CC BY
32УДК 615.9
изучение безопасности
кандидатной вакцины
против гриппа типа а на основе
рекомбинантного
аденовируса человека на грызунах
И.Л. Тутыхина1, Е.С. Седова1,
А.А. Панкратов2, Т.Н. Андреева2,
О.А. Безбородова2, И.Б. Есмагамбетов1,
И.Ю. Грибова1, М.Н. Гарас1,
М.М. Шмаров1, Д.Ю. Логунов1,
Р.И.Якубовская2
'ФГБУ «НИИ эпидемиологии и микробиологии
им. Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 123098, г Москва; 2ФГБУ «Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена, Министерства здравоохранения Российской Федерации, 125284, г Москва
,2
В рамках изучения биобезопасности кандидатной генетической вакцины против вируса гриппа А на основе аденовируса человека пятого серотипа, экспрессирующего ген гемагглю-тинина вируса гриппа птиц Ы5№, проведено доклиническое изучение общетоксического действия данной вакцины. Вакцина Аё5-Ы5К2 при ее однократном внутрибрюшинном, внутривенном и интраназальном применении мышам и крысам в дозах, превышающих предполагаемую иммунизирующую дозу для человека в 10 и 100 раз была удовлетворительно перенесена животными. При многократном («хроническая» токсичность) внутрибрюшинном применении кандидатная вакцина не оказывала выраженного токсического действия на периферическую кровь, печень, почки и ЦНС грызунов. При гистологическом исследовании внутренних органов крыс, получавших вакцину внутрибрюшинно ежедневно, в течение 5 дней, установлено, что вакцина вызывала слабовыраженные воспалительные и деструктивно-воспалительные изменения в печени, миокарде и легких. Выявлено активирующее действие вакцины на пролиферативные потенции клеток печени, селезенки, надпочечников, эпителия желчных капилляров. Найдена доза вакцины, охарактеризованная как ВТД (высокая токсическая доза). На основании данных, полученных при изучении «острой» и «хронической» токсичности вакцины Аё5-Ы5К2 на грызунах вакцину Лё5-Ы5Ш по степени опасности «острого» токсического действия можно отнести к малоопасным лекарственным средствам, а по степени «хронического» токсического действия - умеренно-опасным лекарственным средствам.
Ключевые слова: общетоксическое действие, «острая» токсичность, «хроническая» токсичность, вакцина против гриппа А.
Тутыхина Ирина Леонидовна (Tutykhina Irina Leonidovna), кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории молекулярной биотехнологии
ФГБУ «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, their@yandex.ru;
Седова Елена Сергеевна (Sedova Elena Sergeevna), кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИИ
эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, sedova-es@yandex.ru
Панкратов Андрей Александрович (Pankratov Andrey Alexandrovich), кандидат биологических наук, старший научный сотрудник отделения модификаторов
и протекторов противоопухолевой терапии ФГБУ «Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена» Министерства
здравоохранения Российской Федерации, andreimnioi@yandex.ru
Андреева Татьяна Николаевна (Andreeva Tatiana Nikolaevna), младший научный сотрудник отделения модификаторов и протекторов противоопухолевой терапии ФГБУ «Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 7102929@male. ru
Безбородова Ольга Алексеевна (Bezborodova Olga Alekseevna), кандидат биологических наук, старший научный сотрудник отделения модификаторов и протекторов противоопухолевой терапии ФГБУ «Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена» Министерства здравоохранения Российской Федерации, olgabezborodova@yandex.ru
Есмагамбетов Ильяс Булатович (Esmagambetov Ilyas Bulatovich), младший научный сотрудник лаборатории молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, dmitrovboy@mail.ru
Грибова Ирина Юрьевна (Gribova Irina Yurevna), младший научный сотрудник лаборатории молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, gribova_ira@mail.ru
Гарас Максим Николаевич (Garas Maxim Nikolaevich), младший научный сотрудник лаборатории молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, max.garas@yandex.ru
Шмаров Максим Михайлович (Shmarov Maxim Mihalovich), доктор биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, mmshmarov@gmail.com Логунов Денис Юрьевич (Logunov Denis Yurevich), доктор биологических наук, заведующий лабораторией клеточной микробиологии ФГБУ «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, ldenisy@yahoo.com
Якубовская Раиса Ивановна (Raisa Ivanovna Yakubovskaya), доктор биологических наук, профессор, заведующая отделением модификаторов и протекторов противоопухолевой терапии ФГБУ «Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена» Министерства здравоохранения Российской Федерации, raisayakub@yandex.ru
Введение. Вирусы гриппа типа А способны вызывать эпидемии и пандемии среди населения [1]. Основным способом защиты от вирусов гриппа является вакцинация [1, 2]. Поскольку вирусы гриппа способны постоянно модифицировать свою структуру в результате генетических изменений, традиционные аттенуированные и субъединичные вакцины приводят к формированию строго штамм-специфичного иммунитета. Применение живых гриппозных вакцин позволяет получить иммунный ответ широкого спектра действия с рядом недостатков, среди которых необходимость внутримышечного введения, возможность развития заболевания в случае иммунологической недостаточности, необходимость наращивания в куриных эмбрионах и т.д. [1].
