CC BY
8
DOI 10.31588/2413-4201-1883-239-3-161-165
УДК 619:616-099-02:615.9
ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭСВЕЛАНА НА МОДЕЛИ ЛЕКАРСТВЕННОГО
ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ
Кузьминова Е.В. - д.в.н., доцент, Семененко М.П. - д.в.н., доцент, Кононенко С.И. - д.с/х. н., профессор, Соболев В.А. - аспирант
ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»
Ключевые слова: эсвелан, гепатопротектор, печень, лекарственное поражение, лабораторные животные
Keywords: esvelan, hepatoprotector, liver, medicinal damage, laboratory animals
Современные экологические условия, увеличение интенсивности воздействия химико-физических и биологических факторов, а также массовое применение лекарственных препаратов создают предпосылки к росту гепатопатий у животных. Наиболее часто лекарственно-индуцированные поражения печени связывают с приемом антимикробных и нестероидных противовоспалительных средств. Из этой группы к веществам, оказывающим негативное воздействие на гепатобилиарную систему и способным блокировать ферментную систему гепатоцитов, относятся препараты тетрациклинового ряда. Поэтому тетрациклиновое поражение печени у лабораторных животных используется в фармакологических экспериментах при изучении лекарственных препаратов гепа-топротективного профиля [2].
В основе лекарственного поражения печени лежат процессы активации свобод-норадикального окисления, что вызывает нарушение процессов обмена веществ и энергии в организме, ведет к деструкции и дестабилизации клеточных мембран гепа-тоцитов с развитием ферментемии и цито-токсических эффектов [5]. С учетом этого, в Краснодарском научном центре по зоотехнии и ветеринарии разработан гепато-протекторный препарат эсвелан, комплексное средство для нормализации метаболизма, функции и структуры паренхимы печени у животных. В его состав входят компоненты с доказанной антиок-сидантной активностью - экстракт расто-ропши, дигидрокверцетин и лецитин.
Действующим веществом экстракта расторопши пятнистой является силима-рин, который, взаимодействуя с активными формами кислорода и другими радикалами, способен ингибировать перекис-ное окисление липидов, стабилизировать структуру и улучшать функцию мембран гепатоцитов. Антиоксидантный эффект силимарина также достигается за счет повышения концентрации глютатиона и повышения активности супероксиддисму-тазы [1, 4].
Дигидрокверцетин - антиоксидант, уникальный природный акцептор свободных радикалов кислорода. Кроме того, является мощным гепатопротектором, радиопротектором, обладает противовоспалительными, обезболивающими и иммунокорригирующими свойствами [7]. Лецитины - название группы жиро-подобных веществ, представляющих собой смесь фосфолипидов с триглицеридами. Их гепатопротективное действие достигается путем непосредственного встраивания в фосфолипидную структуру поврежденных печеночных клеток, замещения дефектов и восстановления барьерной функции липидного бислоя мембран. Одним из важнейших свойств лецитина является защита клеток от токсикантов, которое частично реализуется за счет ингибирования процессов перекисного окисления липи-дов. Фосфолипиды, восстанавливая структуру полиненасыщенных жирных кислот в мембране гепатоцитов, уменьшают доступ кислорода к ним, тем самым, снижая скорость зарождения свободных радикалов [6]. Целью исследований явилась оценка
эффективности препарата эсвелан при экспериментальном лекарственно-индуцированном поражении печени у лабораторных животных.
Материал и методы исследований. При изучении фармакологических свойств эсвелана экспериментальное поражение печени у животных вызывали внутрижелудочным введением лабораторным крысам тетрациклина гидрохлорида в виде суспензии с Tween-80 (1:10) в дозе 0,5
г/кг массы тела ежедневно в течение 7 дней [3].
Эксперименты проводили на беспородных крысах, которых разделили на пять групп по 10 животных в каждой. При затравке крысам первых трех групп за час до применения антибиотика и в последующие 7 дней ежедневно внутрь вводили эсвелан в различных дозировках (схема опыта представлена в таблице 1).
