CC BY
14
6. Томилина, С.А. Лекарственные препараты на основе фосфолипидов и их применение в медицинской практике (обзор) / С.А. Томилина, В.В. Малявина, А.М. Сам-пиев // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции.
7. Шаманаев, А.Ю. Антиоксидантная активность композиции дигидрокверце-тина с арабиногалактаном / А.Ю. Шама-наев, И.С. Иванов // Всероссийская молодежная научная конференция: «Молодежь и наука на Севере», Сыктывкар. - 2013. -
- 20017. - Вып. 62. - С.554-559.
С. 214.
ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭСВЕЛАНА НА МОДЕЛИ ЛЕКАРСТВЕННОГО
ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ
Кузьминова Е.В., Семененко М.П., Кононенко С.И., Соболев В.А.
Резюме
Изучена эффективность препарата эсвелан при экспериментальном лекарственно-индуцированном поражении печени у лабораторных животных. Полученные в модельном эксперименте данные выявили, что при интоксикации тетрациклином у крыс происходит повышение активности аминотрансфераз, свидетельствующее о повреждении мембран гепато-цитов, развивается внутрипеченочный холестаз, нарушается протеинсинтетическая функция печени, активизируются процессы липопероксидации. Применение эсвелана улучшает биохимический гомеостаз и функционально-структурное состояние печени крыс на фоне токсического поражения.
The efficiency of the preparation esvelan is studied in experimental preparation-induced liver damage in laboratory animals. The data obtained in the model experiment revealed that when intoxicating with tetracycline in rats, there is an increase in the activity of aminotransferases, indicating damage of the membranes of hepatocytes; intrahepatic cholestasis is developing, the protein synthetic function of the liver and lipid peroxidation are activated. The use of esvelan improves biochemical homeostasis and the functional and structural state of liver of rats on the background of toxic damage.
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ГЕПАТОПАТИИ, ИНДУЦИРОВАННОЙ ПРИЕМОМ КАРПРОФЕНА
STUDY OF THE EFFICIENCY OF ESVELAN ON A MODEL OF LIVER
MEDICINAL DAMAGE
Kuzminova E.V., Semenenko M.P., Kononenko S.I., Sobolev V.A.
Summary
DOI 10.31588/2413-4201-1883-239-3-165-171
УДК 619: 615.276: 615.065
Лазаренко Л.В. - к.в.н.
ФКОУ ВО «Пермский институт ФСИН России»
Ключевые слова: НПВП-гепатопатия, карпрофен, фактор некроза опухоли а Keywords: NSAIDs-hepatopathy, carprofen, tumor necrosis factor а
Печень является основным органом, ется, что не существует лекарств, которые
в котором происходит метаболизм боль- в определенных условиях не вызывали бы
шинства лекарственных веществ. Счита- повреждение печени [9]. На сегодняшний
день все больше специалистов приходят к выводу об очевидной взаимосвязи нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) и гепатотоксичности [4]. На основании изучения негативного влияния препаратов данной группы на печень был сделан вывод о том, что почти все современные НПВП обладают гепатотоксич-ностью, выраженной количественно в большей или меньшей степени [14, 15]. НПВП широко применяются в ветеринарной клинической практике. Карпрофен относится к селективным НПВП, влияет преимущественно на фермент циклоокси-геназу-2 (ЦОГ-2) [11]. Имеются сведения, что использование карпрофена у животных сопряжено с определенным риском побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта, меньше информации имеется о гепатотоксическом действии карпрофена [5]. В настоящее время исследователи выделяют следующие механизмы медикаментозного поражения печени: прямое токсическое действие препарата на клетки печени, токсическое действие метаболитов лекарственных средств, а также иммунные и аллергические поражения печени [3, 9]. Несмотря на большое количество исследований, посвященных проблеме НПВП-индуцированной гепатотоксич-ности, вопрос о механизме повреждения печени на клеточном и субклеточном уровнях при данной патологии сегодня остается открытым.
