CC BY
318
УДК 582.998.2:547.587
ИЗМЕРЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТОВ СМЕСЕЙ ЧАЯ ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
© В.М. Мисин1, Н.Н. Сажина1, Е.И. Короткова2
1 Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН, ул. Косыгина, 4,
Москва, 119334 (Россия), e-mail: [email protected]
2Томский политехнический университет, пр. Ленина, 30, Томск, 634050
(Россия), e-mail: [email protected]
Двумя электрохимическими методами: амперометрическим и вольтамперометрическим - измерены суммарное содержание антиоксидантов и их активность к кислороду и его радикалам в водных экстрактах некоторых видов чая и растительных добавок, а также в экстрактах их бинарных смесей. Изучена зависимость содержания антиоксидантов от времени после экстракции. Обнаружено отклонение экспериментально полученных значений содержания антиоксидантов и их активности в большинстве смесей от значений, рассчитанных исходя из принципа аддитивности этих параметров компонентов смесей.
Ключевые слова: антиоксиданты, амперометрический и вольтамперометрический методы, полифенолы, кислородные радикалы.
Введение
В последние десятилетия с помощью фундаментальных научных исследований были изучены тончайшие механизмы изменений клеточных структур, происходящих в организме во время оксидантного стресса. Пополнение запасов антиоксидантов (АО) извне с помощью определенных продуктов питания, растительных средств, БАД или лекарств антиоксидантного действия может свести оксидантный стресс к минимуму, значительно снизить степень его проявления или даже предотвратить «поломки» в организме, которые происходят в результате отрицательного действия свободных радикалов [1, 2]. В настоящее время особое внимание уделяется изучению содержания и активности АО в экстрактах чая, лекарственных растений и растительных добавок, поскольку они являются наиболее распространенными напитками. Наиболее типичными представителями АО в чаях и растительных добавках являются водорастворимые полифенолы. Хотя их антиоксидантная активность связана с различными механизмами, наиболее распространенным механизмом является повышенная реакционная способность полифенолов, особенно в зеленом чае, по отношению к активным свободным радикалам. За последнее время появились многочисленные публикации о предотвращении и подавлении онкологических заболеваний полифенолами чая [3-5] и значительном снижении риска развития ишемической болезни сердца и других сердечно-сосудистых заболеваний [6].
Исследованию антиоксидантных свойств экстрактов чая и различных растительных добавок посвящено большое количество работ. Авторами монографии [7] приведен широкий обзор этих работ, в которых различными методами измерены состав чаев, суммарное содержание антиоксидантов в них и их биологическая активность. Однако результаты измерений суммарного содержания и активности АО в экстрактах смесей чаев и различных растений практически отсутствуют. Такие исследования могли бы обнаружить и оценить возможное влияние природных полифенолов в экстрактах смесей чая и растений друг на друга, так как известно, что АО фенольного типа могут проявлять эффекты синергизма и антагонизма, усиливая или ослабляя тем самым свое действие [8].
Цель настоящей работы - определение суммарного содержания и биологической активности АО в водных экстрактах некоторых видов чая и растительных добавок. Было проведено сравнение содержания и активности АО в экстрактах смесей этих продуктов с содержанием и активностью АО в экстрактах отдельных чаев и добавок, т.е. исследовали возможное влияние друг на друга компонентов смесей. Для этого использовались оперативные электрохимические методы измерений: амперометрический и вольтамперометрический.
* Автор, с котрым следует вести переписку.
Экспериментальная часть
Объектами исследования являлись водные экстракты трех видов чая (китайского зеленого «Ресницы красавицы», серого с бергамотом «Earl grey tea» и черного цейлонского «Real»), мяты перечной (Mentha piperita L.) и высушенных лимонных корок. Были исследованы также 10 экстрактов бинарных смесей перечисленных образцов с разным соотношением компонентов. Для проведения исследований образец измельчали в ступке до размера частиц 1-2 мм и навеску 0,5 г заливали дистиллированной водой объемом 50 мл с температурой 95 °С. Экстрагирование проводили в течение 10 минут без термостатирования, а экстракты тщательно отфильтровывали через бумажный фильтр «синяя лента» [9].