Группы Условия эксперимента
1 - опытная тетрациклин + эсвелан в дозе 0,3 мл/кг массы тела
2 - опытная тетрациклин + эсвелан в дозе 0,5 мл/кг массы тела
3 - опытная тетрациклин + эсвелан в дозе 0,7 мл/кг массы тела
4 - контроль животные с поражением печени тетрациклином, без лечения
5 - интактная группа здоровые животные, у которых производилось изучение параметров системы крови и метаболизма для расчета «нормальных показателей»
Таблица 1 - Схема опыта по изучению фармакологических свойств эсвелана при экспериментальном поражении печени у животных (M±m; п=10)
В течение эксперимента проводили ежедневный клинический осмотр животных, взвешивание осуществлялось 3 раза -фоновое, в середине и в конце опыта.
Через сутки после завершающего введения гепатопротектора (15-й день опыта) у пяти животных из каждой группы проводили забор крови для лабораторного анализа. О степени поражения печени судили по активности ферментов (АсАТ -аспартатаминотрансферазы, АлАТ - ала-нинаминотрансферазы и ЩФ - щелочной фосфатазы) в сыворотке крови, учитывали изменения в содержании белкового и углеводного обменов, а также показателей продуктов липопероксидации. Лабораторные исследования проводились на биохимическом анализаторе «Vitalab Flexor» с помощью наборов фирмы «ELITech Clinical Systems». Уровень процессов перекис-ного окисления липидов (ПОЛ) определяли по ряду показателей - диеновые конъю-гаты (ДК), кетодиены (КД) и малоновый диальдегид (МДА) в тесте с тиобарбитуро-вой кислотой по методу Андреевой Л.И. (1988). Статистическую обработку данных проводили с помощью программы Statistica v. 6. Критерий достоверности определяли по таблице Стьюдента.
Результаты исследований. Установлено, что при экспериментальном поражении печени тетрациклином гибели животных не зарегистрировано ни в одной из групп.
У крыс в группе без лечения при клиническом обследовании были выявлены следующие проявления токсикоза: угнетение в течение второй половины опытного периода, снижение двигательной активности и реакции на внешние раздражители; взъерошенность, тусклость и загрязнение шерстного покрова; видимые слизистые оболочки со слабой степенью иктеричности. Потребление воды - в пределах нормы, корма - снижено.
Клинический осмотр опытных крыс первых трех опытных групп (с применением эсвелана) выявил следующее: состояние животных несколько угнетенное; потребление корма и воды не снижено; шерстный покров матовый, чистый, без алопеций, видимые слизистые оболочки розового цвета.
Специфических симптомов отравления не установлено. Динамика массы тела лабораторных крыс, участвующих в опыте, представлена в таблице 2.
Таблица 2 - Динамика массы крыс при изучении препарата эсвелан при тетрацикли-
новом поражении печени (M±m; n=10)
Группа Масса тела, г
начальная на 7 день на 14 день
1 - опытная 197,3±2,18 189,0±2,53 186,9±1,84
2 - опытная 201,4±3,26 193,0±2,55 190,6±1,77
3 - опытная 189,7±1,49 184,8±2,42 181,1±3,54
4 - контроль 192,6±3,44 181,5±3,15* 168,5±2,57**
5 - интактная группа 186,7±2,56 192,5±1,53 194,7±2,86
Примечание: различия достоверны (*р<0,05; **р>0,01) в сравнении с животными ин-тактной группы
Гравиметрические исследования показали, что у крыс четвертой группы (получавших только тетрациклин) на протяжении всего эксперимента регистрировалась потеря массы тела (достоверная разница на конец опыта составила 14,3%), тогда как в группах с применением эсве-лана к концу опытного периода вес животных хотя и снизился, но изменения были незначительные. При расчете процентов разница массы тела между фоновыми данными и показателями в конце опыта составила в среднем по группам: 1-я опытная -
5,7%; 2-я опытная - 5,6%; 3-я опытная -4,7%.
В группе интактных животных установлен положительный прирост массы тела с прибавкой в 4,3%. Моделирование токсического поражения печени у крыс, вызванного введением тетрациклина, привело к развитию деструкции гепатоцитов. Так, в активности ферментов-маркеров состояния печени экскреторных (ЩФ) и индикаторных (АсАТ и АлАТ), выявлено увеличение их концентрации, свидетельствующее о повреждении печени (табл. 3).
