CC BY
57
Химия растительного сырья. 2012. №2. С. 15-20.
УДК 676.014; 577.152.37
ИЗМЕНЕНИЕ СТРУКТУРЫ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ И СВОЙСТВ ВОЛОКОН БЕЛЕНОЙ СУЛЬФАТНОЙ ЛИСТВЕННОЙ ЦЕЛЛЮЛОЗЫ ПРИ ФЕРМЕНТАТИВНОМ ВОЗДЕЙСТВИИ
© Е.В. Новожилов , Д.Г. Чухчин, К.Ю. Терентьев, И.А. Хадыко
Северный (Арктический) федеральныйуниверситет им. М.В. Ломоносова, Набережная СевернойДвины, 17, Архангельск, 163002 (Россия), e-mail: [email protected]
Установлено, что при обработке цеплюлазой происходят изменения структуры клеточной стенки целлюлозных волокон, Показана применимость разработанных методик для определения ширины волокна и контроля процессов набухания целлюлозных волокон, Разнообразие форм набухания определяется степенью деструкции поверхности волокон беленой сульфатной лиственной целлюлозы, основным фактором является состояние наружного слоя Si клеточной стенки,
Ключевые слова: целлюлоза сульфатная беленая лиственная, ширина волокна, набухание волокон, целлюлаза,
Волокна древесины имеют сложное строение, их клеточные стенки состоят из первичной и вторичной оболочек, отдельные слои которых отличаются химическим составом и физической организацией [13]. В процессе сульфатной варки клеточные стенки волокон претерпевают существенные изменения: происходит их набухание в щелочной среде; раскрытие и развитие пористой структуры стенки волокна в результате химических превращений, деструкции и удаления основной части нецеллюлозных компонентов; сжатие (контракция) и уменьшение объема пустот в клеточной стенке в конце варки [3]. Структура и состояние клеточных стенок волокон во многом определяют механические, физико-химические и технологические характеристики целлюлозных полуфабрикатов. Актуальным является всестороннее изучение особенностей строения целлюлозных волокон и тех изменений, которые происходят с ними в процессе получения и использования технической целлюлозы.
В целлюлозно-бумажной промышленности (ЦБП) наряду с традиционными химическими и механическими методами воздействия на целлюлозное волокно все шире применяются ферментативные технологии. Ферменты могут использоваться на различных стадиях производства целлюлозы, а также при изготовлении бумаги и картона. Самое крупномасштабное по объему использования ферментов направление - это обработка сульфатной целлюлозы ксиланазами перед отбелкой [4]. В промышленных масштабах ферменты применяются также для ускорения размола и улучшения обезвоживания массы, для очистки вторичных
Введение
Новожилов Евгений Всеволодович - заведующий кафедрой биотехнологии, доктор технических наук, профессор, e-mail: [email protected]
волокон от краски, для борьбы со смоляными затруднениями и липкими отложениями [5-8].
Чухчин Дмитрий Германович - доцент кафедры биотехнологии, кандидат технических наук, e-mail: [email protected]
Терентьев Константин Юрьевич - аспирант, e-mail: [email protected]
ХадыкоИгорь Александрович - магистрант, e-mail: [email protected]
Сульфатная лиственная беленая целлюлоза считается одним из самых массовых товарных полуфабрикатов, выпускаемых ЦБП. Особенностью щелочных способов делигнификации является прочная адсорбция ксилана в течение варки на поверхности целлюлозных волокон [9-11], что обеспечивает повышение выхода и улучшение бумагообразующих свойств целлюлозы.
* Автор, с которым следует вести переписку,
Модификация целлюлозных волокон предполагает изменение их состава и свойств за счет регулируемого ферментативного воздействия. Например, ферментативная деструкция ксиланазой сорбированного ксилана обеспечивает улучшение белимости сульфатной целлюлозы, снижение расхода белящих реагентов, уменьшение загрязненности сточных вод хлорорганическими соединениями. Перспективными направлениями биомодификации являются направленное изменение водоудерживающих свойств массы, повышение показателей прочности бумажного листа, улучшение качества бумаги [5-8]. Для решения этих задач интерес представляют целлюлазы, которые способны модифицировать волокна в желаемом направлении, например, предварительная обработка целлюлазами обеспечивает экономию 20-40% энергии на размол массы [12]. Целлюлазы могут быть также использованы для регулирования вязкости и повышения реакционной способности вискозной целлюлозы [13-15]. Обработка целлюлазами может изменить саму структуру волокна или поверхностные свойства волокон, но действие целлюлолитических ферментов на древесную целлюлозу изучено недостаточно.