Первый метод, амперометрический, реализованный в приборе «Цвет Яуза-01-АА» [10], позволяет определить суммарное содержание АО фенольного типа в исследуемых образцах. Сущность его заключается в регистрации электрического тока, возникающего при окислении исследуемого АО (или смеси АО) на поверхности рабочего электрода при определенном потенциале. При этом потенциале происходит окисление только групп ОН природных АО фенольного типа и флавоноидов. Измеренный сигнал (площадь под кривой тока) сравнивается с сигналом индивидуального антиоксиданта - галловой кислоты с известной концентрацией, полученным в тех же условиях. Погрешность измерения содержания АО составила не более 10%, а время измерения - 10-15 мин при наличии градуировки [10]. Оперативность метода позволила проследить динамику изменения содержания АО в исследуемых образцах непосредственно после экстракции.
Во втором методе, вольтамперометрическом [11], в качестве модельной реакции используется процесс электровосстановления кислорода (ЭВ О2) на ртутно-пленочном электроде, идущий по механизму, аналогичному восстановлению кислорода во многих объектах искусственного и природного происхождения. Процесс ЭВ О2 на электроде идет в несколько стадий с генерацией на поверхности электрода активных форм кислорода [11]:
О2 + е- О2-; (1)
О2- + Н+ HO2; (2)
НО2 + Н+ + е- < > Н2О2;
(3)
Н2О2 + 2Н+ + 2е~ < > 2Н2О. (4)
Для определения активности антиоксидантов предложено использовать первую волну ЭВ О2, соответствующую стадиям (1) - (3), когда на поверхности ртутно-пленочного электрода образуются активные кислородные радикалы и перекись водорода как конечный продукт. При оценке влияния природы антиоксидантов на процесс ЭВ О2 было замечено, что они по-разному влияют на данный процесс. В таблице 1 приведены 4 условно разделенные группы веществ, различающиеся по характеру влияния на процесс ЭВ О2 [12].
Таблица 1. Группы биологически активных веществ, отличающихся по механизму влияния на процесс ЭВ О2
№ группы Названия веществ Влияние на ЭВ О2 Предполагаемый электродный механизм
1 Каталаза, фталоцианины метал- Увеличение тока ЭВ О2, Механизм ЕС* с последующей реакцией дис-
лов, гумминовые кислоты сдвиг потенциала в отрицательную область пропорционирования перекиси водорода и частичной регенерацией молекулярного кислорода
2 Соединения фенольной приро- Уменьшение тока ЭВ О2, Механизм ЕС с последующей химической
ды, витамины А, Е, С, В, фла- сдвиг потенциала в поло- реакцией взаимодействия АО с активными
воноиды, убихинон, глюкоза жительную область кислородными радикалами
3 Ы, Б, Бе-содержащие соедине- Уменьшение тока ЭВ О2, Механизм СЕС с предшествующей и после-
ния, амины, аминокислоты, сдвиг потенциала в отри- дующей химическими реакциями взаимодей-
активные альдегиды цательную область ствия АО с кислородом и его активными радикалами
4 Супероксидисмутаза (СОД), Увеличение тока ЭВ О2, Механизм ЕС с каталитическим восстановле-
порфирины металлов, сдвиг потенциала в поло- нием кислорода через образование промежу-
цитохром С жительную область точного комплекса
*Примечание: Е - электродная стадия процесса, С - химическая реакция.
В качестве критерия антиоксидантной активности исследуемых веществ используется кинетический критерий К, который отражает количество кислорода и активных кислородных радикалов, прореагировав-
С I
ших с АО (или смесью АО) за минуту: К = —— (1-) с размерностью мкмоль/л-мин, где 1,10 — максимум
ґ 1—
тока ЭВ О2 соответственно, в присутствии и в отсутствии АО в растворе фонового электролита, С0 — исходная концентрация кислорода в растворе (мкмоль/л), т.е. растворимость кислорода в фоновом электролите при нормальных условиях, ґ — время экспозиции рабочего электрода при постоянном потенциале предельного тока кислорода, характеризующее протекание реакции взаимодействия АО с активными кислородными радикалами. Время активации составило 120 с, скорость развертки потенциала - 0,1 В/с. Вольтамперометрический метод отличается хорошей чувствительностью и является достаточно простым и дешевым. Однако, как в любом подобном электрохимическом методе, разброс показаний прибора при идентичных измерениях оказался достаточно высоким (до 1,5-2,0 раз). Поэтому для каждого образца было проведено 3-4 замера, а результаты усреднялись. В настоящей работе в качестве фонового электролита использовался фосфатный буферный раствор объемом 10 мл с известной исходной концентрацией молекулярного кислорода, куда добавлялось дозированное (5=30-150 мкл) количество испытуемого образца. Концентрация исследуемых экстрактов чая, добавок и их смесей в объеме буферного раствора соответствовала концентрации экстрактов, вводимых в амперометрическую ячейку прибора «Цвет Яуза-01-АА», для чего экстракты перед введением в ячейку прибора разбавлялись в 50-300 раз.
