CC BY
30ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА
УДК 591.149.12:591.111.1+615.218.1:591.463.2:615.254.5 ББК Е60*732.25*725.112.72+ Е60*739.1*002.3*736.311:Р281.774 Р.И. КЛЯШЕВА, В.Е. СЕРГЕЕВА, Е.А. КЛОЧКОВА
ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРОСТАТИЛЕНА НА СОДЕРЖАНИЕ МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И ГИСТАМИНА В СЕМЕННИКАХ КРЫС
Ключевые слова: простатилен, мочевая кислота, семенники, гистамин. После введения подопытным крысам-самцам «Простатилена» (экстракт простаты) в дозе по 0,02 мг в 1,0 мл в течение трех недель (через один день) было установлено уменьшение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови (p < 0,05) по сравнению с ее содержанием до введения и у интактных животных. В семенниках у подопытных животных в сперматогенном эпителии обнаружены увеличение интенсивности люминесценции гистамина и снижение ее в гландулоцитах (p < 0,01). Установлена взаимосвязь между нуклеиновым обменом и биоаминным статусом.
R. KLYASHEVA, V. SERGEEVA, E. KLOCHKOVA STUDYING PROSTATILEN'S INFLUENCE ON THE CONTENT OF URIC ACID IN BLOOD SERUM AND GISTAMIN IN RAT'S TESTES
Key words: prostatilen, uric acid, testes, histamine.
Injecting 0,02 mg of prostatilen (the extract of bovine prostate) to rat-males for 3 weeks (every second day) led to a decrease in uric acid in blood serum (р < 0,05) in experimental group in comparison with the control group. The content of histamine (p < 0,01) increased in seminiferous epithelium and decreased in glandulocytes. The experiment revealed the interconnection between nucleic exchange and bioamine status.
Биохимическая регуляция представляет собой сложный процесс межклеточных взаимодействий, поддерживающих механизмы гомеостаза всего организма. В таких процессах регулирующая роль принадлежит различным гормонам, в том числе половым и различным биомедиаторам.
Простатилен (лекарственный препарат из простаты бычков) имеет сложный химический состав, но близок к нативному состоянию и в настоящее время широко применяется в медицинской практике для регуляции патологических процессов [1, 11]. Следует отметить то, что в таких экстрактах при их применении главное значение в биохимических и физиологических процессах для организма имеют содержащиеся в них половые гормоны андрогены (и сопутствующие белки). Простатилен снижает чувствительность тканей к медиаторам воспаления, стимулирует синтез антител к гистамину и серотонину [9, 14].
Известно, что действие мужских половых андрогенных гормонов и аналогов стероидной природы осуществляется по липофильному пути. В ядрах клеток-мишеней происходит образование гормон-рецепторного комплекса, что приводит к активированию определенных генов в хроматине и последующим биохимическим, физиологическим, гистологическим, гистохимическим изменениям в тканях и органах организма [4, 5, 12]. Внутримышечное введение «чистого» тестостерона приводит к изменению содержания гистамина в лимфоидных органах, влияя на клеточный и гуморальный иммунитет организма [2, 10].
Ранее нами было установлено, что при введении простатилена лабораторным крысам в сыворотке крови наблюдается уменьшение содержания триацилглицерола, общего холестерола, что свидетельствует об изменении липидного обмена организма. Происходит также увеличение содержания ка-техоламинов и серотонина в семенниках (в сперматогенном эпителии, глан-дулоцитах и интерстиции) [6, 7].
Не подлежит сомнению, что простатилен, содержащий андрогенные гормоны, влияет на нуклеиновый обмен. Мочевая кислота является окисленным продуктом пуриновых оснований аденина и гуанина, источниками которых являются ДНК и различные формы РНК [8].
Целью нашего эксперимента явилось изучение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови лабораторных крыс и реакции на гистаминсодер-жащие структуры семенников при введении простатилена. Подобных работ в имеющейся литературе мы не встретили.
Материал и методы исследования. Эксперимент выполнен на 20 белых половозрелых крысах-самцах массой 180±20 г. Животных содержали в стандартных условиях, соблюдая рацион питания. Все процедуры в работе осуществляли согласно нормам и правилам обращения с лабораторными животными («Приказ МЗ РФ от 19.06.2003 г. № 267»). Контрольная группа (ин-тактные животные) и подопытная группа включали по 10 крыс.
Подопытным животным внутримышечно в течение трех недель (через один день) вводили по 1,0 мл разведенного в 0,9% растворе хлорида натрия (0,02 мг) простатилена производства «МБНПК «Цитомед». Лекарственная форма: лиофи-лизат для приготовления раствора, содержащий в качестве активного вещества экстракт простаты - 5,0 мг (в пересчете на водорастворимые пептиды), вспомогательное вещество в составе простатилена - глицин (25 мг).
Содержание мочевой кислоты в негемолизированной сыворотке крови определяли энзиматическим колориметрическим методом на сертифицированном автоматическом биохимическом анализаторе «Random Access A-25», фирмы «BioSystems S.A.», Испания, 2009 г.
Принцип метода сводится к следующему. Содержащаяся в пробе мочевая кислота окисляется под действием фермента уриказы с образованием эквимо-лярного количества перекиси водорода. В присутствии пероксидазы перекись водорода окисляет хромогены с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты в пробе.