Цель работы - установить, как структурные изменения, происходящие с клеточной стенкой волокна при ферментативном воздействии, взаимосвязаны со свойствами целлюлозных волокон.
Экспериментальная часть
В работе использовали сульфатную беленую лиственную целлюлозу Котласского ЦБК. Образцы беленой целлюлозы были отобраны без размола и после размола по режиму, принятому на комбинате. Пробы целлюлозы не подвергались высушиванию, хранились во влажном состоянии.
После проведения опытов с несколькими препаратами для ферментативной обработки был выбран коммерческий продукт Fiber Care D компании Novozymes A/S (Дания). Основные характеристики целлюлазы Fiber Care D: активность препарата (данные компании) - 9800 ECU/г, эндоглюканазная активность по карбоксиметилцеллюлозе - 273 ед/г, оптимальный диапазон действия по pH - 6-9, по температуре - 4060 °C. Образцы целлюлозы в лабораторных условиях были подвергнуты ферментативной обработке при концентрации массы 3%. Расход целлюлазы был задан из расчета 20 г/кг абсолютно сухой целлюлозы. Пробы выдерживали в термостате при температуре 50 °C от 3 до 48 ч. После завершения обработки пробы целлюлозы промывали водой.
Измерение ширины волокон проводили при помощи микроскопа. Пучки волокон, помещенные на предметные стекла, разделяли иглой на отдельные волокна и проводили их фото- и видеосъемку. Полученные снимки волокон обрабатывали с использованием специально разработанного программного обеспечения, предназначенного для расчета их ширины в автоматическом режиме. Принцип работы программы основан на сканировании волокон в поперечном направлении и определении границ волокна на основании значений яркости пикселей на линии сканирования. Количество измерений ширины волокон - 150-250 для каждой пробы, коэффициент вариации 2-3%.
Оценку изменений клеточной стенки целлюлозных волокон в процессе их набухания в серной кислоте концентрацией 59% проводили по анализу их фото- и видеоизображений. Образцы целлюлозы были предварительно высушены до воздушно сухого состояния. Изменение ширины волокна в процессе набухания в кислоте наблюдалось в течение 5-50 сек, далее происходило растворение волокна. В процессе наблюдения вели видеофиксацию различных форм набухания отдельных волокон.
Степень помола целлюлозы определяли на аппарате СР-2 [16]. Скорость обезвоживания массы также определяли на аппарате СР-2 с закрытой нижней трубкой, предварительно заполненной водой. Брали навеску волокна, эквивалентную 5 г абсолютно сухой целлюлозы. Обезвоживающую способность массы выражали временем истечения определенного объема воды в цилиндр через боковую трубку аппарата.
Обсуждениерезультатов
Волокна беленой целлюлозы в процессе их производства уже испытали химическое воздействие при варке и действие отбеливающих реагентов в процессе многоступенчатой отбелки. В процессе варки разрушается межклеточное вещество и древесная матрица распадается на отдельные волокна. Действие варочных реагентов вызывает почти полное удаление первичной оболочки Р, частично разрушается наружный слой Si вторичной оболочки клеточной стенки. В результате растворения основной части лигнина и гемицеллюлоз, в волокнах появляются капиллярные пространства различных размеров, что в дальнейшем делает возможным их набухание в жидкости или усадку при высушивании.
При промышленной отбелке лиственной сульфатной целлюлозы были использованы различные реагенты: кислород, №ОН, диоксид хлора, пероксид водорода. После стадии кислородно-щелочной обработки для улучшения белимости целлюлозы проводилась обработка ксиланазой.
Применение целлюлаз для модификации свойств целлюлозных волокон в ЦБП основано на использовании монокомпонентных препаратов эндоглюканаз [12-15]. Эндоглюканазы расщепляют связи произвольно по длине макромолекул целлюлозы, действуя преимущественно на аморфные участки фибрилл на поверхности волокна. Беленая целлюлоза хорошо поддается обработке целлюлазой, действию фермента благоприятствует очистка волокон от лигнина.
