ИЗУЧЕНИЕ ДИНАМИКИ ИММУННОГО ОТВЕТА ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГРИППА И НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

УДК 619:616.98:578.832.1:636.52/.58:616-097.3

А.С. Иголкин, М.А. Циванюк, Т.Б. Манин, С.В. Фролов, С.К. Старов

ИЗУЧЕНИЕ ДИНАМИКИ ИММУННОГО ОТВЕТА ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГРИППА И НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ

Введение

Высокопатогенный грипп птиц (чума птиц, ВПГП) - крайне контагиозная, пан-тропная, системная болезнь домашних и диких птиц различных видов, способная протекать в форме эпизоотий и наносить большой экономический ущерб в сфере производства птицеводческой продукции и торговле [5]. Возбудителем заболевания является вирус семейства Ог-thomyxoviridae, рода Influenzaevirus, тип А [2]. По строению поверхностных гли-копротеинов вирусы гриппа птиц (ВПГ) разделяют на 16 подтипов по гемагглю-тинину (Н1-16) и 9 подтипов по нейрами-нидазе (N1-9) [1].

Ньюкаслская болезнь (псевдочума птиц, НБ) - высококонтагиозная вирусная болезнь птиц в основном отряда куриных, характеризующаяся поражением органов дыхания, пищеварительной и центральной нервной системы [3]. Возбудителем НБ является птичий парамиксовирус 1 (АРМУ-1). АРМУ объединены в род Лт1отгш семейства Paramyxoviridae [4]. Вирус НБ может широко варьировать по типу и остроте вызываемого заболевания. НБ зарегистрирована на всех континентах (кроме стран Океании) и наносит большой экономический ущерб.

Двумя основными направлениями осуществления биобезопасности Российской Федерации является недопущение заноса и профилактика особо опасных болезней животных на территории России. К таким заболеваниям относятся грипп птиц и болезнь Ньюкасла. Эти две вирусные инфекции птиц по классификации МЭБ входят в список особо опасных заболеваний и подлежат обязательному уведомлению. В РФ вакцинация промышленного поголовья против НБ является обязательной. Обычно для иммунизации поголовья в птицеводческих хозяйствах РФ применяют живые и инактивированные моно- и поливалентные вакцины против НБ. Вакцинация же, промышленного поголовья против ГП в РФ не проводится. Вспышки гриппа птиц в различных регионах РФ в 2005-2007 гг. подтвердили, насколько реальна опас-

ность заноса и возникновения очагов этой болезни на территории России. В дальнейшем вспышки ГП и НБ в РФ будут иметь серьёзные последствия как для промышленных птицепредприятий, так и для небольших фермерских хозяйств, т.к. их экономическая рентабельность в современных условиях будет поставлена под угрозу. Очевидно, что в сложившихся условиях существует актуальность разработки и испытания инактивированных ассоциированных вакцин против болезни Ньюкасла и гриппа птиц.

Материалы и методы Вакцины. В работе был использован вирус болезни Ньюкасла штамм «Ла-со-та», полученный на куриных эмбрионах с биологическим титром 10,5 лог2, инактиви-рованный аминоэтилэтиленимином (АЭ-ЭИ), в течение 24 часов при температуре +20-22° С. Также был использован штамм Н5Ш вируса ГП, полученный на SPF-ку-риных эмбрионах с титром инфекционной активности 10 лог2, инактивированный 10% бета-пропилактоном в конечной концентрации 0,5% при температуре +20-22° С, в течение 24 часов.

Для создания образцов вакцин использовали масляный адъювант Монтанид КА-70 («СЕППИК», Франция).

Животные. Для проведения опыта использовались цыплята 85-дневного возраста породы Хайсекс-коричневый, в количестве 50 голов. Птица была привита против гидроперикардита кур.

Диагностика. В диагностике использовали серологические методы: реакцию гемагглютинации (РГА) и реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), которые проводили по общепринятой методике с использованием панели специфических сывороток к болезни Ньюкасла шт. «Ла-сота» и вирусу гриппа птиц подтипа Н5.