Особый интерес в патогенезе НПВП-гепатопатии представляет участие провоспалительных цитокинов, к группе которых относится фактор некроза опухоли а (ФНО а, TNF а). ФНО а синтезируется несколькими типами клеток (преимущественно макрофагами), обладает плейо-тропным действием - участвует во многих клеточных процессах. Действие ФНО а на клеточные реакции осуществляется через специфические рецепторы, локализующиеся на мембране клетки [1].
У цитокинов доминирует паракрин-ное и аутокринное действие на клетки тканей; при накоплении некоторых цитоки-нов, в том числе ФНО а, в крови проявляется их эндокринное действие. При эндокринных эффектах цитокинов органами
мишенями являются печень, гипоталамус, костный мозг [12]. На всех этапах формирования иммунного ответа и воспаления ФНО а выступает в качестве одного из основных регулирующих белков. Избыточная продукция этого цитокина вызывает цитотоксический эффект у клеток тканей [1, 2]. Таким образом, изучение роли ФНО а в патогенезе НПВП-гепатопатии обеспечит лучшее понимание факторов риска и будет способствовать разработке путей направленной патогенетической коррекции повреждений печени у животных.
Цель исследований - изучить участие фактора некроза опухоли (ФНО а) в развитии гепатопатии, индуцированной длительным приемом карпрофена у экспериментальных животных (крыс).
Материал и методы исследований. Для моделирования НПВП-индуцированного поражения печени использовали нелинейных белых крыс (самцы и самки) c массой тела 200-250 г. Карпрофен (препарат Римадил Р, Pfizer Animal Health, США) вводили пероральным способом в течение 21 дня. Сформировали четыре экспериментальные группы, которым применяли препарат в следующих дозах: 4 мг/кг (терапевтическая доза, рекомендованная производителем, n=26); 8 мг/кг (n=28), 20 мг/кг (n=22), 40 мг/кг (n=24). Препарат давали на фоне обычного кормового режима один раз в день за час до кормления. Эксперименты выполнены в соответствии с «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации» (утвержденными приказом Министерства здравоохранения РФ № 708 от 23 августа 2010г.) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.
Гистологическое исследование выполнено стандартными методиками, срезы окрашивали гематоксилином и эозином [10]. При исследовании препаратов учитывали характер гистопатологических изменений. Оценку выявленных нарушений проводили, учитывая процентную долю животных в группе, у которых наблюдались гистологические нарушения, также
учитывали степень повреждений паренхимы печени.
Для иммуногистохимических исследований использовали образцы печени от животных с НПВП-индуцированной ге-патопатией, изучали проявления экспрессии рецепторов ФНО а (TNFaRl). Для исследований использовали маркированные антитела TNFR1 (poly) 1GG pl, bs-2941R, Rabbit Anti-TNF Receptor I Polyclonal Antibody (Bioss), видоспецифичные к антигенам тканей крысы. Для выявления антител применяли системы детекции Uno Vue detection system, 1GG tests, UMR 1GGPD, использовали стекла с полилизино-вым покрытием Menzel.
Оценку проводили по выявлению антигенпозитивных клеток, которые идентифицировали по коричневому окрашиванию при просмотре препаратов на светооптическом уровне. Результаты реакции оценивались полуколичественным методом по интенсивности окрашивания -в «крестах» и по числу позитивно окрашенных клеток - в баллах. Выраженность экспрессии маркеров «в крестах» оценивали, просматривая подряд от 10 до 20 по-
Из обнаруженных видов нарушений, наиболее выраженными были сосудистые расстройства, которые проявлялись полнокровием центральных вен печеночных долек и расширением синусоидных капилляров. Данные нарушения встречались у всех животных опытных групп, независимо от дозировки карпрофена. У групп, получав-
лей зрения в каждом гистологическом срезе. В зависимости от интенсивности окрашивания, производили оценку от слабоположительной (+) до резко положительной (++++). Незначительное очаговое окрашивание оценивали на «+», отсутствие окрашивания обозначали как отрицательный результат (-) [7]. Оценка экспрессии маркеров проводилась по 6-ти балльной шкале: 2 балла - до 20% окрашенных клеток; 4 балла - от 20 до 40% окрашенных клеток; 6 баллов - более 40% окрашенных клеток [6].