Таблица 3 - Влияние эсвелана на активность ферментов крови крыс при тетрацикли-новом поражении печени (М±т; п=5)
Группа Показатель, Ед/л
ЩФ АсАТ АлАТ
1 - опытная 428,2±11,7 118,7±3,9 40,3±2,4*
2 - опытная 421,2±9,9 111,4±4,5* 37,4±3,1**
3 - опытная 418,3±8,5 109,4±6,3** 39,0±2,5*
4 - контроль 470,2±16,3 139,8±5,7 53,7±3,6
5 - интактная группа 390,5±15,6 96,8±4,2 29,6±2,8
Примечание: различия достоверны (*р<0,05; **р>0,001) в сравнении с животными
группы
В уровне ферментов, свидетельствующих о развитии цитолиза, в группе крыс без лечения выявлено повышение активности АсАТ - в 1,5 раза и АлАТ - в 1,8 раза относительно интактных животных. В опытных группах при лечении эсвеланом, разница в содержании ферментов по отношению к контролю (4-я группа) составила: по АсАТ - 1-я - на 17,8%, 2-я - на 25,5% (р<0,05) и 3-я - на 27,8% (р>0,001); по АлАТ - 1-я - на 33,2% (р<0,05), 2-я на -43,6% (р>0,001) и 3-я - на 37,7% (р<0,05). Таким образом, в целом по группам, у жи-
вотных с экспериментальным лекарственно-индуцированным поражением печени выявлена доминанта АлАТ, которая относится к цитоплазматическим ферментам и ее уровень повышается при легких формах повреждения гепатоцитов.
Повышение активности ЩФ в опытных группах на 9,6% (первая группа), на 7,7% (вторая группа) и на 7,1% (третья группа) по отношению к интактной группе свидетельствует о незначительном развитии холестатических нарушений у животных, тогда как в контрольной группе без
лечения разница составила 20,4%. Изучение одного из ключевых показателей пигментного обмена - билирубина крови, достаточно информативного в отношении функционального состояния печени, позволило установить достоверное увеличение содержания этого соединения у крыс с тетрациклиновым поражением печени. Так, концентрация общего билирубина сыворотки крови крыс, получавших антибиотик в токсичной дозе, в конце опыта достоверно превышала данные интактных животных: 1-я группа - в 1,54 раза (р>0,01); 2-я группа - в 1,4 раза (р<0,05); 3-я группа - в 1,48 раз (р<0,05); 4-я группа - в 2,1 раза (р>0,001). Максимальная разница между группой с лечением и без, составила 56,3%, что свидетельствует об гепатопро-тективных свойствах эсвелана.
Результаты исследований ряда параметров белкового обмена свидетельствуют о нарушениях протеинового метаболизма у крыс с экспериментальной печеночной недостаточностью. К концу эксперимента в сыворотке крови животных 1 -4 групп содержание общего белка было ниже на 6,8%, 4,7%, 5,6% и 15,4% соответственно по группам в сравнении с показателями интактной группы крыс. Аналогичные изменения зарегистрированы и в концентрации мочевины, с максимальным снижением в группе без лечения - на 31,2%. Значимой разницы в углеводном обмене между группами не установлено. Вышеприведенные данные позволяют констатировать, что при токсическом воздействии антибиотика на организм подопытных крыс, у животных наблюдается выраженное нарушение протеинсинтетической функции печени, превентивное же воздействие эсвелана позволяет значительно снизить патологические процессы в гепатоци-тах. Метаболические расстройства организма экспериментальных животных, сопровождающие развитие поражения печени приводили к активации процессов ПОЛ, что отражалось в увеличении концентрации продуктов липопероксидации в опытных группах в сравнении с крысами без лечения: ДК - 1-я - на 22,2% (р>0,01), 2-я на - 37,5% (р<0,05) и 3-я на - 46,7% (р>0,001); КД - 1-я - на 5,6%, 2-я на -
18,7% (р<0,05) и 3-я на - 26,7% (р>0,01); МДА - 1-я на - 30,2% (р<0,05), 2-я на -38% (р<0,05) и 3-я на - 36,3% (р>0,01).
Заключение. Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать, что при интоксикации тетрациклином у крыс происходит повышение активности аминотрансфераз, свидетельствующее о повреждении мембран гепатоцитов, а также гибели клеток печени под действием антибиотика, приводящих к выходу внутриклеточных субстанций в кровь и лимфу.
