CC BY
62
УДК 582.711+575.858:577.13
ИЗМЕНЧИВОСТЬ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ И СОДЕРЖАНИЯ ФЛАВОНОИДОВ В PENTAPHYLLOIDES FRUTICOSA (L.) O.SCHWARZ (ROSACEAE) В УСЛОВИЯХ КУЛЬТУРЫ
© Е.П. Храмова , Г.И. Высочина
Центральный сибирский ботанический сад СО РАН, ул. Золотодолинская, 101, Новосибирск, 630090 (Россия) e-mail: [email protected]
Проведен анализ эндогенной и индивидуальной изменчивости 11 морфологических и 19 биохимических признаков растений Pentaphylloides fruticosa (L.) O.Schwarz. Для измерения морфологических параметров листовой пластинки P. fruticosa применен метод компьютерного анализа изображений, полученных с увеличением. Определение содержания флавоноидов выполнено методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Отмечена значительная изменчивость количественных признаков на эндогенном уровне. На индивидуальном уровне большинству изученных признаков свойственна низкая и очень низкая вариабельность. Показано, что качественный состав флавоноидов в пределах особи и между отдельными растениями не изменяется.
Ключевые слова: Pentaphylloides fruticosa, эндогенная и индивидуальная изменчивость, морфологические и биохимические признаки, флавоноиды/
Введение
Pentaphylloides fruticosa (L.) O.Schwarz (Dasiphora fruticosa (L.) Rydb., Potentilla fruticosa (L.) - пятилист-ник кустарниковый, лапчатка кустарниковая или курильский чай кустарниковый (сем. Rosaceae) представляет собой сильноветвистый кустарник до 1,5 м высотой с непарноперистыми листьями и золотисто-желтыми крупными цветками, собранными обычно на концах побегов. Вид широко распространен в Восточной Сибири, на Дальнем Востоке, проникает в Северную Америку, изредка встречается в Западной Европе, на Кавказе, Урале [1, 2].
P. fruticosa обитает в лесах, на лугах, по берегам рек и ручьев, не требователен к почвам, может расти на галечнике, каменистых россыпях и в высокогорных тундрах. Обладает большой выносливостью. Поднимается в горы почти до предела распространения растительности. Именно благодаря этим свойствам пятили-стник кустарниковый является пионерным видом, заселяющим речные наносы, горные обнажения и техно-генно-нарушенные горные склоны [2].
P. fruticosa находит широкое применение в медицинской практике, в садово-парковом строительстве как декоративное растение, является прекрасным медоносом; издавна используется как заменитель чая [3-6]. В культуре известен давно и повсеместно, успешно интродуцирован в Новосибирске, Иркутске, Омске, Томске.
В последнее время ведется всестороннее изучение этого вида, в том числе различных форм внутривидовой изменчивости [7-9].
В большинстве работ по внутривидовой изменчивости в качестве фенотипических признаков используются многочисленные морфологические характеристики. Изменчивость биохимических признаков, в том числе фенольных соединений, исследуют гораздо реже. Между тем изучение изменчивости этих признаков в растениях природных и интродукционных популяций показало их высокую информативность [10-13]. В качестве биохимических признаков используются преимущественно флавоноиды, которые по сравнению с другими группами фенольных соединений характеризуются универсальным распространением в растениях, значительным структурным разнообразием, химической устойчивостью и возможностью достаточно легкой и быстрой идентификации. Кроме того, флавоноиды привлекают внимание и как физиологически
* Автор, с которым следует вести переписку.
активные вещества с разносторонним действием, таким как повышение эластичности кровеносных сосудов, антибактериальное, антивирусное, желчегонное, мочегонное идр. [14].
Известно, что P. fruticosa продуцирует значительное количество флавоноидов. В условиях Восточной Сибири содержание флавоноидов в облиственных побегах достигает 13,36% [15], Горного Алтая - 6,50% [16]. В листьях растений, интродуцированных в лесостепную зону Западной Сибири, их количество в фазе бутонизации составляет 6,67-14,03% [17].