Результаты, полученные при проведении исследования образцов печени от животных экспериментальных групп, сравнивали с результатами, полученными при исследовании биоматериала, полученного от интактных животных (контрольная группа, п=21). Для проведения статистического анализа использован критерий Стьюдента.
Результаты исследований. При просмотре гистологических препаратов печени наблюдали патоморфологические изменения, характерные для токсического поражения органа (табл. 1).
ших дозы препарата выше терапевтической, наблюдалось полнокровие сосудов междольковых триад.
Зернистая дистрофия гепатоцитов проявлялась у животных всех опытных групп. У группы, получавшей пятикратную дозировку карпрофена, наблюдались признаки вакуольной и крупнокапельной жи-
Таблица 1 - Гистопатологические изменения в паренхиме печени у животных опыт-
ных групп, получавших карпрофен
Признак Опытные группы, % животных в группе
доза 4 мг/кг доза 8 мг/кг доза 20 мг/кг доза 40 мг/кг
Полнокровие центральных вен 1GG 1GG 1GG 1GG
Расширение синусоидных капилляров 1GG 1GG 1GG 1GG
Полнокровие сосудов триад - 5G* 1GG* 1GG*
Зернистая дистрофия 8G,7 1GG 1GG 1GG
Вакуольная дистрофия - - 5G* -
Некрозы 38,5 1GG* 1GG* 1GG*
Двуядерные клетки б1,5 1GG* 1GG* 1GG*
Жировая крупнокапельная дистрофия - - 5G* -
*p<0,05 по отношению к терапевтической дозе (4 мг/кг).
ровой дистрофии гепатоцитов (единичные клетки). Дистрофические изменения клеток сопровождались некрозами паренхимы на ограниченных участках; в местах некроза находили большое количество дву-ядерных клеток.
Экспрессия Т^аЯ1 в паренхиме печени. Оценку экспрессии TNFaR1 проводили по двум критериям: интенсивности окрашивания, которая характеризует интенсивность экспрессии рецепторов на клеточной мембране, и числу позитивно
У животных всех опытных групп, получавших карпрофен, наблюдали увеличение количества позитивно окрашенных клеток в паренхиме печени в среднем в 3,7 раза, по сравнению с интактными животными, при этом интенсивность окрашивания в группах, получавших различную дозу препарата, была неодинаковой. Наибольшая интенсивность окраски (++++), характеризующая высокий уровень экспрессии рецепторов, отмечалась у животных, получавших двукратную дозу карпрофена. Окрашивание клеток у животных, получавших пяти- и десятикратную дозировку было существенно ниже (++). Выявленное нами при изучении патогенеза НПВП-гепатопатии участие ФНО a показывает присутствие иммунного компонента в развитии процесса.
В научной литературе имеются сведения, что развитие гепатопатий, связанной с применением НПВП, сопровождается как иммунологическими, так и идиосинкратическими реакциями [13, 15]. В
окрашенных клеток (количественная характеристика действия ФНО а на печень). Проявления экспрессии TNFaR1 в паренхиме печени от опытных животных сравнивали с материалом, полученным от интактных животных. При просмотре препаратов у животных контрольной группы (гистологическая норма), TNFaR1-пози-тивные клетки в гепатоцитах и эпителии желчных протоков портальных трактов обнаруживались лишь в качестве единичных окрашенных клеток - «±» (табл. 2).
