CC BY
42
вили против АЭ, ненагруженных и нагруженных опухолеассоциированными антигенами (ОАА), включающими в себя раковоэмбриональный антиген, хорионический гонадотропин человека, нейроспецифическую энолазу, углеводные антигены СА-19-9 и СА-125, альфа-фетопротеин и микроглобулин человека. Индекс цитотоксичности определяли отдельно для нагруженных и ненагруженных ОАА эритроцитов по следующей формуле: ИЦ = (О - К) х 100% / К, где О - оптическая плотность супернатантов ячеек, содержащих эффекторные клетки и АЭ, К — оптическая плотность супернатантов ячеек, содержащих только АЭ. Кроме этого. иммунофлуоресцентным методом определяли популяции и субпопуляции мононуклеарных клеток (МНК), в т. ч. с маркерами активации.
Результаты. Анализ способности монону-клеаров крови лизировать ненагруженные АЭ выявил более высокие значения цитолиза у больных РЖКТ по сравнению с условно здоровыми лицами (12,85±3,14% и 1,84±1,84%; р<0,05 соответственно). ИЦ для АЭ, нагруженных ОАА, был выше в группе больных РЖКТ по сравнению с условно здоровыми лицами (12,79±2,93% и 2,47±1,40%; р<0,05 соответственно). При РЖ выявлены обратные корреляционные связи уровней цитолиза АЭ, нагруженных ОАА, с абсолютным содержанием CD71 (г=-0,471; р<0,05), а при КР между цитолизом ненагруженных АЭ и относительным содержанием CD71 лимфоцитов (г=-0,479; р<0,05). При КР отме-
чены прямые корреляционные связи между ИЦ ненагруженных АЭ с абсолютным содержанием CD8- (г=0,574; р<0,01), CD71- (г=0,579; р<0,01) и HLA-DR- лимфоцитов (г=0,566; р<0,01). У больных РЖКТ была обнаружена обратная корреляционная связь между приростом ИЦ (разность между ИЦ нагруженных ОАА АЭ и ИЦ ненагруженных АЭ) и инфильтрацией опухоли макрофагами (г=0,379, р<0,05). При КР прирост ИЦ находился в прямой корреляционной связи с относительным содержанием CD8 (г=0,465, р<0,05); а также с относительным и абсолютным содержанием CD71 (г=0,612, р<0,01 и г=0,619, р<0,01 соответственно).
Выводы. У больных РЖ при активации иммунной системы (определенной по абсолютному содержанию CD71-клеток), свойственной преимущественно высокодифференцированным аденокарциномам, происходит снижение ИЦ нагруженных ОАА АЭ, что, возможно, создает оптимальные условия развития опухоли в организме за счет включения механизмов супрессии эффекторных функций МНК по отношению к опухоли. Изучение корреляционных связей между антителонезависимой клеточно-опосредованной цитотоксичностью и содержанием популяций и субпопуляций МНК показало, что особенностью цитолиза АЭ при КР является повышение прироста ИЦ при активации иммунной системы, что может свидетельствовать о различных механизмах реализации цитотоксического эффекта в зависимости от локализации аденокарцином.
ИЗМЕНЕНИЯ экспрессии МАРкЕРА 0095 клетками КОСТНОГО МОЗГА БОЛЬНЫХ ГЕМОБЛАСТОЗАМИ под влиянием низких концентраций цитостатиков 1Ы мтко
И.Б. ЛЫСЕНКО, Е.Ю. ЗЛАТНИК, Е.А. КАПУЗА, В.В. ДМИТРИЕВА
ФГУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Росмедтехнологий»,
г. Ростов-на-Дону
Программированная гибель клеток (апоп-тоз) играет важную роль в морфогенетических процессах организма, в развитии опухолевых заболеваний. Один из путей апоптоза может осуществляться через «рецепторы смерти», в
частности, известен Fas-опосредованный путь апоптоза CD95 позитивных клеток. Белок CD95 принадлежит к семейству рецепторов фактора некроза опухолей и экспрессируется на поверхности многих типов клеток. Нами проведено
сравнительное исследование оценки экспрессии CD95 клетками костного мозга (ККМ) больных гемобластозами под влиянием различных цито-статических препаратов in vitro.
