CC BY
19УДК 615.03-615.099
доклиническая
оценка
общетоксических свойств препарата
аделакттм
на грызунах
Р.И. Якубовская1, А.А. Панкратов1, Т.Н. Андреева1, Ю.Б. Венедиктова1, О.А. Безбородова1, И.Л. Тутыхина2, Е.В. Евграфов2, Д.Ю. Логунов2, М.М. Шмаров2
ФГБУ «московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А.Герцена» министерства здравоохранения Российской Федерации, 125284, г. москва, Российская Федерация
2ФГБУ «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» министерства здравоохранения Российской Федерации, 123098, г. москва, Российская Федерация
Препарат АдеЛакт™ представляет собой рекомбинантные псевдоаденовирусные частицы, экс-прессирующие ген лактоферрина человека. Проведено изучение «острой» токсичности препарата на мышах и крысах и «субхронической» токсичности - на крысах и кроликах. Препарат АдеЛакт™ по степени опасности «острого» токсического действия классифицирован как «малоопасное лекарственное средство», а по степени опасности «хронического/субхронического» токсического действия - как «умеренно опасное лекарственное средство». Препарат АдеЛакт™ в токсических дозах оказывал умеренное гепато- и нефротропное действие. Возможно развитие воспалительного процесса в легких. Препарат АдеЛакт™ при внутривенном применении обладает слабовыраженным и полностью обратимым местнораздражающим действием.
Ключевые слова: препарат АдеЛакттм, ген лактоферрина человека, лактоферрин человека, аденовирус 5-го серотипа, общетоксические свойства, «острая» токсичность, «субхроническая» токсичность.
Введение. Лактоферрин человека - одноце-почечный металлсвязывающий гликопроте-ин, относящийся к семейству трансферринов, с молекулярной массой 78±2 кБа. Лактофер-рин содержится во всех эпителиальных секретах человека и выполняет в организме защитную функцию. Он обладает антиоксидантными, детоксицирующими и противовоспалительными свойствами, проявляет иммуномодули-рующее действие, широкий спектр антибактериальной, антивирусной и фунгицидной активности [1].
На основе природного Лф человека, выделенного из женского молока, разработан и
зарегистрирован препарат «Лапрот» (рег. № ЛС-002374) для лечения токсических состояний, обусловленных различными заболеваниями, в частности, гнойно-воспалительными, септическими и другими [2,3]. Однако при поступлении в кровоток в составе препарата лактоферрин быстро элиминируется из организма, и для поддержания терапевтически эффективной концентрации требуется его систематическое введение пациентам. Поэтому актуальной является разработка лекарственных средств на основе лактоферрина человека с пролонгированным терапевтическим действием.
Якубовская Раиса Ивановна (Yakubovskaya Raisa Ivanovna), доктор биологических наук, профессор, руководитель отделения модификаторов и протекторов ФГБУ «МНИОИ им. П.А.Герцена» Минздрава России, 125284, г. Москва, raisayakub@yandex.ru
Панкратов Андрей Александрович (Pankratov Andrey Alexandrovich), кандидат биологических наук, старший научный сотрудник отделения модификаторов и протекторов ФГБУ «МНИОИ им. П.А.Герцена» Минздрава России, 125284, г. Москва, andreimnioi@yandex.ru
Андреева Татьяна Николаевна (Andreeva Tatyana Nikolaevna), младший научный сотрудник отделения модификаторов и протекторов ФГБУ «МНИОИ им. П.А.Герцена» Минздрава России, 125284, г. Москва, 7102929@mail.ru
Венедиктова Юлия Борисовна (Venediktova Julia Borisovna), младший научный сотрудник отделения модификаторов и протекторов ФГБУ «МНИОИ им. П.А. Герцена» Минздрава России, 125284, г. Москва, uluaz@yandex.ru
Безбородова Ольга Алексеевна (Bezborodova Olga Alexeevna), кандидат биологических наук, старший научный сотрудник отделения модификаторов и протекторов ФГБУ «МНИОИ им. П.А.Герцена» Минздрава России, 125284, г. Москва olgabezborodova@yandex.ru
Тутыхина Ирина Леонидовна (Tutykhina Irina Leonidovna), кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, 123098, г. Москва, their@yandex.ru
Евграфов Евгений Валерьевич (Evgrafov Evgeniy Valer'evich), младший научный сотрудник лаборатории молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, 123098, г. Москва, evgeniyevgrafov@yandex.ru
Логунов Денис Юрьевич (Logunov Denis Yur'evich), доктор биологических наук, заведующий лабораторией клеточной микробиологии ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, 123098, г. Москва, ldenisy@yahool.com
Шмаров Максим Михайлович (Shmarov Maxim Mihailovich), доктор биологических наук, заведующий лабораторией молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, 123098, г. Москва, mmshmarov@gmail.com
Пролонгация терапевтического действия лак-тоферрина может быть достигнута путем введения в организм не непосредственно белка, а вирусного вектора на основе аденовируса человека 5-го серотипа, в состав генома которого включен ген лактоферрина человека. Рекомбинантные псевдоаденовирусные частицы, экспрессиру-ющие ген лактоферрина человека, были сконструированы в ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи» Минздрава РФ, На основе этой конструкции ООО «НТфарма» совместно с ФГБУ «МНИОИ им. П.А.Герцена» был разработан и изучен в доклинических исследованиях препарат АдеЛакт™ (раствор для внутривенного введения, представляет собой слегка опалесцирующую жидкость, содержащую рекомбинантные псевдоаденовирусные частицы размером 70-80 нм, в концентрации 2,3х1011 в 1 мл, экспрессирующие ген лактоферрина человека). Препарат АдеЛакт™ для оценки общетоксических свойств был произведен ООО «ИММАФАРМА» [4-7].