Результаты и обсуждение
На рисунке 1 приведен пример амперограмм, полученных в течение примерно 8 мин после экстракции при нескольких введениях в ячейку исследуемых экстрактов чая. Видно, что в течение этого времени сигнал заметно уменьшается. на рисунке 2 показана динамика изменения суммарного содержания фенольных АО для 5 образцов. Наиболее значительное снижение С наблюдается в экстрактах чая (20-25%), что, по-видимому, связано с распадом в них нестойких фенольных соединений (катехинов, теафлавинов, теару-бигинов и др.). Для экстракта лимонных корок содержание фенольных АО значительно меньше и практически не меняется в первые минуты после экстракции.
На рисунках 3, 4 и в сводной таблице 2 представлены результаты измерений суммарного содержания фенольных антиоксидантов С (в галловом эквиваленте) для экстрактов чая и добавок (рис. 3) и экстрактов их смесей в разном соотношении (рис. 4). Содержание АО в смесях (С, мг/г, (р) - расчет для смесей по аддитивности) рассчитано по аддитивному вкладу содержания АО компонентов смеси, взятому из рисунка 3 в соответствии с их соотношением. В таблице 2 приведены значения С, усредненные по 5-6 ам-перограммам (рис. 1) с соответствующей ошибкой (среднеквадратичным отклонением от среднего значения). Видно, что наибольшее содержание антиоксидантов фенольного типа имеет экстракт китайского зеленого чая (43,5 мг/г), наименьшее - экстракт лимонных корок (1,4 мг/г). Что касается смесей чая и добавок (рис. 4), то экспериментально измеренные значения содержания фенольных антиоксидантов в экстрактах смесей исследуемых объектов (э) значительно снизились по сравнению с аддитивным вкладом содержания фенольных соединений компонентов смеси, т. е наблюдается их сильный антагонизм. Особенно он значителен для экстрактов смесей чая или мяты с лимонными корками (образцы 4, 7, 9 и 10).
«83,17 НЛ
0.00 с. 225,00 с
Рис.1. Амперограммы экстракта черного цейлонского чая в течение первых 8 минут после экстракции
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
С, мг/г
111
Рис. 2. Динамика изменения содержания антиоксидантов С (в галловом эквиваленте) в зависимости от времени хранения экстрактов:
1 - зеленого китайского чая; 2 - серого чая с бергамотом; 3 - черного цейлонского чая;
4 - мяты; 5 - лимонных корок (С увеличено в 5 раз)
Рис. 3. Суммарное содержание антиоксидантов фенольного типа С в экстрактах: 1 - зеленого китайского чая; 2 - серого чая с бергамотом;
3 - черного цейлонского чая; 4 - мяты;
5 - лимонных корок
С, мг/г
э - эксперимент р - расчет по аддитивности
Рис. 4. Суммарное содержание антиоксидантов фенольного типа С в экстрактах смесей чая и добавок: 1 - чай 1 + чай 2 (1 : 1); 2 - чай 1 + чай 3 (1 : 1); 3 - чай 1 + мята (4 : 1); 4 - чай 1 + лимонные корки (3 : 2); 5 - чай 2 + чай 3 (1 : 1);
6 - чай 2 + мята (4 : 1); 7 - чай 2 + лимонные корки (3 : 2); 8 - чай 3 + мята (4 : 1); 9 - чай 3 + лимонные корки (3 : 2); 10 - мята + лимонные корки (2 : 3)
Таблица 2. Результаты измерений суммарного содержания С амперометрическим методом
и кинетического критерия \К\ вольтамперометрическим методом во всех образцах с учетом погрешности измерения
№ пробы Название чая, добавки и их смесей С, мг/г (эксперимент) С, мг/г (расчет для смесей по аддитивности) ІКІ, мкмоль/л-мин, (эксперимент) ІКІ, мкмоль/л-мин, (расчет для смесей по аддитивности )
