CC BY
69
Краткие сообщения
УДК 582.284:547.477.2:543.554.4.062
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АГАРИЦИНОВОЙ КИСЛОТЫ ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
© Т.Д. Мезенова, А.Б. Дмитриев , А.Ю. Айрапетова, М.В. Гаврилин
Пятигорская государственная фармацевтическая академия, пр. Калинина, 11, Пятигорск, 357532 (Россия) E-mail: [email protected]
Представлена методика количественного определения агарициновой кислоты потенциометрическим титрованием, которая используется для определения степени чистоты образцов, выделенных из Fomitopsis officinalis. Показано, что наиболее чистые образцы агарициновой кислоты получаются при экстракции спиртом этиловым.
Ключевые слова: агарициновая кислота, лиственничная губка (Fomitopsis officinalis), количественное определение, экстракция, степень чистоты, потенциометрическое титрование.
Введение
Одним из перспективных путей при разработке новых лекарственных средств является поиск новых биологически активных соединений среди природных объектов. К числу таких объектов можно отнести лиственничную губку - Fomitopsis officinalis (Vill. ex Fr.) Bond. et Sing. (семейство трутовиковых - Polyporaceae). Гриб паразитирует преимущественно на лиственнице, образуя на ее стволах крупные «плодовые» тела, чрезвычайно горькая мякоть которых обладает лекарственными свойствами. Основным действующим веществом лиственничной губки является агарициновая кислота (а-цетиллимонная кислота, АК), обладающая слабительным, кровоостанавливающим действием. Зарубежными исследованиями установлено, что агарициновая кислота угнетает клеточное дыхание, что особенно ценно при раковых новообразованиях [1]. В связи с этим ранее нами были разработаны методики выделения и очистки агарициновой кислоты из плодового тела трутовика лекарственного [2].
Цель настоящего исследования - разработка методики количественного определения агарициновой кислоты, выделенной из трутовика лекарственного, для установления степени чистоты полученных образцов.
Экспериментальная часть
Для получения образцов использовали плодовое тело трутовика лекарственного, собранного в Алтайском крае (образцы гриба I, II). Навеску измельченного сырья многократно экстрагировали диэтиловым эфиром (образец 1, 3) и 95%-ным этанолом (образец 2, 4) при суммарном соотношении сырья и экстрагента 1 : 25 до полного истощения, контролируя этот процесс хроматографически. После упаривания экстрактов полученные образцы очищали перекристаллизацией, высушивали до постоянной массы и проводили потенциометрическое титрование. Одновременно анализу подвергался стандартный образец агарициновой кислоты (СО) (Sigma Ol.).
Методика определения. Около 0,15 г (точная навеска) образца, содержащего агарициновую кислоту, помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 96%-ном этаноле и доводят спиртом до метки. Аликвотную часть полученного раствора 5,00 мл переносят в стакан вместимостью 50 мл, опускают в него электродную пару и добавляют около 20 мл спирта этилового таким образом, чтобы электроды были погружены в раствор приблизительно на 1 см. Индикаторным электродом служит стеклянный электрод, вспомогательным - хлоридсеребряный электрод, заполненный насыщенным раствором хлорида калия. Титруют
0,05 молярным спиртовым раствором калия гидроксида (ГФ XI). Объем титранта, пошедший на титрование, определяют по дифференциальным кривым титрования.
Массовую долю агарициновой кислоты в образце рассчитывают по формуле:
_ Т(КОН / АК) X V(KOH) X K(KOH) х W х 100
VA х a
* Автор, с которым следует вести переписку.
где Т(КОН/АК) = 0,006943 г/мл; У(КОИ) - объем титранта в точке эквивалентности, мл; К(КОН) - поправочный коэффициент раствора КОН; W - объем мерной колбы, мл; УА - объем аликвоты, мл; а - навеска образца, г.
Результаты и обсуждение
Дифференциальные кривые титрования представлены на рисунке.
Кривые титрования контрольных образцов и стандартного образца агарициновой кислоты идентичны, имеют четко выраженный скачок в щелочной среде при рН около 12. Интервал рН скачка титрования около четырех единиц, что дает возможность использовать данные потенциометрического титрования для количественного определения. Результаты потенциометрического титрования приведены в таблице.
I
14
12
10
8
6
4
2
О
II
2 4 6
Объем КОН. мл
Объем КОН, мл
III
Дифференциальные кривые титрования агарициновой кислоты: I - стандартный образец;
II - экстракция эфиром; III - экстракция спиртом
Содержание агарициновой кислоты в выделенных образцах
Объем КОН, мл
Образцы гриба Образцы агарициновой кислоты Экстрагент Массовая доля с учетом влаги, % Метрологические характеристики
I 1 2 Диэтиловый эфир Этиловый спирт 95,5 101,6 Дисперсия Б2 = 1,55 Стандартное отклонение Б = 1,25 Относительное стандартное отклонение Бг = 1,3%
II 3 4 Диэтиловый эфир Этиловый спирт 85,5 97,9
СО - 98,4
Однородность дисперсий результатов анализа для двух экстрагентов проверяли по критерию Фишера. Рэксп = 3,3; это меньше Ртабл(5,05), следовательно, дисперсии однородны.
Содержание агарициновой кислоты, полученной экстракцией спиртом и эфиром, сравнивали по t-критерию. 1зксп = 7,22, это больше ^абл (4,3), следовательно, экстракция спиртом дает значимо большее содержание агарициновой кислоты.
Выводы
1. Разработана методика количественного определения агарициновой кислоты потенциометрическим методом.
2. Наиболее эффективным экстрагентом агарициновой кислоты является спирт этиловый.
3. Показано, что агарициновая кислота, выделенная из лиственничной губки предложенным нами ранее методом, обладает высокой степенью чистоты, сходной со стандартным образцом.
Список литературы
Патент №2257222 РФ. Комплексная переработка гриба трутовика лекарственного (Fomitopsis officinalis (Vill.:Fr.) Bond/et Sing.) / В.М. Ушанова, У.С. Ооржак, В.И. Канзай / Опубл. 27.07.04. 10 с.
Патент №2330676 РФ. Способ получения агарициновой кислоты / А.Ю. Айрапетова, П.А. Цуканова, М.В. Гаврилин, Т.А. Шаталова / Опубл. 10.08.08. 8 с.
Поступило в редакцию 16 декабря 2008 г.
1.
