CC BY
9
3. Завгородняя С. В., Тарасов 1983, —№ 9, —С. 29—32.
В. В. // Гиг. и сан.
4. Комов В. П.. Фирсова В И.. Венникас О. Р., Синке-еич Н. В. //Вопр. мед. химии. — 1985. — № 6. — С. 132— 135.
5. Храпова Н. Г. // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. — М., 1982. — С. 59—73.
6. Boyd М. R.// CRC. Crit. Toxicoal. — 1980. — Vol. 7. — P. 103—176.
7. Garsl J. E„ Wilson W. C. et al.//J. Anim. Sci. 1985. — Vol. 60. — P. 248—257.
8. Omura Г., Sato R.// J. biol. Chem. — 1964. — Vol. 239,— P. 2370—2385
9. Vijayalashmi R., Boi/d M. // Toxicol, appl. Pharmacol.— 1985.— Vol. 78.— P. 370—376.
Поступила 11.08.86
УДК 612.26.014.46:9(615.917:547.7751-08
Ю. H. Талакин, И. В. Животникова
изменение параметров насыщения крови кислородом и угнетение дыхания митохондрий печени при воздействии производных пиразолона
и оксинафтойной кислоты
Донецкий медицинский институт им. М. Горького
В литературе, посвященной токсикологии производных ароматических аминов и ннтросоеднненин бензольного ряда, имеются сведения о развитии метгемоглобинообразова-ния и анемии у подопытных животных. В связи с этим представляют интерес изучение параметров насыщения крови кислородом при воздействии новых производных бензольного ряда, а также исследование дыхания гепато-цитов, биоэнергетика которых обязательно вовлекается в процесс интоксикации.
Кровь для исследований брали из подъязычной вены белых крыс массой 150—180 г, подвергавшихся ингаляционному, ннтратрахеальному или внутрижелудочному воздействию производных пнразолона и оксинафтойной кислоты. Производные пнразолона: 1-фенил-З[3'-(1", 4"-днтретами-
но) -феноксибутироиламипо бензоиламино] пиразолон-5 (ЗП7), 1-фенил-3{3'-[а (2", 4"-дитретамнлфенокси) бутироиламино]} - 4 - (4' - метоксифенилазо) пиразолон (ЗП1 ОМ), 1 - (2',4',6'-трихлорфенил) -3-{[2',4'-дитретамилфе-ноксиацетиламнно]-бензоиламино} пиразолон-5 (ЗП24). Производные оксинафтойной кислоты: 4-(4'-третамилфено-ксн)анилид 1,2-оксинафтонной кислоты (ЗГ2), 4- ^'-метоксифенилазо) -п- (третамнлфенокси) анилид 1 -оксн-2-нафтойной ^ кислоты (ЗГ4М). Перечисленные соединения — кристаллические порошки, обладающие гидрофобностыо, со следующими молекулярными массами: ЗП7 — 597, ЗП10М — 731, ЗП24 —672, ЗГ2 —425, ЗГ4М — 560. Подопытным крысам интратрахеально вводили 50 мг вещества в виде суспензии в 1 мл физиологического раствора, внутрижелудочно — по
Таблица 1
Изменение рО., и % О., (в % к контролю) белых крыс при воздействии производных пнразолона и оксинафтойной кислоты
(М±т)
Вещество Парциальное давление, рО
возде ficTBiie
интратрахеальное внутри желудочное икгаляционное
3 мес б мес 2 нед 4 нед 1 нед 2 нед 4 нед
ЗГ2 Ю0±3,0 103±0,5 98±1,0 87±4,6 95±2,0 93+2,3
ЗГ4М 95±1,5 96±1,2 94±3,7 90±4,2 85±4,2 85±4,1 85±3,9
ЗП7 92±4,6 88±2,7* 96±0,1 87±3,1* 94-¿3,0 91 ±3,7 —
ЗП24 95+2,7 92±3,1 — 94±3,1 98 ± 1,1 97±2,5 —
ЗП10М 90±3,2 89±2,3 96±2,5 89rt0,94 94±2,5 95±2,7 98+1,2
П родолжение
Вещество
воздействие
интратрахеальное внутри желудочное :) я гал'яцио.кное
3 мес 6 мес 2 иед 1 нел I нед | 2 нед j 4 нед
ЗГ2 ЗГ4М ЗП7 ЗП24 ЗП10М 92±3,7* 90±4,1 105±4,6 90+4,0 82+3,0 99±0,5 96+2,0 92+2,5* 96±3,1 84±1,0 105±2,9 94±5,0 98+2,0 97+1,8 86+4,8 99±0,9 98±0,S 95+2,3 103+4,3 97±3,0 84+4,7 96±3,5 97+2,9 97+1,8 92±1,5 84±4,9 93±2,1 94±2,1 97+1,9 87±4,5* 91 ±4,5
П р и м е ч а и и е. Звездочка — различия достоверны по сравнению с контролем (Я<0,05).
Таблица 2
Ингибирование производными пиразолона и оксииафтойной кислоты дыхания изолированных митохондрий печени крыс
(М±т)
Вещество Концентр;) цп я. м
IO-<i 1 О-5 10-4
ЗП7 11,6±3,46 16,3±4,44 33,4±6,75
ЗП10М 10,1 ±2,97 17,6±4,21 22,7±5,91
ЗП24 8,2±3,39 15,6+4,17 23,4+4.85
ЗГ2 8,2±3,43 20,6+3,92 26,4±6,94
ЗГ4М 9,5±4,02 17,6±4,03 22,7±5,76
2 г/кг в виде суспензии в 5 мл физиологического раствора с твином-80, ннгаляцнонно — в концентрации 100 мг/м3 (время затравки 4 ч).