У человека предполагаемый курс лечения будет состоять из однократного введения препарата в дозе, равной 4,3х1011 частиц/м2 (или 7,00х1011 частиц на человека). Повторные курсы будут проводиться по показаниям не ранее чем через 4 недели.
Целью настоящего исследования являлось изучение общетоксических свойств препарата Аде-Лакт™ для его последующего внедрения в клиническую практику.
Материалы и методы исследования. Исследования проведены на мышах-гибридах И (СВАхС57В1/6), самцах и самках, массой 18 - 21 г (п=72), неинбредных белых крысах самцах и самках, массой 208 - 220 г (п=117) и кроликах породы «Советская шиншилла» самцах, массой 2,4 - 2,6 кг (п=47). Мыши и крысы были получены из Научного центра биомедицинских технологий ФМ-БА России (филиал «Андреевка»), а кролики - из ООО «Кролинфо». Мыши, крысы и кролики содержались в отдельных комнатах клиники экспериментальных животных ФГБУ «МНИОИ им. П.А.Герцена» Минздрава России. Условия содержания и обращение с используемыми в эксперименте животными соответствовало Приказу МЗ РФ № 708н от 23 августа 2010г. «Об утверждении Правил лабораторной практики» и Директиве Совета ЕС от 24 ноября 1986 «О сближении законов, постановлений и административных положений государств ЕС по вопросам защиты животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (86/609/ЕЕС)».
При выборе доз препарата для токсикологических исследований исходили из доз препарата АдеЛакт™, которые были отобраны при изучении его фармакологических свойств на животных с тяжелой экзогенной интоксикацией, вызванной
введением токсических и смертельных доз высокотоксичных противоопухолевых препаратов. Установлено, что однократное внутривенное введение препарата АдеЛакт™ мышам и крысам в терапевтической дозе, равной 4,3х1011частиц/м2, индуцировало у животных выработку целевого белка - лактоферрина человека, обладающего мощным детоксицирующим потенциалом: у животных наблюдали снижение смертности от летальных доз цитостатиков, а также уменьшение степени выраженности и длительности сохранения специфических симптомов интоксикации.
При изучении «острой» токсичности препарата АдеЛакт™ на грызунах (мышах и крысах; опытные и контрольные группы состояли из 6 животных) его терапевтическая доза (ТД), выраженная в количестве псевдоаденовирусных частиц на м2 поверхности тела животного (дозы лекарственных средств, рассчитанные на площадь поверхности тела для различных видов животных и человека, являются эквивалентными по токсичности), равная равной 4,3х10ичастиц/м2, была увеличена в 10, 50, 100 и 200 раз. Превышение ТД в 10 - 200 раз достаточно для получения достоверной информации о токсикологической безопасности исследуемого лекарственного средства. Наблюдение за животными проводили в течение 30 суток. У животных регистрировали клинические признаки возможной интоксикации, гибель от токсичности, сроки гибели, изменение массы тела. Для оценки повреждающего действия препарата на внутренние органы и ткани каждое животное было подвергнуто аутопсии. При аутопсии детально исследовали внешнее состояние тела, полость черепа, грудную и брюшную полости с органами и тканями, шею с органами и тканями и скелетно-мышечную систему.
