CC BY
116
УДК 615.322:582.284:547.477.2].015.42:612.397.2.085.2
ИЗУЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ АГАРИЦИНОВОЙ КИСЛОТЫ
© 2010 Е.О. Сергеева, А.Ю. Айрапетова, К.А. Айрапетова
Пятигорская государственная фармацевтическая академия
Поступила в редакцию 28.09.2010
Была изучена антиоксидантная активность агарициновой кислоты, полученной из плодового тела трутовика лекарственного. Эффективность антиоксидантного действия оценивали по степени ин-гибирования интенсивности перекисного окисления липидов липосом яичного лецитина в опытных образцах по отношению к контрольным. Установлено, что растворы агарициновой кислоты в диметилсульфоксиде и спирте этиловом 95% обладают способностью ингибировать процессы перекисного окисления липидов. Сравнительное изучение антиоксидантной активности агарицино-вой кислоты в системе липосом проводили в сравнении с раствором кверцетина.
Ключевые слова: агарициновая кислота, трутовик лекарственный, антиоксидантная активность, перекисное окисление липидов, тиобарбитуровая кислота, свободные радикалы
В результате неконтролируемого обществом научно-технического прогресса из года в год ухудшается экологическая обстановка, как в городах, так и в сельской местности. В продаже появляются тысячи бытовых и строительных изделий, лекарственных препаратов, сделанных из новых полимеров и других соединений, качественно отличающихся от природных. Налицо уже резкое ухудшение основных параметров здоровья населения. Падает рождаемость и продолжительность жизни. Известно, что свободные радикалы играют определенную роль в развитии многих заболеваний. Одним из наиболее негативных является формирование липидной пероксидации. Если свободные радикалы окисляют липиды, происходит образование опасной формы липидно-го пероксида. Окислительный стресс является важным патогенетическим фактором развития многих заболеваний и патофизиологических процессов (более 100), таких как воспаление, атеросклероз, канцерогенез, ишемическое и реперфузионное поражение тканей, диабет и т.д. [3-5]. Поддерживать организм в нормальном состоянии - значит сохранять необходимый баланс между свободными радикалами и антиокислительными силами, роль которых выполняют антиоксиданты. Многочисленные данные литературы свидетельствует о том, что введение антиоксидантов при воспалительных
Сергеева Елена Олеговна, кандидат фармацевтических наук, преподаватель кафедры микробиологии и биохимии. E-mail: [email protected] Айрапетова Ася Юрьевна, кандидат фармацевтических наук, старший преподаватель кафедры фармацевтической химии. E-mail: [email protected] Айрапетова Карина Артуровна, аспирантка. E-mail: [email protected]
заболеваниях, сердечно-сосудистой патологии, токсических поражениях печени и т. д., позволяет заметно уменьшить интенсивность пере-кисного окисления липидов (ПОЛ) и другие последствия деструктивного действия свободных радикалов, а также снизить выраженность того или иного патологического процесса.
Одним из перспективных путей при разработке новых лекарственных средств является поиск новых биологически активных соединений среди природных объектов. Базидиоми-цетовые грибы являются источником получения ряда высокоэффективных соединений с противоопухолевой активностью, антибиотиков, антисклеротических препаратов. Уникальным объектом исследования по своему химическому составу является лиственничная губка, или трутовик лекарственный (Fomitopsis officinalis (Will.) Bond.et Singer, сем. Polypo-raceae). Плодовое тело гриба, паразитирующего на лиственнице, реже пихте накапливает до 10% по отношению к массе сырья агарициновой кислоты, до 80% смолистых веществ кислотного характера, эбурикоевую кислоту, полисахариды и другие биологически активные соединения. По данным зарубежных авторов, агарициновая кислота (С19НзбОИ(СООИ)з) проявляет противоопухолевое действие [1].
Цель настоящего исследования: изучение антиоксидантной активности (АОА) выделенной из плодового тела трутовика лекарственного агарициновой кислоты.
Материалы и методика. Для изучения антиоксидантной активности использовали образец агарициновой кислоты, выделенный из плодового тела трутовика лекарственного, собранного на лиственнице в Алтайском крае
2097
Известия Самарского научного центра Российской академии наук, т. 12, № 1(8), 2010
[4]. Кислота мало растворима в воде, растворима в спирте, диметилсульфоксиде.
Антиоксидантное действие агарицино-вой кислоты было изучено in vitro на модели Бе2+-индуцированного ПОЛ в липосомальной системе, полученной на основе фосфатидилхо-лина. Липосомы получали из яичного фосфа-тидилхолина при концентрации липидов 40 мг/мл [6]. Эффективность антиоксидантного действия оценивали по степени ингибирования интенсивности ПОЛ липосом в опытных образцах по отношению к контрольным. Интенсивность ПОЛ липосом измеряли по накоплению тиобарбитуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов за 15 мин инкубации. Реакцию проводили на водяной бане при 37° С. В опытные образцы вносили соответствующие исследуемые фракции. В контрольные пробы добавляли только растворитель (спирт 60% или масло подсолнечное очищенное дезодорированное). Интенсивность поглощения ТБК-активных продуктов измеряли на спектрофотометре СФ-2000 при длине волны 532±2 нм [2]. Рассчитывали процент торможения ПОЛ по отношению к контрольной пробе. В качестве критерия для оценки антиоксидантной активности исследуемого соединения рассчитывали значение коэффициента I50, который показывает концентрацию вещества в среде инкубации, вызывающую снижение интенсивности ПОЛ на 50%.