В последнее время широко изучается использование нового вида вакцин - генетических [3]. Одними из наиболее перспективных генетических вакцин являются вакцины, базирующиеся на ре-комбинантных аденовирусных векторах, экспрес-сирующих определенные протективные антигены возбудителей инфекций [3-5]. В отличие от большинства традиционных, такие генетические вакцины способны вызывать иммунный ответ широкого спектра действия и могут обеспечивать перекрестную защиту против различных вирусов гриппа. Вакцины на основе рекомбинантных аденовирусных векторов подходят как для инъекционного, так и для мукозального введения и при производстве не требуют работы непосредственно с патогеном [3]. На сегодняшний момент зарубежные кандидатные вакцины на основе ре-комбинантных аденовирусов против целого ряда патогенов находятся на разных стадиях доклинических и клинических испытаний.
Целью настоящего исследования являлось доклиническое изучение общетоксического действия кандидатной вакцины против гриппа типа А на основе аденовируса человека пятого сероти-па, экспрессирующего ген гемагглютинина вируса гриппа птиц И5К2. Данная кандидатная вакцина показала свою эффективность против вирусов гриппа А не только птиц (И5К2), но и человека (И^, И2К3) [4, 6]. В исследования по оценке безопасности кандидатной вакцины входило: изучение «острой» токсичности; изучение «хронической» токсичности; изучение местно-раздражающего действия.
Материалы и методы исследования. Исследования рекомбинантной вакцины против гриппа Аё5-И5К,, полученной из ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России [6], проводили в соответствии с действующими методическими рекомендациями по доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических средств [7, 8], с учетом рекомендуемой в клинику иммунизирующей дозы (ИДч): однократ-
но интраназально, 1х107 БОЕ/человек.
Эксперименты выполнялись на мышах-гибридах Б1,(СБА х С57Б1/6]) обоего пола (20-25 г); неин-бредных крысах обоего пола (250-340 г) и кроликах породы шиншилла, самцах (2,15-2,70 кг). Крысы и мыши получены из Научного центра биомедицинских технологий РАМН (филиал НЦБТ «Крюково»), а кролики из ОПХ «Монихино».
При оценке «острой» токсичности раствор вакцины Аё5-И5К2 вводили однократно интраназаль-но (и/н) крысам, внутрибрюшинно (в/б) мышам и крысам и внутривенно (в/в) мышам и крысам в дозах, равных 1х108 БОЕ/животное и 1х109 БОЕ/ животное. Оценивали внешние проявления интоксикации, поведенческие реакции, массу тела и сроки гибели животных от токсичности вакцины. У крыс проводили гематологические исследования крови (на 1-е, 3-и, 7-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки), биохимические исследования сыворотки крови (на 3-и и 30-е сутки), морфометрический анализ ряда внутренних органов (головного мозга, щитовидной железы, тимуса, сердца, легких, печени, селезенки, почек, надпочечников на 3-и и 30-е сутки).
Хроническую токсичность вакцины Аё5-И5К2 изучали на крысах-самцах при ее в/б ежедневном введении в течение 5 дней в суммарных дозах, равных 1х108 и 1х109 БОЕ/животное (разовые дозы вакцины составили 1х108 и 1х109 БОЕ/животное, соответственно). Критериями оценки «хронической» токсичности являлись: число павших животных и сроки их гибели, внешние проявления интоксикации, поведенческие реакции, масса тела и данные клинико-лабораторных исследований. Для определения повреждающего действия вакцины Аё5-И5К2, при ее многократном применении на внутренние органы и ткани животных, проводили патологоанатомическое исследование (макро- и микроскопическая оценка) и морфоме-трический анализ внутренних органов животных (тимус, сердце, легкие, печень, селезенка, надпочечники, почки) павших крыс и крыс, подвергнутых плановой эвтаназии на 1-е, 14-е и 30-е сутки наблюдения.