Установлено, что флавоноидные вещества пятилистника кустарникового представлены в основном группой флавонолов. Так, из надземной части P.fruticosa выделены и идентифицированы агликоны - кверцетин, кемпферол и 7,3',4'-три-0-метилкверцетин, не менее 5 флавонолгликозидов - кверцитрин, гиперозид, ара-бинопиранозид кверцетина, изокверцитрин и астрагалин и 3 ацилированных флавонолгликозида - 6"-0-галлат-3-р-Б-галактопиранозид кверцетина, тернифлорин и трибулозид [18-23].
Первым этапом исследования внутривидовой изменчивости морфологических и биохимических параметров P. fruticosa является изучение эндогенной и индивидуальной форм, что находит подтверждение в рекомендациях многих авторов [10, 24, 25].
Цель настоящей работы заключается в сравнительном анализе изменчивости морфологических и биохимических признаков растений Pentaphylloides fruticosa на эндогенном и индивидуальном уровнях и выявлении степени вариабельности отдельных признаков.
Экспериментальная часть
Эндогенная и индивидуальная изменчивость исследована на отобранных случайным образом пяти модельных кустах P. fruticosa, высаженных 3-летними саженцами в 2004 г. на экспериментальном участке Центрального сибирского ботанического сада СО РАН (ЦСБС СО РАН). Исходный материал выращен на интродукционном участке Горно-Алтайского филиала ЦСБС СО РАН (с. Камлак) из семян, собранных в природной ценопопуляции в окрестностях с. Бичикту-Бом Онгудайского района в Центральном Алтае.
С каждого растения равномерно по всей кроне отбирали по 10 годичных побегов в период полного формирования листа (29.06.2006). С каждого побега брали нижний лист и на свежесобранном материале проводили метрические измерения.
Для промера морфологических параметров был применен современный метод компьютерного анализа изображений, полученных с увеличением. Для измерения метрических параметров листа проводили съемку цифровой камерой в режиме «макро» с последующей обработкой снимков и интерпретацией результатов средствами геоинформационных технологий и электронных таблиц, используя пакет прикладных программ «MapInfo» и «Excel 7.0». Исходное изображение сначала преобразовывали в декартову систему координат,
х4
Х5
затем проводили векторизацию растровых изображений с последующим вычислением морфометри-ческих характеристик листовой пластинки - длины, ширины, площади, периметра [26].
Метрические признаки листовых пластинок измеряли в следующей последовательности: Х1 - дли-
Х2 на черешка листа; Х2 - длина листовой пластинки;
Хэ - ширина листовой пластинки; Х4 - ширина конечной доли; Х5 - длина конечной доли (рис. 1).
Х1
Измеряли длину каждого годичного побега, подсчитывали количество листьев на нем и взвешивали сырую массу листьев на побеге.
Рис. 1. Порядок измерения листьев РеМарЬуИогйвз /тиНеояа: Х1 - длина черешка листа; Х2 - длина листовой пластинки; Хэ - ширина листовой пластинки; Х4 - ширина конечной доли; Х5 - длина конечной доли
Для определения содержания флавоноидов в листьях каждого годичного побега в отдельности брали точную навеску свежесобранного растительного материала (0,5 г), заливали 96%-ным этанолом, настаивали 20-30 дней, затем исчерпывающе экстрагировали 70 и 96%о-ным этанолом при нагревании на водяной бане при Т=60-70 °С [27]. Полноту экс-
трагирования контролировали с помощью качественной реакции на флавоноиды с 10%-ным раствором натрия гидроксида [28]. Извлечения объединяли и измеряли объем, который обычно составлял 50-60 мл.