Результаты и обсуждение. В табл. 1 представлены данные о влиянии раствора агарициновой кислоты в диметилсульфоксиде (ДМСО) и спирте этиловом 95% на накопление ТБК-активных продуктов (в %) в соответствующих концентрациях. Концентрация ага-рициновой кислоты в спирте этиловом 95%, при которой продукция свободных радикалов была подавлена в наибольшей степени, составила 5,0-10-4%, а при растворении агарицино-вой кислоты в ДМСО, концентрация, при которой была практически полностью остановлена выработка свободных радикалов составила 6,25-10-4% (снижена на 87%). Таким образом, исследуемое соединение обладает способностью ингибировать образование ТБК-активных продуктов в используемой системе, что свидетельствует о наличии у него антиок-сидантной активности. Для сравнения снижения накопления перекисных соединений в
опыте с агарициновой кислотой был исследован кверцетин. Данные представлены в табл. 2.
Таблица 1. Влияние агарициновой кислоты на интенсивность Ее2+-индуцированного ПОЛ в суспензии липосом из яичного лецитина
Концентрация агарициновой кислоты в ДМСО в среде инкубации,% Снижение ПОЛ (% )
6,25-10-4 86,9
1,25-10-3 74,5
2,5-10-3 15,3
5,0-10-3 35,0
1,0-10-2 89,8
2,0-10-2 46,7
Концентрация ага-рициновой кислоты в спирте этиловом 95% в среде инкубации,% Снижение ПОЛ (% )
10-4 39,6
2,5-10-4 42,2
5,0-10-4 44,7
10-3 41,7
2,0-10-3 15,3
Таблица 2. Влияние кверцетина на интенсивность Бе2+-индуцированного ПОЛ в суспензии липосом из яичного лецитина
Концентрация кверцетина в среде инкубации, % Снижение ПОЛ (% )
3,04-10-5 20,9
1,52-10-4 10,2
3,04-10-4 43,9
1,52-10-3 41,7
3,04-10-3 94,4
1,52-10-2 98,7
Как следует из табл. 2, кверцетин практически полностью подавляет накопление по-дуктов пероксидации в концентрации 1,52-10-2 (торможение на 98,7%). Для сравнения эффективности антиоксидантного действия были построены графики зависимости процента снижения интенсивности ПОЛ от разведения в среде инкубации и рассчитаны коэффициенты 150, значения которых приведены в табл. 3.
Таблица 3. Значения коэффициента 150 исследуемых фракций в системе Бе2+-индуцированного ПОЛ липосом
Исследуемое соединение Агарициновая кислота в ДМСО Агарициновая кислота в спирте этиловом 95% Кверцетин
Значение коэффициента I50, % 3,04-10-2 0,29 1,9-10-3
2098
Выводы: результаты исследований позволили установить наличие АОА агарициновой кислоты. Наибольшая антиоксидантная активность в системе липосом на модели Fe2-индуцированного ПОЛ, выявлена у агарициновой кислоты в ДМСО, по сравнению со спиртовым раствором. Установленное снижение накопления перекисных соединений изучаемой кислоты было исследовано в сравнении с кверцетином.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
1. Белова, Н.В. Перспективы использования биологически активных соединений высших базидио-мицетов в России // Экол. и фитопатол. 2004. Т. 38, №2. С. 1-4.
2. Владимиров, Ю.А. Определение антиоксидантной активности методами хемилюминесценции / Ю.А. Владимиров, О.Б. Любимов, Д.Ю. Измайлов // Актуальные проблемы создания новых лекарствен-
ных препаратов природного происхождения: материалы 9 Междунар. съезда «Фитофарм 2005» и конф. молодых учёных Европейск. Фитохимич. о-ва «Растения и Здоровье» 22-25 июня 2005 г. -СПб., 2005. С. 67-73.
3. Макаров, В.Г. Антиоксиданты и реакционно-активные формы кислорода. Их роль и механизм действия / В.Г. Макаров, М.Н. Макарова // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы 8 Междунар. съезда «Фитофарм 2004». Мик-кели 21-23 июня 2004 г. - СПб., 2004. С. 121-132.
4. Патент № 2330676 РФ. Способ получения агарициновой кислоты / А.Ю. Айрапетова, П.А. Цуканова, М.В. Гаврилин, Т.А. Шаталова /Опубл. 10.08.08. 8 с.
5. Марков, Х.М. Оксидативный стресс и дисфункция эндотелия / Х.М. Марков // Пат. физиол. и экспе-рим. терапия. 2005. №4. С. 5-9.
6. Современные методы в биохимии / Под ред. В. Н. Ореховича. - М.: Медицина, 1977. 392 с.
STUDYING THE ANTIOXIDATIC ACTIVITY OF AGARICINIC ACID
© 2010 E.O. Sergeeva, A.Yu. Ayrapetova, K.A. Ayrapetova Pyatigorsk State Pharmaceutical Academy
Antioxidatic activity of agaricinic acid received from a fruit body of tinder fungus medicinal has been studied. Efficiency of antioxidatic action estimated on a degree of inhibition of intensity lipids peroxide oxidation intensity of liposomes from an egg lecithine in experimental models in relation to control. It is established, that solutions of agaricinic acid in a dimethylsulfoxide and alcohol of ethyl 95% possess ability to inhibit processes of lipids peroxide oxidation. Comparative studying of antioxidatic activity of agaricinic acid in system of liposomes spent in comparison with a solution of quercetinum.
Key words: agaricinic acid, tinder fungus medicinal, antioxidatic activity, lipids peroxide oxidation, thiobarbituric acid, free radicals
Elena Sergeeva, Candidate of Pharmacy, Lecturer at the Department of
Microbiology and Biochemistry. E-mail: [email protected]
Asia Ayrapetova, Candidate of Pharmacy, Senior Lecturer at the Department
of Pharmaceutical Chemistry. E-mail: [email protected]
Karina Ayrapetova, Post-graduate Student. E-mail: [email protected]
2099
