CC BY
138
НЕПРЕРЫВНОЕ МЕДИЦИНСКОЕ ОБРАЗОВАНИЕ
Исторические аспекты разработки и применения вакиин против эпидемического сыпного тифа (материалы для подготовки лекции)
Пантюхина А.Н., Шпынов С.Н., Белоусова Л.С., Тарасевич И.В.
ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия
Обзор посвящен анализу исторических аспектов создания, совершенствования и применения вакцин против эпидемического сыпного тифа (ЭСТ), эпидемии которого жестко контролировали численность населения, особенно в период войн, массовых бедствий и переселений, преследовавших человечество всю обозримую историю. Авторы пытались продемонстрировать эволюцию подходов в технологии получения эффективных профилактических средств, от первых серий препаратов, полученных в «риккетсиозных» лабораториях, в которых нередко и вводилась вакцина, до периода массового промышленного производства, когда основными требованиями стали безопасность вакцин, снижение токсического действия их компонентов, повышение иммуногенности и ослабление вирулентности. Можно выделить 3 основных принципа или подхода для создания вакцин для профилактики ЭСТ: создание живых вакцин против ЭСТ, основанных на применении штаммов Rickettsia typhi; получение убитых вакцин на основе штаммов R. prowazekii, культивируемых в лабораторных линиях платяных вшей, легких белых мышей, желточных оболочках развивающихся куриных эмбрионов, культуре ткани; разработка живой ослабленной сыпнотифозной вакцины.
Человечество должно быть благодарно первым исследователям-риккетсиологам, ценой своей жизни изучивших возбудителя (R. prowazekii), и их последователям, создавшим вакцины против ЭСТ, которые повлияли на ход мировой истории. Необходима дальнейшая разработка вакцин, так как ликвидация этой инфекции гипотетически возможна, когда демографические процессы приведут к полной элиминации носителей возбудителя этой персистентной инфекции.
Ключевые слова:
вакцина, профилактика, эпидемический сыпной тиф, Rickettsia prowazekii
Для цитирования: Пантюхина А.Н., Шпынов С.Н., Белоусова Л.С., Тарасевич И.В. Исторические аспекты разработки и применения вакцин против эпидемического сыпного тифа (материалы для подготовки лекции) // Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2019. Т. 8, № 1. С. 84-94. doi: 10.2441l/2305-3496-2019-11011. Статья поступила в редакцию 20.06.2018. Принята в печать 24.12.2018.
Historical aspects of the development and use of vaccines against epidemic typhus (materials for the preparation of the lecture)
Pantyukhina A.N., Shpynov S.N., N.F. Gamaleya Scientific Research Institute of Epidemiology
Belousova L. S., Tarasevich I.V. and Microbiology, Moscow, Russia
The review analyzes the historical aspects of the creation, improvement and application of vaccines against epidemic typhus, which tightly controlled the number of human population, especially in the period of wars,
mass disasters and migrations, persecuting humanity in all recorded history. The authors tried to demonstrate the evolution of approaches in the technology of obtaining effective prophylactic preparations, from the first series of the preparations obtained in rickettsiosis laboratories, where vaccination was often carried out, to the period of mass industrial production, when the main requirements are safety of vaccines, reducing the toxic effects of its components, increasing immunogenicity and weakening virulence. It is possible to allocate three basic principles or approach for creating a vaccine for the prevention epidemic typhus. The creation of live vaccines against epidemic typhus, based on the use of strains of Rickettsia typhi, elaborated killed vaccines based on the strains of R. prowazekii cultivated in laboratory lines body lice, the lungs of white mice, yolk tissues of developing chicken embryos, tissue culture, and the development of live attenuated typhus vaccine.
Humanity should be grateful to first research-rickettsiologists and their followers, who created a vaccine against epidemic typhus, which influenced the course of world history and prevent our species from extinction. Further development of vaccines is a necessity, as elimination of this infection is hypothetically possible, when «demographic processes will lead to the complete elimination of carriers of this persistent infection».
Keywords:
vaccine, prevention, epidemic typhus, Rickettsia prowazekii
For citation: Pantyukhina A.N., Shpynov S.N., Belousova L. S., Tarasevich I.V. Historical aspects of the development and use of vaccines against epidemic typhus (materials for the preparation of the lecture). Infektsionnye bolezni: novosti, mneniya, obuchenie [Infectious Diseases: News, Opinions, Training]. 2019; 8 (1): 84-94. doi: 10.24411/2305-3496-2019-11011. (in Russian) Received 20.06.2018. Accepted 24.12.2018.
Считается, что от Rickettsia prowazekii - возбудителя эпидемического сыпного тифа (ЭСТ), передающегося платяной вошью (Pediculus humanus corporis) за историю человечества погибло больше людей, чем за все известные войны [1]. Эпидемии ЭСТ всегда связаны с войной, голодом и миграцией населения, сопровождающимися резким ухудшением санитарно-гигиенических условий.
Потенциальная эпидемическая значимость сыпного тифа определяется тем, что среди населения имеется некоторое количество людей, переболевших этой инфекцией во время Великой Отечественной войны (ВОВ) и в послевоенные годы, что даже спустя десятилетия приводит к развитию рецидива заболевания - болезни Брилля-Цинссера (возвратный сыпной тиф), а при высоких показателях педикулеза (платяного) могут возникнуть спорадические случаи или вспышки ЭСТ. Свидетельством этого стала вспышка ЭСТ, произошедшая в психоневрологической больнице в Липецкой области в конце 1997 г. на фоне эпидемиологического благополучия по этой инфекции. Во время расследования вспышки были зарегистрированы 14 больных и 15 переболевших ЭСТ на фоне высокой пораженности среди пациентов (женского отделения) платяными и головными вшами [2, 3]. Источником заражения могли стать пациенты 1942 и 1943 г.р., в прошлом перенесшие ЭСТ. Эта инфекция может быть отнесена к категории возвращающихся.
На протяжении последних десятилетий регистрируется высокий уровень заболеваемости ЭСТ в странах Африки (Руанда, Бурунди) и Южной Америки (Боливия, Перу) [4]. В 1997 г. в лагере беженцев в Бурунди во время эпидемии этой инфекции, где заболели ЭСТ 43 345 человек, летальность составила 15% [5-7].
По данным государственных статистических форм отчетности (формы 1 и 2) «Сведения об инфекционных и паразитарных заболеваниях», показатель распространенности педикулеза в Москве в 2014 г. составил 1633,2 на 100 тыс. населения.
К сожалению, вопрос полной ликвидации ЭСТ, тесно связанный с уничтожением переносчика, в глобальном масштабе вряд ли когда-то будет решен.
На фоне возможного формирования условий, благоприятных для эпидемического проявления сыпнотифозной инфекции, действенной мерой остается специфическая профилактика ЭСТ путем вакцинации контактируемых людей и неиммунного населения в очаге [8-11]. Специфическая профилактика ЭСТ - проблема, требующая самого серьезного внимания, а вопросы создания эффективных вакцин не теряют своей актуальности до настоящего времени [12].
Для решения этой задачи на данном этапе исследований была проведена сравнительная оценка разработанных ранее вакцин против ЭСТ, в отношении которых проведено всестороннее изучение профилактического действия и доказана эпидемиологическая эффективность. Актуальность этой работы обусловлена выбором наиболее полноценного в антигенном отношении, технологически простого в изготовлении препарата, обладающего высокими протективными свойствами, для эффективного проведения противоэпидемических мероприятий.
По данным научных публикаций, для профилактики ЭСТ во время эпидемий и локальных (Европа, Северная Африка и Египет) войн, Первой мировой, гражданской и Великой Отечественной войн было приготовлено и применено несколько вариантов сыпнотифозных вакцин.
Живые вакцины против эпидемического сыпного тифа, основанные на применении R. typhi
Согласно историческим данным, основой для применения сыпнотифозной вакцины послужили эксперименты H. da Rocha-Lima по использованию фенолизированной
эмульсии из естественно зараженных и растертых вшей в качестве вакцины [13]. Однако в те годы в среде риккетси-ологов постулировало мнение, что наиболее эффективным способом активной иммунизации является введение человеку живых ослабленных штаммов риккетсий, способных вызывать такой же длительный иммунитет, как при естественном заражении [14, 15]. Авторы в качестве вакцинного штамма использовали R. typhi (R. mooseri) исходя из положения о более легком течении крысиного (эндемического) сыпного тифа и наличии перекрестного иммунитета с ЭСТ. Изготовление живых вакцин из ослабленных штаммов R. typhi шло в двух направлениях, которые были разработаны двумя группами исследователей G. В1апс и соавт. [15] и Ch. NicoLLe, J. Laigret [16].
