-27.
3. Щербакова С.А., Попов Н.В., Добло А.Д. и др. Некоторые результаты и перспективы изучения циркуляции вируса ГЛПС на территории Саратовской области // Проблема особо опасных инфекций : сборник трудов. Саратов, 2000. Вып. 80. С. 48-52.
4. Никоноров Ю.М., Хасанова С.С., Филатова О.В. Анализ первичной структуры РНК хантавируса, обнаруженного в органах погибших от ГЛПС больных в Республике Башкортостан // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2001. № 1. С. 35-38.
5. Иванис В.А., Сокотун О.А., Колесникова Н.А. и др. Клинические особенности хантавирусной инфекции в Приморском крае // Тихоокеанский медицинский журнал. 1998. № 1. С. 46-48.
6. Lee U.W., Calisher C., Schmaljohn C. Manual of hemorrhagic fever with renal syndrome and hantavirus pulmonary syndrom. Seoul, 1998.
7. Сиротин Б.З. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом. Хабаровск, 1994. 300 c.
8. Петров В.А. Клинико-серологические исследования и вопросы этиотропного лечения геморрагической лихорадки с почечным синдромом : автореф. дис. ... канд. мед. наук. Москва, 1993. 26 с.
9. Tang T., Hsiang C.M., Zheg Z.M. et al. Efficacy of human leucocytic interferon (IF) on the treatment of epidemic HFRS // Int. Symp. HFRS, Oct. 31-Nov. 2, 1989, Hubei, China. Hubei, 1988. P. 159.
10. Shu C.J., Xie W.M., He M.L. et al. Double bland trial of polyI:polyC for early HFRS // Int. Symp. HFRS, Oct. 31-Nov. 2, 1989, Hubei, China. Hubei, 1988. P. 165.
11. Chung D.H., Kumarapperuma S.C., Sun Y. et al. Synthesis of 1-beta-D-ribofuranosyl-3-ethynyl-[1,2,4]triazole and its in vitro and in vivo efficacy against Hantavirus.// Antiviral Res. 2008. Vol. 79, N 1. Р. 19-27. DOI: https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2008.02.003
12. Логинова С.Я., Ковальчук А.В., Борисевич С.В. и др. Противовирусная эффективность сочетанного применения амиксина и виразола при экспериментальной форме геморрагической лихорадки с почечным синдромом у белых мышей-сосунков // Вопросы вирусологии. 2005. Т. 50, № 6. С. 30-32.
13. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва : Минздрав РФ, 2013. 942 с.
14. Хунафина Д.Х., Фазлыева Р.М., Мирсаева Г.Х., Исламова А.А. Диагностическое значение показателей перекисного окисления липидов у больных ГЛПС // Тезисы докладов V Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы медицинской вирусологии». 24-26 марта 1998 г. Санкт-Петербург, 1998. С. 100-101.
15. Асеинова Р.З. Изменение иммунных и биохимических реакций при ГЛПС и возможности их коррекции : дис. ... канд. мед. наук. Саранск, 2000.
16. Мурзабаева Р. Т. Система интерферона при геморрагической лихорадке с почечным синдромом // Материалы тезисов всероссийской научной конференции (ВМА) «Клинические перспективы в инфекто-логии», 17-18 октября 2001 г. Санкт-Петербург, 2001. С. 133-134.
REFERENCES
1. Chu J.-K., Jennings G.B., Schmaljohn C.S. A vaccinia virus-vectored Hantaan virus vaccine protects hamsters from challenge with Hantaan and Seoul virus but not Puumala virus. J Virol. 1995; 69 (10): 6417-23.
2. Dekonenko A.E., Tkachenko E.A., Lipskaya G.Yu., et al. Genetic differentiation of hantaviruses by polymerase reaction and sequencing. Voprosy virusologii [Problems of Virology]. 1996; (1): 24-7. (in Russian)
3. Shcherbakova S.A., Popov N.V., Doblo A.D., et al. Some results and prospects of studying the circulation of the hemorrhagic fever virus with renal syndrome in the Saratov region. In: The Problem of Especially Dangerous Infections: Collection of Works. Saratov, 2000; Issue 80: 48-52. (in Russian)
4. Nikonorov Yu.M., Khasanova S.S., Filatova O.V. Analysis of the primary structure of hantavirus RNA detected in the organs of patients who died from hemorrhagic fever with renal syndrome in the Republic of Bashkortostan. Molekulyarnaya genetika, mikrobiologiya i virusologiya [Molecular Genetics, Microbiology, Virology]. 2001; (1): 35-8. (in Russian)
5. Ivanis V.A., Sokotun O.A., Kolesnikova N.A., et al. Clinical features of hantavirus infection in the Primorsky Territory. Tikhookeanskiy meditsinskiy zhurnal [Pacific Medical Journal]. 1998; (1): 46-8. (in Russian)
6. Lee U.W., Calisher C., Schmaljohn C. Manual of hemorrhagic fever with renal syndrome and hantavirus pulmonary syndrom. Seoul, 1998.
7. Sirotin B.Z. Hemorrhagic fever with renal syndrome. Khabarovsk, 1994: 300 p. (in Russian)
8. Petrov V.A. Clinical and serological studies and questions of etio-tropic treatment of hemorrhagic fever with renal syndrome: Diss. Мoscow; 1993: 26 p. (in Russian)
9. Tang T., Hsiang C.M., Zheg Z.M., et al. Efficacy of human leucocytic interferon (IF) on the treatment of epidemic HFRS. In: Int. Symp. HFRS, Oct. 31-Nov. 2, 1989, Hubei, China. Hubei, 1988: 159.
10. Shu C.J., Xie W.M., He M.L. et al. Double bland trial of polyI:polyC for early HFRS. In: Int. Symp. HFRS, Oct. 31-Nov. 2, 1989, Hubei, China. Hubei, 1988: 165.
* Автор для корреспонденции.
11. Chung D.H., Kumarapperuma S.C., Sun Y., et al. Synthesis of 1-beta-D-ribofuranosyl-3-ethynyl-[1,2,4]triazole and its in vitro and in vivo efficacy against Hantavirus. Antiviral Res. 2008; 79 (1): 19-27. DOI: https://doi. org/10.1016/j.antiviral.2008.02.003
12. Lognova S.Ya., Koval'chuk A.V., Borisevich S.V., et al. Antiviral effectiveness of the combined use of amixine and virasole in experimental hemorrhagic fever with renal syndrome in sucking albino mice. Voprosy virusologii [Problems of Virology]. 2005; 50 (6): 30-2. (in Russian)
13. Guidelines for experimental (preclinical) study of new pharmacological substances. Moscow: Minzdrav RF, 2013: 942 p. (in Russian)
14. Khunafina D.Kh., Fazlyeva R.M., Mirsaeva G.Kh., Islamova A.A. Diagnostic value of lipid peroxidation indicators in patients with HFRS. In: Abstracts of the V All-Russian Scientific Conference «Actual Problems of Medical Virology». March 24-26, 1998. Saint Petersburg, 1998: 100-1. (in Russian)
15. Aseinova R.Z. Changes in immune and biochemical reactions in HFRS and the possibility of their correction: Diss. Saransk, 2000. (in Russian)
16. Murzabaeva R.T. The interferon system in hemorrhagic fever with renal syndrome. In: Abstracts of the All-Russian Scientific Conference (VMA) «Clinical Perspectives in Infectology», October 17-18, 2001. Saint Petersburg, 2001: 133-4. (in Russian)