В крови крыс определяли парциальное давление кислорода (р02) и углекислого газа (рС02), рН плазмы крови « насыщенность крови кислородом (%02) [6), содержание метгемоглобнна [2] и гемоглобина, подсчитывали число ре-тикулоцитов и эритроцитов.
Митохондрии из печени декапитироваиных крыс выделяли методом дифференциального центрифугирования после измельчения и гомогенизации охлажденной ткани в среде выделения, взятых в соотношении 1:8. Среда выделения содержала 250 мМ сахарозы, 2 мМ этилендиамннтетраацета-£ та, 10 мМ триоксиметнламинометана, рН 7,4. Гомогенат 4 центрифугировали 10 мин при 800g , а супернатант — 10 мин при 8500 g и температуре 4 °С. Осадок митохондрий ресуспенднровали в среде выделения до создания концентрации митохондрнального белка 100 мг/мл, определяемого биуретовым методом [1]. Скорость потребления митохондриями кислорода регистрировали полярографическн с электродом типа Кларка на «Ро1агодгаПс АпаНгег РА-2" (ЧССР). В среду инкубации, содержащую 70 мМ КС1, 5 мМ КН2Р04 и 10 мМ сукцината, вносили 0,02—0,03 мл суспензии митохондрий. После стабилизации скорости дыхания вносили изучаемый ксенобиотик, растворенный в 0,01 мл 100 % этанола, создавая концентрации исследуемого соединения от 10_б до Ю-4 М. Для каждой серии проводили 6 опытов, в каждом из которых измерения осуществляли 2—3 раза.
При разных путях воздействия производных пиразолона и оксииафтойной кислоты нами отмечено метгемоглобино-образование в крови белых крыс. Так, при внутрижелудоч-цом введении ЗП10М содержание метгемоглобнна в крови ^крыс опытной группы возросло до 5,3±1,34% (в контроле 1,2±0,81 %; Р<0,02), а через 1 мес составило 8,9+2,40% (в контроле 2,0±1,29 %; Р<0,05). Увеличение содержания метгемоглобнна отмечено также при интратрахеальном воздействии ЗП7 (10,0±2,39%, в контроле 3,3±1,80 %; Р< <0,05) и ЗГ2 (11,9± 1,28 %, в контроле 2,0±1,27 %; Р< <0,001). Статистически достоверных различий в содержании ретикулоцитов, гемоглобина и эритроцитов не выявлено.
Параллельно с метгемоглобинообразованием в крови подопытных животных отмечено снижение р02 %02 (табл. 1). Таким образом, производные пиразолона и оксииафтойной кислоты при ингаляционном, интратрахеальном и внутри-желудочном введении вызывают у крыс метгемоглобипооб-разование, снижение р02 и %02. По-видимому, вследствие метгемоглобинообразования уменьшается количество гемоглобина, транспортируемого в ткани. Потребление же кислорода, например, печенью при воздействии ксенобиотиков увеличивается вследствие включения системы микросомаль-ного окисления, в связи с чем насыщенность венозной крови кислородом понижается. Все это в итоге приводит к развитию гипоксии.
В опытах на митохондриях после внутрижелудочного введения в течение 1 мес ЗП24 отмечено увеличение N/4 (по Чансу) от 13.7dzl.21 до 17,5± 1,30 нмоль 02 в 1 мин на 1 мг белка (Р<0,05), что на 28 % выше скорости дыхания в контроле. Это является свидетельством ннзкоэнергетнче-ского сдвига н дыхании митохондрий вследствие интоксикации ЗП24. Такой же эффект отмечен и при действии других производных пиразолона и оксииафтойной кислоты.
Реакцией изолированных митохондрий печени крысы на внесение в инкубационную среду как производных пиразолона, так и производных оксииафтойной кислоты являлось ингибирование скорости «нативного» дыхания (табл. 2). Эффект ингибировання оставался стабильным, не исчезая по мере потребления кислорода. При увеличении концентрации воздействующего на изолированную суспензию митохондрий ксенобиотика от Ю-6 до 10-4М ингибирующий эффект увеличивался от 10 до 25 %. Поскольку характер ингибировання не зависел от различий в структуре
изучаемых веществ, можно предполагать, что воздействие производных пиразолона оксииафтойной кислоты на полиферментный комплекс митохондрий связан с их общим свойством — гидрофобностыо. В литературе имеются сведения об ингнбнрованнн дыхательной цепи митохондрий липофильнымн соединениями [3—5|. Можно полагать, что этот процесс, вызванный производными пиразолона и оксииафтойной кислоты, обусловлен неспецифической адсорбцией их в гидрофобных участках дыхательной цепи митохондрий.
Литература
1. Виноградов А. Д., Лейкин Ю. И.. Липская Т. Ю. Биохимия митохондрий: Биоэнергетика. — М., 1977.
2. Кушаковский М. С. Клинические формы повреждения гемоглобина. — Л., 1968.
3. Николе Д. Дж. Биоэнергетика: Введение в хемносмотн-ческую теорию: Пер. с англ. — М„ 1985.
4. Ротенберг Ю. С. // Бюл. экспер. биол. — 1982. — № 9. — С. 42—45.
5. Ягужинский Л. С. // Регуляция энергетического обмена и физиологическое состояние организма. — М., 1978.— С. 201.
6. Siggaard-Aiidersen О. //Scand. J. clin. Lab. Invest. — 1962. — Vol. 14. — P. 598—615.
Поступила 08.08.86
