CC BY
6
зультаты определения АОХ и ЛХС позволяют не только оценить количество хлорорганики в природных и питьевых водах, но и получить определенную информацию об источниках и составе хлорорганических соединений. Обнаружение АОХ в речной воде и подземных водах предполагает присутствие хлорорганических соединений не только антропогенного, но и естественного происхождения.
Л итература
1. Грошева Е. И., Дубовенко Ж. В., Белявцева Г. В.. Бейм А. М. П Бумаж. пром-сть.— 1991.— № I,— С. 28— 29.
2. ГОСТ 2874—82. Вода питьевая. Гигиенические требования и контроль за качеством.
3. Дмитриев М. Т., Христова В. Ц Гиг. и сан.— 1991.— № 3,- С. 85.
4. Руководство по контролю качества питьевой воды. ВОЗ.— М„ 1986.
5. Cords-Tolle М„ Möbius Н. // Allg. Pap. Rdsch.1991 — Bd 115, N 11-12,- S. 304-308.
6. Csanady M.. Karpati L., Kady I. // Egeszseg. tudomany.— 1986,- Vol. 30, N 1,— P. 69—74.
7. Schnitzler M. // Lab. Prax.— 1986 - Bd. 10, № 3,— S. 214—216, 218, 221.
8. Ekland G., Jeffsson В.. Bjorseth J. 11 J. Chromatogr.— 1978,- Vol. 150, N 1,— P. 161 — 169.
9. Grimvall А. Ц Tappi J.— 1991,— Vol. 74, N 5,— P. 197— 203.
10. Jokela J., Satkonoja-Salonen M. S., Elomaa E. // Aqua.— 1992,— Vol. 41, N 1,— P. 4—12.
11. Kringslad K. P.. Sousa F.. Stromberg L. M. // Environ. Sci. Technol.—1981 Vol. 15, N 5,—P. 562—566.
12. Kringslad K. P.. S»usa F.. Stromberg L. M. Ц Ibid.— 1985.— Vol. 19, N 5.— P. 427—431.
13. Reckhow D. Ц Ibid.—1990,—Vol. 24, N II,—P. 1655— 1664.
14. SCAN-W-9:89. // Paper! ja Puu — Paper and Timber.— 1989,—Vol. 71, № 3.
15. Water Waste Treat. (Lond.).—1990,—Vol. 33, N 10.— P. 24. // РЖ Химия,— 1991,— № 2И276.
16. Wigilius В.. Allard В.. Boren H., Grimvall A. // Chemosphe-re.- 1988,- Vol. 17, N 10,- P. 1985-1994.
Поступила 09.07.93
Summary. Adsorption of chlorinated organic compounds (COC) on activated charcoal and determination of ionic chlorine by gas chromatography were used for assessment of water pollution by COC. Content of adsorbing COC was the following (ng CI-/1): in river water 10-470, in drinking water 10-1180, in underground water 90-150; content of volatile COC was (ng Cl~/\): in drinking water 2-117, in underground water 14-16.
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ. 1993 УДК 579.843.1:579.2531.083.12(477)
Т. А. Кудрякова, Е. И. Евтеева, Л. Д. Македонова, С. Р. Саямов, О. В. Дудкина, Е. В. Смирнова
ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ХОЛЕРНЫХ ФАГОВ И ШТАММОВ ВИБРИОНОВ ЭЛЬ-ТОР, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ ДОНЕЦКА
Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт
Анализ литературы свидетельствует, что поиск холерных фагов в объектах внешней среды используется как дополнительный метод эпидемиологического надзора по холере на территориях,где были вспышки этого заболевания [3—5]. Выявление источников контаминации холерными вибрионами поверхностных водоемов Донецкой обл. и определение эпидемиологической значимости водопользования являются актуальной проблемой, так как штаммы холерных вибрионов на данной территории обнаруживаются более 10 лет, а. условия, обеспечивающие длительное сохранение их в воде открытых водоемов или сточных водах, при этой не выявлены. С учетом того что холерные фаги в отсутствие хозяина могут сохраняться в сточной воде длительное время, их обнаружение в эпидемический и межэпидемический сезоны служит показателем контаминация объектов холерными вибрионами.