Результаты и их обсуждение Полноту инактивации вирусов нью-каслской болезни и гриппа птиц определяли методом трехкратных пассажей на развивающихся эмбрионах СПФ-кур 11-суточ-ного возраста (ЛоЬшап», Германия).

В аллантоисной жидкости из зара-

Таблица 1

Уровень титров антител у цыплят в РТГА к вирусу ГП после однократной вакцинации

Наименование вакцины Титр антител, log2

через 7 дней через 14 дней через 21 день через 28 дней через 35 дней через 42 дня через 49 дней через 56 дней

Контроль 0 0 0 0 0 0 0 0

Моновалентная вакцина против ГП 0 7,125 4,875 6,125 3,875 5,825 6,25 5,375

Ассоциированная вакцина против ГП и НБ, соотн. 60/40 0 7,5 5,375 6,375 5,625 4,25 5 3,5

Ассоциированная вакцина против ГП и НБ, соотн. 50/50 0 7,825 5,5 7,125 6,25 4,5 5,5 4

Ассоциированная вакцина против ГП и НБ, соотн. 70/30 0 6,875 5,125 5,75 5,625 4,625 4 3

Таблица 2

Уровень титров антител у цыплят в РТГА к вирусу НБ после однократной вакцинации

Наименование вакцины Титр антител, log2

через 7 дней через 14 дней через 21 день через 28 дней через 35 дней через 42 дня через 49 дней через 56 дней

Контроль 4 3,5 4,5 5,5 7,5 7 8,5 6

Моновалентная вакцина против НБ 8,25 12 12 12 11,625 7,825 10,375 9,25

Ассоциированная вакцина против ГП и НБ, соотн. 60/40 6,75 10,125 10,5 10,875 10,25 8,5 9 10,25

Ассоциированная вакцина против ГП и НБ, соотн. 50/50 9,5 10 11,625 11,5 11,625 9 9,75 10,25

Ассоциированная вакцина против ГП и НБ, соотн. 70/30 6 9,5 10,375 10,875 10 7,875 9,25 8,5

женных эмбрионов всех трех пассажей отмечали отсутствие гемагглютинирую-щей активности.

Для проведения экспериментальных исследований было изготовлено два образца инактивированных моновакцин против НБ и ГП и три образца инктивирован-ных ассоциированных вакцин против НБ и ГП в процентном соотношении антигенов 40/60, 50/50, 30/70, соответственно. Полученную смесь объединяли с масляным адъювантом в соотношении 30:70 и эмульгировали в гомогенизаторе 8Цуегеоп 450 LS при температуре 4-12° С в течение 5 минут при 6000 об/мин.

Для определения фонового титра специфических антител выборочно были взяты образцы крови от 10 голов птиц для постановки РТГА. Цыплята оказались се-ронегативны к вирусу ГП и имели средний титр антител к вирусу НБ 3,6

Птица была разделена на шесть групп (10 голов - контроль, 5 групп по 8 голов) и

вакцинирована изготовленными экспериментальными образцами вакцин. Иммунизацию проводили во внутреннюю поверхность правого бедра в дозе 0,5 мл/гол.

Для определения иммунного статуса у экспериментальных цыплят после введения опытных образцов вакцин использовали РГА и РТГА по описанным методикам. Полученные результаты приведены в табл. 1 и 2.

Как показывают полученные экспериментальные данные (табл. 1 и 2), у вакцинированной птицы вырабатывались специфические антитела к возбудителю НБ и ГП уже на 7-е сутки наблюдения. Было установлено, что все исследуемые экспериментальные образцы вакцин индуцируют у однократно привитых цыплят формирование высокого уровня гуморального иммунитета к вирусу ГП и НБ уже через 14 суток после прививки. Пик показателей наблюдается к возбудителю ГП на 28 день, а к возбудителю НБ - на 35 сутки.