Исследование местнораздражающего действия проводили на крысах и кроликах. Аё5-И5К2 с концентрацией 1х107 и 1х108 БОЕ/мл вводили крысам в/б однократно в объеме 0,5 мл. Контрольным животным вводили 0,5 мл 0,9% раствора №С1. Эвтаназию животных проводили в 2 срока: на 3-и и 14-е сутки и оценивали реакцию брюшины и органов брюшной полости на исследуемую вакцину. Мест-нораздражающее действие вакцины Аё5-И5К2 было изучено также в тесте «конъюнктивальная проба» на кроликах. Вакцину Аё5-И5К2 в концентрации 1х107 и 1х108 БОЕ/мл в объеме 0,2 мл однократно закапывали в конъюнктивальный мешок глаза кролика (по 2 кролика на каждую концентрацию препарата). Контролем служил второй
глаз животного, в который закапывали 0,2 мл 0,9% раствора NaCl. Наблюдение за состоянием конъюнктивы и глазного яблока проводили через 15 мин, 1 ч и 48 ч после внесения вакцины.
Эксперименты на животных были проведены в соответствии с национальными и международными правилами гуманного обращения с животными. В исследовании мыши и крысы были подвергнуты плановой эвтаназии, которую осуществляли передозировкой эфира для наркоза (aetherpro narcosi). Результаты исследований срав-
нивали с данными, полученными у контрольных крыс, которым вводили 0,9% раствор хлористого натрия.
Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М) и стандартную ошибку среднего (т), которые представлены в итоговых таблицах.
Статистический анализ проводили с использованием программы 81аЙ8Йса. Достоверность отличий между группами данных оценивали с применением ^критерия Стьюдента и и-критерия
Таблица 1
Клинический анализ крови аутбредных крыс после однократного внутрибрюшинного введения
вакцины Ad5-H5N2
Сутки опыта
Доза
Показатель БйЕ/животное 14 21 30
1x108 19,4±3,5 21,9±2,5 20,6±6,2 19,7±2,0 18,1±1,4
общее число лейкоцитов (тыс/мм3) 1x109 26,3±6,9 23,9±5,7 21,8±6,9 18,7±1,9 16,0±2,1
Контроль 13,5±3,2 19,1±5,2 17,0±6,6 18,4±2,6 16,2±1,5
1x108 6,1±1,0 6,4±0,2 5,2±0,5 5,5±0,4 5,4±0,4
Число эритроцитов (млн/мм3) 1x109 5,6±0,3 5,6±1,0 5,2±0,2 5,1±0,6 5,1±0,2
Контроль 5,0±0,5 5,9±0,2 5,7±0,6 5,7±0,4 5,7±0,4
1x108 184,0±15,7 228,3±35,0 151,3±8,5 185,1±12,0 189,1±17,2
Количество гемоглобина (г/л) 1x109 174,3±18,0 186,7±57,9 190,7±11,0 172,2±23,3 182,3±16,3
Контроль 152,0±12,5 194,0±8,7 175,5±16,3 177,4±12,6 189,4±21,1
1x108 30,3±1,1 33,8±2,5 31,2±1,5 29,7±0,9 33,1±0,6
Гематокрит(%) 1x109 29,3±0,3 31,5±5,4 29,8±1,8 29,0±1,2 33,8±1,8
Контроль 29,1±1,4 33,6±0,3 28,1±1,2 29,8±0,3 30,1±4,5
Манна-Уитни, в зависимости от числа наблюдений и характера распределения величин параметров в группе. Различия считали достоверными
при р<0.05.
Результаты и обсуждение. Острая токсичность. Однократное в/в и в/б введение вакцины мышам и крысам в дозах, равных 1х108 БОЕ/животное и 1х109 БОЕ/животное, не приводило к гибели животных от токсичности. У животных отсутствовали внешние проявления интоксикации и снижение массы тела в течение всего срока наблюдения (30 дней).