Цель работы — исследование воды открытых водоемов и сточной воды Донецка на вибрио-фаги и изучение их биологических свойств. В задачу исследования входила также характеристика фаголизабельных свойств и лизогении штаммов холерных вибрионов, поступивших из Донецкой обл. в этот период.
В исследованиях по выявлению фагов использовали 44 пробы сточной воды и воды открытых водоемов, отобранных лабораторией особо опасных инфекций Донецкого государственного объединения защиты здоровья населения. Индикаторными штаммами служили V. сИо1егае 145, V. еНог 75, V. еНог 208. Диапазон литической активности изучали на 148 штаммах холерных вибрионов 2 биоваров, 96 V. сИо1егае сероваров
02—080, 59 штаммах микроорганизмов близкородственных видов и родов. Кроме того, для определения фаготипа, лизогении, чувствительности к диагностическим холерным фагам были получены 17 штаммов вибрионов Эль-Тор, выделенных в Донецкой обл.
В Экспериментах использовали 0,7 и 1,5 % агары и бульон Мартена (рН 7,6—7,8).
Для выделения холерных фагов использовали 2 метода. 1-й метод: исследовали 1 пептонную воду, в которую была внесена вода (сточная, открытых водоемов) контролируемых территорий Донецка для проверки на вибриофлору. К этой пробе (5 мл) добавляли 1 мл хлороформа и после встряхивания супернатант оставляли в холодильнике при 4—6 °С. На индикаторные штаммы холерных вибрионов, засеянных двухслойным методом, наносили надосадочные жидкости из проб исследуемой воды. Посевы выращивали при 37 °С в течение 18—20 ч. 2-й метод: к 3-часовой бульонной культуре индикаторного штамма, засеянной в 100 мл бульона Мартена, добавляли по 0,1 мл надосадочной жидкости исследуемых проб, объединенных в 2 группы (по 22 пробы в каждой). Инкубировали в течение 5 сут при 37 °С, затем инактивировали бактерии хлороформом, центрифугировали и супернатанты проверяли на газоне индикаторных штаммов. Расшифровку проб, давших положительные результаты в группах хлороформатов, проводили путем повторного размножения фагов из каждой пробы индивидуально. Титры обнаруженных фагов проверяли по Грациа. Препараты фагов для электронной микроскопии готовили путем нанесения на дорожку фаголизиса бактерий капли дистилли-
рованной воды. Взвесь эмульсировали петлей и наносили на сетку-подложку, покрытую углеродной пленкой; контрастировали 2—3 % раствором уранилацетата и исследовали в электронном микроскопе ЛЕМ-100 [11]. Антифаговые сыворотки получали путем внутривенной иммунизации кроликов по методу Марьиной [6]. Для серологической идентификации выделенных фагов применяли антифаговые сыворотки к холерным фагам I—XI серологических типов. Минимальный латентный период внутриклеточного развития и средний урожай фагов в одиночном цикле определяли по Адамсу [1|. Для определения спектра литической активности фагов на газон испытуемого штамма, приготовленного в слое 0,7 % агара, наносили фаги штампом-репликатором. Результаты учитывали через 24 ч инкубирования при 37 °С. Влияние прогревания при 60, 65 °С на фаги изучали путем добавления 0,5 мл фага (106 — 107 БОЕ/мл) в 4,5 мл бульона и выдерживания при заданной температуре в течение 30 мин. Инактивирующее действие 15 и 30 % растворов мочевины исследовали в бульоне после суточного контакта. Сохранение фагов при разных значениях рН наблюдали в течение 15 и 30 дней. Для этого фаги разводили в 100 раз буферными растворами (рН 5,6, 6,6, 7,6, 8,6 и 9,4), запаивали в ампулы по 2 мл и хранили при 25 и 4 °С [12]. Воздействие на фаги УФ-лучей изучали, используя облучение лампой ПРК-2 фаголизатов, разведенных в 100 раз фосфатно-буферным раствором (1/15М), на расстоянии 150 см с экспозицией 60, 120 и 180 с. Во избежание фотореактивации все манипуляции проводили в затемненном помещении. Холерные монофаги ХДФ-3, 4, 5 применяли для определения вирулентности штаммов холерных вибрионов в комплексе с тестом гемолиза эритроцитов после изучения признаков биовара и серовара вибрионов Эль-Тор по общепринятой методике [2]. Для фаготипи-рования применяли 4-часовые бульонные культуры холерных вибрионов. Результаты учитывали через 18 ч выращивания при 37 °С.