«Субхроническую» токсичность препарата изучали на крысах (опытные и контрольные группы состояли из 15 животных) и кроликах (опытные и контрольные группы состояли из 9 животных) при ежедневном в течение 5-и дней введении препарата АдеЛакт™ крысам в суммарных дозах, равных 43,0х10и и 430,0х10и частиц/м2 (соответствующих 1/5МПД и 2МПД при однократном применении препарата; исследованные дозы превышали расчетную эквитерапевтическую дозу для человека в 10 и 100 раз), а кроликам - в суммарных дозах, равных 43,0х1011 и 215,0х1011 ча-стиц/м2 (превышали расчетную эквитерапевти-ческую дозу для человека в 10 и 50 раз).
Программа экспериментов включала интегральные, гематологические, биохимические, физиологические и патолого-анатомические исследования в соответствии с методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия лекарственных средств [8].
Токсическое действие препарата на сердце
оценивали с использованием макро- и микроскопических (гистологических) методов исследования в сроки проведения плановой аутопсии животных.
Влияние на ЦНС оценивали по поведенческим реакциям животных. Оценивали рефлексы «позы», «походки», атаксию, реакции на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители. Состояние вегетативных эффектов оценивали по величине зрачка (миоз, мидриаз), наличию или отсутствию экзофтальма. Фиксировали все патологические изменения в поведении и клиническом состоянии животных.
Эвтаназию мышей и крыс проводили путем передозировки эфира для наркоза, а кроликов - путем внутривенного введения тиопентала натрия в количестве 200 мг на животное.
Статистический анализ проводили с использованием программы Statistica ver. 7.0. Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (M) и стандартную ошибку среднего (m). Достоверность отличий между группами данных оценивали с применением t-крите-рия Стьюдента и U-критерия Манна Уитни, в зависимости от числа наблюдений и характера распределения величин параметров в группе. Различия считали достоверными при P<0.05.
Результаты и обсуждение.
«Острая» токсичность препарата АдеЛакттм
Препарат АдеЛакт™ при однократном внутривенном введении мышам (самцам и самкам) в дозах от 4,3х1011 частиц/м2 до 430х10и частиц/м2 был удовлетворительно перенесен животными. Гибель мышей от токсичности отсутствовала. При использовании препарата в дозе, равной 860х10и частиц/м2, была зафиксирована гибель мышей от токсического действия препарата, которая составила в группе мышей-самцов 33%, а в группе мышей-самок - 17% (табл.1).
При аутопсии макроскопические изменения во внутренних органах и тканях были выявлены только у погибших животных, которые получили препарат в максимальной дозе, равной 860х1011 частиц/м2. У этих мышей наблюдали полнокровие печени и селезенки.
Крысы оказались более чувствительным видом животных к токсическому действию препарата АдеЛакт™ чем мыши (табл. 1 и 2). Так, при однократном внутривенном введении препарата АдеЛакт™ крысам (самцам и самкам) в дозах от 4,3х10и частиц/м2 до 215,0х10и частиц/м2 гибель животных от токсичности отсутствовала. У этих животных наблюдали внешние проявления интоксикации в виде адинамии или гиподинамии. В
Таблица 1
Гибель мышей от токсичности после однократного внутривенного введения препарата АдеЛакт™
мышам («острая» токсичность)
исследуемый препарат или контрольное вещество Доза препарата частиц/м2 общее количество животных Гибель животных от токсичности
всего погибло % сроки гибели, сутки
Самцы
АдеЛакт™ 4,3х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 43,0х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 215,0х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 430,0х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 860,0х1011 6 2 33 2 и 9
0,9% раствор NaCl 25 мл/кг 6 0 0 -
Самки
АдеЛакт™ 4,3х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 43,0х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 215,0х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 430,0х1011 6 0 0 -
АдеЛакттм 860,0х1011 6 1 17 13
0,9% раствор NaCl 25 мл/кг 6 0 0 -
течение 48 часов после введения препарата крысы были вялыми и слабо реагировали на внешние раздражители (звуковые, тактильные, болевые). При использовании препарата в дозах, равных 430,0х1011 частиц/м2 и 860,0х1011 частиц/м2, наблюдали гибель крыс от токсического действия препарата, которая колебалась (в зависимости от дозы и пола животных) от 17% до 50% (табл.2).
При вскрытии крыс, погибших в первые сутки после введения препарата АдеЛакт™ в летальных дозах, отмечали увеличенные в размере и плотные легкие (отечные) с точечными кровоизлияниями, увеличенную полнокровную селезенку, точечные кровоизлияния в почки и диффузное кровотечение в толстом отделе кишечника.