G. В1апс и соавт. (1934) была приготовлена вакцина (вакцина Бланка), содержавшая живые риккетсии R. typhi, полученные из растертых и профильтрованных органов морских свинок, обработанных 5% бычьей желчью. Вакцину вводили однократно внутримышечно по 1,0 мл взрослым и 0,25-0,5 мл детям [15]. При иммунизации 778 человек разными дозами вакцины, взятыми в разведениях от 1:20 до 1:1000 фильтратов органов морской свинки, авторы отметили уменьшение числа лихорадочных реакций в зависимости от введенной дозы вакцины от 20 до 1,29% соответственно. В контрольной группе у вакцинированных R. typhi, не обработанных желчью, лихорадочные реакции наблюдали у 90% привитых. Оценив полученные результаты как удовлетворительные, G. BLanc и соавт. (1939-1940) приступили к массовой вакцинации людей в очагах ЭСТ [17, 18]. Вакциной Бланка («желчной вакциной») во время большой эпидемии ЭСТ в Марокко были привиты 1 млн 254 человека, включая местное население, небольшое число европейцев и контингент военных гарнизонов. При этом среди европейцев были выявлены лихорадочные реакции у 20% привитых.
Продолжая исследования по усовершенствованию вакцины, G. BLanc и M. BaLtazard (1936) в желчную вакцину добавляли определенную дозу фекалий блох, зараженных риккетсиями крысиного сыпного тифа (блошиная били-вакцина) [19]. Оценивая эффективность этой вакцины, M. Laurens, M. Fort и M. Вегтег (1939) обнаружили, что у 24 из 1949 привитых туземцев было выявлено заболевание в легкой форме, среди европейцев лихорадочные реакции наблюдали в 30% случаев [20]. Больных лечили в госпитале в течение 25-30 дней, и заболевание было идентифицировано как аттенуированный крысиный сыпной тиф, вызванный вакциной [8]. При ее применении в Чили из 800 вакцинированных заболели 23%, и у 5 человек были выделены штаммы R. typhi.
Причина неоднозначного действия вакцины заключалась в отсутствии контроля и стандартизации вирулентности R. typhi в процессе ее получения. Обработка препарата 5% желчью по существу была направлена на уменьшение инфекциозности вакцины, а не на изменение патогенности и вирулентности риккетсий.
Анализируя данные прививок в Касабланке, Laurens, Fort, Bernier и Suarez отмечали неравномерность вакцинирующего эффекта в зависимости от серии вакцины и связанные с этим тяжелые общие реакции, вплоть до того, что из крови
вакцинированных удавалось выделить риккетсии [20, 21]. В Японии вакциной Бланка и Балтазара были привиты 11 000 жителей острова Хоккайдо во время эпидемии ЭСТ. Среди 10% вакцинированных на 7-24-й день после прививки наблюдались общие реакции (головная боль, лихорадка) длительностью до 14 дней, при этом 1 вакцинированный умер. J. Sadusk и H. KuhLenbeck считали эти реакции результатом ненадежной аттенуации риккетсий и недостаточной стандартизацией вакцины [22, 23].
Ch. NicoLLe и J. Laigret (1935-1936) в основу своих экспериментов положили принцип создания депонированных вакцин [14, 16]. Для их приготовления использовали высушенный мозг морской свинки, зараженной R. typhi, депонированный в яичном желтке и прованском масле. Эта вакцина применялась для прививок по 1 мл в дозе 1/200 части мозга. В результате вакцинирования 32 481 жителей Туниса депонированной ослабленной вакциной на основе R. typhi у 13 человек наблюдали проявления, идентифицированные как поствакцинальная инфекция. Положительный эффект от вакцинации был достигнут, прививки способствовали ликвидации трех старых очагов сыпного тифа в течение 3 нед.
Об эффективности применения живых вакцин в то время сложилось неоднозначное мнение. G. BLanc, M. BaLtazard (1939-1940) считали, что во время эпидемии следует использовать вакцину с живыми риккетсиями, поскольку такая вакцина применяется однократно и формирует стойкий иммунитет, аналогичный заболеванию, у 60% вакцинированных [18]. Другие исследователи придерживались мнения, что применение живых вакцин нецелесообразно из-за опасности развития заболевания [11, 21, 24-27].
Подводя итог этого этапа разработки живых вакцин против ЭСТ, основанных на применении R. typhi, нельзя отрицать достигнутого положительного эффекта от их применения. Несмотря на реактогенность, их применение было оправданным и результативным и позволило остановить эпидемическое распространение ЭСТ на многих континентах. Однако, даже учитывая это, они не получили дальнейшего применения. Причина лежала в несовершенстве методики приготовления вакцин: в отсутствии стандартизации живых риккетсий, их нестойкости в процессе хранения препарата, реактогенности и появлении поствакцинальных реакций.
Инактивированные (убитые) вакцины против эпидемического сыпного тифа
В последующие годы исследователи сосредоточилось на разработке вакцин на основе инактивированных риккетсий как более безопасных при иммунизации населения.
Первые исследования по использованию в практике вакцин из инактивированных риккетсий были осуществлены R. WeigL (1920) [28]. Метод Вейгля был воспринят с выраженным интересом, поскольку позволял проводить заражение вшей возбудителем ЭСТ с учетом его дозировки и свойств. Заражение проводили (под контролем лупы) в анальное отверстие вшей с помощью тончайшего капилляра, наполненного стандартизованным количеством инфекционного материала. Накопление риккетсий в кишечнике вшей было колоссальным - до 10-100 млн бактериальных клеток. Вак-
цина представляла собой фенолизированную (0,5% фенол) эмульсию из кишечников зараженных вшей, очищенную от примесей путем центрифугирования и стандартизованную до 25-30 кишечников на курс вакцинации. Вакцину вводили подкожно, троекратно в дозах 2 млрд (20 кишечников) - 5 млрд (50 кишечников) - 10 млрд (100 кишечников) с 5-7-дневными интервалами.
Эффективность вакцины была доказана на большом эпидемиологическом материале. Первая массовая вакцинация была проведена в 1920 г. при эпидемии ЭСТ, разразившейся в предгорьях Карпат. В результате вакцинации 2734 человек удалось предотвратить распространение заболевания среди населения [29].
Позже вакцинацию проводили бельгийские миссионеры во Внутренней Монголии в Китае. Им удалось остановить эпидемию как среди местного населения, так и среди миссионеров. При этом 1 из 50 миссионеров отказался от вакцинации, заболел ЭСТ и умер, все остальные вакцинированные миссионеры остались живы [30]. Вакцина Вейгля была успешно применена в Африке, Абиссинии (Эфиопия), где шла война и свирепствовал ЭСТ [30], с неизменным успехом широко применялась во многих странах.
В 1931-1932 гг. у 2790 человек, привитых вакциной Вейгля, были отмечены незначительные местные и общие реакции, а головную боль и повышение температуры до 38 °С наблюдали довольно редко [10]. С 1941 г. был налажен производственный выпуск вакцины. Применение вакцины Вейгля среди солдат Германии способствовало ограничению уровня заболеваемости ЭСТ, который был зарегистрирован у 6% солдат.
При оценке эпидемиологической значимости вакцинации у людей был сделан вывод, что прививка вакциной Вейгля при полной ее дозировке не гарантирует защиты от заражения, но снижает заболеваемость, полностью исключает смертность и облегчает течение ЭСТ [30]. Основным недостатком вакцины Вейгля считали сложность ее производства.
Советскими исследователями А.В. Пшеничновым и Б.И. Рай-хером в 1942 г. была предложена оригинальная модификация метода Вейгля, дающая возможность одновременного заражения большого количество вшей путем кормления их инфицированной кровью на эпидермомембранах [31]. Вакцина представляла собой взвесь риккетсий из растертых нимф II вшей в растворе 0,9% хлорида натрия с добавлением 0,2% формалина. Нимф II заражали риккетсиями путем кормления инфицированной кровью через эпидермомем-брану. Доза на курс вакцинации 100 нимф на 2,5 мл изотонического раствора хлорида натрия, т.е. 3-4 млрд риккетсий. Прививки проводили подкожно, 3-кратно (0,2-0,8-1,5 мл) с интервалом 5-10 дней.
В эпидемиологической практике при вакцинации 25 000 человек побочных реакций не наблюдали. Применение этой вакцины позволило снизить уровень заболеваемости ЭСТ в 4-5 раз [32]. По результатам применения вакцины авторами были сделаны следующие выводы:
1) для приготовления вакцины можно пользоваться одновременно любым количеством штаммов, что полностью удовлетворяет требованиям поливалентного препарата;
2) вакцина готовится на основе полноценных в антигенном отношении риккетсий, которые в естественных условиях вызывают заболевание у человека;
3) вакцину Пшеничнова-Райхера от вакцины Вейгля отличают простота приготовления, дешевизна и доступность для массового производства.