Средние значения ширины волокон сульфатной беленой лиственной целлюлозы после ферментативной обработки в течение 3, 6, 24 и 48 ч представлены на рисунке 1.
Изменения в строении клеточной стенки сульфатной целлюлозы при механической и ферментативной обработке связаны главным образом с деструкцией и частичным удалением наружного слоя Бь что может оказать различное влияние на структуру волокон. С одной стороны, это должно привести к уменьшению ширины волокна за счет удаления части наружных структурных элементов клеточной стенки. Для неразмолотой целлюлозы это происходит при ферментативной обработке продолжительностью до 24 ч. С другой стороны, возможно увеличение ширины волокна за счет того, что разрушение слоя Б1 вызывает раскрытие структуры клеточной стенки и ее усиленное набухание в воде, как это имело место после 48 ч обработки неразмолотой целлюлозы.
В процессе размола происходит деформирование и укорочение целлюлозных волокон, расслоение и частичное разрушение клеточной стенки, удаление ее отдельных элементов, внутренняя и внешняя фибрилляция, увеличение внешней поверхности волокна и числа свободных гидроксильных групп на его поверхности, набухание волокон [3, 17]. Ферментативная обработка размолотой целлюлозы на начальных стадиях, до 3-6 ч, приводит к увеличению ширины волокна, но длительное действие фермента вызывает уменьшение ширины волокна из-за значительной деструкции и частичного удаления наружных слоев клеточной стенки.
Способность целлюлозы к набуханию является важной характеристикой и может изменяться в широких пределах в зависимости от условий ее получения и химического состава целлюлозы. Изучение процессов набухания представляет интерес при оценке процесса размола различных полуфабрикатов, при получении целлюлозы для химической переработки, при подготовке макулатурной массы. Набухание целлюлозных волокон в воде очень ограниченное, значительно сильнее целлюлоза набухает в водных растворах щелочей [3, 18], концентрированных растворах сильных кислот [3, 19].
Особенности тонкого строения клеточных стенок волокон приводят к различным типам набухания. При действии серной кислоты концентрацией 59% наблюдали следующие варианты: отсутствие видимого набухания; равномерное набухание, когда волокно равномерно набухает с сохранением четких границ; образование «баллонов»; «раскручивание» волокон; набухание, быстро переходящее в растворение. Образование «баллонов» и «раскручивание» волокон с образованием спиралевидных набухших форм показано на рисунке 2.
Появление при набухании волокон целлюлозы в хороших растворителях характерных вздутий («баллонов» или «бус») обусловлено особенностями строения спиральной структуры слоев клеточной стенки [3, 19]. Способность микрофибрилл слоя скользить по слою Б2 приводит к образованию перетяжек, в результате слой Б2, сильно набухая, образует «баллоны» (рис. 2а). Для равномерного и сильного набухания волокон необходимо полное удаление слоев Ри Б].
Рис. 1. Средние значения ширины волокон в зависимости от продолжительности ферментативной обработки:.
1 - неразмолотая целлюлоза;
2 - размолотая целлюлоза
О 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
Продолжительность обработки, ч
а
б
Рис. 2. Фотографии «баллонов» на целлюлозном волокне (а) и «раскрученных» целлюлозных волокон (б)
При набухании в серной кислоте наблюдали такое явление, как «раскручивание» волокон, при этом отсутствовали четкие границы клеточных стенок, а само волокно имело форму частично развернутой спирали (рис. 26). Был сделан вывод, что структура целлюлозного волокна образована совокупностью сильно закрученных в одном направлении микрофибрилл, при набухании которых создаются значительные механические напряжения, что вызывает наблюдаемое при видеозаписи вращение волокна вокруг своей оси.
Для беленых волокон наиболее часто встречалось относительно слабое, но равномерное набухание с сохранением четких границ. Наблюдалось также образование редких «баллонов», что свидетельствовало о том, что слой 81 сравнительно мало повре>вден. Наличие этого слоя является главным сдерживающим фактором процесса набухания, его разрушение приводит к значительному увеличению размеров волокон в поперечном направлении. После механического воздействия в процессе размола беленой целлюлозы образование «баллонов» в присутствии кислоты значительно усилилось, часть волокон принимала спиралевидную форму.