На наличие холерных фагов было исследовано 44 супернатанта: 23 пробы сточной воды коллекторов хлопчатобумажного комбината (ХБК) и контрольно-пропускного фильтра, 18 проб воды открытых водоемов детской дачи «Солнышко» и 3 пробы воды без названия характера материала. При первичном исследовании надосадоч-ных жидкостей 17 проб были обнаружены едва заметные зоны лизиса на газоне индикаторной культуры Эль-Тор 75. В связи с этим в дальнейшем поиск проводили путем предварительного контакта исследуемого материала с тест-штаммами холерных вибрионов. В 2 пробах (№ 389/23 и 499/37) сточной воды коллектора ХБК, отобранных в августе и октябре, были обнаружены фаги на индикаторном штамме V. еНог 208, обозначенные 23 и 37 соответственно. После размножения их титры составляли п-10'— 108 БОЕ/мл. Фаги 23 и 37 образовывали негативные колонии: прозрачные, мелкие диаметром 1 мм и полупрозрачные, 2—3 мм с зоной неполного лизиса по краю. При электронно-микроскопическом изучении фагочастицы имели многогранную головку и короткий отросток, что позволило отнести их к III морфологической
группе, по классификации А. С. Тихоненко [11]. Фаги принадлежали к VI серотипу холерных фагов и не проявляли антигенного родства с фагами I—V, VII—XI серотипов. Антифаговая сыворотка, полученная к фагу 23, полностью (100%) нейтрализовала фаг 37, т. е. фаги были серологически родственными. Литическая активность фагов 23 и 37 распространялась на штаммы холерных вибрионов 01 и не 01 групп, при этом чувствительность проявляли от 2,02 до 2,08 % культур холерных вибрионов двух био-варов. Фаг 23 лизировал единичные штаммы холерных вибрионов 09, 029, 034, 040, 060, 065, 075 сероваров, фагом 37 в этой фагочувст-вительной группе не лизировались штаммы 060 и 075 сероваров (табл. 1). Микроорганизмы близкородственных родов и семейств были резистентны к исследованным фагам. Большинство вирулентных фагов обладает устойчивостью к воздействию неблагоприятных факторов среды [12]. Результаты изучения влияния физических и химических агентов на фаги 23 и 37 представлены в табл. 2. Концентрированные растворы мочевины (15 и 30%) неблагоприятно действовали на них. Полная инактивация фагов наступала в 30 % растворе через 1 сут контакта. Выживаемость фагов в 15 % растворе составляла 0,025— 0,03 %. При УФ-облучении в течение 2 мин количество активных корпускул составляло 0,0001 %, а через 3 мин фагов не обнаружено. После прогревания при 60 °С в течение 30 мин снижение титров фагов 23 и 37 происходило на 2 порядка (выживало 0,34 и 0,15 % активных корпускул соответственно), при повышении температуры до 65 °С выживаемость составляла 0,02—0,06 %. Фаги полностью инактивировались при рН 5,6 в буферном растворе при комнатной температуре хранения через 1 мес, в условиях холодильника (4 °С) сохранялось 16 % фаговых корпускул.
Таблица 1
Спектр действия и специфичность фагов, выделенных из сточной воды Донецкой обл.
