CC BY
6chicks - 50%. The course of disease was acute. The high pathogenicity of the strain under study causing death of chicks was demonstrated
Литература
1. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. pathotype: philosophy and methodology / R.L. Wit-Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. - М.: ter, B.W Calnek, C. Buscaglia, I.M. Gimeno, K.A. ВНИТИБП, 1998. - 928 с. Schat // Avian Pathol.- 2005.- Vol. 34, N 2.- P.75-90.
2. Госманов, РГ Ветеринарная вирусология / Р.Г. Гос- 4. Mareks disease. An evolving problem / Ed. by манов, М.Н. Колычев. - М: КолосС, 2006. - 304 с. IF Davison and V Nair. - London, Elsevier Acad.
3. Classication of Marek's disease viruses according to Press., 2004. -212 P.
Контактная информации об авторах для переписки Чичерина Екатерина Александровна, ведущий ветврач лаборатории болезней Марека и лейкоза птиц ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИ-ИЗЖ»). Адрес: 600028, г. Владимир, проспект строителей, д. 19 кв. 64. Тел.: (919) 018-30-11 (моб). E-mail: [email protected].
УДК: 619:616.98:578.835.2:616-078
С.Р. Кременчугская, Н.Е. Камалова, А.И. Егорова, М.В. Жильцова, Д.Н. Афонина, В.Д. Юрчишин
(ФГУ Федеральный центр охраны здоровья животных (ФГУ «<ВНИИЗЖ»))
ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ ИЗОЛЯТА ВИРУСА ЯЩУРА ТИПА А/КИРГИЗИЯ/07
Ключевые слова: вирус ящура, серология, изолят вируса, А/Киргизия/07, вакцина, антигенное родство.
Введение
Схема лабораторной диагностики болезней, протекающих с везикулярным синдромом, состоит из нескольких этапов. После постановки первичного диагноза на ящур задачей следующего этапа диагностики является определение биологических свойств возбудителя, его антигенного и иммуногенного спектров и степени одностороннего родства с производственными штаммами. В настоящее время, согласно Руководству МЭБ по диагностическим тестам и вакцинам для наземных животных, 2008 антигенное соответствие изо-лятов и производственных штаммов определяют в РМН и ИФА с сыворотками крови вакцинированного КРС [5, 7]. На основе этих данных прогнозируется эпизоотическая опасность очага болезни и ожидаемая эффективность вынужденной вакцинации. Окончательная классификация выделенного возбудителя проводится на основании данных о его двухстороннем антигенном родстве с ранее выделенными эпизоотическими изолятами и производственными штаммами в РСК с гипериммунными специфическими сыворотками морских свинок. [2].
Материалы и методы
Вирус ящура А/Киргизия/07 адаптиро-
вали к монослойным культурам клеток в течение 3-5 пассажей и использовали для определения антигенного соответствия производственным штаммам в РМН и ИФА. Для этого титр сыворотки КРС против полевого вируса сравнивали с титром сыворотки против гомологичного производственного штамма. Значение r1, вычисляли по формуле:
г _ титр референтной сыворотки с эпизоотическим изолятом 1 титр референтной сыворотки с производственным изолятом
Значение r1 в РМН интерпретировали согласно Barnett P et al, 2001 [3]:
> 0.3 - штаммы антигенно родственны, производственный штамм будет защищать от полевого изолята;
< 0.3 - штаммы антигенно отличаются, производственный штамм не будет защищать от полевого изолята.
Значение r1 в ИФА интерпретировали согласно критериям, установленным Ferris and Donaldson, 1992 [4]:
0,4-1,0 - близкое антигенное родство между полевым изолятом и производственным штаммом;
0,2-0,39 - полевой изолят антигенно родственен производственному штамму, вакцина из производственного штамма может быть использована, если не будет найдено более родственного штамма и при
условии, что животные будут иммунизированы более 1 раза;
<0,2 - полевой изолят отличается от производственного штамма, вакцина из которого не приемлема для защиты от заражения полевым вирусом.
Для постановки РСК с целью определения двустороннего антигенного родства использовали концентрированные инак-тивированные антигены, полученные при размножении вируса в культуре клеток 1В-Я5-2, и гипериммунные сыворотки морских свинок на штаммы вируса ящура типа А.
Двустороннее антигенное родство (Я%) штаммов рассчитывали по формуле Архетти и Хорсфала (Я% = 100х ^х г2). Штаммы вируса ящура считали относящимися к одному подтипу при Я > 40%, к разным подтипам — при Я = 25-40% [1].
Результаты и обсуждение
В конце декабря 2007 г. в ФГУ «ВНИ-ИЗЖ» из Департамента государственной ветеринарии Кыргызской Республики поступил патологический материал от КРС с подозрением на ящур. Для постановки диагноза применяли комплекс методов, таких как РСК, ИФА, ПЦР и вирусовыделение с использованием первичных и перевиваемых культур клеток. В поступившем материале методом ОТ-ПЦР был обнаружен вирус ящура типа А. В филогенетическом отношении вирус был отнесен к линии А Иран/05 топотипа Азия [6].