Большое влияние на свойства волокон оказала обработка целлюлазой. Вероятно, в этом случае структура слоя 81 полностью разрушена ферментом, возможна частичная деструкция слоя Б2. Как результат, после 3 часов действия целлюлазы как неразмолотые, так и размолотые волокна беленой целлюлозы быстро растворялись в серной кислоте.
Способность целлюлозы удерживать воду может быть охарактеризована степенью помола и скоро -стью водоотдачи целлюлозной массы, которые находятся в зависимости от степени гидратации волокон. Ферментативная обработка беленой целлюлозы в течение 3 ч по сравнению с контролем вызвала небольшое снижение степени помола и улучшение дренажных свойств массы (табл. 1).
Далее наблюдалась слабая тенденция к нарастанию степени помола целлюлозы с увеличением времени обработки ферментом до 24-48 ч при одновременном ухудшении обезвоживающей способности. Это взаимосвязано с ранее установленным увеличением ширины и степени набухания беленого волокна после длительной ферментативной обработки (рис. 2).
Структура волокон размолотой целлюлозы более доступна для действия целлюлазы, и после ферментативной обработки имеет место значительное усиление водоотдачи массы. Основные изменения происходили в течение первых часов действия целлюлазы, степень помола уменьшалась с 25 до 19 °ШР, одновременно примерно в 2 раза улучшалась обезвоживающая способность массы (табл. 2). Это может быть объяснено частичным удалением фибрилл с поверхности волокон размолотой целлюлозы.
Таблица 1. Испытания обезвоживающей способности беленой сульфатной лиственной целлюлозы
Образец целлюлозы Продолжительность обработки,ч Степень помола, °ШР Обезвоживающая способность, с
500 мл 700 мл
Контроль* 3 17 6 13
Образцы, обработан- 3 15 4 10
ные ферментом 24 16 5 11
48 17 7 15
* Обработка без добавления фермента.
Таблица 2. Испытания обезвоживающей способности образцов размолотой беленой сульфатной лиственной целлюлозы
Образец целлюлозы Продолжительность обработки,ч Степень помола, °ШР Обезвоживающая способность, с
500 мл 700 мл
Контроль* 3 25 15 33
Образцы, обработан- 3 19 8 18
ные ферментом 24 19 8 18
48 20 12 24
Обработка без добавления фермента
Длительное действие целлюлазы вызывало сильное разрушение самого волокна. При увеличении продолжительности обработки целлюлазой до 48 ч деструкция целлюлозы приводила к тому, что после достигнутого минимума степени помола начиналось ее увеличение, и вновь значительно ухудшалась обезвоживающая способность массы. Чтобы сохранить волокно и обеспечить высокие прочностные показатели целлюлозы, улучшение дренажных свойств бумажной массы путем ферментативной обработки должно проходить в мягких условиях.
С практической точки зрения наиболее значимым результатом ферментативной обработки целлюла-зой является улучшение набухания беленых целлюлозных волокон, что может найти применение при модификации свойств целлюлозы для химической переработки.
Выводы
1. Биомодификация структуры клеточной стенки волокон беленой сульфатной лиственной целлюлозы посредством обработки целлюлазой вызывает разрушение и отщепление слоев клеточной стенки, изменение ширины волокон, удаление фибрилл с поверхности волокна, что приводит к улучшению способности к набуханию, изменению водоотдачи массы.
2. Разные формы набухания беленой сульфатной лиственной целлюлозы в серной кислоте концентрацией 59% определяются степенью деструкции поверхности целлюлозных волокон, основным фактором является состояние наружного слоя S1 клеточной стенки.
3. Для исследования структурных изменений клеточной стенки древесной целлюлозы разработаны методики измерения ширины и степени набухания волокон, основанные на использовании метода микроскопии с фиксацией видеоизображений и автоматизацией методов определения параметров волокна.
Список литературы
1. Фенгел Д., Вегенер Г. Древесина (химия, ультраструктура, реакции): пер. с англ. М., 1988. 512 с.
2. Технология целлюлозно-бумажного производства: в 3-х т. СПб., 2004.
3. Бейнарт И.И., Ведерников H.A., Громов B.C., Закис Г.Ф., Кальнина В.К., Каткевич Р.Г., Каткевич Ю.Ю., Крейцберг З.Н., Милютина С.В., Можейко Л.Н., Муращенко Н.Ф., Рейзинь Р.Э., Сергеева В.Н., Эриньш П.П. Клеточная стенка древесины и ее изменения при химическом воздействии. Рига, 1972. 509 с.