Вид микроба Всего штаммов Число штаммов, лизируется фагами
23 37
V. cholerae 74 15 16
V. eltor 74 21 21
V. cholerae не OI группы 96 8 6
Из них сероваров:
02—08, 010—028, ОЗО- ОЗЗ, 035 -039
041-059, 06I — 062, 066 -074, 076- -080 88 — —
09 2 2 2
029 1 1 1
034 1 1 1
040 1 1 1
060 1 1 —
065 1 1 1
075 1 1 —
V. albensis 5 — —
V. mimicus 3 — —
V. parahaemolyticus 5 — —
V. alginolyticus 6 — —
V. fluvialis 3 — —
Aeromonas 5 — —
Plesiomonas 2 — —
Enterobacteriaceae 20 — —
Comamonas 5 — —
Pseudomonas 5 — —
Таблица 2
Влияние различных факторов на выживаемость холерных фагов
Фактор воздействия Фаг 23 Фаг 37
контроль опыт выживаемость. % контроль ОПЫТ выживгемость, %
Мочевина:
0,03 0
0,0001 0
0,15 0,06
15% 2. Ю7 5- 103 0,025 18 -107 6-103
30% 2- 107 0 0 18 ■ 107 0
УФ-облучение:
120с 7,4- 10* 8- 10г 0,0001 5,2-108 7 • 102
180с 7,4. 10е 0 0 5,2-10* 0
Прогревание:
60 °С 8,5. 10е 2,9- 104 0,34 1,6-Ю7 2-Ю5
65 °С 8,5' 106 2- 103 0,02 1,6-Ю7 МО4
При рН 6,6, 7,6, 8,6 и 9,6 активность холерных фагов менялась незначительно в течение наблюдаемого срока. В одиночном цикле развития фагов 23 и 37 минимальный латентный период составлял 20—25 мин, урожай на одну клетку — 2—3 корпускулы. Для исследования лизогении и чувствительности к диагностическим холерным фагам штаммов холерных вибрионов, выделенных на территории Донецкой обл. в 1991 г., были отобраны 17 штаммов: 4 штамма Эль-Тор серовара Огава и 13 — Инаба. При испытании надосадочных жидкостей культур на 3 индикаторных штаммах лизогения не обнаружена. Результаты определения фаготипа и лизабельности холерными фагами представлены в табл. 3. Как видно из приведенных данных, все штаммы вибрионов Эль-Тор были устойчивы к фагам С, Эль-Тор, ХДФ 3, 4, 5 и авирулентны по комплексному методу. При фаготипировании штаммов, изолированных из внешней среды, выявлено 2 группы, одна из которых представлена 8 штаммами, отнесенными к фаготипу 19, другая — 6 нетипировавши-мися культурами. Три штамма вибрионов Эль-Тор (14854, 14855 и 14856), выделенные от человека, также относились к фаготипу 19. Два фагоустой-чивых штамма холерных вибрионов (14857 и 14858) лизировались фагами 23 и 37. Это свидетельствовало, что циркулирующие во внешней среде холерные вибрионы обладают индикатор-
ными свойствами в отношении фагов из сточной воды, которые могут на них размножаться.