При дальнейшем исследовании уровень антител к обеим инфекциям постепенно снижался и на 56 сутки (период исследования) составил 4,1875±1,1875 к вирусу ГП, а к вирусу НБ - 9,375±0,875 Исследованиями установлено, что среди ассоциированных экспериментальных вакцин наиболее эффективный иммунный ответ у птицы вызывает образец с антигенным соотношением 50/50 к возбудителям ГП и НБ.

Также следует отметить, что общее состояние иммунизированных цыплят в течение всего периода наблюдений было удовлетворительным. Физиологические показатели у привитых цыплят не отличались от таковых у птиц контрольной группы.

Выводы

Таким образом, можно заключить, что экспериментальные образцы инактивиро-ванных ассоциированных вакцин против ГП и НБ с различным соотношением антигенов индуцируют у вакцинированного поголовья образование высокого уровня специфических антител к вирусу гриппа птиц и болезни Ньюкасла.

Образец экспериментальной инактиви-рованной ассоциированной вакцины против ГП и НБ с антигенным соотношением 50/50 обладает наибольшей антигенной активностью и может быть использован для дальнейшего изучения и возможности внедрения в ветеринарную практику.

РЕЗЮМЕ

В статье представлены результаты исследовании динамики иммунного ответа у птиц после введения экспериментальных образцов вакцин против гриппа птиц (ГП) и болезни Ньюкасла (НБ). В опыте были использованы две моновалентные вакцины против ГП и НБ и три образца ассоциированных вакцин против ГП и НБ с антигенным соотношением 60/40, 50/50 и 70/30, соответственно. По результатам проведенных исследований было установлено, что образец вакцины с антигенным соотношением 50/50 обладает наибольшей антигенной активностью и может быть использован для дальнейшего изучения.

SUMMARY

In this paper the results of investigations aimed at studying the immune response dynamics in poultry after administration of the experimental vaccine against avian influenza and Newcastle disease are shown. Two monovalent vaccines against avian influenza and Newcastle disease and three samples of associated vaccines against avian influenza and Newcastle disease with the antigenic ratio of 60/40; 50/50 and 70/30, respectively, were used in the trial. The results of the trial suggest that the vaccine sample with the antigenic ratio of 50/50 possesses the greatest antigenic activity and can be used for further investigations.

Литература

1. Грипп: обзор литературы / Н.С. Дудникова, В.В. son // Diseases of Poultry. 11th ed. Ames, Iowa, 2003. Дрыгин, Л.О. Щербакова, А.В. Андриясов. Вла- P. 135-160.

димир, 2005. 59 с. 4. Highly pathogenic avian influenza // O.I.E. Manual of

2. Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных / А.А. Конопаткин, И.А. Бакулов, Я.В. Нуйкин [и др.]. М.: Колос, 1984. С. 457-466.

3. Swayne, D.E. Influenza / D.E. Swayne, D.A. Halvor-

Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. - Paris, 2004. Vol. 1. P. 258-269. 5. Mayo, M. A. Virus taxonomy-Houston 2002 / M. A. Mayo // Arch. Virol. 2002. Vol. 147. P. 1071-1076.

УДК 619:578.825.1: 57.082.26

Е.В. Курненкова, Ш.Н. Куляшбекова, Е.А. Кудакова, А.В. Борисов, М.И. Шульпин, В.В. Дрыгин

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ШТАММА Md5 ВИРУСА БОЛЕЗНИ МАРЕКА НА РАЗЛИЧНЫХ КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ

Введение

Для первичного выделения высоковирулентных вирусов болезни Марека (ВБМ) традиционно используют первичные культуры клеток почек куриных эмбрионов или цыплят, культуры фиброблас-тов куриных или утиных эмбрионов. Наилучшие результаты получают на куль-

турах клеток, приготовленных из тканей цыплят с генетически обусловленной высокой восприимчивостью к заражению вирусом болезни Марека [1, 3, 4, 6].

В 2006 году ФГУ «ВНИИЗЖ» был приобретен штамм Md5 высоковирулентного вируса болезни Марека (ввВБМ) из коллекции «Collection of animal viruses and an-