CC BY
24
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ♦ микробиология ♦
УДК 619: 579.62.84
Изоляция Serratia rubidaea из верхних дыхательных путей лошади
Н.А. Соколова, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории микробиологии с музеем типовых культур, М.Н. Лощинин, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник лаборатории микробиологии с музеем типовых культур (viev.lmn@mail.ru), А.В. Горбатов, кандидат ветеринарных наук, заведующий лабораторией микробиологии с музеем типовых культур, К.П. Юров, доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий лабораторией вирусологии.
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко» (ВИЭВ), 109428, Москва, Рязанский проспект, д. 24 кор. 1.
Целью исследования было изучение биологических свойств и антибиотикочувствительности штамма Serratia rubidaea, выделенного из верхних дыхательных путей лошади.
В данной работе штамм S. rubidaea был выделен из верхних дыхательных путей скаковой лошади, у которой в летний период диагностировали плеврит, позднее наблюдали серозные выделения из носовых ходов, а также лейкопению по данным клинического анализа крови.
Из верхних дыхательных путей скаковой лошади, переболевшей плевритом, выделен вирулентный для белых мышей штамм Serratia rubidaea, обладающий a-гемолитическими свойствами и высокой резистентностью к антибиотикам.
Ключевые слова: Serratia rubidaea, S. marcescens, S. plymuthica, пигмент продигиозин, вирулентность, антибиотикорезистентность, лошади Сокращения: NCCLD — National Committee for Clinical Laboratory Standards (Национальный комитет по клиническим и лабораторным стандартам)
Введение
В настоящее время, согласно определителю бактерий Берджи (1997), род Serratia включает в себя 10 видов, среди которых только три вида способны продуцировать красный пигмент продигиозин: S. marcescens, S. plymuthica, S. rubidaea [4, 5].
Serratia marcescens является наиболее хорошо изученным видом, который обнаруживают в воде, почве, пищевых продуктах (вызывает их порчу), а также в клиническом материале больных и здоровых людей (фекалии, моча, слизь из носоглотки, мокрота, гной) [2]. Полагают, что с этим микроорганизмом могут быть связаны внутрибольничные инфекции дыхательных и мо-чевыводящих путей [1].
Места обитания Serratia rubidaea изучены недостаточно. Бактерию изолировали из кокосов, различных овощей. В то же время мало данных об обнаружении этого вида в воде, в насекомых, теплокровных животных, хотя нельзя исключить, что S. rubidaea может играть определенную роль в инфекциях у людей и животных [7, 8]. Описано, что этот микроорганизм выделяли из респираторного тракта, крови, желчи и ран больных людей [7].
В работе Mirta R. Litterio et al. (2012) описывается тяжелая инфекция у ребенка после укуса лошади, при котором из раны были выделены Serratia rubidaea и Enterobacter cloaceae [3].
В данной работе штамм S. rubidaea был выделен из верхних дыхательных путей скаковой лошади, у которой в летний период диагностировали плеврит, позднее наблюдали серозные выделения из носовых ходов, а также лейкопению по данным клинического анализа крови.
• РВЖ •
V:
i«
\ ■
Рис. 1. S. rubidaea. Окраска по Граму Рис. 2. Колонии S. rubidaea на пита-
(ок. 10, об. 100) тельном агаре
Fig. 1. S. rubidaea. Gram stain (eye- Fig. 2. Colonies S. rubidaea at the
piece 10, lens 100 ) Nutrient Agar
Цель исследования
Изучить биологические свойства и антибиотикочув-ствительность штамма Serratia rubidaea, выделенного из верхних дыхательных путей лошади.
Материалы и методы
Пробы слизистых выделений из носовых ходов четырех лошадей с подозрением на мыт были доставлены в пробирках с транспортной средой «Swab collection and preservation of aerobic, anaerobic and fac-tidious bacteria».
Чистую культуру выделяли стандартным бактериологическим методом путем изоляции единичной колонии в пробирку с питательным бульоном при одновременном приготовлении мазка и окраски его по методу Грама.
Культуральные свойства изолятов изучали на питательном агаре, кровяном агаре и среде Эндо.
Ферментативную активность изучали с использованием сред Гисса и набора для ускоренной идентификации энтеробактерий «ENTERO TEST-24» («Lachema», Чехия).