В результате промышленного выпуска и широкого применения вакцины Пшеничнова-Райхера в СССР удалось предотвратить эпидемию ЭСТ в действующей армии и в тылу во время ВОВ. За эти работы ученые были удостоены звания лауреатов Государственной премии СССР.
По данным М.К. Кронтовской (1946), ограничения при производстве вакцин из вшей были связаны с необходимостью их кормления (интактных и зараженных) на людях для поддержания популяции переносчика [8]. Кормление переносчика ЭСТ на людях было прекращено после выведения «кроличьей расы» вшей, кормившихся на кроликах [33].
В последующие годы продолжались поиски более совершенного способа культивирования риккетсий, обеспечивающего их массовое накопление.
После открытия Сastaneda (1939), установившего выраженное размножение R. typhi в легких белых мышей и крыс, появилась возможность массового накопления риккетсий в легких мышей в целях приготовления инактивированных вакцин [34]. В 1940 г. французские ученые, продолжившие эти исследования на модели R. prowazekii, разработали метод интраназального заражения белых мышей [35] и кроликов [36]. Вслед за этим они разработали технологию изготовления легочной инактивированной сыпнотифозной вакцины. Эта технология предполагала интраназальное заражение белых мышей или кроликов культурой R. prowazekii. На 3-4-е сутки у животных развивалась пневмония, мышей вскрывали под наркозом, асептически извлекали легкие и готовили взвесь на 0,9% растворе хлорида натрия с добавлением 0,2% формалина. Препарат очищали от тканевых компонентов путем дробного центрифугирования и стандартизовали до 1 млн риккетсий, затем выдерживали 5 сут для инактивации R. prowazekii. Вакцину вводили троекратно подкожно по 0,5-1-1,5мл с интервалом 5 дней. «Легочная формолвакцина» имела высокую иммуноген-ность и формировала невосприимчивость людей к естественному заражению ЭСТ.
В 1941 г. в Алжире было зарегистрировано 12 950 случаев ЭСТ, что обусловило проведение массовой иммунизации населения живой вакциной Бланка (450 000 человек) и убитой вакциной Дюран-Жиру (500 000 человек). В результате проведенных комплексных мер - мероприятий санитарно-гигиенического характера и массовой вакцинации к 1945 г. удалось уменьшить число случаев ЭСТ до 189 [37].
По данным Duran, во время вспышки ЭСТ в Алжире в 1943 г. при вакцинации медицинского персонала «легочной вакциной» был зарегистрирован летальный исход у одного вакцинированного сотрудника, в то время как у непривитых отмечался высокий уровень летальности [37].
В годы ВОВ одной из основных проблем профилактики ЭСТ в СССР было обеспечение возможности проведения активной массовой иммунизации населения. Решению этого вопроса были посвящены работы профессора М.К. Кронтов-
ской и соавт. [8, 38, 39]. В течение короткого времени был освоен метод Дюрана, что позволило в массовом количестве приготовить вакцину из R. prowazekii, культивируемых в легких белых мышей. Иммунологическую эффективность вакцины, ее реактивность и безвредность оценивали на морских свинках и добровольцах. Вакцину вводили троекратно подкожно по 0,5-1-1,5 мл с интервалом 5 дней. Введение легочной сыпнотифозной вакцины сопровождалось появлением как местных, так и общих реакций, которые, по данным различных авторов, наблюдались у привитых в диапазоне от 1-2 до 8-11%.
В результате проведенных исследований был сделан вывод о безвредности и эффективности вакцины, содержащей полноценный антиген, обладающий выраженными иммуногенными свойствами. Введение вакцины приводило к формированию стойкого напряженного иммунитета при незначительной реактогенности. Положительные результаты вакцинации в ограниченном опыте на добровольцах позволили рекомендовать вакцину для применения в практике. Эффективность вакцинации оценивали на многочисленном контингенте, включающем группу привитых - 92 974 человек и контрольную группу непривитых -87 375 человек [39].
Практика показала, что вакцина М.К. Кронтовской способна предупредить заболевание, а в случае развившегося заболевания облегчала его течение и практически устраняла летальность при ЭСТ. Однако недостатком этой вакцины являлся риск ее контаминации и реактогенность, проявляющаяся местными и общими реакциями. «Легочная вакцина» Кронтовской, применявшаяся в годы ВОВ в нашей стране, стала одним из основных препаратов для профилактики ЭСТ [10], за что ученая была удостоена звания лауреата Государственной премии СССР.
Инактивированные вакиины на основе R. prowazellic культивированием в желточных оболочках развивающихся куриных эмбрионов
В этот же период в США H. Cox [40-42] и J. Craigie [43] разработали инактивированные вакцины с использованием R. prowazekii, культивируемых в желточных оболочках развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ). Вакцина представляла собой лиофилизированную формалинизированную 10% взвесь яичной культуры риккетсий. Способ приготовления вакцины заключался во введении непосредственно в желточный мешок 6-7-дневных РКЭ материала, содержащего R. prowazekii, с инкубацией при температуре 34-36 °С на протяжении 5-7 сут. Затем оболочки желточного мешка извлекали, инактивировали формалином, очищали методом центрифугирования [40] или при сочетании способов обработки с применением эфира и центрифугирования [43]. Полученную взвесь риккетсий стандартизовали по концентрации. Стандартизацию проводили на морских свинках и белых мышах либо по способности нейтрализовать 2 DLM риккетсиозного токсина, либо по способности воспроизводить антитоксический иммунитет у мышей при введении 1 DLM токсина. Вакцину Кокса вводили людям подкожно
троекратно по 1 мл с интервалом 7 дней. Для эффективности прививок требовалось проведение ревакцинации через 6 мес.
Во время Второй мировой войны вакцину производили в больших масштабах и применяли в США, Англии, Северной Африке (Египет), на Среднем Востоке (Иран, Ирак) и в Индии. Вакцину использовали для иммунизации солдат, имевших риск заражения, а также гражданского населения в очагах ЭСТ. В войсках армии США, где была проведена вакцинация, за время Второй мировой войны было зарегистрировано всего 64 случая заболевания легкой формой ЭСТ, причем все заболевшие выздоровели [44, 45].
При сравнении данных о заболеваемости ЭСТ в Северной Африке (большая вспышка среди местного населения) в воинских контингентах английских войск (непривитых сыпнотифозной вакциной) и американских войск (привитых вакциной Кокса) была наглядно продемонстрирована эпидемиологическая эффективность вакцинации. Среди непривитого английского воинского контингента заболел 41 человек, из них 13 умерли, а в американских войсках было лишь несколько случаев ЭСТ без смертельного исхода [8]. Болезнь у иммунизированных вакциной Кокса обычно протекала легче и заканчивалась быстрее, чем у невакциниро-ванных, при этом отмечено уменьшение числа осложнений и отсутствие летальных исходов. В то же время следует отметить, что такие вакцины обладали реактогенностью, вероятно, обусловленной компонентами среды культивирования, и требовали дополнительной очистки.
В связи с этим заслуживают внимания исследования профессора Е.М. Голиневич и соавт. по разработке сухой химической сыпнотифозной вакцины (СХСТВ) [46, 47]. СХСТВ представляла собой очищенную, лиофильно высушенную, стойкую при хранении субстанцию, которую рассматривали как протективный антиген вирулентной культуры R. prowazekii (штамм Брейнль). Для ее получения использовали желточные оболочки РКЭ, инфицированные штаммом R. prowazekii. Методика приготовления вакцины сводилась к получению из инфицированных желточных оболочек нативного растворимого антигена с последующим двукратным осаждением его сульфатом аммония при насыщении до 25-27% и диализом для удаления солей аммония. Завершающей стадией являлась стандартизация вакцины с добавлением сахарозы и консерванта-мертиолята (1:10 000), с последующим лио-фильным высушиванием [47, 48]. Стандартизовали препарат по серологической активности в РСК, условно принимая титр антигена как антигенные единицы (АЕ) из расчета на 1 мл вакцины. Перед введением вакцину растворяли в 0,15 М NaCL для получения 64 АЕ в 1 мл. Авторы утверждали: полученные экспериментальные данные на животных позволяли считать, что СХСТВ по своим иммуногенным свойствам превосходит живую сыпнотифозную вакцину Е (ЖСВ-Е) и живую комбинированную сыпнотифозную вакцину Е (ЖКСВ-Е).