«Субхроническая» токсичность препарата АдеЛакттм
Многократное (ежедневно в течение 5-и дней) внутривенное введение препарата АдеЛакт™ крысам в суммарных дозах, равных 43,0х1011 ча-стиц/м2 и 430,0х1011 частиц/м2 и кроликам - в суммарных дозах, равных 43,0х1011 частиц /м2 и 215,0х10и частиц/м2, было удовлетворительно перенесено животными: гибель от токсичности отсутствовала.
Препарат АдеЛакт™ в исследованных дозах не вызывал изменений интегральных показа-
телей у крыс и кроликов (потребление пищи, воды, поведенческие реакции). При использовании препарата АдеЛакт™ у крыс в суммарной дозе 430,0х10и частиц/м2 было зафиксировано два пика снижения массы тела - на 3 и 14 сутки после последнего введения препарата. У кроликов, при использовании препарата в суммарной дозе 430,0х1011 частиц/м2, достоверное снижение массы тела было отмечено в течение 10 суток после последнего введения препарата (табл. 3).
После многократного внутривенного применения препарата АдеЛакт™ крысам в суммарных дозах 43,0х1011 частиц/м2 и 430,0х1011 частиц/м2 и кроликам в суммарных дозах 43,0х1011 частиц/м2 и 215,0х10и частиц/м2, по данным клинико-лабо-раторных и патологоанатомических (аутопсия с макроскопической оценкой состояния внутренних органов и тканей) исследований, у животных не выявлено существенных изменений, которые свидетельствовали бы о токсическом действии препарата на кровь, сердце, почки, органы ЖКТ и ЦНС. Препарат не оказывал негативного влияния на углеводный и липидный обмен у животных. При использовании препарата в максимально исследованной дозе у крыс отмечали транзиторное, умеренное нарушение барьерной функции печени, сопровождающееся увеличением уровня АЛТ в сыворотке крови
Таблица2
Гибель крыс от токсичности после однократного внутривенного введения препарата АдеЛакт™
крысам («острая» токсичность)
исследуемое ЛС или контрольное вещество Доза препарата частиц/м2 общее количество животных Гибель животных от токсичности
всего погибло % сроки гибели, сутки
Самцы
АдеЛакт™ 4,3х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 43,0х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 215,0х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 430,0х1011 6 2 33 1, 20
АдеЛакт™ 860,0х1011 6 2 33 1
0,9% раствор NaCl 10 мл/кг 6 0 0 -
Самки
АдеЛакт™ 4,3х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 43,0х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 215,0х1011 6 0 0 -
АдеЛакт™ 430,0х1011 6 1 17 1
АдеЛакт™ 860,0х1011 6 3 50 1
0,9% раствор NaCl 10 мл/кг 6 0 0 -
в 2 раза, а у кроликов - транзиторное, умеренное нарушение белоксинтезирующей функции печени, сопровождающееся статистически достоверным снижением количества альбумина в сыворотке крови в 1,4 раза (табл. 4 и 5).
При гистологическом исследовании внутренних органов и тканей крыс после многократного применения препарата АдеЛакт™ в суммарной дозе, равной 43,0х1011 частиц/м2, у отдельных крыс отмечали неглубокие очаговые и полностью обратимые дистрофические изменения в печени, деструктивно-воспалительные изменения в почках и воспалительные изменения в легких. При увеличении суммарной дозы препарата до 430,0х1011 частиц/м2, у животных наблюдали неглубокие и очаговые дистрофические изменения в печени и деструктивные и/или воспалительные изменения в почках и сердце (миокарде) отдельных крыс. При использовании этой дозы препарата отмечено повышенное содержание в синусоидах печени лимфоцитов и клеток РЭС (клетки Купфера и эндотелиоциты). Выявленные морфологические изменения в сердце крыс были полностью обратимы, а в печени и почках - частично обратимы.
При гистологическом исследовании внутренних органов и тканей кроликов после многократного применения препарата АдеЛакт™ в суммарной дозе, равной 43,0х1011 частиц/м2, у отдельных кроликов наблюдали изменения в тимусе (высокое содержание лимфоцитов), селезенке (слияние крупных лимфатических фолликулов, что, по-видимому, связано с повышенной пролиферацией лимфоцитов), щитовидной железе (по-
вышенное содержание интрафолликулярной ткани), печени (умеренные дистрофические изменения гепатоцитов), сердце и почках (умеренные воспалительные или дистрофические изменения). Выявленные патологические изменения в щитовидной железе, тимусе, сердце и почках кроликов были полностью обратимы (срок обратимости - 30 суток). Морфологические изменения в ткани печени и селезенке были не полностью обратимы: к 30 суткам наблюдения они имели тенденцию к обратимости и носили умеренно выраженный характер. При использовании препарата в суммарной дозе, равной 215,0х1011 частиц/м2, у отдельных животных наблюдали морфологические особенности или изменения в легких (следы бронхиолита), печени (дистрофические изменения некоторых гепатоцитов, повышенное содержание лейкоцитов в синусоидах), тимусе (повышенное содержание лимфоцитов), селезенке (слияние крупных лимфатических фолликулов), щитовидной железе (повышенное содержание интрафолликулярной ткани), сердце и почках (воспалительные или дистрофические изменения). Выявленные изменения в щитовидной железе, сердце и легких были полностью обратимы (период обратимости - 30 суток), а в тимусе, печени, селезенке и почках - сохранялись.