1 Чай зеленый китайский 43,5±2,2 - 1,46±0,28 -
2 Чай серый с бергамотом 19,2±1,5 - 0,68±0,14 -
3 Чай черный цейлонский 14,9±1,3 - 0,31±0,07 -
4 Мята перечная 20,6±0,7 - 1,5±0,32 -
5 Лимонные корки 1,4±0,1 - 0,45±0,08 -
6 Чай 1 + чай 2 (1 : 1) 25,6±2,6 31,3±2,5 1,48±0,32 1,07±0,28
7 Чай 1 + чай 3 (1 : 1) 23,3±1,7 29,2±2,4 1,31 ±0,21 0,89±0,26
8 Чай 1 + мята (4 : 1) 29,5±1,1 38,9±2,3 0,53±0,12 1,46±0,42
9 Чай 1 + лимонные корки (3 : 2) 16,2±1,6 26,7±2,2 0,68±0,21 0,70±0,25
10 Чай 2 + чай 3 (1 : 1) 12,9±1,1 17,0±1,8 0,81±0,06 0,50±0,12
11 Чай 2 + мята (4 : 1) 13,5±1,0 19,5±1,6 0,50±0,14 0,84±0,31
12 Чай 2 + лимонные корки (3 : 2) 7,1±0,6 12,0±1,5 0,48±0,09 0,23±0,11
13 Чай 3 + мята (4 : 1) 9,6±0,6 12,2±1,4 0,71±0,15 0,55±0,21
14 Чай 3 + лимонные корки (3 : 2) 6,4±0,5 9,5±1,3 0,78±0,15 0,03±0,01
15 Мята + лимонные корки (3 : 2) 5,5±0,3 9,0±0,8 1,42±0,41 0,33±0,10
На рисунках 5, 6 и в таблице 2 представлены также данные по измерению кинетического критерия К вольтамперометрическим методом для экстрактов чая, добавок (рис. 5) и их смесей (рис. 6) в том же соотношении и с той же концентрацией экстракта в ячейке, что и в амперометрическом методе. Характерно, что для всех образцов экстрактов, кроме экстракта лимонных корок (образец 5), доминирующий характер взаимодействия компонентов с кислородом и его радикалами имеет не фенольную, а каталитическую природу и протекает по механизму, характерному для веществ 4 группы таблицы 1.
Пример вольтамперограмм для экстрактов этих образцов приведен на рисунке 7, на котором видно увеличение максимума тока ЭВ О2 и сдвиг потенциала в положительную область относительно максимума тока фонового электролита. Поэтому кинетический критерий К имеет отрицательные значения, а на рисунках
5, 6 и в таблице 2 указан его модуль ІКІ. Для экстракта лимонных корок «работает» классический АО механизм, характерный для 2 группы веществ таблицы 1 и кинетический критерий К положительный (рис. 8). Указанные в таблице 2 значения ІКІ - это усредненные значения по 2-3 идентичным измерениям. В отличие от содержания фенольных АО, измеренного амперометрическим методом, кинетический критерий оказался максимальным не только для экстракта зеленого чая (1,46 мкмоль/л-мин), но и для экстракта мяты (1,50 мкмоль/л-мин), минимальный - для экстракта черного чая (0,31 мкмоль/л-мин) (рис. 5). Несмотря на то, что в экстрактах чая и мяты содержание фенольных соединений оказалось значительно больше, чем в лимонных корках, окончательная суммарная активность экстрактов чая и мяты определяется не фенольными соединениями, а, по-видимому, всевозможными металлокомплексами, присутствующими в них и играющими роль катализаторов протекающих химических процессов. Для этих комплексов предполагается следующий механизм каталитического восстановления кислорода и его радикалов по типу супероксидисмутазы СОД (4-я группа в таблице 1):
| | | | + Ог'+ н+
^ Cu—N^^,,f.N—Zn—^ + О*' + Н+ Си + H Zn—^--------------------------►
Р-1 Си——Zn «2 + Н2О2
В пользу достаточно высокого содержания в чаях и мяте полифенольных соединений говорит значительный сдвиг потенциала максимума тока восстановления кислорода в положительную область (рис. 7).