Таким образом, в результате исследования проб воды контролируемых водоемов Донецка было показано присутствие холерных фагов в сточной воде коллектора ХБК. Фаги выделены из одной и той же точки забора воды в августе и октябре 1991 г. Обнаруженные фаги по биологическим свойствам идентифицированы как фаги холерных У вибрионов 01 группы. К особенностям антигенных свойств выделенных фагов относится родство с фагом VI серотипа III морфологической группы. Анализ литературы свидетельствует, что VI тип холерных фагов представлен только одним фагом типа А Саратовской коллекции [7—10]. Однако изученные фаги не идентичны ему. Различия имелись в диапазоне активности. Устойчивость фагов к хлороформу, 15 % раствору мочевины, действию повышенных температур, УФ-облучению и рН 6,6—9,6 буферной среды свидетельствует, что они могут выживать в неблагоприятных условиях химического и физического воздействия. Обнаружено 2 штамма среди резистентных к диагностическим фагам, обладавших индикаторными свойствами в отношении исследованных фагов. Этот факт свидетельствует в пользу того, что в водоемах Донецкой обл. циркули- ^ руют холерные штаммы, являющиеся потенциаль-
Таблица 3
Результаты определения фаголизабельности, вирулентности комплексным методом и лизогении холерных штаммов, поступивших
из Донецкой санэпидстанции
№ штамма Источник выделения Серовар Гемолиз ус1-ген Лизабельность фагами Фаготип Лизогения
с еНог ХДФЗ ХДФ 4 ХДФ-5 23 37
14 845 Вода И + _ _ _ _ _ _ _ _ 19 _
14 846 » и + _ _ _ _ _ _ _ _ 19 _
14 847 » и — — — — — — — — 19 —
14 848 > о — _ _ _ — — — — — н/т —
14 849 » и — _ _ _ _ _ _ _ — 19 —
14 850 » и _ _1. _ _ _ _ _ _ _ 19 _
14 851 » и _ _ _ _ -_ _ _ _ — 19 —
14 852 » и _ _ _ _ _ _ _ _ — н/т —
14 854 Человек и + — — _ — — _ — — 19 —
14 855 > и + _ _ _ — _ — — — 19 —
14 856 » и + — — — — — — — — 19 —
14 857 Вода и + — — — — — — + + н/т —
14 858 » и + — — — — — — + + н/т —
14 859 > о — — — — — — н/т —
14 860 » о + _ _ — — — _ _ — 19 —
14 861 » и + — — — — — — — — 19 —
14 862 » о — — — — — — — — н/т —.
Примечание. И — серовар Инаба; О — серовар Огава ; н/т — не тилируются; + наличие лизиса; - - отсутствие лизиса.
ными хозяевами для выделенных холерных фагов VI серотипа.
Выводы. 1. Фаги, изолированные из воды контролируемых водоемов Донецка, по биологическим свойствам идентифицированы как фаги холерных вибрионов СИ группы.
2. Выделенные штаммы вибрионов Эль-Тор были авирулентны по фаговому тесту и резистентны к диагностическим холерным фагам.
3. Обнаружено 2 штамма холерных вибрионов среди исследованных, обладавших индикаторными свойствами в отношении выделенных фагов.
Литература
1. Адамо М. Бактериофаги.— М., 1961.
2. Адамов А. К.. Быстрый Н. Ф., Шмеркевич Д. Л.. Середин В. Г. // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1971,—Вып. 1. С. 116—123.
3. Бичуль К. Г., Киселева В. И., Сомова А. Г. // Проб л. особо опасных инфекций,— 1969.—№ 6,—С. 188—192.
4. Кудрякова Т. А., Македонией Л. Д., Черкасова Л. Р., Дегтярев Б. М. // Гиг. и сан,— 1990,— № 5,— С. 7—9.
5. Либинзон А. Е., Попов Ю. М., Кулов Г. И. // Пробл. особо опасных инфекций.— 1970.— № 2.— С. 37—41.
6. Марьина Ю. Н. // Труды Ростов.-н/Д противочумного ин-та,— 1941,— Т. 2,— С. 3.
7. Остроумова Н. М. // Проблемы особо опасных инфекций,—Саратов, 1970,—Вып. 6,—С. П.
8. Остроумова Н. М., Попов А. А., Мельникова А. Ф. и др. // Там же,— Вып. 2,— С. 5—12.
9. Остроумова Н. М.. Мельникова А. Ф.. Царева С. А.. Агапова 3. М. //Там же. - 1971. Вып. 2,—С. 130-134.
10. Остроумова Н. М.. Бессель М. М.. Царева С. А. и др. // Там же. Вып. 1,—С. 129—135.
11. Тихоненко А. С. Ультраструктура вирусов бактерий.— М„ 1968.
12. Харитонова Т. И.. Токарев С. А., Быстрый Н. Ф. // Пробл. особо опасных инфекций.— 1970.— Вып. 2.- С. 30—33.
Поступила 14.07.93
Summary. Choleraic phages were identified in 2 out of
44 samples of Donetsk sewage. Biological properties of phages
were characterized.