1 мл экстракта разбавляли бидистиллированной водой до V=5 мл и пропускали через концентрирующий патрон Диапак С16 (ЗАО «БиоХимМак») для освобождения от примесей гидрофильной природы. Флаво-нолгликозиды смывали с патрона небольшим количеством 70%-ного этанола, агликоны - 96%-ного этанола. Элюаты объединяли, измеряли объем, который обычно составлял 5-8 мл, и пропускали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
Анализ флавоноидов лапчатки кустарниковой выполняли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на жидкостном хроматографе Agilent 1100 (Agilent Technologies, США) с УФ-спектрофотометрическим детектором и программным обеспечением обработки хроматографических данных ChemStation [29,30]. Разделение проводили на колонке Hypersil ODS размером 125x2,0 мм с октадецилсили-кагелем (С18) с диаметром частиц 3 мкм в следующих условиях: элюирование - градиент от 10 до 13% аце-тонитрила, подкисленного в ортофосфорной кислоте (0,25%) за 10 мин, затем от 13% до 15% ацетонитрила и 5% метанола за 20 мин, далее от 15 до 75% ацетонитрила и от 5 до 15% метанола за 15 мин. Скорость потока элюента - 0,2 мл/мин. Объем вводимой пробы - 3 мкл. Температура колонки - 45 °С. Перед использованием подвижную фазу фильтровали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Детектирование осуществляли при X 360 нм.
Для приготовления подвижных фаз применяли метиловый спирт (ос. ч.), ортофосфорную кислоту (ос. ч.), бидистиллированную деионизированную воду. Для приготовления стандартных образцов, использовали образцы кверцетина, кемпферола, гиперозида и кверцитрина производства фирмы «Fluka». Стандартные растворы готовили в концентрации 10 мкг/мл в метиловом спирте.
Количественное определение индивидуальных компонентов в образцах P. fruticosa проводили по методу внешнего стандарта как наиболее оптимальному для хроматографического анализа многокомпонентных смесей [30].
Общее содержание флавоноидных соединений оценивали по сумме площадей хроматографических пиков на Х=360 нм, так как для многих наиболее активных флавоноидов максимумы поглощения находятся в длинноволновой области (362±14 нм), что позволяет легко отличить их от других классов веществ.
Для определения флавонолгликозидов (гликозидов кверцетина и кемпферола в отдельности) методом ВЭЖХ проводили анализ свободных агликонов - кверцетина и кемпферола, образующихся после кислотного гидролиза соответствующих гликозидов [30, 31]. Для проведения кислотного гидролиза к 0,5 мл водно-этанольного извлечения прибавляли 0,5 мл HCl (2 н) и нагревали на кипящей водяной бане в течение 2 ч. После охлаждения разбавленный экстракт пропускали через концентрирующий патрон Диапак С16 (ЗАО «БиоХимМак»), агликоны смывали 96%-ным этанолом и хроматографировали, применив градиентный режим элюирования. В подвижной фазе содержание метанола в водном растворе ортофосфорной кислоты (0,1%) изменялось от 45 до 48% за 18 мин.
Суммарное содержание флавонолгликозидов (отдельно гликозидов кверцетина и кемпферола) в образцах пятилистника кустарникового рассчитывали по содержанию свободных агликонов, образующихся после кислотного гидролиза, применяя известные из литературных данных коэффициенты для пересчета концентрации агликона на соответствующий гликозид: 2,504 для кверцетина и 2,588 для кемпферола [30, 31].
Содержание флавонолов определяли как сумму флавонолгликозидов и свободных агликонов - кверцетина и кемпферола.
Все биометрические данные были обработаны методами вариационной статистики с помощью пакетов прикладных статистических программ «Excel 7.0» и «Statistica 5.0».
Результаты и их обсуждение
Известно, что под эндогенной изменчивостью понимается изменчивость метамеров в пределах особи [10, 25, 32]. Она характерна для морфологических, физиологических, биохимических признаков растений. Недооценка этой формы изменчивости может повлечь за собой серьезные просчеты при изучении других форм [32].
Исследование состава флавоноидов методом ВЭЖХ показало, что в экстрактах листьев P. fruticosa содержится не менее 14 соединений флавоноидной природы (рис. 2).