В исследованиях на крысах, которым вакцину Аё5-И5Ш вводили однократно внутрибрюшинно в дозе, равной 1х108 БОЕ/животное, установлено, что вакцина в этой дозе по данным клинико-лабо-раторных исследований и анализу поведенческих
реакций не оказывала токсического действия на кровь, печень, почки и ЦНС (табл. 1). В то время как применение вакцины Аё5-И5Ш в дозе, равной 1х109 БОЕ/животное, у крыс (на 3-и сутки) наблюдали умеренное транзиторное повышение общего количества лейкоцитов в периферической крови в 1,9 раза. Изменения в биохимических показателях сыворотки крови животных, свидетельствующих о токсическом поражении печени и почек, отмечены не были. Признаков поражения ЦНС не выявлено. При патолого-анатомическом исследовании крыс, получивших вакцину в указанных дозах и подвергнутых эвтаназии на 3-и и 30-е сутки наблюдений с макроскопической оценкой состояния внутренних органов и тканей животных (включая морфо-метрический анализ внутренних органов), пато-
Таблица2
Клинический анализ крови аутбредных крыс после многократного внутрибрюшинного введения
вакцины Ad5-H5N2
Сутки опыта
Показатель Доза вакцины, разовая/ суммарная, БоЕ/животное
14 21 30
0,2х108/1х108 12,2±2,7 15,8±3,3 16,4±2,1 16,3±1,9 17,1±1,4
общее число лейкоцитов (тыс/мм3) 0,2х109/1х109 10,9±3,9 18,1±5,8 19,7±2,1 21,2±1,6 18,5±1,9
Контроль 11,6±2,8 16,9±4,9 13,6±1,5 15,2±3,4 15,8±1,2
0,2х108/1х108 5,1±0,2 5,0±0,4 4,7±0,3 5,5±0,4 5,1±0,4
Число эритроцитов (млн/мм3) 0,2х109/1х109 4,9±0,2 5,5±0,6 4,9±0,2 5,4±0,5 5,4±0,5
Контроль 4,9±0,3 5,5±0,6 5,0±0,2 5,1±0,2 5,1±0,2
0,2х108/1х108 153±11 159±11 158±23 186±29 179±19
Количество гемоглобина (г/л) 0,2х109/1х109 148±8 160±12 161±12 178±12 176±18
Контроль 152±11 189±29 155±6 168±11 187±24
0,2х108/1х108 28,3±1,1 29,1±0,9 26,9±2,4 32,3±2,4 30,2±0,8
Гематокрит (%) 0,2х109/1х109 28,5±0,5 30,1±0,2 30,4±1,8 29,5±2,1 29,3±1,4
Контроль 28,8±1,3 32,5±0,5 28,9±0,7 29,2±1,2 30,5±1,5
логических изменений во внутренних органах и тканях крыс не наблюдали.
Таким образом, вакцина Ad5-H5N2 при ее однократном в/в и в/б и и/н применении мышам и крысам в дозах, равных 1x108 и 1x109 БОЕ/животное, превышающих предполагаемую ИДч в 10 и 100 раз, соответственно, была удовлетворительно перенесена животными и не оказывала существенного токсического действия на периферическую кровь, печень, почки и ЦНС животных при ее вну-трибрюшинном введении крысам.
Хроническая токсичность. Многократное применение вакцины Ad5-H5N2 в суммарных дозах, равных 1x108 БОЕ/животное (разовая - 0,2х108 БОЕ/животное) и 1x109 БОЕ/животное (разовая -0,2х109 БОЕ/животное), не приводило к гибели животных от токсичности, отсутствовали внешние проявления интоксикации, не было отмечено снижения массы тела в течение всего срока наблюдения (30 дней).
После многократного применения вакцины Ad5-H5N2 в исследованных дозах наблюдали умеренные, транзиторные изменения в показателях клинического анализа крови крыс. Так, на 7-е и 14-е сутки после окончания применения вакцины наблюдали увеличение сегментоядерных нейтро-филов в 2-3 раза. При использовании вакцины в суммарной дозе 1x109 БОЕ/животное у крыс на 14-е сутки после ее применения наблюдали увеличение общего количества лейкоцитов в периферической крови в 1,5 раза (табл. 2 и 3).
При биохимическом исследовании сыворотки крови крыс, изменений в биохимических показателях, свидетельствующих о токсическом поражении печени и почек, отмечено не было. Внешних признаков, наблюдаемых при поражении ЦНС, не выявлено.
