CC BY
50
Є
Изучение эффективности Ингавирина® in vitro в отношении штаммов пандемического вируса гриппа A(H1N1/09)v
Л. Н. ШИШКИНА1, В. Е. НЕБОЛЬСИН2, А. С. КАБАНОВ1, М. О. СКАРНОВИЧ1, У. Б. ЭРДЫНЕЕВА1,
Н. А. МАЗУРКОВА1, О. А. СЕРОВА1, Е. А. СТАВСКИЙ1, И. Г. ДРОЗДОВ1
1 ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, п. Кольцове, Новосибирская обл.
2 ОАО «Валента Фарм», Москва
In vitro Efficacy of Ingavirin® against the Pandemic Influenza Virus A(H1N1/09)v
L. N. SHISHKINA, V. E. NEBOLSIN, A. S. KABANOV, M. O. SKARNOVICH, U. B. ERDYNEEVA,
N. A. MAZURKOVA, O. A. SEROVA, E. A. STAVSKY, I. G. DROZDOV
State Research Centre of Virology and Biotechnology VECTOR, Koltsovo, Novosibirsk Region JSC Valenta Pharm, Moscow
Ингавирин® эффективно ингибирует размножение штаммов вируса гриппа A/California/04/2009 (H1N1)v, A/California/07/2009 (H1N1)v, A/Moscow/225/2009 (H1N1)v, A/Moscow/226/2009 (H1N1)v, а также штаммов A/Chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) и A/Aichi/2/68 (H3N2) в культуре клеток MDCK. При внесении Ингавирина® in vitro снижается гемагглютинирующая и цитопатическая активность этих штаммов вируса гриппа.
Ключевые слова: вирус гриппа A(H1N1/09)v, Ингавирин®, противовирусная активность.
Ingavirin® was shown to be efficient in inhibition of the influenza virus strains A/California/04/2009 (H1N1)v, A/California/07/2009 (H1N1)v, A/Moscow/225/2009 (H1N1)v and A/Moscow/226/2009 (H1N1)v, as well as the strains A/Chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) and A/Aichi/2/68 (H3N2) in the MDCK cell culture. The hemagglutinin and cytopathic activity of the influenza virus strains decreased at entering Ingavirin® in vitro.
Key words: influenza virus A(H1N1/09)v, Ingavirin®, antiviral activity.
В лаборатории Центра контроля за инфекционными заболеваниями (СБС, США) 15 апреля 2009 года у 10-летнего ребенка с клиническими признаками респираторного заболевания (лихорадка, кашель, рвота) был выделен новый вариант вируса гриппа А субтипа Н1Ш [1]. Было показано, что новый вариант возник в результате реассортации в геноме штаммов вируса гриппа свиней Евроазиатской линии и штаммов вируса гриппа свиней Североамериканской линии, которая возникла в конце 1990-х после тройной ре-ассортации субтипов Н1Ш, Н3Ш и НШ2 внутри классических свиных штаммов [2].
По данным ВОЗ, к началу ноября 2009 г. было зарегистрировано более 400000 лабораторно подтверждённых случаев заболевания пандемическим гриппом Н1Ш/09, из которых свыше 4740 случаев закончились смертельным исходом [3]. В январе-феврале 2010 г. активность пандемического гриппа НШ1/2009 в странах Европейского региона сохранялась, несмотря на тенденцию к снижению. Наи-
© Коллектив авторов, 2010
Адрес для корреспонденции: 630559 р.п. Кольцово Новосибирского района Новосибирской области. ГНЦ ВБ «Вектор»
более высокой она оставалась в таких странах, как Грузия, Польша, Сербия и Украина, а также в отдельных регионах РФ. При этом всего с апреля 2009 г. в Европе сообщалось о 4057 случаях смерти, связанных с лабораторно подтверждённым инфицированием вирусом пандемического гриппа А(Н1Ш/09) [4]. Международный опыт в области лечения пандемического гриппа Н1Ш/09 показывает, что плохие клинические результаты связаны с поздним обращением за медицинской помощью и задержкой начала противовирусной терапии [3, 5].