15 2D 25 3D 55 <Ю
Рис. 2. Хроматограмма экстракта листьев Pentaphylloides fruticosa: 4 - гиперозид (tR=17,32 мин); 5 - изокверцитрин (tR=18,05 мин); 11 - кверцитрин (tR=26,08 мин); 12 - астрагалин (tR=28,45 мин); 13 - кверцетин (tR=37,36 мин); 14 - кемпферол (tR=39,85 мин). 1-3, 6-10 - неидентифицированные компоненты. По оси абсцисс - время удерживания, мин, по оси ординат - оптическая плотность
Сопоставление времен удерживания пиков веществ на хроматограммах анализируемых образцов с временами удерживания пиков стандартных образцов и УФ-спектрами позволило идентифицировать следующие флавонолгликозиды: гиперозид, изокверцитрин, кверцитрин и астрагалин, а также агликоны: кверцетин и кемпферол. Изокверцитрин и астрагалин выделены нами ранее из исследуемого растения, идентифицированы по результатам хроматографического анализа, данным спектроскопии УФ и ЯМР 1Н и С [23] и использованы в данной работе в качестве метчиков. Остальные компоненты (1-2, 6-11, 13) пока не идентифицированы, но в процессе хроматографирования в режиме online были зарегистрированы УФ-спектры некоторых из них. Компонент 1 имеет Х^х 278, 358 нм; компонент 2 - Хмах 284, 354 нм; компонент 3 - Х„ах 284, 354 нм; компонент 6 - Хмах 257, 367 нм; компонент 7 - 257, 367 нм; компонент 9 - Хмах 252, 367 нм; компонент 10 - Xmjx 255, 355 нм. На основании этих данных они отнесены к флавоноидным структурам.
При сравнении хроматограмм исследуемых экстрактов выявлено, что качественный состав флавоноид-ного комплекса в пределах особи и между отдельными растениями не изменяется. Эндогенная и индивидуальная изменчивость качественных признаков равна нулю, т.е. в разных частях кроны одного куста и на разных кустах флавоноидный профиль одинаковый.
Количественные признаки в пределах одной особи и между растениями подвержены изменчивости.
В качестве меры изменчивости использовали коэффициент вариации, его оценку проводили по шкале уровней изменчивости, предложенной С.А. Мамаевым [24]. Уровень изменчивости считается очень низким при CV < 7%, низким при CV=8-12%, средним при CV=13-20%, высоким при CV=21-40% и очень высоким при CV>40%.
Нами получены средние значения, стандартные отклонения и коэффициенты вариации 11 морфологических и 19 биохимических признаков (табл.). На эндогенном и индивидуальном уровнях изменчивость исследуемых признаков P. fruticosa различна.
Из большого числа морфологических параметров листа в пределах индивидуума наиболее стабильным признаком является длина листа (CV=10-22%), для которого отмечены средний и низкий уровени изменчивости. Ширина листа, его периметр и особенно площадь в пределах особи менее стабильны, они имеют средний, высокий и очень высокий коэффициенты вариации. Размеры конечной доли в пределах особи у P. fruticosa также изменчивы: наименьшая эндогенная изменчивость свойственна длине (CV= 18-22%), а наибольшая - площади конечной доли (CV=34-51%).
На среднем и высоком уровнях изменчивости варьирует длина черешка листа (CV=19-26%), а также длина годичного побега (CV=19-32%).
Наибольшей вариабельностью из рассматриваемых признаков выделяются число листьев и их сырая масса на побеге, которым свойственен очень высокий уровень эндогенной изменчивости.
Следует отметить, что показатели сырой массы листьев, их количество на побеге, площадь листа имеют более высокий уровень изменчивости по сравнению с признаками, характеризующими линейные размеры органов. Аналогичные зависимости описаны в литературе [32, 33].