При патологоанатомическом исследовании крыс, получивших вакцину в указанных дозах и подвергнутых эвтаназии на 1-е, 14-е и 30-е сутки наблюдений с макроскопической оценкой состояния внутренних органов и тканей животных (включая морфометрический анализ внутренних органов), патологических изменений во внутренних органах и тканях крыс не наблюдали. В то же время при гистологическом исследовании внутренних органов крыс, получивших вакцину Ad5-H5N2 в суммарной дозе 1х109 БОЕ/животное, установлено, что вакцина вызывала слабые деструктивно-воспалительные изменения в печени, миокарде и несколько более выраженные воспалительные в легких. Выявлено активирующее действие вакцины Ad5-H5N2 на пролиферативные потенции клеток печени, селезенки, надпочечников, эпителия желчных капилляров.
При гистологическом исследовании внутренних органов крыс (забранных для исследования на 1-е и 30-е сутки после последнего введения вакцины),
получивших вакцину Ad5-H5N2 в суммарной дозе 1х108 БОЕ/животное, не выявлено патологических или деструктивных изменений в щитовидной железе, тимусе, сердце, легких, печени, селезенки, надпочечниках, почках и тонкой кишки.
Таким образом, вакцина Ad5-H5N2 при ее многократном (ежедневном в течение 5 дней) в/б применении крысам в суммарных дозах, равных 1x108 и 1x109 БОЕ/животное (разовые дозы 0,2x108 и 0,2x109 БОЕ/животное), превышающих предполагаемую ИДч в 10 и 100 раз, соответственно, была удовлетворительно перенесена животными. Доза вакцины, равная 1x108 БОЕ/животное, охарактеризована как низкая токсическая доза (НТД), а доза, равная 1x109 БОЕ/животное, - как высокая токсическая доза (ВТД, соответствует максимально-переносимой дозе (МПД)).
Местнораздражающее действие вакцины Ad5-H5N2. При аутопсии крыс на все сроки наблюдения (3-и и 14-е сутки) макроскопически отмечали отсутствие каких-либо изменений в брюшине и органах брюшной полости, свидетельствующих о местнораздражающем действии вакцины: серозные покровы органов брюшной полости блестящие, выпот, спайки, отек, гиперемия отсутствовали. При макроскопическом исследовании конъюнктивы и глазного яблока кроликов отмечали отсутствие каких-либо патологических местнотканевых реакций.
Таким образом, вакцина Ad5-H5N2 в концентрациях 107 БОЕ/мл и 108 БОЕ/мл не оказывала мест-нораздражающего действия.
Выводы. 1. Вакцина Ad5-H5N2 при однократном в/в, в/б и и/н применении грызунам в дозах 1x108 БОЕ/животное и 1x109 БОЕ/животное, превышающих ИДч в 10 и 100 раз, соответственно, была удовлетворительно перенесена животными и не приводила их к гибели. По данным клинико-ла-бораторных исследований, вакцина у крыс при внутрибрюшинном введении не оказывала выраженного гематотоксического, гепатотоксическо-го, нефротоксического и нейротоксического действия.
2. Вакцина Ad5-H5N2 при многократном (хроническая токсичность) ежедневном, в течение 5 дней внутрибрюшинном применении в суммарной дозе, равной 1х108 БОЕ/животное (разовая доза - 0,2х108 БОЕ/животное), не оказывала выраженного токсического действия на периферическую кровь, печень, почки и ЦНС крыс. При гистологическом исследовании внутренних органов крыс, получивших вакцину в указанной дозе, не выявлено патологических изменений во внутренних органах и тканях животных. Эта доза вакцины охарактеризована как НТД (превышает ИДч в 10 раз).