Наряду с пандемией гриппа А(Н1Ш/09) в январе 2010 г. появились сообщения о случаях заболевания, связанных с инфицированием вирусом гриппа птиц в Египте. Они подтверждены Центральными лабораториями общественного здравоохранения Египта, Национальным центром по гриппу в рамках Глобальной сети ВОЗ по эпиднадзору за гриппом (СТ8М) [6]. Из 97 лабораторно подтверждённых случаев заболевания птичьим гриппом А(Н5Ш), зарегистрированных в Египте, 27 закончились смертельным исходом. Во всех случаях имелся контакт с больными и мёртвыми домашними птицами [6].
-е-
e
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Существует четыре противовирусных препарата, которые рекомендованы ВОЗ для лечения гриппа: амантадин и римантадин (ингибиторы вирусного белка М2), осельтамивир и занамивир (ингибиторы вирусной нейраминидазы). Недавние исследования показали, что вирус гриппа A(H1N1/09)v, который был выявлен у людей, устойчив к амантадину и римантадину, в то же время этот вирус восприимчив к осельтамивиру и за-намивиру [7].
В связи с ежегодными эпидемиями гриппа, возможностью заражения людей вирусом гриппа животного происхождения и возникновением пандемии гриппа среди людей, остро встаёт вопрос о создании надёжных средств для его профилактики и лечения.
Целью настоящего исследования является изучение эффективности отечественного препарата Ингавирин® in vitro в отношении штаммов пандемического вируса гриппа A(H1N1) 2009 г., а также штаммов вируса гриппа A(H5N1) и A(H3N2).
Материал и методы
Вирус. В работе использовали следующие штаммы вируса гриппа (ВГ): A/Califomia/04/2009 (H1N1)v и A/Califomia/07/2009 (H1N1)v, полученные в мае 2009 г. из CDC (США); A/Moscow/225/2009 (H1N1)v и A/Moscow/226/2009 (H1N1)v, выделенные и охарактеризованные в ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» в июне 2009 г.; A/Chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) и A/Aichi/2/68 (H3N2), полученные из «Коллекции микроорганизмов» ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор». Штаммы A/California/07/2009 (H1N1)v, A/Moscow/226/2009 (H1N1)v, A/Chicken/Kuigan/05/2005 (H5N1) и A/Aichi/2/68 (H3N2) были наработаны на развивающихся куриных эмбрионах (РКЭ), штаммы A/California/04/2009 (H1N1)v и A/Moscow/225/2009 (H1N1)v были наработаны в культуре клеток MDCK. Концентрацию вируса в исследуемых образцах определяли путём титрования на РКЭ или клетках MDCK [8], рассчитывали и выражали в ^ЭИД50/мл (десятичных логарифмах 50% эмбриональных инфицирующих доз в мл) или в ^ТЦД50/мл (десятичных логарифмах 50% тканевых цитопатических доз в мл) по методу Спирма-на-Кербера [9]. Наработанные и использованные в работе серии вирусосодержащей аллантоисной жидкости ^AX) и культуральной жидкости со штаммами вируса гриппа хранили при -70°С.
Клеточная культура. Для тестирования противовирусной активности препаратов использовали перевиваемую культуру клеток MDCK (клетки почки собаки). По 100 мкл суспензии клеток MDCK с концентрацией 1,0—1,5х105 кл/мл вносили в лунки 96-луночных планшетов. Планшеты с клетками помещали в термостат при температуре 37°C, 5% СО2 и 100% влажности на 1—2 сут до образования сплошного клеточного монослоя.
Исследуемые препараты. В работе использован Ингавирин® производства OAO «Валента Фармацевтика» (Россия) и Ремантадин® (ООО «Розфарм», Россия). При проведении исследования препараты вносили в культуральную среду через 1 час после адсорбции вируса на клетках в следующих конечных концентрациях в среде культивирования: Ингави-рин® — 200 мкг/мл, Ремантадин® — 10 мкг/мл.
Инфицирование клеток MDCK вирусом гриппа. Готовили разведения исходных образцов вируса гриппа с 1-го по 7-е с десятикратным шагом с использованием среды MDCK StemAlpha (Франция), содержащей 2 мкг/мл трипсина TPCK (Sigma, СШA). По 50 мкл разведений вируса вносили в лунки с монослоем клеток MDCK (по 6 лунок на каждое разведение).
Адсорбцию вируса проводили в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем в каждую лунку с инфицированными клетками MDCK вносили исследуемые препараты в объёме 50 мкл и по 50 мкл питательной среды MDCK StemAlpha с 2 мкг/мл трипсина TPCK.