свою очередь, исследования, посвященные изучению патогенеза болезней печени у человека показали, что ФНО а играет роль в развитии различных заболеваний: хронических гепатитов В и С, алкогольного гепатита, холестаза различной этиологии [1]. В исследованиях на экспериментальных моделях мышей было продемонстрировано участие ФНО а в индукции развития аутоиммунного гепатита, причем, применение ингибиторов ФНО а препятствовало его развитию [1]. В литературе дано описание нескольких сигнальных путей, через которые ФНО а реализует свое действие на клетку, в том числе пути активации апоптоза [1, 2]. ФНО а действует на клетку-мишень через экспрессирующиеся на ее поверхности рецепторы (TNFaR1), которые содержат в своей структуре внутриклеточный домен смерти (DD, death domain). В результате взаимодействия ФНО а с рецептором клетки происходит мобилизация TNFR-ассоциированного белка домена смерти (TRADD),
Таблица 2 - Результаты полуколичественной оценки экспрессии TNFaRl в паренхиме
печени экспериментальных животных
Опытная группа Полуколичественная оценка экспрессии TNF-aR1
в «+» (оценка интенсивности окрашивания) в баллах (по числу позитивно окрашенных клеток)
Интактные животные ± 1,79 ± 0,14
доза 4,0 мг/кг (терапевтическая) +++ 5,93±0,54* (р=0,000)
доза 8,0 мг/кг ++++ 5,98±0,67* (р=0,000)
доза 20,0 мг/кг ++ 5,81±0,74* (р=0,000)
доза 40,0 мг/кг ++ 5,73±0,56* (р=0,000)
* по отношению к количеству TNFaR1-позитивных клеток в паренхиме печени у жи-
вотных контрольной группы.
в дальнейшем сигнал передается на Fas-ассоциированный с доменом смерти белок (FADD), который последовательно активирует каспазы-8 и каспазы-3 и вызывает апоптоз клетки [1, 2].
Предполагается, что иммунологические реакции при лекарственных гепа-топатиях могут быть обусловлены продуктами метаболизма, которые образуются в результате соединения лекарственного препарата с гемсодержащим цитохромом P-450, и затем в виде везикул мигрируют к клеточной оболочке. Эти соединения могут быть причинами многогранного иммунного ответа, включающего цитолити-ческие Т-лимфоциты и цитокины. Происходящая при этом активация ФНО a является триггерным фактором для запуска каскада каспаз, который заканчивается программированным апоптозом клеток с потерей ядерного хроматина [9].
Проведенные нами гистологические исследования выявили характерные изменения в печени у животных, получавших карпрофен, которые встречаются при ее токсическом поражении; при оценке степени поражения отмечался дозозависимый эффект. Подобная закономерность проявления гистологических и иммуногистохи-мических изменений в печени наблюдалась нами ранее, при моделировании НПВП-гепатопатии, индуцированной приемом нимесулида [8].
Проявляющая экспрессия TNFaRl свидетельствует о готовности гепатоцитов к апоптозу, обусловленному действием цитокина. В представленных результатах исследований показано, что проявления экспрессии рецепторов обнаруживались у животных, получавших препарат, начиная с терапевтической дозы. Более выраженной экспрессия TNFaR1 была в паренхиме печени животных, получавших двукратную дозу карпрофена. Такая ситуация может быть обусловлена большей морфологической сохранностью печени. Тогда как, низкий уровень экспрессии TNFaRl у животных, получавших пяти- и десятикратную дозу препарата, может быть связан с повреждением клеточной мембраны гепатоцитов и наличием обширных некрозов, развитие которых может происходить
из-за прямого токсического действия кар-профена на печень.
Заключение. Результаты проведенных исследований продемонстрировали участие фактора некроза опухоли a (иммунного компонента) в патогенезе НПВП-гепатопатии, индуцированной длительным приемом карпрофена. Иммунопозитив-ность паренхимы печени, указывающая на экспрессию TNFaRl, свидетельствует о готовности гепатоцитов к апоптозу, обусловленному действием фактора некроза опухоли a. При анализе результатов обнаружено, что как морфологические нарушения паренхимы печени, так и степень проявления экспрессии TNFaR1 имеют дозо-зависимый эффект.
Наибольшая экспрессия TNFaRl отмечалась у животных, получавших двукратную дозу карпрофена, что может быть связано с большей морфологической сохранностью печени. У животных, получавших высокие дозы препарата, снижение экспрессии может быть обусловлено повреждением мембраны гепатоцитов и развитием некрозов.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Барановский, А.Ю. Роль фактора некроза опухоли альфа в развитии аутоиммунной патологии печени: нерешенная проблема / А.Ю. Барановский, Н.В. Марченко, У.А. Мительглик, К.Л. Райхельсон // Практическая медицина. - 2014. - № 1 (77). - С. 15-19.