Данный процесс сопровождается внутрипеченочным холестазом, нарушением протеинсинтетической функции печени и повышением процессов липопероксида-ции. Применение эсвелана улучшает биохимический гомеостаз и функционально-структурное состояние печени крыс на фоне токсического поражения.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Башкирова, Е.В. Изучение фарма-кодинамических параметров лекарственной формы на основе флаволигнанов рас-торопши пятнистой (Silybum marianum (L.) Gaerth) / Е.В. Башкирова, С.Н. Путина, А.А. Волков и др. // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. -2014. - № 2. - С. 6-10.
2. Еремина, Е.Ю. Лекарственные поражения печени / Е.Ю. Еремина // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. - 2012. -№ 1. - С. 6-25.
3. Макаренко, Т.Н. Разработка модели острого тетрациклинового гепатоза у крыс и получение его динамических предикторов / Т.Н. Макаренко, А.М. Дудченко, Л.Д. Лукьянова // Бюлл. экспериментальной биологии и медицины. - 1994. - № 12. - С. 603-606.
4. Медетханов, Ф.А. О перспективах использования экстрактов грибов в качестве стимуляторов роста и развития животных / Ф.А. Медетханов, А.С. Соловьева, Г.М. Ахметзянова, Е.О. Баканова, Е.А. Никитина, З.Г. Чурина // Ученые записки КГАВМ. - 2016. - Т. 228 (IV). - С. 71-73.
5. Медетханов, Ф.А. Сравнительная оценка влияния тимолизата и «Нормотро-фина» на организм лабораторных белых крыс / Ф.А. Медетханов // Ученые записки КГАВМ. - 2013. - Т. 213. - С. 146-151.
6. Томилина, С.А. Лекарственные препараты на основе фосфолипидов и их применение в медицинской практике (обзор) / С.А. Томилина, В.В. Малявина, А.М. Сам-пиев // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции.
7. Шаманаев, А.Ю. Антиоксидантная активность композиции дигидрокверце-тина с арабиногалактаном / А.Ю. Шама-наев, И.С. Иванов // Всероссийская молодежная научная конференция: «Молодежь и наука на Севере», Сыктывкар. - 2013. -
- 20017. - Вып. 62. - С.554-559.
С. 214.
ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭСВЕЛАНА НА МОДЕЛИ ЛЕКАРСТВЕННОГО
ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ
Кузьминова Е.В., Семененко М.П., Кононенко С.И., Соболев В.А.
Резюме
Изучена эффективность препарата эсвелан при экспериментальном лекарственно-индуцированном поражении печени у лабораторных животных. Полученные в модельном эксперименте данные выявили, что при интоксикации тетрациклином у крыс происходит повышение активности аминотрансфераз, свидетельствующее о повреждении мембран гепато-цитов, развивается внутрипеченочный холестаз, нарушается протеинсинтетическая функция печени, активизируются процессы липопероксидации. Применение эсвелана улучшает биохимический гомеостаз и функционально-структурное состояние печени крыс на фоне токсического поражения.
The efficiency of the preparation esvelan is studied in experimental preparation-induced liver damage in laboratory animals. The data obtained in the model experiment revealed that when intoxicating with tetracycline in rats, there is an increase in the activity of aminotransferases, indicating damage of the membranes of hepatocytes; intrahepatic cholestasis is developing, the protein synthetic function of the liver and lipid peroxidation are activated. The use of esvelan improves biochemical homeostasis and the functional and structural state of liver of rats on the background of toxic damage.
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ГЕПАТОПАТИИ, ИНДУЦИРОВАННОЙ ПРИЕМОМ КАРПРОФЕНА
STUDY OF THE EFFICIENCY OF ESVELAN ON A MODEL OF LIVER
MEDICINAL DAMAGE
Kuzminova E.V., Semenenko M.P., Kononenko S.I., Sobolev V.A.
Summary
DOI 10.31588/2413-4201-1883-239-3-165-171
УДК 619: 615.276: 615.065
Лазаренко Л.В. - к.в.н.
ФКОУ ВО «Пермский институт ФСИН России»
Ключевые слова: НПВП-гепатопатия, карпрофен, фактор некроза опухоли а Keywords: NSAIDs-hepatopathy, carprofen, tumor necrosis factor а
Печень является основным органом, ется, что не существует лекарств, которые
в котором происходит метаболизм боль- в определенных условиях не вызывали бы
шинства лекарственных веществ. Счита- повреждение печени [9]. На сегодняшний