В контрольные лунки с инфицированными клетками вносили по 100 мкл питательной среды MDCK StemAlpha с 2 мкг/мл трипсина TPCK. Клетки инкубировали 4 сут при температуре 37°C в атмосфере 5% СО2 в термостате ТС-1/80 СПУ (Россия).
Через 4 сут в каждой лунке регистрировали ЦПД в монослое клеток с помощью инвертированного микроскопа и наличие вируса в среде культивирования по реакции гемагглю-тинации (РГА) с 0,5% эритроцитами кур. На основании этого определяли титры вируса в ^ТЦД^/мл в контроле (ИД50 in vitro без препарата) и в опыте (ИД50 in vitro с препаратом) и высчитывали индекс нейтрализации (ИН) вируса под влиянием препарата: ИН = ИД50контроль — ИД50опыт (lg).
Далее определяли, могут ли препараты оказывать влияние на репродукцию и инфекционную активность вируса гриппа. С этой целью собирали культуральную жидкость из одного или двух рядов лунок с клетками, инфицированными одним или двумя наибольшими разведениями вируса, т. е. его наименьшими дозами, при которых вирус был зарегистрирован по РГА в <100% лунок в контроле и в опыте ( в присутствии и без препарата). После этого оценивали продукцию вируса в объединённых пробах из лунок каждого ряда по гемагглютинирующей (титр в РГА) и инфекционной (титр в lg ТЦД50/мл) активности, а также рассчитывали индекс подавления его продукции под влиянием препарата in vitro на основании разницы между титрами вируса в контрольных и опытных лунках.
Оценка противовирусной эффективности препаратов осуществлялась в соответствии с рекомендациями Фармакологического государственного комитета РФ [10]. Между контрольными и опытными образцами инфицированных клеток MDCK оценивали достоверность различий ^=0,05) по ИД50 штаммов вируса гриппа in vitro и по показателям репродукции вируса гриппа.
Статистическая обработка результатов. Статистическую обработку данных проводили общепринятыми методами для биологических исследований [9] с помощью метода Спир-мана-Кербера с оценкой достоверности отличий (^=0,05) для 95% доверительного уровня (I95).
Результаты и обсуждение
При внесении Ингавирина® в клеточную культуру MDCK, инфицированную штаммами вируса гриппа, было показано, что инфекцион-ность всех исследованных штаммов под его влиянием достоверно уменьшалась (табл. 1). Наблюдаемый диапазон индексов нейтрализации исследованных штаммов находился в пределах от 0,5 до 1,7. При этом наиболее высокий индекс нейтрализации достигался при инкубировании Ингавирина® со штаммом вируса гриппа A/Aichi/2/68 (H3N2) (табл. 1).
После оценки ИН на основании результатов РГА определяли продукцию каждого штамма вируса гриппа в лунках с клетками, инфицированными наиболее низкими дозами вируса, при которых наблюдалась РГА в <100% лунок. Было обнаружено, что при инкубировании инфицированных клеток MDCK с Ингавирином® продукция исследованных штаммов вируса гриппа достоверно уменьшалась и по показателям их титров в РГА, и по пока-
e
Таблица 1. Инфекционность (50% инфицирующая доза — ИД50 в клетках MDCK) штаммов вируса гриппа A(H1N1)v in vitro в контроле и при инкубировании с Ингавирином® через 4 сут после заражения
Штаммы вируса гриппа ИД50 штамма in vitro в контроле (в lgTЦД5o/мЛ, +I95) ИД50 штамма in vitro при инкубировании с Ингавирином® (в ^ТЦД^/мл, +I95) Индекс нейтрализации (в lg)
A/Califomia/04/2009 (H1N1)v 4,3±0,4 3,8±0,0* 0,5*
A/California/07/2009 (H1N1)v 5,0±0,5 3,8±0,5* 1,2*
A/Moscow/225/09 (H1N1)v 5,6±0,3 5,1±0,4* 0,5*
A/Moscow/226/09 (H1N1)v 5,8±0,6 5,1±0,4* 0,7*
A/Chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) 7,3±0,7 6,1±0,4* 1,2*
A/Aichi/2/68 (H3N2) 7,6±0,7 5,9±0,3* 1,7*
Примечание. * - отличия от контроля по ИД50 при р=0,05.