2. Воронина, Е.В. Роль фактора некроза опухолей-альфа в иммунопатогенезе заболеваний различной этиологии и его значимость в развитии антицитокиновой терапии моноклональными антителами / Е.В. Воронина, Н.В. Лобанова, И.Р. Яхин и др. // Медицинская иммунология. - 2018. -№ 20(6). - С. 797-806.
3. Галимова, С.Ф. Лекарственные поражения печени (Ч.1) / С.Ф. Галимова // Трансплантология. - 2011. - №1. - С. 1322.
4. Жолобова, Е.С. Гепатотоксичность нестероидных противовоспалительных препаратов, применяемых в детской ревматологии / Е.С. Жолобова, О.Ю. Коно-пелько, З.В. Гешева // Педиатрия. - 2009. -Т. 88. № 5. - С. 155-160.
5. Кемельман, Е.Л. Оценка частоты возникновения гастроэнтерологических осложнений при назначении собакам кар-профена в комбинации с омепразолом / Е.Л. Кемельман, К.С. Варенов, А.А. Архи-пова // Российский ветеринарный журнал.
- 2015. - №1. - С. 16-19.
6. Коган, Е.А. Автономность роста очагов аденомиоза: иммуногистохимиче-ские особенности экспрессии маркеров / Е.А. Коган, Н.В. Низяева, Т.А. Демура и др. // Medline.ru. Иммунология. - 2011. - № 1. - С. 311-325.
7. Козлова, И.В. Гастропатия, индуцированная нестероидными противовоспалительными препаратами, у больных остео-артрозом: роль некоторых факторов диффузной эндокринной системы желудка в ее возникновении / И.В. Козлова, Т.Е. Липатова, Н.Г. Афонина, И.М. Кветной // Российский журнал гастроэнтерологии, гепа-тологии, колонопроктологии. - 2006. - №1.
- С. 47-53.
8. Лазаренко, Л.В. Фактор некроза опухоли в патогенезе НПВП-ассоциирова-ной гепатопатии / Л.В. Лазаренко, П.В. Косарева, Е.И. Самоделкин, В.П. Хо-ринко // Журнал анатомии и гистопатологии. - 2017. - Т. 6. - № 3. - С 50-55.
9. Полунина, Т.Е. Лекарственные поражения печени / Т.Е. Полунина,
И.В. Маев // Гастроэнтерология. Приложение к журналу Consilium medicum. - 2011.
- № 2. - С. 54-60.
10. Саркисов, Д.С. Микроскопическая техника: руководство для врачей и лаборантов / Д.С. Саркисов, Ю.Л. Перов. - М.: «Медицина», 1996. - 544с.
11. Справочник Видаль 2012. Лекарственные препараты в России. Vidal 2012. -М.: АстраФармСервис. - 2012. - 1664 с.
12. Черешнев, В.А. Иммунология воспаления: роль цитокинов / В.А. Черешнев, Е.Ю. Гусев // Медицинская иммунология.
- 2001. - Т. 3. - № 3. - С. 361-368.
13. Greaves, R.R. Inadvertent diclofenac rechallenge from generic and non-generic prescribing, leading to liver transplantation for fulminant liver failure / R.R. Greaves, A. Agarwal, D. Patch et al. // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. - 2001. - Vol. 13. -P. 71-73.
14. Enescu, A. Drug-induced hepatitis -morphological and ultrastructural aspects / A. Enescu, P. Mitrut, E. Buteica et al. // Romanian Journal of Morphology and Embryology.
- 2007. - № 48 (4). - P. 449-454.
15. O'Connor, N. Hepatocellular damage from non-steroidal anti-inflammatory drugs / N. O'Connor, P.I. Dargan, A.L. Jones // Q. J. Med. - 2003. - Vol. 96. - P. 787-791.
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ГЕПАТОПАТИИ, ИНДУЦИРОВАННОЙ ПРИЕМОМ КАРПРОФЕНА
Лазаренко Л.В.