Заслуживают внимания данные о видоспецифично-сти поствакцинального иммунитета, что было установлено в опытах при заражении 2 групп морских свинок, вакцинированных однократно R. prowazekii, и с последующим введением им через 1,5 мес в 1-й группе R. prowazekii, а во 2-й -R. typhi. При оценке поствакцинального иммунитета выяв-
лено, что все животные 1-й группы были защищены против заражения R. prowazekii, а животные 2-й группы, зараженные R. typhi, перенесли заболевание, аналогичное таковому у контрольных животных, т.е. протекавшее с многодневной лихорадкой и скротальным феноменом. На основании экспериментальных данных и опытов на ограниченном контингенте людей авторы сделали вывод, что СХСТВ является наилучшим препаратом для профилактики ЭСТ.
В итоге большинство исследователей, занимавшихся сравнительным изучением эффективности различных инак-тивированных сыпнотифозных вакцин, отметили их одинаковую иммуногенность и эпидемиологическую эффективность, не отдавая предпочтения ни одной из них.
П.Ф. Здродовский и Е.М. Голиневич (1972), оценивая практическую значимость профилактики ЭСТ инактивиро-ванными вакцинами, указывали на трудности в технологиях их изготовления, связанные с приготовлением большого количества концентрированного риккетсиозного материала для 2- или 3-кратных инъекций, медленное развитие поствакцинального иммунитета в ответ на введение корпускулярного антигена [10]. Данные обстоятельства ограничивают значимость инактивированных вакцин в качестве противоэпидемического средства. Их создание лишь частично решило проблему специфической профилактики ЭСТ.
Живая ослабленная сыпнотифозная вакиина
Для решения проблемы вакцинопрофилактики ЭСТ внимание исследователей привлекли работы испанских рик-кетсиологов по созданию живой ослабленной сыпнотифозной вакцины. В 1941 г. испанские ученые Clavero и Gallardo выделили из мозга умершего от ЭСТ вирулентный штамм R. prowazekii, который при длительных пассажах на РКЭ (79-й пассаж) утратил патогенные свойства, но при этом сохранил иммуногенные свойства [49, 50]. Этот штамм, названный авторами как штамм-Е R. prowazekii, был взят за основу для приготовления сыпнотифозной вакцины. Вакцина представляла собой высушенную и разведенную 1:20 яичную культуру штамма Е. Испытание иммунногенных свойств штамма Е и его протективных свойств проводили на морских свинках [51]. При испытании полученной вакцины на группе в 2217 человек, привитых подкожно, у 100 человек наблюдалась местная реакция и у нескольких имела место 2-3-дневная лихорадка.
К живой сыпнотифозной вакцине Е проявили интерес американские исследователи. В результате подробного изучения штамма, взятого на 255-м пассаже на РКЭ, они охарактеризовали его как стабильный по своим патогенным, куль-туральным и иммуногенным свойствам [51]. Позднее группа американских исследователей [52] возобновила работу по применению в качестве вакцины живого штамма Е R. prowazekii. После успешной апробации сначала на персонале лаборатории, а затем на многочисленных группах людей в США, авторы провели вакцинацию гражданского населения и воинского контингента в Перу.
В прямых контролируемых опытах были изучены безвредность, реактогенные свойства, иммуногенность и эффектив-
ность живой вакцины R. prowazekii. Для вакцинации людей использовали лиофильно высушенную 10% взвесь яичной культуры штамма Е с концентрацией живых риккетсий 7,5Lg минимальных инфицирующих доз риккетсий для куриных эмбрионов (МИДЭ), которую вводили подкожно или внутримышечно в дозе 0,25 мл. На большом количестве вакцинированных было установлено, что вакцина безвредна, но может вызывать у привитых местные реакции (покраснение, отек, регионарный лимфаденит), а также ранние (на 1-4-й день) и поздние (9-й день и позже) общие реакции (лихорадка, головная боль, недомогание и др.). Степень их выраженности по частоте и клиническим проявлениям значительно варьировала. При серологическом обследовании вакцинированных были выявлены специфические антитела в РСК и реакции нейтрализации, что свидетельствовало об иммунологической перестройке организма.
J.P. Fox и соавт. (1959) в прямых опытах на добровольцах установили, что у вакцинированных формируется высокий защитный иммунитет к ЭСТ, и при внутрикожном введении 0,1 мл культуры R. prowazekii, в отличие от невакцинирован-ных, заражения не происходило. В группе невакцинирован-ных данная доза культуры вызывала заражение с инкубацией в пределах 6-12 дней [53]. Было также установлено, что приобретенный иммунитет в результате прививки живой вакциной штамма Е отличается стойкостью и продолжительностью (не менее 5 лет).
В более поздних опытах CL.Jr. Wisseman (1972) было показано, что 94% (170/181) иммунизированных людей были защищены в течение 14-месячного периода после вакцинации от естественного заражения ЭСТ по сравнению с невакцинированными контрольной группы [54]. Дальнейшее изучение протективных свойств вакцины с помощью штамма Брейнль в период от 2 до 36 мес после вакцинации штаммом E показало, что 96% (27/28) добровольцев остались здоровыми после заражения, а 83% (5/6) добровольцев, наблюдаемых в период 48-66 мес, были защищены от инфекции [54]. Однако применение этой вакцины вызвало позднюю реакцию у 14% вакцинированных через 9-14 дней после инокуляции. Поздняя реакция могла проявляться от простого недомогания и легкой головной боли до видоизмененного тифа, характеризующегося лихорадкой, головной болью, недомоганием, иногда сыпью у небольшой части привитых. Причина поздней реакции не была установлена [54, 55].
Оценка иммунологической эффективности штамма Е R. prowazekii была проведена в лаборатории П.Ф. Здродов-ского, в которой подтвердили данные испанских и американских исследователей [10]. Отечественными исследователями проведена работа по изучению действия вакцины на контингенте численностью 2617 человек, а у 465 из них были подробно изучены реактогенность и иммунологическая эффективность вакцины. В результате исследований было установлено наличие ранних общих и местных реакций у 9% привитых. Поздние реакции в виде длительной лихорадки от 2 до 9 дней, головной боли и розеолезных высыпаний зарегистрированы в 5% случаев. Тяжелые поствакцинальные реакции, потребовавшие госпитализации привитых с диагнозом «легкая форма ЭСТ», возникли в 1% случаев. При серологическом исследовании 465 человек появление
специфических антител выявили в РСК у 89,8%, в РНГА -у 84,7%. Проведенные испытания штамма Е R. prowazekii позволили рассматривать его в качестве вакцинного и рекомендовать для применения в практику в прививочной дозе 4Lg МИДЭ по 0,25 мл яичной культуры в разведении 10-3. Поствакцинальные реакции, возникающие у привитых живой вакциной Е, стали основанием для поиска различными авторами менее реактогенных вакцин.
Вопрос снижения реактогенности живой вакцины Е частично был решен В.А. Яблонской (1964-1966), предложившей живую комбинированную сыпнотифозную вакцину из штамма Е R. prowazekii, обладающую в 2 раза меньшей реак-тогенностью, чем живая вакцина Е [9,56]. Вакцина представляла собой взвесь R. prowazekii авирулентного штамма Мадрид Е (0,25 мл 10-3 яичной культуры) в комбинации с растворимым антигеном из R. prowazekii вирулентного штамма Брейнль (16 АЕ по РСК). Обоснованность такой композиции вакцины была связана с тем, что введение в ее состав растворимого антигена, формирующего раннюю устойчивость организма к сыпнотифозной инфекции, будет снижать число поздних реакций на введение вакцины. После успешного испытания вакцины в эксперименте и на ограниченном количестве добровольцев был проведен расширенный опыт по вакцинации 1610 человек дозой 4-5Lg МИДЭ. В этом опыте поздние реакции были выявлены у 42 (2,6%) человек, т.е. в 2 раза меньше, чем при вакцинации живой вакциной Е (6,9%). Кроме того, изменилось клиническое проявление поздних реакций. Они были выявлены у 2 привитых в виде легкого недомогания, повышения температуры тела у 18 человек до субфебрильных значений, у 16 человек до 37,6-38,5 °С и у 2 - до 38,6-39 °С. На введение вакцины у привитых формировался иммунный ответ, выявленный в РСК в 97,8% и в РНГА - в 87% случаев.
Подводя итоги испытаний, следует отметить, что и эта усовершенствованная вакцина не была лишена недостатков. Основные из них - наличие сенсибилизирующих белковых компонентов куриного эмбриона и живых аттенуированных (ослабленных) R. prowazekii штамма Е. Наличие в вакцине яичных компонентов нередко является причиной аллергических реакций у людей, сенсибилизированных к яичному белку. Наличие живых риккетсий в вакцине представляется опасным, поскольку живые риккетсии могут сохраняться (персистировать) в организме вакцинированного с возможностью последующего возникновения рецидивной инфекции риккетсиозной этиологии. Живые вакцины, получаемые на основе риккетсий культивируемых на РКЭ, потенциально могут содержать вирус лейкоза птиц. На этом фоне выделяется возможность получения ревертанта, восстановившего вирулентность при пассировании авирулентного вакцинного штамма на экспериментальных животных.