Материалом послужили клетки костного мозга (ККМ) больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), неходжкинскими лимфомами с поражением костного мозга (НХЛ). Определение экспрессии CD95 клетками костного мозга проводили с помощью иммунофлюорес-центного теста. В опытные пробы добавляли цитостатики, применяемые для лечения гемо-бластозов, в низких концентрациях (10-6/мл), в контрольные - эквивалентный объем среды 199. Длительность инкубации при 37оС составляла 45 мин, после чего клетки отмывали однократным центрифугированием в среде 199 и однократным - в фосфатно-солевом буфере (рН 7,3-7,4) и ставили иммунофлюоресцентный тест с моноклональными антителами к CD95. В качестве группы сравнения нами была взяты пробы ККМ больных с «внекостномозговыми» локализациями злокачественного процесса (рак легкого и меланома), с которыми были проведены аналогичные исследования. Статистическую обработку проводили с использованием непараметрических методов (непрямых разностей, критерия Уилкоксона, z-критерия).
Обработка костномозгового пунктата всеми исследуемыми препаратами приводила к повышению количества ККМ с маркером CD95, после инкубации с дексаметазоном (9,2±1,98%),
метотрексатом (9,4±0,88%) и циклофосфаном (7,25±0,84%), тенипозидом (10,0±2,8б%), метотрексатом (9,4±0,88%) этот показатель был достоверно отличен от контроля (4,5±0,44%). Показатели содержания CD95+ ККМ обработанных цитостатиками у больных раком легкого и меланомой с малигнизированным и немалигнизированным костным мозгом составили 8,3±2,05% и 15,6±3,05% соответственно. что было статистически достоверно выше, чем у онкогематологических больных. Также мы обнаружили, что обработка химиопрепаратами ККМ больных раком легкого и меланомой не вызывает статистически значимых изменений в зависимости от поражения костного мозга. Можно предположить, что, несмотря на то, что готовность ККМ к апоптозу, маркируемая рецептором CD95 (Fas-APO-1), значительно выше у больных с солидными опухолями, реализуется он в сходной степени, то есть механизм реализации апоптоза в данном случае, вероятно, опосредуется не через Fas-рецептор. Итак, полученные результаты позволяют считать, что ККМ онкогематологических больных демонстрируют более низкую экспрессию CD95, чем ККМ больных с негематологической онкопатологией, а обработка их in vitro низкими концентрациями различных химиопрепаратов приводит к индивидуально обусловленным изменениям, в большинстве случаев увеличению числа CD95 позитивных клеток костного мозга.
РОЛЬ МУТАЦИОННОГО АНАЛИЗА В ПРЕДСкАЗАНИИ ОТВЕТА НА ТАРГЕТНУЮ ТЕРАПИЮ СОЛИДНЫХ ОПУХОЛЕЙ
Н.Н. МАЗУРЕНКО
НИИ канцерогенеза Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН,
г. Москва
Благодаря успехам молекулярной биологии традиционные диагностические подходы в онкологии пополняются молекулярнодиагностическими тестами. В первую очередь это касается молекулярных мишеней лекарственной терапии опухолей, увеличивается количество молекулярно-диагностических тестов, направленных на оптимизацию выбора терапии.
Одним из ярких примеров необходимости мутационного анализа для диагностики, прогноза и терапии опухолей являются стромальные опухоли ЖКТ (GIST), характерной особенностью которых являются мутации рецепторной тирозинкиназы KIT.
Иммуногистохимическое определение экспрессии тирозинкиназы KIT позволяет диффе-