3. Вакцина Ad5-H5N2 при многократном (хроническая токсичность) ежедневном, в течение 5 дней внутрибрюшинном применении в суммарной
НОЯБРЬ - ДЕКАБРЬ 2013
Таблица 3
лейкоцитарная формула крови аутбредных крыс после многократного внутрибрюшинного
введения вакцины Ad5-H5N2 (на 100 клеток)
Сутки опыта
Показатель Доза вакцины, разовая/ суммарная, БоЕ/животное
14 21 30
0,2х108/108 82,2±5,6 74,6±7,7 74,8±6,5 79,0±3,7 80,0±5,9
лимфоциты (%) 0,2х109/109 87,2±3,3 67,4±11,5 75,6±11,4 77,0±5,7 75,6±4,4
Контроль 82,2±6,5 82,0±6,6 89,0±4,6 76,3±5,9 80,7±1,2
0,2х108/108 7,2 4,4 7,4 6,0 5,6
Моноциты (%) 0,2х109/109 6,0 6,6 10,0 6,0 7,0
Контроль 5,0 7,3 5,3 7,0 7,3
0,2х108/108 1,0± 0,8 1,0 1,8 1,2
Эозинофилы (%) 0,2х109/109 0,4 0,6 1,0 2,0 1,2
Контроль 1,2 0,7 0,7 1,3 1,7
0,2х108/108 10,6±5,8 19,2±5,8 14,8±6,4 12,2±3,7 12,4±4,7
Сегменто-ядерные нейтрофилы (%) 0,2х109/109 7,0±2,7 25±10,5 12,0±5,8 14,2±3,8 15,8±4,7
Контроль 11,0±7,5 9,7±2,5 4,7±3,5 15,0±4,0 10,3±0,6
0,2х108/108 0,2 1,0 0 1,0 1,0
Палочко-ядерные нейтрофилы (%) 0,2х109/109 0 0,2 0 0,8 0,8
Контроль 0,2 0,3 1,0 0,3 0,3
дозе, равной 1х109 БОЕ/животное (разовая доза -0,2х108 БОЕ/животное), по данным клинико-лабо-раторных исследований не оказывала выраженного токсического действия на периферическую кровь, печень, почки и ЦНС крыс. При гистологическом исследовании внутренних органов крыс, получивших вакцину в указанной дозе, установлено, что вакцина вызывала слабовыраженные воспалительные и деструктивно-воспалительные
изменения в печени, миокарде и легких. Выявлено активирующее действие вакцины на пролифера-тивные потенции клеток печени, селезенки, надпочечников, эпителия желчных капилляров. Эта доза вакцины охарактеризована как ВТД (МПД, превышает ИДч в 100 раз).
4. На основании данных, полученных при изучении острой и хронической токсичности вакцины Аё5-И5^2 на грызунах (мыши и крысы), вакцину
Аё5-Ы5К2 по степени опасности острого токсического действия можно отнести к малоопасным лекарственным средствам, а по степени хронического токсического действия - умеренно-опасным лекарственным средствам.
5. Вакцина Аё5-Ы5К2 в концентрациях 1х107 БОЕ/мл и 1х108 БОЕ/мл при введении в брюшную полость и под верхнее веко глаза не приводила к развитию патологических местно-тканевых реакций.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Киселев О.И. (ред.). Грипп и другие респираторные вирусные инфекции: эпидемиология, профилактика, диагностика и терапия. СПб.: Боргес; 2003.
2. Карпухин Г.И., Карпухина О.Г. Диагностика, профилактика и лечение острых респираторных заболеваний. СПб.: Гиппократ, 2000.
3. Тутыхина И.Л., Щербинин Д.Н., Шмаров М.М., Логунов Д.Ю., Народицкий Б.С. Преимущества и перспективы использования генетических вакцин для защиты от опасных и социально значимых инфекций // Вестник Российской академии
медицинских наук, 2011. - №10. - С. 39-47.
4. Седова Е.C., Шмаров М.М., Тутыхина И.Л., Барыкова ЮА., Верховская Л.В., Логунов Д.Ю. и др. Протективные свойства кандидатных генно-инженерных вакцин против вируса гриппа птиц, созданных на основе рекомбинантных аденовирусных векторов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 2010. №3. С. 44-48.
5. Tutykhina I., Logunov D., Shcherbinin D., Shmarov M., Tukhvatulin A., Naroditsky B. et al. Development of adenoviral vector-based mucosal vaccine against influenza // J. Mol.
Med. (Berl), 2011. - 89 (4). - Р. 331-41.
6. Шмаров М.М., Седова Е.С., Верховская Л.В., Руднева H.A., Богачева ЕЛ. и др. Индукция протективного гетеросубтипического иммунного ответа против вируса гриппа при иммунизации рекомбинантными аденовирусными векторами, экспрессирующими гемагглютинин вируса гриппа H5 // Acta Naturae. 2010. - №1. - 119-126.
7.ХабриевР.У. (ред.) Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. 2-е изд. М.: Медицина, 2005.
8. Санитарные правила СП 3.3.2.56196 «Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов». М.: Минздрав России, 1998.
9. ПлатоновА.Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы. М.: Издательство РАМН, 2000.