Еще в 1971 г. Н.М. Балаевой [57] при исследовании биологических свойств вакцинного штамма Е было установлено, что вирулентность может быть необратимо изменена при пассировании на маловосприимчивых лабораторных животных (морских свинках и белых мышах). Причем повышение вирулентности культуры штамма Е является стойким и сохраняется в последовательных многочисленных пассажах на высоковосприимчивых к нему РКЭ. Н.М. Балаева
ставила вопрос о пересмотре отношения к штамму Е R. prowazekii как к штамму с абсолютно закрепленной пониженной вирулентностью и указывала на нестандартность популяции R. prowazekii в куриных эмбрионах [57].
Спустя почти 40 лет с применением сравнительной гено-мики при изучении авирулентного (вакцинного) штамма R. prowazekii Madrid E и его ревертанта, восстановившего вирулентность после пассирования на экспериментальных животных, было показало, что это связано с горячими точками мутаций в гомополимерных трактах поли(А) и поли(Т) у 8 split-генов (recO, putative methyltransferase, exported protein и др.) авирулентного штамма, которые прерывали и инактивировали эти гены [58]. Пассирование авирулентного штамма Madrid E на культуре клеток или экспериментальных животных приводило к каскаду реакций генов, который начинался с гена recO, в результате чего происходило восстановление вирулентного фенотипа.
К аналогичному выводу пришли Yan Liu и соавт. (2014) [55]. В экспериментах на животных ими было показано, что вакцинный штамм Madrid E R. prowazekii, введенный морским свинкам, восстанавливает свою вирулентность, и обозначили его как вирулентный ревертантный штамм Evir. Они раскрыли механизм мутации вакцинного штамма Е R. prowazekii, проведя сравнительный анализ последовательности секвенированного генома штамма Evir с последовательностью оригинального штамма, выделенного в Мадриде. Было установлено, что отличие между геномами вакцинного штамма Madrid E и его вирулентного ревертантного штамма Evir составляет только один нуклеотид. Мутация представляет собой однонуклеотидную вставку в ген метилтрансфе-разы (PR028) в вакцинном штамме и инактивирует его.
Следует отметить, что эти экспериментальные данные получены на модели малочувствительных к R. prowazekii животных. Авторы не принимали во внимание, что данные изменения вакцинного штамма могли возникнуть вследствие его пассирования в малочувствительном организме с его последующей селекцией. Кроме того, сам феномен реверсии авирулентного штамма R. prowazekii Е в вирулентный при пассировании на лабораторных животных с изменением его фенотипических и генотипических характеристик очень важен применительно к возможной реализации подобного процесса при вакцинации человека.
Учитывая это, необходимо ввести в процедуру производственного контроля вакцинного штамма периодическое проведение молекулярно-биологических исследований (секвенирование отдельных генов, полногеномное секве-нирование) для сравнительного анализа с последовательностью оригинального штамма для исключения возникновения обратных вирулентных мутантов за счет мутаций в этом и других участках генома. Поэтому в отношении применения живых ослабленных вакцин важен контроль молекулярно-биологическими методами за изменениями яичной культуры штамма Е при пассажах, а также наблюдение за биологическими свойствами в процессе пассирования как в высокочувствительных моделях (куриные эмбрионы), так и у маловосприимчивых животных.
Важными вопросами для создания вакцин остаются их безопасность, снижение токсического действия компонентов,
а также повышение иммуногенности и ослабление вирулентности. Существенный вклад в решение проблем получения совершенных вакцин могут привнести современные исследования в области иммунологии и медицинской генетики рик-кетсиозов. В настоящее время, учитывая имеющийся опыт по созданию вакцин против ЭСТ, необходимо обратиться к современным технологиям по разработке и приготовлению вакцин, среди которых можно выделить создание вакцин методами генной инженерии посредством клонирования гена, а также путем создания пептидных вакцин и нановакцин.
При этом нельзя забывать опыт исследователей-рик-кетсиологов, полученный при создании вакцин против ЭСТ, представленный тремя основными подходами: 1) создание живых вакцин против сыпного тифа, основанных на применении штаммов R. typhi; 2) создание инактивированных вакцин на основе штаммов R. prowazekii; 3) получение живой ослабленной сыпнотифозной вакцины.
Наблюдающиеся случаи возвращения сыпнотифозной инфекции, связанные с резким снижением санитарно-гигиенических условий определенных групп населения, локальными войнами и миграцией населения, наличием больных с болезнью Брилля-Цинссера, невозможностью полной ликвидации педикулеза, указывают на актуальность разработки вакцин против сыпного тифа с учетом современных данных о возбудителе и возможном появлении штаммов R. prowazekii, обладающих антибиотикорезистентностью.
Мнения риккетсиологов о возможном возвращении ЭСТ в настоящее время неоднозначны. С одной стороны, предполагается, что возврат эпидемической формы риккетсиоза Провачека в России и Европе маловероятен, при этом не исключается возможность эпидемии ЭСТ вследствие биотерроризма [59, 60], с другой стороны, возникновение ЭСТ по-прежнему считается вероятным [7, 30, 55].
По мнению Г.С. Мосинга, «...каждый новый случай эпидемического сыпного тифа отдаляет момент полной ликвидации этого заболевания в стране. Каждый новый случай эпидемического сыпного тифа - это возможный источник вреда и потерь в будущем, и окончательная ликвидация сыпного тифа в стране осуществится, когда демографические процессы приведут к полной элиминации носителей перси-стентной инфекции» [61-63].
Следует быть благодарными исследователям-рик-кетсиологам, которые часто ценой своей жизни изучали R. prowazekii и создавали вакцины против сыпного тифа, повлияв на ход мировой истории, выявив и изучив возбудитель единственного антропонозного риккетсиоза, который истребил миллионы человек на нашей планете, часто решая исходы войн, практически приводя к вымиранию населения городов и целых регионов.
Таким образом, можно выделить 3 основных принципа или подхода, которые применялись для создания вакцин с целью профилактики ЭСТ. Можно констатировать, что благодаря исследователям-риккетсиологам из разных стран в первой половине XX в. удалось разработать несколько типов вакцин против этого заболевания, обеспечив эффективную защиту населения планеты. В результате в настоящее время регистрируется только спорадическая заболеваемость ЭСТ и болезнью Брилля-Цинссера. В то же время сыпнотифозный потенциал не утратил своей значимости и на фоне высоких показателей педикулеза и подавляющего большинства неиммунного населения необходимо совершенствовать вакцины против этой инфекции на современном методологическом уровне.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ
ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Россия:
Пантюхина Анна Николаевна (Pantyukhina Anna N.) - доктор медицинских наук, профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории экологии риккетсий E-mail: nity151@yandex.ru
Шпынов Станислав Николаевич (Shpynov Stanislav N.) - доктор медицинских наук, руководитель лаборатории экологии риккетсий
E-mail: stan63@inbox.ru https://orcid.org/0000-0002-4550-3459
Белоусова Любовь Сергеевна (Belousova Lyubov S.) - кандидат медицинских наук, главный технолог филиала «Медгамал» E-mail: nity151@yandex.ru
Тарасевич Ирина Владимировна (Tarasevich Irina V.) - академик РАН, доктор биологических наук, профессор, главный научный сотрудник лаборатории экологии риккетсий E-mail: tarasevichirina@yandex.ru
ЛИТЕРАТУРА
1. Gray M.W. Rickettsia, typhus and the mitochondrial connection // 2. Тарасевич И.В., Фетисова Н.Ф. Сыпной тиф // ЗНИСО. 1995.
Nature. 1998. Vol. 396, N 6707. P. 109-110. № 2. С. 9-15.
3. Савельев C.K, Щукина И.Ф., Мищук В.И. и др. Вспышка эпидемиологического сыпного тифа в Липецкой области // ЗНИСО. i998. № i. С. 7-ii.
4. Raoult D., Woodward T., Dumler J.S. The history of epidemic typhus // Infect. Dis. Clin. North Am. 2GG4. Vol. iS. P. i27-i4G.
5. Houhamdi L., Raoult D. Louse-borne epidemic typhus // Rickettsial Diseases / eds D. Raoult, Ph. Parola. New York; London ; Informa Healthcare, 2GG7. On. 5. Р. 52^.