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
IКІ, мкмоль/л .мин
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
ІКІ, мкмоль/л .мин
Рис. 5. Суммарная антиоксидантная активность экстрактов чая и добавок по отношению к кислороду и его радикалам ІК1: 1 - зеленого китайского чая; 2 - серого чая с бергамотом;
3 - черного цейлонского чая; 4 - мяты;
5 - лимонных корок
Рис. 6. Суммарная антиоксидантная активность экстрактов смесей чая и добавок по отношению к кислороду и его радикалам ІК1: 1 - чай 1 + чай 2 (1 : 1); 2 - чай 1 + чай 3 (1 : 1); 3 - чай 1 + мята (4 : 1); 4 - чай 1 + лимонные корки (3 : 2); 5 - чай 2 + чай 3 (1 : 1); 6 - чай 2 + мята (4 : 1); 7 - чай 2 + лимонные корки (3 : 2); 8 - чай 3 + мята (4 : 1);
9 - чай 3 + лимонные корки (3 : 2); 10 - мята + лимонные корки (2 : 3). В скобках указано соотношение между компонентами смесей
Рис. 7. Вольтамперограммы тока Рис. 8. Вольтамперограммы тока
электровосстановления кислорода на ртутно- электровосстановления кислорода на ртутнопленочном электроде в отсутствии (нижняя пленочном электроде в отсутствии (верхняя
кривая) и присутствии экстрактов чая и мяты кривая) и присутствии экстракта лимонных корок
(верхние линии) в зависимости от времени (нижние линии) в зависимости от времени
протекания процесса взаимодействия протекания процесса взаимодействия
антиоксидантов с активными кислородными антиоксидантов с активными кислородными
радикалами радикалами
Что касается активности экстрактов смесей к кислороду и его радикалам, то отклонения измеренных значений кинетического критерия К от вычисленных по аддитивности значений достаточно большие и наблюдаются в сторону как уменьшения, так и увеличения К (табл. 2). По-видимому, для этого метода не работает принцип аддитивности, так как активность составляющих смеси имеет разную природу и механизм взаимодействия с кислородом и его радикалами, а на активность смесей влияют не только химические взаимодействия между веществами, но коэффициенты диффузии этих веществ к электроду и др. Поэтому в таблице 1 аддитивные значения К приведены формально, а на рисунке 6 для экстрактов смесей лишь измеренные значения К. Как видно из рисунка, активность экстрактов смесей чая не очень меняется по сравнению с активность экстрактов отдельных чаев, мята снижает активность зеленого чая (образец 3). Лимонные корки также снижают кинетический критерий экстрактов смесей (образцы 4, 7), кроме смеси их с мятой, где влияние лимонных корок на величину К оказалось незначительным (образец 10).
Как известно из литературы [7], в чаях содержится большое количество различных соединений. Основные из них: катехины, являющиеся сильными АО (в зеленом чае - 15-30% от сухого листа, в черном чае -9%), теафлавины, которые отвечают за интенсивность оранжево-красного цвета чая, и теарубигины - высокомолекулярные соединения, придающие более интенсивное окрашивание заварке чая, чем теафлавины. В черном чае теафлавинов содержится 3-6% от сухого листа, а в зеленом чае этих соединений мало, так как они образуются в процессе ферментации при участии катализаторов из катехинов. Теарубигины также образуются в процессе ферментации (в черном чае их 12-18% от сухого веса). Кроме этих соединений, в чаях содержатся кофеин (в черном чае 1,5-4%) и различные аминокислоты, содержание которых, особенно в зеленом чае, является критерием его качества и составляет 0,1-10,0 мг/г. Это глутамин, аланин, аспарагин, метионин, тиразин, теанин и др. В чае также имеются сахара (глюкоза, фруктоза и сукроза), витамины (С, Е, К, Р и группы В), фенольные кислоты (основная - галловая кислота), катионы и анионы щелочных и щелочноземельных металлов и металлокомплексы [7]. Что касается мяты, то она содержит эфирное масло (2-3%), основным компонентом которого является ментол, определяющий вкус и анестезирующие свойства мяты, а также дубильные и смолистые вещества, каротин (0,01%), аскорбиновую кислоту (0,01%), рутин (0,015%) и другие соединения [13]. В корках лимона есть лимонное масло (а-лимонен, терпен, цитраль), лимонная и аскорбиновая кислоты, тиамин, рибофлавин, горькое вещество лимонин и др. [13].