4. Аксенов A.C., Новожилов Е.В., Демашев O.A., Опарина A.A. Промышленное использование ксиланаз при отбелке сульфатной целлюлозы // Целлюлоза. Бумага. Картон. 2006. Ноябрь. С. 15-17.
5. Bajpaj P. Application of enzymes in the pulp and paper industry // Biotechnology Progress. 1999. N15. Pp. 147-157.
6. Aehle W. Enzymes in Industry. Weinheim, 2004. 484 p.
7. Петерсен X. Применение ферментов в технологии переработки макулатуры // Современные научные основы и инновационные технологии бумажно-картонных материалов с использованием вторичного волокна из макулатуры: тез. докл. науч.-практ. конф. Караваево, 2006. С. 31-34.
8. Новожилов Е.В., Мартынов В.Ю., Крупенин И.С. Инновационные ферментные технологии для макулатурной массы // Особенности производства бумаги, картона и гофротары. Киев, 2009. С. 45-48.
9. Yllner S., Enstrom B. Studies of the adsorbtion of xylan on celluloses fibres during the sulphate cook. Part I // Svensk papperstidning. 1956. Vol. 59, N6. Pp. 229-232.
10. Yllner S., Enstrom B. Studies of the adsorbtion of xylan on celluloses fibres during the sulphate cook. Part II // Svensk papperstidning. 1957. Vol. 60, N15. Pp. 549-554.
11. Шарков В.И., КуйбинаН.И. Химия гемицеллюлоз. М., 1972. 440 с.
12. Новожилов Е.В., Терентьев К.Ю., Пошина Д.Н., Чертовская В.П. Применение ферментов для ускорения размола беленой целлюлозы // Наука Северному региону: сб. науч. тр. С(А)ФУ. Архангельск. 2010. Вып. 83. С. 101-103.
13. Новожилов Е.В., Пошина Д.Н. Биотехнологии в производстве целлюлозы для химической переработки (Обзор) // Химия растительного сырья. 2011. №3. С. 15-32.
14. Engstrom A.-C., Ek M., Henriksson G. Improved accessibility and reactivity of dissolving pulp for the viscose process: pretreatment with monocomponent endoglucanase // Biomacromolecules. 2006. Vol. 7, N6. Pp. 2027-2031.
15. Kopcke V., Ibarra D., Ek M. Increasing accessibility and reactivity of paper grade pulp by enzymatic treatment for use as dissolving pulp // Nordic Pulp and Paper Research Journal. 2008. Vol. 23, N4. Pp. 363-368.
16. Дубовый B.K., Гурьев A.B., Казаков Я.В., Комаров В.И., Коновалова Г.Н., Смолин А.С., Хованский В.В. Лабораторный практикум по технологии бумаги и картона: учебное пособие. СПб., 2006. 230 с.
17. Фляте Д.М. Технология бумаги: учеб. для вузов. М., 1988. 440 с.
18. Никитин В.М., Оболенская А.В., Щеголев В.П. Химия древесины и целлюлозы. М., 1978. 368 с.
19. Paul Ander. Dislocations and balloon swelling in spruce kraft pulp fibres - Effect of cellulases, xylanase and laccase/HBT // Biotechnology in the Pulp and Paper Industry, L. Viikari, R. Lantto, editors. Elsevier Science. 2002. Pp. 49-59.
Поступило в редакцию 28 марта 2012 г.
Novozhilov E.V.*, Chukhchin D.G., Terentyev K.Y., Hadyko I.A. CHANGES OF CELL WALL STRUCTURE AND FIBER PROPERTIES OF BLEACHED KRAFT HARDWOOD PULP BY ENZYMATIC ACTION
Northern (Arctic) Federal University named after M.V. Lomonosov, Severnaya Dvina Emb. 17, Arkhangelsk, 163002
(Russia), e-mail: [email protected]
It is established that there are structure’s changes of a cellular wall of cellulose fibres after cellulase treatment. It is shown an applicability of the developed techniques for determination of fiber’s width and control of cellulose fibres swelling. A variety of swelling forms is defined by surface’s destruction degree of bleached hardwood kraft cellulose fibres, a major factor is the condition of external layer S1 of a cellular wall.