REFERENCES:
1. Kiselev O.I., ed. Influenza and the other viral infections of respiratory tract:epidemiology, prophylaxis diagnostics, and therapy. Saint-Petersburg: Borges; 2003 (in Russian).
2. Karpukhin G.I., Karpukhina O.G. Diagnostics, prophylaxis and treatment of upper respiratory tract infection. Saint-Petersburg: Hippocrates; 2000 (in Russian).
3. Tutykhina I.L., Shcherbinin D.N., Shmarov M.M., Logunov D.Yu., Naroditskiy B.S. Advantages and prospects of the use of genetic vaccines for the protection from dangerous and socially significant infections. Vestnik Rossiyskoy Akademii Medicinskih Nauk.
2011; 10: 39-47 (in Russian).
4. Sedova E.S., Shmarov M.M., Tutykhina IL., Barykova IuA., VerkhovskaiaL.V, Logunov D.Yu. et al. Protective properties of candidate genetically engineered vaccines against avian influenza viruses constructed on the basis of recombinant adenoviral vectors. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologic Immunobiologii. 2010; 3:44-8 (in Russian).
5. Tutykhina IL., Logunov D.Y., Shcherbinin D.N., Shmarov M.M., Tukhvatulin A.I., Naroditsky B.S. et al. Development of adenoviral vector-based mucosal vaccine against influenza. J. Mol. Med. (Berl). 2011; 4:331-41.
6. Shmarov M.M., Sedova E.S., Verkhovskaya L.V, Rudneva I.A., BogachevaEA., Barykova YA. et al. Induction of a protective heterosubtypic immune response against
the influenza virus by using recombinant adenoviral vectors expressing hemagglutinin of the influenza H5 virus. Acta Naturae. 2010; 1:111-8.
7. KhabrievR.U., ed. Handbook of experimental (preclinical) study of new pharmacological compounds. Moscow: Meditsina; 2005 (in Russian).
8. Sanitation code SC 3.3.2.561-96 State tests and registration of new medical immunobiological preparations. Moscow.:
Ministry of Health, 1998. Management normative document MD-126-91 «regulations for preclinical estimation of safety of pharmacological compounds (GLP)». Moscow; 1992 (in Russian). 9. PlatonovA.E. Statistical analysis in medical and biology: problems, terminology, logic, computer tools. Moscow: Russian Academy of Science; 2000 (in Russian).
I.L. Tutykhina1, E.S. Sedova1, A.A. Pankratov2, T.N. Andreeva2, O.A. Bezborodova2, I.B. Esmagambetov1, I.Y. Gribova1, M.N. Garas1, M.M. Shmarov1, D.Y. Logunov1, R.I. Iakubovskaia2
Study of safety of a candidate vaccine based on human recombinant adenovirus against flu of type A
in rodents
1 Gamaleya Research Institute of Epidemiology and Microbiology, 123098, Moscow, Russian Federation
2 Moscow P.A. Hertsen Oncological Scientific Research Institute, 125284, Moscow, Russian Federation
Pre-clinic investigations were conducted into vaccine Ad5-H5N2 within the study of biological safety of against type A flu candidate genetic vaccine based on fifth-serotype human adenovirus expressing hemagglutinin gene of avian flu H5N2 virus. While performing a single intraperitoneal, intravenous and intranasal administration of vaccine Ad5-H3N2 to mice and rats in doses exceedinga 10-and 100 -fold suggested immunizing dose for humans, the general condition of animals was satisfactory. While administrated multifold intra-abdominally («chronic toxicity»), the candidate vaccine did not exert an apparent toxic effect on rodents peripheral blood, liver, kidneys and CNS.A histological investigation into internal organs of rats receiving abdominally the vaccine during 5 days showed that the vaccine induced slightly expressed inflammatory and destructive inflammatory alterations in liver, myocard and lungs. Activating effect of the vaccine on proliferative cells in liver, spleen, adrenals, bile capillaries epithelium was identified. A vaccine dose characterized as a high toxic dose was found out. The outcome of investigations of acute and chronic toxicity of vaccine AdH5N2 in rodents showed in terms of «acute» toxic effect, vaccine AdH5N2 can be allocated to low hazardous medical drugs and in terms of «chronic toxic effect to moderately hazardous ones.
Key words: general toxic effect, «acute» toxicity, «chronic» toxicity, vaccine against flu A.
Материал поступил в редакцию 12.07.2013 г