Для подтверждения принадлежности выделенных культур микроорганизмов к семейству Enterobacteri-aceae применяли тест-полоски на оксидазу «OXI-test»
№ 4/2017 • 11
Н.А. Соколова, М.Н. Лощинин, А.В. Горбатов, К.П. Юров
и 3%-ю перекись водорода для определения наличия каталазы.
Чувствительность микроорганизмов к 28 антибиотикам определяли диско-диффузионным методом в соответствии со стандартами NCCLS на агаре Мюл-лера-Хинтона. Качество определения чувствительности контролировали с использованием штаммов Escherichia coli ATCC 25922 и ATCC 35218 [6].
Выделенные культуры микроорганизмов идентифицировали в соответствии с классификационной системой «Bergy,s manual, 1997».
Для определения патогенности изолята использовали 5 белых беспородных мышей массой 16 г, которым вводили внутрибрюшинно суточную культуру бактерий.
Результаты и обсуждение
При посевах проб слизистых выделений из носовых ходов лошадей на кровяной агар b-гемолитические стрептококки (Streptococcus equi) — возбудители мыта лошадей не были выявлены. При этом, на кровяном агаре были обнаружены красные пигментированные колонии со слабым а- гемолизом. Микроскопически бактерии из этих колонии представляли собой грамотри-цательные мелкие короткие палочки (рис. 1). У отвитых на питательный бульон колоний были изучены культуральные и биохимические свойства. Исследуемые изоляты продуцировали красный пигмент, как при комнатной температуре, так и в термостате при 37 °С. Цвет варьировался от розового до бордового оттенка (рис. 2).
На среде Эндо изоляты образовывали лактозопози-тивные колонии. Продуцировали каталазу, но не ок-сидазу. С помощью набора для ускоренной идентификации энтеробактерий было установлено, что изо-ляты дают отрицательные реакции на индол, сероводород, уреазу, аргинин, фенилаланин, сорбитол, рамнозу, дульцитол, а также положительные реакции на лизин, орнитин, малонат, галактозидазу, инозитол, адони-тол, целлобиозу, сахарозу, трегалозу, маннитол, ацето-ин, эскулин, мелибиозу, раффинозу, глюкозу, цитрат. На полужидком агаре Гисса с глюкозой наблюдали образование кислоты без газа. Бактерии давали рост по уколу и на поверхности агара, что говорит об их неподвижности.
Согласно определителю бактерий Берджи (1997), изолированный штамм принадлежит к виду Serratia rubidaea.
Изучаемый штамм отличался от эталона только способностью ферментировать орнитин.
Установлено, что выделенный штамм был чувствителен к амоксиклаву, ципрофлоксацину, энрофлокса-цину, гентамицину, канамицину, тобрамицину, триме-таприму. Штамм проявил резистентность или слабую чувствительность к амоксициллину, цефазолину, лин-комицину, неомицину, стрептомицину, тетрациклину, цефатаксиму, сульфадиазину, метронидозолу, сульфа-метизолу, оксициллину, олеандомицину, тилозину, суль-фафеназолу, ампициллину, цефтриаксону, фуразоли-дону, фузидиевой кислоте.
Таким образом, только 25 % антибиотиков были способны подавлять развитие выделенного штамма.
Высокая резистентность к антибиотикам S. rubidaea упоминается в статье Mirta R. Litterio et al [3]. Штамм,
12 • рвж •
выделенный при укусе лошади, был чувствителен к ген-тамицину, ципрофлоксацину, триметоприму, как и выделенный нами из верхних дыхательных путей лошади.
У выделенного штамма 5. тиЫйава были изучены патогенные свойства и установлено, что введение 0,5 мл суточной бульонной культуры внутрибрюшинно вызывает гибель всех белых мышей в течение суток, что свидетельствует о его вирулентности.
Заключение
Из верхних дыхательных путей скаковой лошади, переболевшей плевритом, выделен вирулентный для белых мышей штамм 5. тиЫйава, обладающий а-гемоли-тическими свойствами и высокой резистентностью к антибиотикам.
Библиография
1. Голубева, И.В. Энтеробактерии. Руководство для врачей / И.В. Голубева, В.А. Килессо, Б.С. Киселева, Н.С. Прямухина, С.Д. Татаринова, Н.А. Хоменко, Г.В. Ющенко. — М.: Медицина, 1985. — 321 с.