При экстрагировании смесей чая и добавок в экстрактах происходят сложные биохимические реакции взаимодействия компонентов смесей между собой, приводящие к образованию менее эффективных соединений, окисляемость которых, регистрируемая амперометрическим методом, ниже. Это химический антагонизм [8]. Возможно, при экстракции смесей происходит конкуренция различных веществ, приводящая к меньшему экстрагированию некоторых из них. Кроме того, некоторые экстракты, например смесей чая с лимонными корками, всегда более обесцвечены по сравнению с чистыми экстрактами чая, что гово-
рит о возможном разрушении теарубигинов, теафлавинов или других составляющих чая некоторыми соединениями лимонных корок. Вероятно, эти причины и приводят к уменьшению содержания АО фенольного типа в экстрактах бинарных смесей по сравнению с аддитивными значениями содержания АО в компонентах смесей в соответствии с их соотношением. Что касается активности экстрактов смесей к кислороду и его радикалам, то она определяется, вероятно, главным образом теми соединениями, присутствующими в компонентах смеси, которые имеют более высокую активность и действуют эффективно даже при малых значениях концентраций.
Выводы
В настоящей работе в водных экстрактах чая, мяты и лимонных корок и в 10 экстрактах их бинарных смесей измерены суммарное содержание АО и их активность к кислороду и его радикалам амперометрическим и вольтамперометрическим методами. В экстрактах чая и его смесей обнаружено снижение содержания фенольных АО непосредственно после заварки. При определении активности экстрактов к кислороду и его радикалам выявлено, что доминирующим механизмом их взаимодействия с компонентами чая и мяты является каталитический механизм электровосстановления кислорода через образование метал-локомплексов. Для экстрактов смесей чая с добавками обнаружено значительное отклонение экспериментально полученных значений содержания антиоксидантов и их активности в большинстве смесей от значений, рассчитанных исходя из принципа аддитивности этих параметров компонентов смеси.
Список литературы
1. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты: вчера, сегодня, завтра // Биологическая кинетика : сб. обзорных статей. М., 2005. Т. 2. С. 10-45.
2. Dillard C.J., German J.B. Phytochemicals: nutraceuticals and human health // J. Sci. Food Agric. 2000. V. 80. Pp. 1744-1756.
3. Katiyar S.K., Mukhtar H. Антиоксиданты чая в хемопредотвращении рака. // J. Cell. Biochem. Suppl. 1997. V. 27. Pp. 59-67.
4. Bushman J.L. Green tea and cancer in humans: a Review of the literature // Nutr. Cancer 1998. V. 31. Pp. 151-159.
5. Mukhtar H., Amad N. Tea polyphenols: prevention of cancer and optimizing health. // J. Clin. Nutr. Suppl. 2000. V.71. Pp. 1698-1702.
6. Sano J. Влияние потребления зеленого чая на сердечно-сосудистые заболевания. // Circ. J. 2004. V. 68. Pp. 665-670.
7. Яшин Я.И., Рыжнев В.Ю., Яшин А.Я., Черноусова Н.И. Природные антиоксиданты. Содержание в пищевых продуктах и их влияние на здоровье и старение человека. М., 2009. С. 70-84.
8. Карпухина Г.В., Эмануэль Н.М. Классификация синергических смесей антиоксидантов и механизмов синергизма // Докл. АН СССР. 1984. Т. 276, №5. С. 1163-1167.
9. Мисин В.М., Сажина Н.Н., Завьялов А.Ю., Яшин Я.И. Измерение содержания фенолов в экстрактах лекарственных трав и их смесях амперометрическим методом // Химия растительного сырья. 2009. №4. С. 127-132.
10. Яшин А.Я. Инжекционно-проточная система с амперометрическим детектором для селективного определения антиоксидантов в пищевых продуктах и напитках // Российский химический журнал. 2008. Т. LII. №2. С. 130-135.
11. Korotkova E.I., Karbainov Y.A., Avramchik O.A. Investigation of antioxidant and catalytic properties of some biological-active substances by voltammetry // Anal. and Bioanal. Chem. 2003. V. 375, N1-3. Pp. 465-468.
12. Короткова Е.И. Вольтамперометрический метод определения суммарной активности антиоксидантов в объектах искусственного и природного происхождения: автореф. дисс. ... д-ра хим. наук. Томск, 2009.
13. Дудченко Л.Г., Козьяков А.С., Кривенко В.В. Пряно-ароматические и пряно-вкусовые растения. Киев, 1989. 304 с.
Поступило в редакцию 7 июня 2010 г.