При заражении афтозным материалом чувствительных к вирусу ящура первично трипсинизированных и перевиваемых культур клеток СП, ПСГК-30 и 1В-Я5-2 уже в первом пассаже было отмечено проявление ЦПД. В культуре клеток ПСГК-30 выраженное ЦПД проявлялось через 24 часа после заражения, а полное отторжение клеток от стекла происходило через 48 часов после инокуляции материала. В культурах клеток СП и ГБ-Я8-2 90-100%-ное ЦПД отмечали в первом пассаже через 20-24 часа после заражения. Было
проведено 3-5 пассажей в культурах клеток, при этом титр инфекционной активности вируса, полученного в культуре клеток ПСГК-30, составил 5,0±0,15 и 7,0±0,08 ^ ТЦД50/мл в 4 и 5 пассажах соответственно. Титр инфекционной активности вируса 3 и 5 пассажей, репродуцированного в культуре клеток Ш-Я5-2, составил 6,33± 0,12 ^ ТЦД50/мл. Вирус 2 и 3 пассажей, размноженный в культуре клеток СП, имел титр инфекционной активности 5,0± 0,10 и 6,5±0,14 ^ ТЦД50/мл соответственно.
Изучение антигенного соответствия (г1) изолята А Киргизия/07 производственным штаммам проводили в реакции микронейтрализации и жидкофазном блокирующем варианте ИФА с использованием сывороток крови КРС, иммунизированного моновалентными инактивированными вакцинами против ящура типа А. При этом в РМН для сравнения использовали штаммы А22 № 550/Азербайджан/64, А22 Ирак 24/64, А Иран/97 и А Турция/2006, а в ИФА - А22 № 550/Азербайджан/64, А22 Ирак 24/64 и А Иран/97. Результаты исследований приведены в табл. 1 и 2.
Исходя из приведенных в табл. 1 данных, следует заключить, что изолят А/ Киргизия/07 является антигенно родственным штаммам вируса ящура А22 Ирак 24/64 и А Турция/06 (г1 = 0,7 и 0,5), следовательно в Кыргызской Республике целесообразно применять вакцины, изготовленные из антигенов вируса ящура штаммов А22 Ирак 24/64 или А Турция/06.
Как следует из результатов изучения антигенного соответствия в ИФА (табл. 2) производственные штаммы А22 №550/64 и А22/Ирак/64 имеют умеренное антигенное родство с изолятом вируса ящура А/Кир-гизия/07 (г1 = 0,24) и, согласно интерпретации результатов, рекомендованной в Руководстве МЭБ по диагностическим тестам и вакцинам для наземных животных, 2008, могут быть использованы для профилактики и ликвидации ящура в составе высокоактивных вакцин при условии прове-
Таблица 1
Результаты определения в РМН антигенного соответствия (г1) изолята вируса ящура типа А/Киргизия/2007 производственным штаммам типа А
Изолят Сыворотки, г1
А22 №550/64 А22 Ирак 24/64 А Турция/06 А Иран/97
А Киргизия/07 0,21 0,7 0,5 0,125
при значении г1 > 0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса; при значении г1 < 0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса.
Таблица 2
Результаты определения в ИФА антигенного соответствия (г1) изолята вируса ящура типа А/Киргизия/2007 производственным штаммам типа А
Изолят Сыворотки, г1
А22 №550/64 А22/Ирак/64 А Иран/97
А Киргизия/07 0,24 0,24 0,19
г1 - 0,4 - 1,0 - близкое антигенное родство между полевым изолятом и производственным штаммом;
г1 - 0,2 - 0,39 - полевой изолят антигенно родственен производственному штамму, вакцина из производственного штамма может быть использована, если не будет найдено более родственного штамма и при условии, что животные будут иммунизированы более 1 раза; г1 < 0,2 - полевой изолят отличается от производственного штамма, вакцина из которого не приемлема для защиты от заражения полевым вирусом
дения вакцинации более 1 раза [5]. В тоже клеток и предложен в качестве производ-
время изолят А/Киргизия/07 отличается от штамма А Иран/97 (г1 = 0,19).
Окончательная идентификация изоля-та вируса ящура типа А/Киргизия/07 была проведена в РСК при изучении двустороннего антигенного родства с производственными штаммами и ранее полученными изолятами. С этой целью были использованы концентрированные инакти-вированные антигены и гипериммунные сыворотки морских свинок А/Киргизия/07 и сравниваемых штаммов. Результаты изучения антигенного спектра в РСК, пред-ставленые в табл. 3, свидетельствуют, что изолят А/Киргизия/07 антигенно близкородственен изолятам, относящимся к генетической линии А/Иран/05 (Я= 66-68%) и антигенно отличается от производственных штаммов вируса ящура типа А/Арме-ния/98, А/Иран/97 и А22 №550/64 (Я=7-14%). Изолят А/Киргизия/07 и европейский производственный штамма А22/Ирак/64 относятся к разным подтипам (6=28%).