Таблица 2. Показатели репродукции (титры) штаммов вируса гриппа А(Н1№^ в клетках МйСК в контроле и при инкубировании с Ингавирином® через 4 сут после заражения
Штаммы вируса гриппа
Доза заражения штамма вируса гриппа в ^ТЦД50/ 50 мкл
Репродукция штаммов вируса гриппа in vitro в контроле
Титры в РГА
Титры в
^ТЦД5о/мл,
Репродукция штаммов вируса гриппа in vitro при инкубировании с Ингавирином®
±1
95
Титры в РГА
Титры в
^ТЦД5о/мл,
Индекс подавления продукции вируса in vitro (в lg)
±I
95
A/Califomia/04/2009 (H1N1)v 2,0 1:32 4,0±0,6 1:16 1,5±0,0* 2,5
1,0 1:32 4,0±0,6 1:8* 1,5±0,0* 2,5
A/California/07/2009 (H1N1)v 1,7 1:512 7,5±0,0 1:256 6,5±0,8* 1,0
0,7 1:256 6,5±0,0 1:64* 5,3±0,8* 1,2
A/Moscow/225/09 (H1N1)v 1,3 1:32 2,5±0,0 1:32 2,5±0,0 0,0
0,3 1:32 2,5±0,0 1:16 1,5±0,0* 1,0
A/Moscow/226/09 (H1N1)v 2,5 1:16 3,0±0,6 1:16 2,3±0,5* 0,7
1,5 1:16 2,5±0,0 1:4* 1,8±0,5* 0,7
A/Chicken/Kurgan/ 05/2005 (H5N1) 2,0 1:256 6,0±0,6 1:64* 2,8±0,5* 3,2
1,0 1:256 6,0±0,6 1:64* 2,8±0,5* 3,2
A/Aichi/2/68 (H3N2) 2,3 1:256 5,5±0,0 1:32* 2,8±0,5* 2,7
1,3 1:256 5,0±0,6 1:16* 2,8±0,5* 2,2
Примечание. * - отличия от контроля при р=0,05.
Таблица 3. Инфекционность (50% инфицирующая доза — ИД50 в клетках МРСК) штаммов вируса гриппа
A(H1N1)v in vitro в контроле и при инкубировании с Ремантадином® через 4 сут после заражения
Штаммы вируса гриппа ИД50 штамма in vitro ИД50 штамма in vitro Индекс
в контроле при инкубировании с Ремантадином® нейтрализации
(в ^ТЦД50/мл, +I95) (в ^ТЦД;о/мл, ±195) (в lg)
A/Califomia/04/2009 (H1N1)v 4,3±0,4 4,1±0,4 0,2
A/California/07/2009 (H1N1)v 5,0±0,5 5,0±0,5 0,0
A/Moscow/225/09 (H1N1)v 5,6±0,3 5,6±0,3 0,0
A/Moscow/226/09 (H1N1)v 5,8±0,6 5,8±0,5 0,0
A/Chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) 7,3±0,7 5,1±0,4* 2,2*
A/Aichi/2/68 (H3N2) 7,6±0,7 5,6±0,7* 2,0*
-Q-
Примечание. * - отличия от контроля по ИД50 при р=0,05.
зателям их инфекционности при титровании на клетках MDCK (табл. 2). Как следует из таблицы 2, индексы подавления продукции штаммов вируса гриппа под влиянием Ингавирина® in vitro колебались в диапазоне от 0,7 до 3,2 lg. При этом наиболее высокое значение индекса подавления продукции вируса in vitro наблюдалось при инкубировании Ингавирина® со штаммом вируса гриппа A/Chicken/Kurgan/ 05/2005 (H5N1) (табл. 2).
Показано, что при внесении Ремантадина® в клеточную культуру MDCK, инфицированную штаммами вируса гриппа, достоверно уменьша-
лась инфекционность только двух исследованных штаммов: А/СЫ1скеп/Кш^ап/05/2005 (Н5Ш) и А/А1еЫ/2/68 (Н3Ш) при достижении соответствующих индексов нейтрализации 2,2 и 2,0 (табл. 3). Как следует из таблицы 3, штаммы вируса гриппа А/СаШогта/04/2009 (НШ1)у, А/СаШогта/07/ 2009 (Н1Ш)у, А/Мо8^/225/09 (Н1Ш)у и A/Moscow/226/09 (Н1Ш)у не изменяли своей ин-фекционности в клеточной культуре МБСК при инкубировании с Ремантадином®.