На крысах суммарная доза препарата АдеЛакт™ при его многократном внутривенном применении, равная 43,0х1011 частиц/м2, превышающая расчетную эквитерапевтическую дозу для человека в 10 раз, охарактеризована как низкая токсическая доза (НТД), а доза препарата, равная
Таблица 3
Гибель от токсичности и изменение массы крыс и кроликов после 5-кратного внутривенного введения препарата АдеЛакт™ («субхроническая» токсичность)
Доза препарата АдеЛакт™, частиц/м2 Гибель от токсичности, % Масса тела животных, сутки после последнего введения препарата
разовая суммарная фон 3 7 10 14 21 30
КРЫСЫ
8,6x10" 43,0x10" 0 214±2 246±6 226±15 265±10 264±12 274±19 260±31
86,0x10" 430,0x10" 0 215±2 219±12* 251±5 252±18 226±23* 271±26 265,4±34
Контроль; изотонический (0,9%) раствор хлористого натрия
5 мл/кг 25 мл/кг 0 213±2 234±8 243±7 266±9 273±11 299±15 311±17
КРОЛИКИ
8,6x10" 43,0x10" 0 2553±34 2595±37 2638±31 2715±9 2770±62 2807±49 2932±68
43,0x10" 215,0x10" 0 2473±37 2318±45* 2323±79* 2467±92* 2540±11 2703±50 2960±45
Контроль; изотонический (0,9%) раствор хлористого натрия
5 мл/кг 25 мл/кг 0 2600±115 2640±106 2697±91 2733±69 2770±70 2837±59 3013±109
* - отличия между опытной и контрольной группой статистически достоверны при р<0.05.
430,0х1011 частиц/м2, превышающая расчетную эквитерапевтическую дозу для человека в 100 раз - как высокая токсическая доза (ВТД, соответствует МПД;). На кроликах суммарная доза препарата АдеЛакт™ при его многократном внутривенном введении, равная 43,0х1011 частиц/м2, превышающая расчетную эквитерапевтиче-скую дозу для человека в 10 раз, охарактеризована как умеренно токсическая доза (УТД), а доза препарата, равная 215,0х1011 частиц/м2, пре-
вышающая расчетную эквитерапевтическую дозу для человека в 50 раз - как ВТД.
При сопоставлении данных, полученных при изучении «субхронической» и «острой» токсичности на крысах, рассчитан индекс кумуляции препарата АдеЛакт™ (1к, [9]) при его внутривенном введении, который составил величину, равную -12,5%, что свидетельствует об отсутствии кумулятивных свойств у препарата и обратимости его токсических эффектов.