2. Соколова Н.А. Возбудители зооантропонозов, пищевых отравлений, порчи сырья и продуктов животного происхождения / Н.А. Соколова, А.М. Абдуллаева, М.Н. Лощинин. — М.: ДеЛи плюс, 2015. — 170 с.
3. Mirta, R. Isolation of Serratia rubidaea from a mixed infection after a horse bite. / R. Mirta litterio et al. // Revista Argentina de Microbiologia. — 2012. — No. 44. — pp. 272-274.
4. Определитель бактерий Берджи. Т. 1. / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Смита и др. — М.: Мир, 1997. — 432 с.
5. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий / Р. Вейант, У. Мосс, Р. Уивер, Д. Холлис, Дж. Джордан, Э. Кук, М. Дейншвар. — М.: Мир, 1999. — 791 с.
6. Практика определения антибиотикочувствительности микроорганизмов. — Индиа.: Хай-Медиа, 2000. — 54 с.
7. Rojo Ursua, P. Serratia rubidaea as an invasive pathogen / P. Rojo Ursua, M.J. Unzaga, P. Melero, I. Iturburu, C. Ezpeleta, R. Cisterna // J Clin Microbiol. — 1996. — No. 34. — pp. 216-217.
8. Stock, I. Natural antimicrobial susceptibilities of strains of unusual Serratia species: S. ficaria, S. fonticola, S. odorifera, S. plymuthica and S. rubidaea / I. Stock, S. Burak, K.J. Sherwood, T. Gruger, B. Wiedemann // J Antimicrob Chemother. — 2003. — No. 51. — pp. 865-885.
References
1. Golubeva I.V., Kilesso V.A., Kiselev B.S., Pryamuhina N.S., Tatarinov S.D., Homenko N.A., Yushchenko G.V. Enterobacteria: Manual of bacteriological investigation, Мoscow, Мedicina: 1985, 321 p.
2. Sokolova N.A., Abdullaeva A.M., Loshchinin M.N. Zooantroponose pathogens, food poisoning, spoilage of raw materials and products of animal origin, Мoscow, DeLi plys, 2015, 170 p.
3. Mirta R. litterio et al., Revista Argentina de Microbiologia, 2012, No. 44, pp. 272-274.
4. Bergeys Manual Trust, Edited by J. Holt, N. Krieg, P. Smith et al., Мoscow, м1г, 1997. — 432 с.
5. Nontrivial determinant of pathogenic Gram-negative bacteria/ R. Veyant, W. Moss, R. Weaver, D. Hollis, J.. Jordan, E. Cooke, M. Deynshvar, Мoscow, м1г, 1999. — 791 с.
6. The practice of determining the antibiotic susceptibility of microorganisms, India, HiMedia, 2000. — 54 p.
7. Rojo Ursua P., Unzaga M.J., Melero P., Iturburu I., Ezpeleta C., Cisterna R., J Clin Microbiol, 1996, No. 34, 216-217.
8. Stock I., Burak S., Sherwood K.J., Gruger T., Wiedemann B. J Antimicrob Chemother, 2003, No. 51, 865-885.
ABSTRACT
N.A. Sokolova, M.N. Loshchinin, A.V. Gorbatov, K.P. Yurov
All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after Ya. R. Kovalenko (VIEV) (109428, Moscow, Ryazanskyi prospect str. 24-1)
Isolation of Serratia rubidaea from the Upper Respiratory Tract of the Horse. Purpose was to study of antibiotic susceptibility and biological properties of the strain Serratia rubidaea isolated from the upper respiratory tract of the horse. In this paper, the strain S. rubidaea was isolated from the upper respiratory tract of the racehorse, which in summer was diagnosed with pleurisy, and later observed nasal serous discharge, as well as leucopenia according to CBC. From the upper respiratory tract of the racehorse with pleurisy, were isolated virulent for mice strain S. rubidaea which has a-hemolytic properties and high resistance to antibiotics. Keywords: Serratia rubidaea, S. marcescens, S. plymuthica, pigment prodigiosin, virulence, antibiotic resistance, horses.
№ 4/2017 •