в. Raoult D., Ndihohuwayo J., Tusso-Dupont H. et al. Giantic outbreak of epidemic typhus associated with trench fever in Burundi // Lancet. i99S. Vol. 352. P. i-i5.
7. Тарасевич И.В., Боев Б.В. Сыпной тиф и математическое моделирование эпидемического процесса. Смоленск i МАКМАХ, 2Gi3. P. 1-64.
S. Яцимирская-Кронтовская М.К. Теоретические и экспериментальные основы специфической профилактики сыпного тифа i дис. ... д-ра мед. наук. М., 1946. 26G с.
9. Яблонская В.А. Специфическая профилактика сыпного тифа живой комбинированной сыпнотифозной вакциной Е (ЖКСВ-Е) i дис. . д-ра мед. наук. М., 1966. 367 с.
1G. Здродовский П.Ф., Голиневич Е.М. Учение о риккетсиях и рик-кетсиозах. М. i Медицина, 1972. 495 с.
11. Снайдер Дж. Сыпнотифозные лихорадки // Вирусные и риккет-сиозные инфекции человека / под ред. Т. Риверса. М. i Иностранная литература, 1955. С. 645-682.
12. Никольская В.Н. Экспериментальный анализ иммуногенных свойств различного типа живых и убитых вакцин против сыпного тифа i дис. ... канд. мед. наук М., 1968. 2G5 с.
13. Da Rocha-Lima H. Schutzimpfungen gegen Fleckfieber // Munch. Med. Wochenschr. 1918. Vol. 65. P. 1454-1456.
14. Nicolle Ch. Limmunite et l'immunisation contre le typhus exanthematique // Rev. Immunol. 1935. Vol. I. P. 9-15.
15. Blanc G., Nouri M., Baltazard M. Nouvelles experiences de vaccination humaine contre le typhus exanthematique par vaccine vivant // Presse Med. 1934. Vol. 9. P. 792-833.
16. Nicolle Ch., Laigret J. Vaccination contre le typhus exanthematique a l'aide du virus typhique vivant, desseche et enrobe // Arch. Inst. Pasteur Tunis. 1936. Vol. 25. P. 4G-78.
17. Blanc G., Baltazard M. La Vaccination contre le typhus exanthematique par virus vivant, son application au Maroc // Rev. Hyg. Med. Prev. 1939-194G. Vol. 64. P. 593-634.
18. Blanc G., Baltazard M. Vaccination contre le typhus exanthematique par virus vivant de typhus murin // Arch. Inst. Pasteur Maroc. 1941. Vol. 2. P. 445-486.
19. Blanc G., Baltazard M. Vaccination contre le typhus exanthematique par virus sec de typhus provenant de puces infectees // C. R. Acad. Sci. 1936. Vol. 2G7. P. 547-588.
2G. Laurens M., Fort M., Bеrnier M. La vaccination contre le typhus exanthematique. Lexperience marocaine (1937-1938). Application en milieu militaire a Casablancae // Presse Med. 1939. Vol. 63. P. 121-129.
21. Suarez E. La prophylaxes du typhus exanthematique et la vaccination contre cette maladie // Bull. de l'organisation d'Hygiene Societe des Nations (Geneve), 1937. Vol. 6, N 2. P. 216-234.
22. Sadusk J., Kuhlenbeck H. Dangers associated with the use of living «attenuated» typhus vaccine // Am. J. Public Health. 1946. Vol. 36. P. 1G27-1G3G.
23. Sadusk J.F. Jr. Typhus fever in the United States Army following immunization. Incidence, severity of the disease, modification of the clinical course and serologic diagnosis // J. Am. Med. Assoc. 1947. Vol. 133. P. 1192-1199.
24. Weigl R. Die Methoden der aktiwen Fleckfieber-Immunisierung // Bull. Int. Acad. Polonaise Sci. Lett. (Cl. Med). 193G. Vol. 4. P. 25-62.
25. Zinssеr H. Epidemiology and immunity in the rickettsial diseases // Virus and Rickettsial Diseases. Harvard School of Public Health. Cambridge i Harvard University Press, 194G. P. 872-9G7.
26. Wohlrab R. Immunisierung gegen Flecktyphus // Med. Klin. 1941. Vol. 21. P. 532-561.
27. Кронтовская M.К., Савицкая Е.П. Специфическая профилактика сыпного тифа. Сообщение I // Журн. микробиол. 1942. № 1G. C. 3-1G.
28. Weigl R. Untersuchungen und Experimente an Fleckfieberlausen. Die Technik der Rickettsia-Forschung // Beitr. Klin. Infektionskr. 192G. Vol. 8. P. 353-376.
29. Chodzko W. Experience polonaise, de la vaccination preventive contree le typhus exenthematique d'apres la method de Weigl // Bull. Off. Inter. d'Hyg. Publ. 1933. Vol. 25. P. 1549-1558.
30. Zinsser H. Epidemiology and immunity in the rickettsial diseases // Virus and Rickettsial Diseases. Cambridge : Harvard University Press, 1943. P. 872-907.
31. Пшеничнов А.В., Райхер Б.И., Носкова Е.Г. Изготовление вакцины из сыпнотифозных вшей по методу Пшеничнова-Райхера // Журн. микробиол. 1945. № 10-11. C. 54-59.
32. Райхер Б.И. Основные положения техники изготовления вакцины против сыпного тифа из кишечников вшей по методу Пшенич-нова-Райхера // Журн. микробиол. 1943. № 1-2. C. 48-51.
33. Пшеничнов А.В., Носкова Н.Г. Получение штамма человеческих вшей, питающихся на кроликах и его значение для метода эпидермо-мембран // Вопр. вирусол. 1957. № 1. C. 53-65.
34. Castaneda R. Experimental pneumonia produced by typhus rickettsiae // Am. J. Pathol. 1939. Vol. 15. P. 467-475.
35. Durand P., Sparrow H. Developement dans le poumon des virus typhiques et boutonneux instilles par voie respiratoine // Arch. Inst. Pasteur Tunis. 1940. Vol. 29. P. 1-28.
36. Durand P., Giroud P. Essais de vaccination contre le typhus historique au moyen de rickettsias tuees par e formol souches pulmonaires // Compt. Rend. Acad. Sci. 1940. Vol. 210. P. 493-496.
37. Grenolleau G. Anti-typhus vaccination in Algeria // Epidem. Inform. Bull. 1945. Vol. I, N 20. P. 855-902.
38. Кронтовская М.К., Маевский М.М., Савицкая Е.П. Солитерман П.Л. и др. Специфическая профилактика сыпного тифа Сообщение III. Экспериментальные исследования, небольшие эпидемиологические и клинические наблюдения // Журн. микробиол. 1943. № 1-2. C. 3-17.
39. Кронтовская М.К. Специфическая профилактика сыпного тифа // Сан. служба в дни Отеч. войны. 1945. № 5. C. 5-8.
40. Cox H.R. Use of yolk sac os developing embrio as medium for growing rickettsiae of RMSF and typhus group // Public Health. Rep. (Wash.). 1938. Vol. 53. P. 2241-2247.
41. Cox H.R. Cultivation of rickettsiae of the Rocky Mountain spotted fever, typhus and Q fever groups in the embryonic tissues of developing chicks // Science. 1941. Vol. 94. P. 399-403.
42. Cox H.R. Method for the preparation and standardization of rickettsial vaccines // Symposium on Rickettsial Diseases. Boston : American Association for the Advancement of Science, 1946.
43. Craigie J. Application and control of ethylether-water interface effects to the separation of rickettsiae from yolk sac suspensions // Can. J. Res. 1945. Vol. 23. P. 104-114.
44. Sadusk F.J. Jr. Typhus fever in the United States Army following immunization. Incidence, severity of the disease, modification of the clinical course and serologic diagnosis // JAMA. 1947. Vol. 133. P. 11921199.
45. Snyder J.C. Typhus fever in the second World War // Calif. Med. 1947. Vol. 66. P. 3-10.
46. Голиневич Е.М., Фрязинова И.Б. Антигенные и иммуногенные фракции цельных антигенов из яичных культур риккетсий // Вест. АМН СССР. 1964. № 3. C. 9-57.
47. Голиневич Е.М., Воронова З.А., Гудима О.С., Фрязинова И.Б. и др. Химическая сыпнотифозная вакцина. Сообщение I. Иммуногенная субстанция риккетсий Провачека, ее получение и характеристика // Вестн. АМН СССР. 1969. № 10. C. 63-77.
48. Golinevitch E., Voronova Z., Friazinova I., Doutova G. et al. Lantigene soluble purifie de R. prowazekii (le vaccine chimique) // Rev. Immunol. 1969. Vol. 33. P. 229-240.