Таблица 4
Биохимические показатели сыворотки крови крыс после 5-кратного внутривенного введения
препарата АдеЛакт™
Доза разовая/суммарная, частиц/м2 орган Сутки после введения препарата
3 14 30
8,6х10"/43,0х10" «< |_и 68,0±9,8 46,4±6,4 88,8±10,5
86,0х10"/430,0х10" 108,6±13,1* 46,6±5,7 75,6±19,0
0,9% раствор NaCl 51,4±9,0 33,0±5,9 67,4±5,8
8,6х10"/43,0х10" <£ Ш 188,0±21,3 143,0±8,0 165,4±11,9
86,0х10"/430,0х10" 161,6±16,8 135,2±9,9 184,0±21,1
0,9% раствор NaCl 159,2±21,1 143,6±7,3 155,4±13,0
8,6х10"/43,0х10" ЩФ (Е/л) 304,8±29,4 363,2±33,6 259,4±42,1
86,0х10"/430,0х10" 361,4±27,0 300,8±27,7 226,2±82,7
0,9% раствор NaCl 311,0±9,4 316,0±11,6 287,0±18,9
8,6х10"/43,0х10" Билирубин Общий (мкмоль/л) 5,3±1,2 4,0±0,9 2,9±0,4
86,0х10"/430,0х10" 4,3±1,0 3,4±0,4 3,2±0,6
0,9% раствор NaCl 5,3±0,9 3,2±0,3 4,3±0,8
8,6х1011/43,0х1011 Мочевина (ммоль/л) 7,7±0,3 7,6±0,8 8,1±0,5
86,0х1011/430,0х1011 8,3±0,5 7,7±0,6 8,1±0,5
0,9% раствор NaCl 7,4±0,3 7,0±0,9 7,7±0,5
8,6х1011/43,0х1011 Креатинин (мкмоль/л) 73,2±6,8 55,0±3,5 75,8±9,2
86,0х1011/430,0х1011 86,6±17,6 71,4±6,4 68,0±7,6
0,9% раствор NaCl 69,4±7,4 62,8±3,3 89,8±8,1
8,6х1011/43,0х1011 Общий белок (г/л) 81,8±12,7 63,6±3,1 82,2±8,7
86,0х1011/430,0х1011 77,8±6,7 62,8±6,8 84,8±6,4
0,9% раствор NaCl 77,6±6,3 78,6±9,8 76,4±8,6
8,6х1011/43,0х1011 Альбумин (г/л) 48,0±2,9 32,0±2,6 38,8±6,2
86,0х1011/430,0х1011 42,0±3,7 31,4±3,2 36,2±2,4
0,9% раствор NaCl 44,4±5,8 41,0±3,8 38,6±2,7
8,6х1011/43,0х1011 Глюкоза (ммоль/л) 8,0±0,4 3,9±0,3 5,5±0,8
86,0х1011/430,0х1011 7,5±0,5 4,9±0,7 5,7±0,2
0,9% раствор NaCl 6,9±0,2 5,8±0,6 6,1±0,7
8,6х1011/43,0х1011 Холестерин (ммоль/л) 2,5±0,4 1,6±0,2 1,8±0,4
86,0х1011/430,0х1011 2,6±0,2 1,6±0,2 1,6±0,2
0,9% раствор NaCl 1,8±0,1 1,5±0,2 1,7±0,3
* - отличия между опытной и контрольной группой статистически достоверны при p<0.05.
Таблица 5
Биохимические показатели сыворотки крови кроликов после 5-кратного внутривенного введения
препарата АдеЛакт™
Доза разовая/суммарная, частиц/м2 Орган Сутки после введения препарата
фон 3 14 30
8,6х1011/43,0х1011 43,0х10"/215,0х10" «< ш 53,3±6,2 42,3±7,5 52,3±4,3 52,3±8,0
51,7±12,2 72,0±20,0 44,7±5,8 48,7±6,6
0,9% раствор №0! 61,7±15,4 55,0±16,4 68,7±9,0 51,0±7,1
8,6х1011/43,0х1011 43,0х1011/215,0х1011 «< ш 35,0±4,6 32,3±6,8 68,3±7,5 42,3±1,3
37,0±9,3 60,0±12,3 68,3±13,8 36,0±5,5
0,9% раствор №0! 48,6±4,5 48,7±9,7 63,7±15,3 42,7±4,5
8,6х1011/43,0х1011 ЩФ (Е/л) 165,3±20,5 224,0±30,6 137,7±33,8 205,7±52,3
43,0х1011/215,0х1011 175,0±10,4 153,3±52,0 154,3±39,3 158,3±26,0
0,9% раствор №0! 141,7±20,5 151,0±17,5 139,3±10,3 161,7±34,8
8,6х1011/43,0х1011 43,0х1011/215,0х1011 Билирубин Общий (мкмоль/л) 3,5±0,5 3,8±0,6 3,3±0,3 3,6±0,8
4,3±0,7 4,6±0,9 3,6±0,3 3,6±0,3
0,9% раствор №0! 4,0±0,7 3,7±0,6 4,4±0,3 4,3±0,6
8,6х1011/43,0х1011 43,0х1011/215,0х1011 0,9% раствор №0! Мочевина (ммоль/л) 4,8±0,3 5,5±1,1 6,9±1,3 6,2±0,8
5,0±0,6 3,9±0,4 6,1±0,6 5,4±0,2
5,9±0,7 4,7±0,1 6,1±1,2 7,3±1,0
8,6х1011/43,0х1011 Креатинин (мкмоль/л) 150,0±8,5 147,7±14,7 177,0±16,0 177,3±14,7
43,0х1011/215,0х1011 137,3±3,8 137,7±15,4 177,0±24,4 186,7±17,7
0,9% раствор Ыа0! 137,3±10,7 130,7±16,7 145,0±9,2 148,7±7,5
8,6х1011/43,0х1011 Общий белок (г/л) 74,7±5,9 82,7±4,6 66,7±4,7 60,0±1,2
43,0х1011/215,0х1011 60,7±3,3 43,7±3,8 63,7±2,7 93,7±11,3