Keywords: bleached hardwood kraft cellulose, fiber’s width, fibres swelling, cellulase.
References
1. Fengel D., Vegener G. Drevesina (khimiia, ul'trastruktura, reaktsii) [Wood (chemistry, ultrastructure, reactions)]. Moscow., 1988. 512 p. (in Russ.).
2. Tekhnologiia tselliulozno-bumazhnogo proizvodstva [Technology Pulp and Paper Production]. St. Petersburg, 2004, vol. 1-3. (in Russ.).
3. Beinart I.I., Vedernikov N.A., Gromov V.S., Zakis G.F., Kal'nina V.K., Katkevich R.G., Katkevich Iu.Iu., Kreitsberg Z.N., Miliutina S.V., Mozheiko L.N., Murashchenko N.F., Reizin' R.E., Sergeeva V.N., Erin'sh P.P. Kletochnaia stenka drevesiny i ee izmeneniia pri khimicheskom vozdeistvii [The cell wall of wood and its changes during chemical exposure]. Riga, 1972, 509 p. (in Russ.).
4. Aksenov A.S., Novozhilov E.V., Demashev O.A., Oparina A.A. // Tselliuloza. Bumaga. Karton, 2006, november, pp. 15-17. (in Russ.).
5. Bajpaj P. Biotechnology Progress, 1999, no. 15, pp. 147-157.
6. Aehle W. Enzymes in Industry. Weinheim, 2004. 484 p.
7. Petersen Kh. Sovremennye nauchnye osnovy i innovatsionnye tekhnologii bumazhno-kartonnykh materialov s is-pol'zovaniem vtorichnogo volokna iz makulatury: tez. dokl. nauchno-prakt. konf [Modern scientific principles and innovative technologies of paper and cardboard materials using recycled fiber from waste paper: Sci. Techn. Conf.]. Karavaevo, 2006, pp. 31-34. (in Russ.).
8. Novozhilov E.V., Martynov V.Iu., Krupenin I.S. Osobennosti proizvodstva bumagi, kartona i gofrotary [Especially the production of paper, cardboard and corrugated packaging]. Kiev, 2009, pp. 45-48. (in Russ.).
9. Yllner S., Enstrom B. Svensk papperstidning, 1956, vol. 59, no. 6, pp. 229-232.
10. Yllner S., Enstrom B. Svensk papperstidning, 1957, vol. 60, no. 15, pp. 549-554.
11. Sharkov V.I., Kuibina N.I. Khimiia gemitselliuloz [Chemistry of hemicellulose]. Moscow, 1972, 440 p. (in Russ.).
12. Novozhilov E.V., Terent'ev K.Iu., Poshina D.N., Chertovskaia V.P. Nauka Severnomu regionu: sb. nauch. trudov S(A)FU [Science North Region: collection of proceedings]. Arkhangel'sk, 2010, no. 83, pp. 101-103. (in Russ.).
13. Novozhilov E.V., Poshina D.N. Khimiia rastitel'nogo syr'ia, 2011, no. 3, pp. 15-32. (in Russ.).
14. Engström A.-C., Ek M., Henriksson G. Biomacromolecules, 2006, vol. 7, no. 6, pp. 2027-2031.
15. Kopcke V., Ibarra D., Ek M. Nordic Pulp and Paper Research Journal, 2008, vol. 23, no. 4, pp. 363-368.
16. Dubovyi V.K., Gur'ev A.V., Kazakov Ia.V., Komarov V.I., Konovalova G.N., Smolin A.S., Khovanskii V.V. Labora-tornyi praktikum po tekhnologii bumagi i kartona: uchebnoe posobie [Laboratory workshop on the technology of paper and paperboard]. St. Peterburg, 2006, 230 p. (in Russ.).
17. Fliate D.M. Tekhnologiia bumagi. [Paper technology]. Moscow, 1988, 440 p. (in Russ.).
18. Nikitin V.M., Obolenskaia A.V., Shchegolev V.P. Khimiia drevesiny i tselliulozy. [Chemistry of wood and cellulose] M., 1978. 368 s. (in Russ.).
19. Paul Ander. Biotechnology in the Pulp and Paper Industry. ed. L. Viikari, R. Lantto. Elsevier Science, 2002, pp. 49-59.
Received Marh 28, 2011
* Corresponding author.