49. Clavero C.G., Perez-Gallardo P.F. Experimental Study of a Non-Pathogenic Immunizing Strain of Rickettsia Prowazekii // Trop. Dis. Bull. 1944. Vol. 41. P. 24. Revista de Sanidad e Higiene Publica. 1943. P. 17.50. Clavero C.G., Perez Gallardo P.F. Immunization against exanthematic typhus by a living vaccine (strain E) // Trop. Dis. Bull. 1950. Vol. 47, N 3. P. 22. Escuela nacional de Sanidad, 1949.51. Perez Gallardo F., Fox J. Infection and Immunization of laboratory animals with Rickettsia prowazekii of reduced pathogenicity (strain E) // Am. J. Hyg. 1948. Vol. 48. P. 6-14.
52. Fox J.P., Everritt M.G., Robinson T.A., Conwell D.P. Immunization of man against epidemic typhus by infection with avirulent Rickettsia prowazeki (strain E); observations as to post-vaccination reactions, the relation of serologic response to size and route of infecting dose, and the resistanceto challenge with virulent typhus strains // Am. J. Hyg. 1954. Vol. 59. P. 74-88.
53. Fox J.P., Jordan M.E., Gelfand H.M. Immunization of man against epidemic typhus by infection with a virulent Rickettsia prowazeki strain E. IV. Persistence of immunity and a note as to differing complement fixation antigen requirements in post-infection and post-vaccination sera // J. Immunol. 1957. Vol. 79, N 4. P. 348-354.
54. Wisseman C.L. Jr. Concepts of louse-borne typhus control in developing countries: the use of the living attenuated E strain typhus vaccine in epidemic and endemic situations // Immunity in Viral and Rickettsial Diseases / ed. M.A. Klingberg. New York : Plenum Publishing Corporation, 1972. P. 97-130.
55. Yan Liu, Bin Wu, George Weinstock, David H. Walker, Xue-jie Yu. Inactivation of SAM-methyltransferase is the mechanism of attenuation of a historic louse borne typhus vaccine strain // PLoS One. 2014. Vol. 9, N 11. Article ID e113285.
56. Яблонская В.А. Опыт применения малореактогенной комбинированной живой вакцины из штамма Е риккетсий Провачека // Вестн. АМН СССР. 1964. № 8. C. 61-69.
57. Балаева Н.М. О вирулентности вакцинного штамма Е риккетсий Провачека и некоторые вопросы биологии риккетсий группы сыпного тифа : дис. ... д-ра мед. наук. М., 1971. 343 с.
58. Bechah Y., Karkouri K., Mediannikov O., Leroy Q. et al. Genomic, proteomic, and transcriptomic analysisof virulent and avirulent Rickettsia prowazekii reveals its adaptive mutation capabilities // Genome Res. 2010. Vol. 20, N 5. P. 655-663.
59. Онищенко Г.Г., Лукин Е.П., Сыскова Т.Г. Прогностическая оценка сыпного тифа (риккетсиоз Провачека) в России // Микробиол., эпиде-миол. и иммунол. 1997. № 6. С. 30-36.
60. Лукин Е.П. К 100-летию открытия возбудителя эпидемического сыпного тифа - Rickettsia prowazekii (H. DA Rocha Lima, 1916). Вернется ли сыпной тиф в Россию и Европу? // Журн. инфектологии. 2015. Т. 7, № 3. С. 5-21.
61. Bechah Y., Capo C., Mege J.L., Raoult D. Epidemic typhus // Lancet Infect. Dis. 2008. Vol. 8. P. 417-426.
62. Мосинг Г.С. Эпидемиология сыпного тифа (итоги 20-летних наблюдений) // Журн. микробиол. 1952. № 2. С. 44-56.
63. Сагайдаковский Н.Н. О решающем вкладе доктора Генриха Станиславовича Мосинга в дело ликвидации сыпного тифа на обширной части евроазиатского континента в пределах бывшего СССР. К 100-летию со дня рождения Г.С. Мосинга. URL: http://alan.ucoz.lv/RWeigl/ Henryk_Mosing.htm.
REFERENCES
1. Gray M.W. Rickettsia, typhus and the mitochondrial connection. Nature. 1998; 396 (6707): 109-10.
2. Tarasevich I.V., Fetisova N.F. Epidemic typhus. Zdorov'e naseleniya i sreda obitaniya [Public Health and Environment]. 1995: (2): 9-15. (in Russian)
3. Saveliev C.I., Shchukina I.F., Mishchuk V.l., et al. Outbreaks of epidemic typhus in the Lipetsk region. Zdorov'e naseleniya i sreda obitaniya [Public Health and Environment]. 1998: (1): 7-11. (in Russian)
4. Raoult D., Woodward T., Dumler J.S. The history of epidemic typhus. Infect Dis Clin North Am. 2004; 18: 127-40.
5. Houhamdi L., Raoult D. Louse-borne epidemic typhus. In: Rickettsial diseases. Edited by D. Raoult, Ph. Parola. New York; London: Informa Healthcare, 2007; On. 5: 52-61.
6. Raoult D., Ndihohuwayo J., Tusso-Dupont H., et al. Giantic outbreak of epidemic typhus associated with trench fever in Burundi. Lancet. 1998; 352: 1-15.
7. Tarasevich I.V., Boev B.V. Spotted fever and mathematic modeling of the epidemical process. Smolensk: MAKMAKh; 2013: 64 p. (in Russian)
8. Yatsimirskaya-Krontovskaya M.K. Theoretical foundations and experimental bases of spotted fever specific prophylaxis: Diss. Moscow, 1946: 260 p. (in Russian)
9. Yablonskaya V.A. Specific prophylaxis of spotted fever with live combined typhoid vaccine E: Diss. Moscow; 1966: 367 p. (in Russian)
10. Zdrodovsky P.F., Golinevich E.M. The doctrine of rickettsia and rick-ettsiosis. Moscow: Meditsina, 1972: 495 p. (in Russian)
11. Snyder J. Typhoid fever. In: Viral and Rickettsial Infections of Man. Edited by T. Rivers. Moscow: Inostrannaya literatura, 1955: 645-82. (in Russian)
12. Nikolskaya V.N. Experimental analysis of the immunogenic properties of various types of live and dead typhus vaccines: Diss. Moscow, 1968: 205 p. (in Russian)
13. Da Rocha-Lima H. Schutzimpfungen gegen Fleckfieber. Munch Med Wochenschr. 1918; 65: 1454-6.
14. Nicolle Ch. Limmunite et l'immunisation contre le typhus exanthe-matique. Rev Immunol. 1935; 1: 9-15.
15. Blanc G., Nouri M., Baltazard M. Nouvelles experiences de vaccination humaine contre le typhus exanthematique par vaccine vivant. Presse Med. 1934; 9: 792-833.
16. Nicolle Ch., Laigret J. Vaccination contre le typhus exanthematique a l'aide du virus typhique vivant, desseche et enrobe. Arch Inst Pasteur Tunis. 1936; 25: 40-78.
17. Blanc G., Baltazard M. La Vaccination contre le typhus exanthematique par virus vivant, son application au Maroc. Rev Hyg Med Prev. 1939-1940; 64: 593-634.
18. Blanc G., Baltazard M. Vaccination contre le typhus exanthematique par virus vivant de typhus murin. Arch Inst Pasteur Maroc. 1941; 2: 445-86.
19. Blanc G., Baltazard M. Vaccination contre le typhus exanthematique par virus sec de typhus provenant de puces infectees. CR Acad Sci. 1936; 207: 547-88.
20. Laurens M., Fort M., Bernier M. La vaccination contre le typhus exanthematique. Lexperience marocaine (1937-1938). Application en milieu militaire a Casablancae. Presse Med. 1939; 63: 121-9.
21. Suarez E. La prophylaxes du typhus exanthematique et la vaccination contre cette maladie. Bull de l'organisation d'Hygiene Societe des Nations (Geneve). 1937; 6 (2): 216-34.
22. Sadusk J., Kuhlenbeck H. Dangers associated with the use of living «attenuated» typhus vaccine. Am J Public Health. 1946; 36: 1027-30.
23. Sadusk J.F. Jr. Typhus fever in the United States Army following immunization. Incidence, severity of the disease, modification of the clinical course and serologic diagnosis. Am Med Assoc. 1947; 133: 1192-9.
24. Weigl R. Die Methoden der aktiwen Fleckfieber-Immunisierung. Bull Int Acad Polonaise Sci Lett (Cl Med). 1930; 4: 25-62.
25. Zinsser H. Epidemiology and immunity in the rickettsial diseases. Virus and Rickettsial Diseases. Harvard School of Public Health. Cambridge: Harvard University Press, 1940: 872-907.