0,9% раствор Ыа0! 65,3±11,9 72,7±22,2 65,3±4,4 92,7±4,7
8,6х1011/43,0х1011 Альбумин (г/л) 49,7±4,1 45,7±2,4 44,7±2,7 35,3±2,3
43,0х1011/215,0х1011 35,7±2,7 24,3±4,8* 51,0±5,1 51,0±4,4
0,9% раствор Ыа0! 42,3±10,3 35,0±1,7 45,0±3,6 47,3±2,0
8,6х1011/43,0х1011 Глюкоза (ммоль/л) 4,9±0,2 6,7±0,5 7,7±0,3* 3,4±0,1
43,0х1011/215,0х1011 4,6±0,8 5,0±0,7 7,5±0,4* 4,5±0,6
0,9% раствор Ыа0! 4,1±0,6 4,5±0,5 4,7±0,3 4,2±0,2
8,6х1011/43,0х1011 Холестерин (ммоль/л) 2,0±0,3 2,5±0,6 1,6±0,3 2,1±0,4
43,0х1011/215,0х1011 1,8±0,3 2,0±0,8 2,0±0,2 2,0±0,3
0,9% раствор Ыа0! 2,0±0,2 2,1±0,2 1,8±0,3 1,5±0,2
* - отличия между опытной и контрольной группой статистически достоверны при р<0.05.
При изучении местнораздражающего действия препарата АдеЛакт™ , на 3 сутки после его однократного внутривенного введения в концентрации 2,3x1с11 частиц в мл вены у всех кроликов (п = 5) были расширены с небольшим содержанием крови. У всех животных отмечено некоторое выбухание кожи над сосудом. При гистологическом исследовании у 4-х кроликов патологических изменений стенки вены и окружающих тка-
ней не обнаружено. У одного кролика отмечен небольшой отек - выход плазмы в стенку вены и окружающую подкожную ткань.
На 14 сутки после внутривенного введения препарата АдеЛакт™ у всех кроликов (п=5) просвет вены был не расширен и содержал небольшое количество крови. Признаков отека или иных патологических изменений в стенке вены и окружающих тканей не выявлено.
Заключение. Препарат АдеЛакт™ по степени опасности «острого» токсического действия может быть классифицирован как «малоопасное лекарственное средство», а по степени опасности «хронического/субхронического» токсического действия - как «умеренно опасное лекарственное средство». Препарат в дозах, превышающих расчетную эквитерапевтическую дозу для человека в 10 раз, не оказывал существенного влияния на
функцию и структуру органов и тканей лабораторных животных. В больших дозах, превышающих расчетную эквитерапевтическую дозу для человека в 50 - 100 раз, возможно умеренное ге-пато- и нефротропное действие. Возможно развитие воспалительного процесса в легких. Внутривенное введение препарата АдеЛакт™ оказывало слабо выраженное и полностью обратимое мест-нораздражающее действие.
список литературы
1. Gonzalez-Chavez SA, Arevalo-Galle-gos S, Rascón-Cruz Q. Int J Antimicrob Agents. 2009. V. 33. N4. P. 301e1-8.
2. Немцова Е.Р., Эделева Н.В., Осипова Н.А., Якубовская Р.И., Бойко А.В., ДемидоваЛ.В., Чиссов В.И.. Российский онкологический журнал.2006. № 4. С. 29-33.
3. Чиссов В.И., Якубовская Р.И., Немцова Е.Р., Осипова Н.А., Эделева Н.В., Уткин М.М., Звягин А.А. Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 2008. №
11. С. 14-19.
4. Народицкий Б.С., Шмаров М.М., Логунов Д.Ю., Тутыхина И.Л., Токарская Е.А., Чиссов В.И., Якубовская Р.И., Немцова Е.Р., Безбородова О.А. Способ получения рекомбинантного лактоферрина человека. Российский патент № 2340676, 2008.
5. Tutykhina I., Bezborodova O., Shmarov M, Logunov D., Nemtsova E., Yakubovs-kaya R., Naroditskiy B., Gintsburg A. Protein expression purification. 2009. V.
65. N1. Р. 100-107.
6. Тутыхина И.Л., Безбородова О.А., Верховская Л.В., Шмаров М.М. Логунов Д.Ю., Немцова Е.Р., Народицкий Б.С., Якубовская Р.И., ГинцбургА.Л. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2009. Т.1. С. 27-31.