В качестве биохимических признаков нами выбраны общая сумма флавоноидов, сумма флавонолов, сумма гликозидов кверцетина, сумма гликозидов кемпферола, сумма агликонов и отдельные компоненты, а именно гиперозид, изокверцитрин, кверцитрин, астрагалин, кверцетин, кемпферол, и неидентифицированные соединения 1-3, 6-10.
Оценка изменчивости морфологических и биохимических признаков Pentaphylloides fruticosa (содержание флавоноидов дано в мг/г от а.с.м.)
Признак Эндогенная изменчивость Индивидуальная изменчивость
X ± 5 СУ, % X ± 5 СУ, %
Морфометрические параметры
Длина листа, мм 36±8 22 34±1,8 5
Ширина листа, мм 34±6 18 31±2,6 8
Площадь листа, мм2 349±126 36 304±43 14
Периметр листа, мм 188±37 20 179±11,5 6
Длина конечной доли, мм 17±3,7 22 16,5±0,5 3
Ширина конечной доли, мм 5,2±1,0 19 4,6±0,6 12
Площадь конечной доли, мм2 64±22 34 54±10 18
Периметр конечной доли, мм 38±7 18 35±3 8
Длина черешка, мм 13,3±3,1 24 11,7±1,8 15
Длина годичного побега, мм 163±52 32 196±32 16
Число листьев, шт. 17,3±5,9 34 14,7±2,2 15
Сырая масса листьев на побеге, мг 706±284 40 634±65 10
Биохимические параметры
Компонент 1 1,43±0,76 81 0,86±0,51 59
Компонент 2 0,86±0,35 75 0,58±0,11 19
Компонент 3 2,06±1,05 37 0,96±0,27 28
Гиперозид 1,08±0,86 79 1,12±0,43 38
Изокверцитрин 0,69±0,44 64 1,18±0,62 50
Компонент 6 0,66±0,39 60 1,01±0,44 42
Компонент 7 0,24±0,21 90 0,20±0,11 52
Компонент 8 0,24±0,18 74 0,17±0,07 42
Компонент 9 4,60±2,24 49 3,80±0,91 24
Компонент 10 10,94±2,29 21 9,84±0,98 10
Кверцитрин 0,93±0,67 72 1,15±0,14 12
Астрагалин 0,32±0,14 43 0,27±0,09 32
Кверцетин 0,38±0,24 62 0,16±0,02 14
Кемпферол 0,44±0,15 34 0,08±0,01 16
Суммарное содержание флавоноидов 24,64±5,64 23 21,38±2,13 10
В том числе:
Гликозиды кверцетина 12,67±5,07 40 12,99±0,35 3
Гликозиды кемпферола 1,80±0,77 43 1,44±0,41 29
Суммарное содержание агликонов 0,82±0,35 43 0,24±0,02 8
Суммарное содержание флавонолов 15,29±5,69 37 14,67±0,06 0,4
Примечание: X - среднее значение признака, 5 - стандартное отклонение, СУ,% - коэффициент вариации.
Эндогенная изменчивость дана напримере одного куста (п=10).
На эндогенном уровне наиболее стабильными признаками оказались сумма флавоноидов (СУ= 13-23%) и содержание компонента 10 (СУ=15-21%), которые имели средний уровень изменчивости. Остальным признакам свойственна высокая и очень высокая изменчивость, особенно выделяются индивидуальные компоненты, за исключением компонента 10. Возможно, сильное варьирование исследованных признаков можно объяснить лабильностью химического состава листьев в связи с приспособительной функцией к условиям произрастания [27]. В литературе довольно часто отмечается факт, что у разных видов растений, в зависимости от расположения листьев в различных частях кроны, возрастных состояний органов и других факторов, варьирует содержание тех или иных флавоноидных структур - кверцетина, кемпферола, мирицетина и их производных [10, 27, 34, 35].
При сравнении изменчивости признаков ме^ду отдельными особями Р. р-и^со^'а обнаружено, что варьирование любого из исследованных признаков внутри отдельной особи больше, чем ме^ду особями, т.е.