Полученный из эпизоотического изо-лята штамм вируса ящура типа А/Кирги-зия/07 в антигеном и филогенетическом отношении отличается от производственного штамма типа А22 №550/64, адаптирован к первичным и перевиваемым культурам
ственного при изготовлении противоящур-ных вакцин и диагностических препаратов.
Штамм паспортизирован и 7 июля 2009 года депонирован под регистрационным номером А №2045/Киргизия/2007-ДЕП во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве.
Выводы
Результаты изучения антигенных свойств изолята вируса ящура А/Кирги-зия/07 свидетельствуют о его близком антигеном родстве с изолятами А/Турция/06 и А Иран 4/05 и значительном отличии от производственного штамма вируса ящура
А22 № 550.
Полученный из эпизоотического изо-лята штамм вируса ящура типа А/Кирги-зия/07 адаптирован к первичным и перевиваемым культурам клеток и предложен в качестве производственного при изготовлении противоящурных вакцин и диагностических препаратов. Штамм паспортизирован и 7 июля 2009 года депонирован под регистрационным номером А №2045/ Киргизия/2007-ДЕП во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве.
Таблица 3
Результаты изучения двустороннего антигенного родства вируса ящура типа А/Киргизия/07 в РСК
Штаммы г1 г2 Я%
А/Иран/05 0,46 1,0 68
А/Турция/06 0,59 0,76 66
А22/Ирак/64 0,08 1,0 28
А22 №550/64 0,02 1,0 14
А/Грузия/99 0,84 0,02 13
А/Иран/97 0,05 0,11 8
А/Армения/98 0,04 0,14 7
РЕЗЮМЕ
Для изучения антигенных свойств изолята А/Киргизия/07 использована схема, предложенная Шаж-ко Ж.А., 1997 и модифицированная нами с учетом рекомендаций МЭБ. Полученные результаты свидетельствуют о том, что наиболее полную характеристику антигенного спектра изолята можно получить при использовании комплекса серологических методов - РМН, ИФА и РСК. SUMMARY
A scheme proposed by Zh.A.Shazhko (1997) and modified by us according to the OIE recommendations is used for studying antigenic properties of A/Kyrgyzstan/07 isolate. The obtained results demonstrate that antigenic properties are most fully characterized when using the complex of serological methods: microneutralization test, ELISA and complement-fixation test.
Литература
1. Бурдов, А.Н. Ящур / А.Н. Бурдов, А.И. Дудни- Donaldson // Rev. Sci. Tech. OIE. - 1992. - N. 11. - P. ков, П.В. Малярец.- М.: Агропромиздат, 1990. - 657 — 684.
С. 6. 5. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for
2. Шажко, Ж.А. Проблемы унификации методов terrestrial animals (mammals, birds and beers). -6th лабораторной диагностики ящура и других ве- Edition, Paris, 2008. -Vol. 1. - P. 203-207 зикулярных болезней / Ж.А. Шажко // Пробл. 6. Scherbakov A., Virus diversity and vaccine selec-инфекц. патологии с.-х. ж-ных.: тез. докл. конф. tion: Russia, CIS-countries and Mongolia in 2000- Владимир, 1997. - С.25. 2007 / A. Scherbakov, A. Timina, V Borisov // "The
3. Barnett, P.V, The suitability of the 'emergency' Global Control of FMD: Tools, ideas and ideals": foot-and-mouth disease antigens held by the Open Session of the Research Group of the Stand. International Vaccine Bank within a global context Techn. Comm. of the Europ. Commiss. for the / P.V. Barnett, A.R. Samuel, R.J. Statham // Vaccine. Control of FMD.- Erice, Italy, 2008.- P.18.
- 2001. - Vol. 19. - N. (15/16). - P. 2107—2117. 7. Selection of foot and mouth disease vaccine strains
4. Ferris, N.P. The World Reference Laboratory for - a review / D.J. Paton, J.-F Valacher, J. Bergman [et foot-and-mouth disease: review of thirty-three al.] // Rev. Sci. Tech. OIE. - 2005. - Vol. 24(3). - P 981-years of activity (1958—1991) / N.P. Ferris, A.I. 993.
Контактная информации об авторах для переписки
Кременчугская С.Р. - заведующая лабораторией ящура и везикулярных болезней, к.в.н., Камалова Н.Е. - ст.н. сотр., к.в.н., Егорова А.И. - ст.н. сотр., к.в.н.,Жильцова М.В. - м.н.с.,
Афонина Д.Н. - ведущий биолог, Юрчишин В.Д. - аспирант. ФГУ Федеральный центр охраны здоровья животных (ФГУ «ВНИИЗЖ»).