7. Якубовская Р.И., Безбородова О.А., Немцова Е.Р., Тутыхина И.Л., Шмаров М.М., Логунов Д.Ю., Народицкий Б.С., Чиссов В.И., Гинцбург А.Л. Молекулярная генетика,
микробиология и вирусология. 2010. Т. 2. С. 28-33.
8. Руководство по экспериментальному (доклиническому)изучению новых фармакологических веществ, под редакцией Р.У.Хабриева, М, «Медицина», 2005, 832с.
9. Методы экспериментальной химиотерапии, практическое руководство, под редакцией Г.Н.Першина, М. «Медицина», 1971, 541 с.
REFERENcEs:
1. Gonzalez-Chavez SA, Arevalo-Gallegos S, Rascón-Cruz Q. Int J Antimicrob Agents. 2009. V. 33. N4. P. 301e1-8.
2. Nemtsova E.R., Edeleva N.V., Osipova N.A., Yakubovskaya R.I., Boiko A.V., Demidova L.V., Chissov V.I. Russian Journal of Oncology. 2006. # 4. P. 29-33 (in Russian).
3. Chissov V.I., Yakubovskaya R.I., Nemtsova E.R., Osipova N.A., Edeleva N.V., Utkin M.M., Zvyagin A.A. Khirurgiya.
Zhurnal imeni N.I. Pirogova ( Surgery) . 2008. #11. P. 14-19 (in Russian).
4. Naroditskiy B.S., Shmarov MM, Logunov DYu, Tutykhina IL, Tokarskaya EA, Chissov VI, Yakubovskaya RI, Nemtsova ER, Bezborodova OA. Method for Production of Recombinant Human Lactoferrin. Russian Patent # 2340676, 2008 (in Russian).
5. Tutykhina I., Bezborodova O., Shmarov M, Logunov D., Nemtsova E., Yakubovskaya R., Naroditskiy
B., Gintsburg A. Protein expression purification. 2009. V. 65. N1. P. 100-107.
6. Tutykhina I.L., Bezborodova O.A., Verkhovskaya L.V., ShmarovM.M., Logunov D.Yu., Nemtsova E.R., Naroditskiy B.S., Yakubovskaya R.I., Ginzburg A.L. Molecular Genetics, Microbiology & Virology. 2009. V. 1. P. 27-31 (in Russian).
7. Yakubovskaya R.I., Bezborodova OA, Nemtsova ER, Tutykhina IL, Shmarov MM, Logunov DYu, Naroditskiy BS, Chissov
VI, Ginzburg AL. Molecular Genetics, Microbiology & Virology. 2010. V. 2. P. 28-33 (in Russian).
8. Guidelines for Experimental (Preclinical) Study of Novel Pharmacological Substances. Edit. RU Khabriev, M, «Medicine», 2005, 832 p (in Russian).
9. Methods of Experimental Chemotherapy, Practical Guidelines. Edit. GN Pershin, M. «Medicine», 1971, 541 p (in Russian).
R.I. Yakubovskaya1, A.A. Pankratov1, T.N. Andreeva1, J.B. Venediktova1, O.A. Bezborodova1, I.L. Tutykhina2, E.V. Evgrafov2, D.Yu. Logunov2, M.M. Shmarov2
PRECLINICAL STUDY OF GENERAL TOXICITY OF ADELACT™ IN RODENT MODELS
1Federal State Budgetary Institution «P.A.Gerzen Moscow Research Institute of Oncology», RF Ministry of Health, 125284, Moscow, Russian Federation
2 Federal State Budgetary Institution «N.F. Gamaleya Research Institute of Epidemiology and Microbiology», RF Ministry of Helath,123098, Moscow, Russian Federation.
Toxicity of AdeLact™, a novel medicinal product on the basis of recombinant pseudo-adenoviral particles expressing human lactoferrin gene, was studied. Acute toxicity was evaluated in mice and rats, and sub-chronic toxicity was evaluated in rats and rabbits. According to its acute toxicity, AdeLact™ was classified as a low hazardous preparation and according to its sub-chronic toxicity, as a moderate hazardous preparation. In toxic doses, AdeLact™demonstrated moderate hepatic and renotropic toxicity. Inflammatory processes might develop in lungs after administration of AdeLact™. Intravenous infusion of AdeLact™ produces a mild and fully recoverable local effect.
Keywords: AdeLact™, human lactoferrin gene, human lactoferrin, adenovirus of serotype 5, general toxicity, acute toxicity, sub-chronic» toxicity.
Переработанный материал поступил в редакцию 10.03.2015 г.