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1993 УДК 614.3/.4 (470.312-25)
Л. С. Музалевская, А. Г. Лобковский, Н. И. Кукарина
ЗАБОЛЕВАЕМОСТЬ ЖЕЛЧНОКАМЕННОЙ, ПОЧЕЧНОКАМЕННОЙ БОЛЕЗНЯМИ, ОСТЕОАРТРОЗАМИ И СОЛЕВЫМИ АРТРОПАТИЯМИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ЖЕСТКОСТИ
ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ
Тульский областной центр Госсанэпиднадзора
Одним из основных показателей, характеризующих качество питьевой воды по ГОСТу 2874—82, является содержание в ней солей кальция и магния, что объединяется понятием «жесткость воды». Этот показатель нормируется по ГОСТу и должен составлять не более 7 мг-экв/л. В различных административных территориях нашей области содержание солей кальция и магния в питьевой воде различно и колеблется от 5 до 20 мг-экв/л. Показатель для каждой территории является стабильным на протяжении ряда лет и изменяется, как правило, только в случаях ввода в эксплуатацию новых водозаборов, вода которых имеет другую степень жесткости. Практически за период с 1982 по 1991 г. колебание жесткости воды отмечается только в Кур-кинском (от 6 до 10 мг-экв/л), Богородицком (от 10 до 13 мг-экв/л) районах, в г. Донском (от 10 до 17 мг-экв/л), однако изменения жесткости невелики.
В зависимости от жесткости питьевой воды районы и города области условно могут быть разделены на 3 группы. В 1-ю группу с жесткостью воды до 7 мг-экв/л входят 6 районов: Алексин-ский, Веневский, Дубенский, Ефремовский, Ленинский, Ясногорский. Ко 2-й группе с жесткостью воды от 7 до 10 мг-экв/л относятся 10 районов: Арсеньевский, Заокский, Киреевский, Кур-кинский. Новомосковский, Одоевский, Плавский, Суворовский, Тепло-Огаревский, Чернский. 3-я. группа, в которой показатель жесткости превышает 10 мг-экв/л, включает 7 территорий: Белевский, Богородицкий, Кимовский, Узловский, Щекинский районы, города Донской и Тула.
Задачей настоящей работы было проведение ретроспективного анализа заболеваемости некоторыми болезнями, распространение которых может
в той или иной мере зависеть от содержания солей кальция в питьевой воде. Для анализа были выбраны следующие группы заболеваний: желчнокаменная болезнь и холециститы (ЖКБ), остеоартрозы и солевые артропатии (остеоартрозы), камни почек и мочеточников (КПиМ). Сведения о числе случаев заболеваний получены из годовых отчетных форм лечебно-профилактических учреждений № 1 — леч за период с 1982 по 1990 г.—ЖКБ, с 1983 по 1990 г.— остеоартрозы, с 1988 по 1990 г.— КПиМ. Периоды наблюдения связаны с изменениями в отчетных формах. Для статистической обработки данных была использована программа Ленинградского института усовершенствования врачей и Владимирского городского центра Госсанэпиднадзора «Анализ многолетней динамики заболеваемости».
Ретроспективный анализ вышеуказанных групп заболеваний показал следующее: по ЖКБ за период с 1982 по (990 г. в среднем по области показатели заболеваемости в расчете на 1000 населения выросли с 5,2 до 6,4, теми прироста составил 2 %. В 1-й группе районов показатель заболеваемости ЖКБ вырос незначительно— с 4,1 до 4,2, темп прироста составил 0,6 %. Во 2-й группе районов он стабилен и составил 4,1, темп прироста отрицательный — 0,8%. В 3-й группе рост заболеваемости ЖКБ более выраженный — с 5,3 до 6,5, темп прироста 2,9 %.
При попытке установить корреляционную зависимость между заболеваемостью ЖКБ и содержанием солей кальция с расчетом коэффициентов корреляции (КК) были получены следующие результаты: в 1-й группе районов КК недостоверен, связь обратная, во 2-й группе районов связь прямая, слабая, в 3-й группе связь прямая.
3 Гигиена и сан. № 12
17