СУэнд. > СУинд. По всей видимости, на уровень изменчивости признаков внутри кроны куста флуктуации светового, температурного, водного режимов оказывают влияние в большей мере, чем между отдельными
кустами. Снижение вариабельности признаков между особями, вероятнее всего, связано с достаточно однородными условиями произрастания.
Кроме того, в результате проведенного исследования решается методический вопрос об установлении необходимого объема материала при биохимическом исследовании пятилистника кустарникового.
Выводы
В результате проведенного исследования выявлены особенности эндогенной и индивидуальной изменчивости 11 морфологических и 19 биохимических признаков Pentaphylloides fruticosa (L.) O.Schwarz в условиях культуры.
Установлено, что качественный состав флавоноидов в пределах особи не изменяется.
Большинство количественных признаков характеризуется высокой эндогенной изменчивостью. Наименьшая изменчивость отмечена для ширины и длины листа и конечной доли и их периметров. Из биохимических признаков наименее изменчивы общая сумма флавоноидов и компонент 10.
На индивидуальном уровне наблюдается значительное снижение вариабельности изучаемых признаков. Уровень изменчивости морфологических признаков между особями оценивается как очень низкий и низкий, за исключением площади листа и конечной доли, длины побега и количества листьев на побеге, для которых отмечена средняя вариабельность. Из химических признаков очень низкий и низкий уровени изменчивости отмечены для общей суммы флавоноидов, суммы флавонолов, гликозидов кверцетина, суммы агликонов, компонента 10, кверцитрина, кверцетина и кемпферола.
Список литературы
1. Флора Сибири. Rosaceae / под ред. A.B. Положий и Л.И. Малышева. Новосибирск, 1988. Т. 8. 198 с.
2. Коропачинский И.Ю., Встовская Т.Н. Древесные растения Азиатской России. Новосибирск, 2002. 707 с.
3. Davidson C.G. and Lenz L.M. Experimental taxonomy of Potentilla fruticosa // Can. J. Bot. 1989. V. 67. N12. Pp. 3520-3528.
4. Innes R.L., Remphrey W.R., Lenz L.M. An analysis of the development of single and double flowers in Potentilla fruticosa // Can. J. Bot. 1989. V. 67. N4. Pp. 1071-1079.
5. Шретер А.И. Лекарственная флора Советского Дальнего Востока. М., 1975. 328 с.
6. Телятьев В.В. Полезные растения Центральной Сибири. Новосибирск, 1991. 431 с.
7. Храмова Е.П. Анализ внутривидовой изменчивости в экотипах Pentaphylloides fruticosa (L.) O.Schwarz // Сибирский экологический журнал. 2003. №1. С. 71-77.
8. Соколенко O.A., Триль В.М. Морфогенез цветков и соцветий Potentilla fruticosa L. // Известия вузов. СевероКавказский регион. 2004. №1. С. 64-67.
9. Годин В.Н. Изменчивость признаков цветка Pentaphylloides fruticosa (Rosaceae) в Центральном и Юго-Восточном Алтае. 3. Сравнительный анализ мономорфных и гетерогенных ценопопуляций // Ботанический журнал. 2005. №6. С. 865-974.
10. Семкина Л.А. Изменчивость изоферменгных спектров пероксидазы у сосны обыкновенной. Свердловск, 1985. 70 с.
11. Высочина Г.И. Биохимические подходы к познанию биоразнообразия растительного мира // Сибирский экологический журнал. 1999. №3. С. 207-211.
12. Высочина Г.И. Фенольные соединения в систематике и филогении семейства гречишных: автореф. дис. ... д-ра биол. наук. Новосибирск, 2002. 32 с.
13. Полякова Л.В., Ершова Э.А. Изменчивость фенольных соединений у некоторых травянистых и древесных растений от межпопуляционного до внутрииндивидуального (эндогенного) уровня // Химия растительного сырья. 2000. №1. С. 121-129.