Резюме
В статье изложены результаты экспериментальных исследований, целью которых было изучение участия провоспалительного цитокина - фактора некроза опухоли а - в развитии гепатопатии, возникающей вследствие длительного приема карпрофена. Моделирование НПВП-индуцированного поражения печени у нелинейных белых крыс осуществляли перо-ральным введением карпрофена в разных дозах. Роль фактора некроза опухоли в развитии гепатопатии определяли при исследовании иммуногистохимической экспрессии рецепторов фактора некроза опухоли а (TNFаR1) с использованием антител Т№^1. При гистологическом исследовании печени обнаружены изменения, характерные для токсического поражения, при этом степень поражения зависит от дозы препарата. Высокая экспрессия TNFaR1 в паренхиме печени отмечалась у животных опытных групп, получавших терапевтическую и двукратную дозу карпрофена, что указывает на готовность гепатоцитов к апоптозу, обусловленному действием цитокина. Снижение экспрессии TNFaR1 у экспериментальных животных, получавших высокие дозы препарата, связано с повреждением мембраны гепатоцитов и преобладанием некрозов в паренхиме печени.
IMMUNOLOGICAL ASPECTS OF EXPERIMENTAL HEPATOPATHY INDUCED BY
CARPROPHEN ACCEPTANCE
Lazarenko L.V.
Summary
The article presents the results of experimental studies, the purpose of which was to study the participation of proinflammatory cytokine - tumor necrosis factor a - in the development of hepatopathy, resulting from prolonged use of carprofen. Simulation of NSAID-induced liver damage in non-linear white rats was performed by oral administration of carprofen in different doses. The role of tumor necrosis factor in the development of hepatopathy was determined in the study of the immunohistochemical expression of the receptor for tumor necrosis factor a (TNFaRl) using antibodies TNFR1. Histological examination of the liver tissue revealed changes characteristic of toxic damage, and the degree of liver tissue damage depends on the dose of the drug. High expression of TNFaRl in liver tissue is observed in animals of the experimental groups receiving a therapeutic and double dose of caprofen, which indicates that hepatocytes are ready for apoptosis due to the action of cytokine. Reduced expression of TNFaRl in experimental animals treated with high doses of the drug is associated with damage to the hepatocyte membrane and the predominance of necrosis in the liver parenchyma.
DOI 10.31588/2413-4201-1883-239-3-171-176
УДК 636.5.034:615.33:591.111.1
ВЛИЯНИЕ ЦИПРОФЛОКСАЦИНА НА ЛЕЙКОЦИТАРНУЮ ФОРМУЛУ КРОВИ ЦЫПЛЯТ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СТАФИЛОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
Моисеева А.А. - мл. науч. сотр., Скворцов В.Н. - д.в.н., Присный А.А. - д.б.н., вед. науч. сотр.
Белгородский филиал ФГБНУ «Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и ЯР.
Коваленко Российской академии наук»
Ключевые слова: фторхинолоны, ципрофлоксацин, цыплята, кровь, инфекция, лей-
коциты
Keywords: fluoroquinolones, ciprofloxacin, chickens, blood, infection, leukocytes
Содержание большого поголовья птицы в условиях тесных небольших производственных площадок, на современных крупных птицефабриках, приводит к быстрому возникновению и распространению инфекционных заболеваний. Стремительно развивающиеся инфекции являются причиной больших производственных потерь. Заболевания бактериальной природы вызывают снижение продуктивности и увеличение отхода птицы, что наносит существенный ущерб птицеводству [7]. Среди инфекционных заболеваний на птицефабриках часто встречается стафило-коккоз птиц. Несмотря на широкий спектр лечебных и дезинфицирующих средств
стафилококковые инфекции у птиц требуют длительного, дорогостоящего и высококвалифицированного лечения. Поэтому проблемы профилактики, диагностики и лечения стафилококкоза у сельскохозяйственной птицы неизменно сохраняет актуальность. Одной из причин роста заболеваемости стафилококковыми инфекциями является высокая устойчивость и адаптивность микроорганизмов к новым лекарственным препаратам. В этих условиях возрастает роль ветеринарных мероприятий, направленных на снижение потерь в производстве. В настоящее время в птицеводстве широко используются антимикробные химиотерапевтические сред-