Определение продукции вируса гриппа в лунках с клетками, инфицированными наиболее
Є
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Таблица 4. Показатели репродукции (титры) штаммов вируса гриппа A(H1N1)v в клетках MDCK в контроле и при инкубировании с Ремантадином® через 4 сут после заражения
Штаммы вируса гриппа Доза заражения штамма вируса гриппа в ^ТЦД50/ 50 мкл Репродукция штаммов вируса гриппа in vitro в контроле Титры Титры в в РГА ^ТЦД5о/мл, ±І95 Репродукция штаммов вируса гриппа in vitro при инкубировании с Ремантадином® Титры Титры в в РГА ^ТЦД5о/мл, ±І95 Индекс подавления продукции вируса in vitro (в lg)
A/Califomia/04/2009 (H1N1)v 2,0 1:32 4,0±0,6 1:32 4,0±0,6 0,0
1,0 1:32 4,0±0,6 1:32 3,8±0,5 0,2
A/California/07/2009 (H1N1)v 1,7 1:512 7,5±0,0 1:512 7,5±0,0 0,0
0,7 1:256 6,5±0,0 1:256 6,5±0,0 0,0
A/Moscow/225/09 (H1N1)v 1,3 1:32 2,5±0,0 1:32 2,5±0,0 0,0
0,3 1:32 2,0±0,6 1:32 2,0±0,6 0,0
A/Moscow/226/09 (H1N1)v 2,5 1:16 3,0±0,6 1:16 3,0±0,6 0,0
1,5 1:16 2,5±0,0 1:16 2,3±0,5 0,2
A/Chicken/Kurgan/ 05/2005 (H5N1) 3,0 1:256 6,3±0,5 1:64* 4,8±0,5* 1,5
2,0 1:256 6,0±0,6 1:32* 4,3±0,5* 1,7
A/Aichi/2/68 (H3N2) 2,3 1:256 5,5±0,0 1:64* 4,3±0,5* 1,2
1,3 1:256 5,0±0,6 1:32* 4,1±0,4* 0,9
Примечание. * - отличия от Контроля при р=0,05.
низкими дозами штаммов вируса гриппа, при которых наблюдалась РГА в < 100% лунок в контроле и в опыте, также показало отсутствие чувствительности к Ремантадину® штаммов вируса гриппа А(Н1Ш)у (табл. 4). Так, для штаммов вируса гриппа А/СаЖогта/04/2009 (НШ1)у, А/СаШогта/07/2009 (НШ1)у, A/Moscow/225/09 (ШШ)у и A/Moscow/226/09 (Н1Ш)у не было обнаружено снижения продукции при инкубировании инфицированных клеток МБСК с Ремантадином® ни по титрам объединенных проб в РГА, ни по их инфекционности в культуре клеток МБСК (табл. 4). При этом наработка штаммов вируса гриппа А/СЫ1скеп/Кш^ап/05/2005 (Н5Ш) и А/А1сЫ1/2/68 (Н3Ш) достоверно снижалась под воздействием Ремантадина® (табл. 4). Как видно из табл. 4, при инкубировании инфицированных клеток МБСК с Ремантадином® индексы подавления продукции штамма А/СЫ1скеп/Кш^ап/ 05/2005 (Н5Ш) достигали значений 1,5 и 1,7 ^ при соответствующих дозах заражения 3,0 и 2,0 ^ТЦД50/50 мкл, а индексы подавления продукции штамма А/А1сЫ1/2/68 (Н3Ш) были равны 1,2 и 0,9 ^ при дозах заражения 2,3 и 1,3 ^ТЦД50/50 мкл соответственно.