26. Wohlrab R. Immunisierung gegen Flecktyphus. Med Klin. 1941; 21: 532-61.
27. Krontovskaya M.K., Savitskaya E.P. Specific prevention of typhus. Post I. Zhurnal mikrobiologii [Journal of Microbiology]. 1942; (10): 3-10. (in Russian)
28. Weigl R. Untersuchungen und Experimente an Fleckfieberlausen. Die Technik der Rickettsia-Forschung. Beitr Klin Infektionskr. 1920; 8: 353-76.
29. Chodzko W. Experience polonaise, de la vaccination preventive contree le typhus exenthematique d'apres la method de Weigl. Bull Off Inter d'Hyg Publ. 1933; 25: 1549-58.
30. Zinsser H. Epidemiology and immunity in the rickettsial diseases. Virus and Rickettsial Diseases. Cambridge: Harvard University Press, 1943: 872-907.
31. Pshenichnov A.V., Raykher B.I., Noskova E.G. Production of a vaccine from typhous lice according to the Pshenichnov - Reicher method. Zhurnal mikrobiologii [Journal of Microbiology]. 1945; (10-11): 54-9. (in Russian)
32. Raykher B.I. Fundamental principles of technique of Cox-type vaccine production from intestines of infected lice according to Pshenichnov-Reicher method. Zhurnal mikrobiologii [Journal of Microbiology]. 1943; (1-2): 48-51. (in Russian)
33. Pshenichnov A.V., Noskova N.G. Obtaining a strain of human lice that have been adapted to feed on rabbits and its significance for the epi-dermomembrane method. Voprosy Virusologii [Problems of Virology]. 1957; (1): 53-65. (in Russian)
34. Castaneda R. Experimental pneumonia produced by typhus rick-ettsiae. Am J Pathol. 1939; 15: 467-75.
35. Durand P., Sparrow H. Developement dans le poumon des virus typhlques et boutonneux instilles par voie respiratoine. Arch Inst Pasteur Tunis. 1940; 29: 1-28.
36. Durand P., Giroud P. Essais de vaccination contre le typhus historique au moyen de rickettsias tuees par e formol souches pulmonaires. Compt Rend Acad Sci. 1940; 210: 493-6.
37. Grenolleau G. Anti-typhus vaccination in Algeria. Epidem Inform Bull. 1945; 1 (20): 855-902.
38. Krontovskaya M.K., Maevsky M.M., Savitskaya E.P. Soliterman P.L., et al. Specific prevention of typhus. Report III. Experimental studies, small epidemiological and clinical observations. Zhurnal mikrobiologii [Journal of Microbiology]. 1943; (1-2): 3-17. (in Russian)
39. Krontovskaya M.K. Specific prevention of typhus. Sanitarnaya slu-zhba v dni Otechestvennoy voyny [Sanitary Service in the days of the Patriotic War]. 1945; (5): 5-8. (in Russian)
40. Cox H.R. Use of yolk sac os developing embrio as medium for growing rickettsiae of RMSF and typhus group. Public Health Rep (Wash.). 1938; 53: 2241-7.
41. Cox H.R. Cultivation of rickettsiae of the Rocky Mountain spotted fever, typhus and Q fever groups in the embryonic tissues of developing chicks. Science. 1941; 94: 399-403.
42. Cox H.R. Method for the preparation and standardization of rickettsial vaccines. In: Symposium on Rickettsial Diseases. Boston: American Association for the Advancement of Science, 1946.
43. Craigie J. Application and control of ethylether-water interface effects to the separation of rickettsiae from yolk sac suspensions. Can J Res. 1945; 23: 104-14.
44. Sadusk F.J. Jr. Typhus fever in the United States Army following immunization. Incidence, severity of the disease, modification of the clinical course and serologic diagnosis. JAMA. 1947; 133: 1192-9.
45. Snyder J.C. Typhus fever in the second World War. Calif Med. 1947; 66: 3-10.
46. Golinevich E.M., Fryazinova I.B. Antigenic and immunogenic fractions of whole antigens from rickettsiae in egg cultures. Vestnik Akademii meditsinskikh nauk SSSR [Bulletin of the Academy of Medical Sciences of the USSR]. 1964; (3): 9-57. (in Russian)
47. Golinevich E.M., Voronova Z.A., Gudima O.S., Fryazinova I.B., et al. Chemical typhoid vaccine. Report I. Immunogenic substance of Rickettsia prowazekii, its preparation and characterization. Vestnik Akademii meditsinskikh nauk SSSR [Bulletin of the Academy of Medical Sciences of the USSR]. 1969; (10): 63-77. (in Russian)
48. Golinevitch E., Voronova Z., Friazinova I., Doutova G. et al. Lantigene soluble purifie de R. prowazekii (le vaccine chimique). Rev Immunol. 1969; 33: 229-40.
49. Clavero C.G., Perez-Gallardo P.F. Experimental Study of a Non-Pathogenic Immunizing Strain of Rickettsia Prowazekii. Trop Dis Bull. 1944; 41: 24. Revista de Sanidad e Higiene Publica. 1943: 17.50. Clavero C.G., Perez Gallardo P.F. Immunization against exanthematic typhus by a living vaccine (strain E). Trop Dis Bull. 1950; 47 (3): 22. Escuela nacional de Sanidad, 1949.51. Perez Gallardo F., Fox J. Infection and Immunization
of laboratory animals with Rickettsia prowazekii of reduced pathogenicity (strain E). Am J Hyg. 1948; 48: 6-14.
52. Fox J.P., Everritt M.G., Robinson T.A., Conwell D.P. Immunization of man against epidemic typhus by infection with avirulent Rickettsia prowa-zeki (strain E); observations as to post-vaccination reactions, the relation of serologic response to size and route of infecting dose, and the resis-tanceto challenge with virulent typhus strains. Am J Hyg. 1954; 59: 74-88.
53. Fox J.P., Jordan M.E., Gelfand H.M. Immunization of man against epidemic typhus by infection with a virulent Rickettsia prowazeki strain E. IV. Persistence of immunity and a note as to differing complement fixation antigen requirements in post-infection and post-vaccination sera. J Immunol. 1957; 79 (4): 348-54.
54. Wisseman C.L. Jr. Concepts of louse-borne typhus control in developing countries: the use of the living attenuated E strain typhus vaccine in epidemic and endemic situations. Immunity in Viral and Rickettsial Diseases. Edited by M.A. Klingberg. New York: Plenum Publishing Corporation, 1972: 97-130.
55. Liu Y., Wu B., Weinstock G., Walker D.H., Yu X.J. Inactivation of SAM-methyltransferase is the mechanism of attenuation of a historic louse borne typhus vaccine strain. PLoS One. 2014; 9 (11): Article ID e113285.
56. Yablonskaya V.A. Experience in little reactogenic combined live vaccine application from strain E of Rickettsia prowazekii. Vestnik Akademii meditsinskikh nauk SSSR [Bulletin of the Academy of Medical Sciences of the USSR]. 1964; (8): 61-9. (in Russian)
57. Balaeva N.M. On the virulence of vaccine strain E of Rickettsia prowazekii and some questions of typhus group Rickettsia biology: Diss. Moscow, 1971: 343 p. (in Russian)
58. Bechah Y., Karkouri K., Mediannikov O., Leroy Q., et al. Genomic, proteomic, and transcriptomic analysisof virulent and avirulent Rickettsia prowazekii reveals its adaptive mutation capabilities. Genome Res. 2010; 20 (5): 655-63.
59. Onishchenko G.G., Lukin E.P., Syskova T.G. Predictive appraisal of typhus (Rickettsia prowazekii) in Russia. Zhurnal mikrobiologii, epidemi-ologii i immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Immuno-biology]. 1997; (6): 30-6. (in Russian)
60. Lukin E.P. On the 100th anniversary of discovery of epidemic typhus Causative agent - Rickettsia prowazekii (H. Da Rocha Lima, 1916). Whether typhus will return to Russia and Europe? Jurnal infektologii [Journal Infectology]. 2015; 7 (3): 5-21. (in Russian)
61. Bechah Y., Capo C., Mege J.L., Raoult D. Epidemic typhus. Lancet Infect Dis. 2008; 8: 417-26.
62. Mosing G.S. Epidemiology of typhus (results of 20-year observations). Zhurnal mikrobiologii [Journal of Microbiology]. 1952; (2): 44-56. (in Russian)
63. Sagaydakovsky N.N. On the decisive contribution of Dr. Henrikh Stanislavovich Mosing to the elimination of typhus in the vast part of Euro-Asian continent within the borders of the former USSR. On the 100th anniversary of G.S. Mosing. http://alan.ucoz.lv/RWeigl/Henryk_Mosing.htm. (in Russian)