14. Harborne J.B.,Williams C.A. Advances in flavonoid reseach since 1992 // Phytochemistry. 2000. N55. Pp. 481-504.
15. Николаева И.Г., Хобракова В.Б., Арьяева M.M. Пятилистник кустарниковый (Курильский чай кустарниковый). Улан-Удэ, 2003. 110 с.
16. Триль В.М., Волхонская Т.А., Шкель Н.М. Особенности накопления БАВ в курильском чае кустарниковом в природе и культуре // Особенности акклиматизации многолетних интродуцентов, накапливающих биологически активные вещества : тез. докл. Всерос. конф. Краснодар, 1995. С. 239-242.
17. Храмова Е.П. Динамика содержания флавонолов в надземных органах Pentaphylloides fruticosa (L.) O.Schwarz различных экотипов, выращиваемых в Новосибирске // Растительные ресурсы. 1999. Вып. 4. С. 31-38.
18. Bate-Smith E.C. Chromatography and taxonomy in the Rosaceae with special reference to Potentilla and Prunus // J. Linnean Soc. London, 1961. Botany. V. 58. N370. P. 39-54.
19. Федосеева Г.М. Фенольные соединения Potentilla fruticosa // Химия природных соединений. 1979. №4. С. 575-576.
20. Растительные ресурсы СССР. Л., 1987. 326 с.
21. Ганенко Т.В., Верещагин А.Л., Семенов A.A. Химический состав Potentilla fruticosa. 3. Флавоноиды и свободные стерины // Химия природных соединений. 1991. №2. С. 285.
22. Ганенко Т.В., Луцкий В.И., Ларин М.Ф. и др. Химический состав Potentilla fruticosa 1. Флавоноиды // Химия природных соединений. 1988. №3. С. 451.
23. Шкель Н.М, Храмова Е.П., Кузаков Е.В.и др. Фенольные соединения Pentaphylloides fruticosa (L.) O. Schwarz // Химия в интересах устойчивого развития. 1997. Т. 5. №1. С. 123-127.
24. Мамаев С.А. Основные принципы методики исследования внутривидовой изменчивости древесных растений // Индивидуальная эколого-географическая изменчивость растений. Свердловск, 1975. Вып. 94. С. 9-14.
25. ШембергМ.А. Береза каменная. Новосибирск, 1986. 175 с.
26. Трубина Л.К. Стереомодели в изучении биологических объектов. Новосибирск, 2006. 136 с.
27. Минаева В.Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование. Новосибирск, 1978. 255 с.
28. Бандюкова B.A., Шинкаренко A.A., Казаков А.Л. Методы исследования природных флавоноидов. Пятигорск, 1977.
29. Keinänen M.., Julkunen-Tiitto R. High-performance liquid chromatographyc determination of flavonoids in Betula pendula and Betula pubescens leaves // J. of chromatography A. 1998. V. 793. Pp. 370-377.
30. Beek T.A. Chemical analysis of Gingo biloba leaves and extracts // J. of Chromatography A. 2002. N967. Pp. 21-35.
31. Юрьев Д.В., Эллер К.И., Арзамасцев А.П. Анализ флавонолгликозидов в препаратах и БАД на основе экстракта Gingo biloba // Фармация. 2003. №2. С. 7-9.
32. Мамаев С.А. Формы внутривидовой изменчивости древесных растений М., 1972. 284 с.
33. Мишуров В.П. Внутривидовая изменчивость горца Вейриха и горца итурупского. Л., 1984. 132 с.
34. Laitinen M.L., Julkunen-Tiitto R., Rousi M. Variation in phenolic compounds within a Birch (Betula pendula) population // J. of Chemical Ecology. 2000. V. 26. N7. Pp. 1609-1622.
35. Hohl U., Neubert B., Pforte H., Schonhhof I., Böhm H. Flavonoid concentrations in the inner leaves of head lettuce genotypes // Eur. Food Res.Technol. 2001. N213. Pp. 205-211.
Поступило в редакцию 27 марта 2009 г.