Полученные нами данные согласуются с ранее описанными результатами изучения противовирусной активности Ингавирина® [11]. Так, авторами было обнаружено подавление гемаг-глютинирующей активности штаммов А/СаШогта/04/2009 (Н1Ш)у и А/СаШогта/07/ 2009 (Н1Ш)у под влиянием Ингавирина®. Причем показатель эффективности Ингавирина® по подавлению гемагглютинирующей активности этих штаммов был сопоставим с таковым в отношении штамма вируса гриппа А/А1сЫ1/2/68
(H3N2). Изучение эффективности Ингавирина® в культуре клеток MDCK по подавлению цитопа-тической активности штаммов вируса гриппа A/California/04/2009 (H1N1)v и A/California/07/ 2009 (H1N1)v также свидетельствовало о том, что Ингавирин® эффективно ингибировал размножение вируса in vitro. При этом эффективность Ингавирина® в культуре клеток MDCK в отношении подтипов вируса гриппа A(H1N1) по подавлению цитопатической активности была сопоставима с таковыми показателями в отношении штаммов вируса гриппа A/Chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) и A/Aichi/2/68 (H3N2) [11].
Подавление гемагглютинирующей и цитопа-тической активности вируса гриппа А под влиянием Ингавирина® в экспериментах in vitro может осуществляться благодаря противовирусному механизму действия препарата, который основан на подавлении репродукции вируса гриппа на этапе ядерной фазы, задержке миграции нового синтезированного нуклеопротеида вируса из цитоплазмы в ядро [12, 13].
Заключение
Таким образом, при изучении влияния Ингавирина® и Ремантадина® в культуре клеток MDCK на показатели гемагглютинирую-щей и цитопатической активности штаммов вируса гриппа АЩШ1/09^ была показана эффективность Ингавирина® и отсутствие эффективности Ремантадина® в отношении этих штаммов. В то же время Ингавирин® и Ремантадин® проявляли противовирусную эффективность в отношении используемых в работе референс-штаммов вируса гриппа АЩ5Ш) и А(ШШ).
e
ЛИТЕРАТУРА
1. Dawood F. S., Jain S., Finelli L. et al. Emergence of a novel swine-ori-gin influenza A (H1N1) virus in humans. Novel Swine-Origin Influenza A (H1N1) Virus Investigation Team. New Engl J Med 2009; 360: 2605—2615.
2. Zimmer S. M, Burke D. S. Historical perspective — emergence of influenza A (H1N1) viruses. N Engl J Med 2009; 361: 279—285.
3. Пандемия гриппа (H1N1) — 2009: обзор ситуации в Европейском регионе ВОЗ. http://www.euro.who.int/influenza/AH1N1/20091026_17lan-guage=Russian.
4. Снижение уровня пандемического гриппа в Европе 01—07 февраля 2010. http://www.euro.who.int/influenza/AH1N1/20100105_17lan-guage=Russian.
5. Пандемический грипп (H1N1) — 2009, Украина. http://www.who.int/ csr/don/2009_11_01/ru/index.html.
6. Птичий грипп — ситуация в Египте — обновлённая информация 29. http://www.who.int/csr/don/2010_02_10/ru/index.html
7. WHO Guidelines for Pharmacological Management of Pandemic (H1N1) 2009 Influenza and Other Influenza Viruses. 20 August 2009. http://www.who.int/csr/resources/publications/swineflu/h1n1_guide-lines_pharmaceutical_mngt.pdf.
8. Вирусология. Методы. Пер. с англ. Мейхи Б. М.: 1988; 344.
9. Закс Л. Статистическое оценивание. М.: 1976; 598.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Хабриева Р. У.
М.: 2005; 832.
11. Логинова С. Я., Борисевич С. В., Лыков М. В. и др. Изучение эффективности Ингавирина® in vitro в отношении «мексиканского» пандемического подтипа H1N1 вируса гриппа А, штаммы A/California/04/2009 и A/California/07/2009. Антибиотики и хи-миотер 2009; 54: 3—4: 15—17.
12. Небольсин В. Е., Новиков Ф. Н., Строганов О. Л. и др. Поиск терапевтических мишеней и исследование механизма противогриппозной активности нового препарата Ингавирин. Тезисы докладов IV Российского симпозиума «Белки и пептиды», Казань, 23—27 июня 2009; 103.
13. Семенова Н. П., Прокудина Е. Н., Львов Д. К., Небольсин В. Е. Влияние противовирусного препарата Ингавирин® на внутриклеточные преобразования и импорт в ядро нуклеокапсидного белка (NP) вируса гриппа. Вопр вирусол 2010 (в печати).
-Q-