Гистамин - (2,-4-имидазолилэтиламин), биогенный амин, медиатор аллергических реакций немедленного типа - является также регулятором многих физиологических процессов.
Для исследования гистаминсодержащих структур семенников был применен метод Кросса [13]. Высушенные криостатные срезы извлеченных семенников инкубировали в парах ортофталиевого альдегида в течение 20 с, затем в парах воды 1 мин при температурном режиме термостата 1000. Флуофоры, образующиеся в данных условиях, имеют максимумы свечения для гистамина при длине волны 480 нм (светофильтр 7), затем применяли спектрофлуориметрический анализ для количественного определения содержания гистамина на люминесцентной фотометрической насадке ФМЭЛ-1А с выходным напряжением 900 В. Замер интенсивности люминесценции гистамина производили в условных единицах флуоресценции (усл. ед.) по шкале регистрирующего прибора усилителя У-5. Интенсивность люминесценции пропорциональна концентрации содержания гистамина в разных структурах семенников.
Окраску гематоксилин-эозином применяли для общегистологической характеристики структур семенников.
Определяли среднее арифметическое значение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови и интенсивности люминесценции гистамина в разных структурах семенников животных контрольной и подопытной групп. Средние величины (M) приводятся в таблице с величиной стандартного отклонения (а).
При статистической обработке данных анализ различий между исследованной группой и контрольной группой экспериментальных животных осуществляли с помощью непараметрического критерия Манна - Уитни. Оценка достоверности различий средних значений биохимических параметров определяли с помощью критерия Стьюдента (Р < 0,05), а достоверность содержания гистамина была определена непараметрическим критерием Вилькоксона - Манна - Уитни.
Корреляционный анализ проводили для установления взаимосвязи между показателями интенсивности люминесценции гистамина в разных гиста-минсодержащих структурах семенников.
Результаты исследования и их обсуждение. Нами были получены следующие биохимические данные по результатам исследования мочевой кислоты в сыворотке крови. У интактных крыс и подопытных животных до введения простатилена содержание мочевой кислоты в сыворотке крови равнялось 0,46±0,01 ммоль/л. После введения простатилена животным наблюдалось уменьшение мочевой кислоты в сыворотке крови до 0,33±0,02 ммоль/л (уменьшение в 1,4 раза).
Следует отметить, что в ходе эксперимента при введении простатилена нами обнаружены незначительное увеличение массы тела животных и уменьшение массы семенников (~15%) по сравнению с аналогичными показателями у интактных крыс.
Паренхима семенников гистологически подразделяется на две части: эндокринную и сперматогенную. Последняя представлена системой канальцев: в одних образуются сперматозоиды, другие служат для их выведения. Эндокринная же часть представлена интерстицинальными эндокриноцитами (клетками Лейдига), в которых вырабатывается основная доля мужских половых гормонов [3]. Общегистологическая окраска выявила визуальные изменения в семенниках подопытной группы по сравнению с контрольной группой. В препаратах семенников животных контрольной группы, обработанных по методу Кросса, обнаружили четко различимый, слаболюминецирующий желтовато-дымчатый однородный сперматогенный эпителий. Клетки Лейдига имеют визуально более выраженную, ярко-желтую люминесценцию. В препаратах семенников животных подопытной группы, наоборот, визуально наблюдается менее выраженная люминесценция интерстициальных эндокриноцитов по сравнению с таковой сперматогенного эпителия, который однородно люминесцирует желтым светом.
Полученные данные спектрофлуориметрии подтвердили визуальную картину (см. таблицу).
Интенсивность люминесценции гистамина в разных структурах семенников лабораторных крыс при введении простатилена, усл. ед.
Структуры семенников Группа( М± а)
контрольная подопытная
Сперматогенный эпителий 3,07±0,15 4,46±0,25*
Интерстициальные эндокриноциты 6,35±0,24 3,70±0,15*
Примечание. *- различия средних значений статистически значимы (р < 0,01).
Данные таблицы позволяют говорить о том, что в семенниках лабораторных крыс подопытной группы происходит перераспределение гистамина между сперматогенным эпителием и интерстицинальными эндокриноцитами. Кроме того, между указанными структурами у животных контрольной группы наблюдается сильная корреляционная связь положительной направленности (г = 0,78), которая ослабевает у животных подопытной группы (г = 0,58). Этот
факт также свидетельствует о том, что в гистаминсодержащих структурах семенников подопытных крыс происходит перераспределение данного биогенного амина - гистамина.
Исходя из полученных нами экспериментальных гистохимических данных и анализа научной литературы, считаем, что в механизме действия простати-лена на структуры семенников определенную роль играет также гистамин.
Последовательность биохимических и гистологических событий при введении простатилена крысам-самцам может быть представлена в виде схемы:
Простатилен ^ мышцы ^ кровью печень^ образующиеся метаболиты ^ изменение в нуклеиновом обмене (уменьшение мочевой кислоты в сыворотке крови) ^ увеличение содержания гистамина в сперматогенном эпителии, уменьшение гистамина в гландулоцитах семенников, что связано с изменением в них биоаминного статуса.
Выводы. Полученные нами результаты по изучению влияния простатилена на уменьшение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови и изменению интенсивности люминесценции гистамина в различных структурах семенников позволяют судить о тесной взаимосвязи состояния нуклеинового обмена (уменьшение распада нуклеиновых кислот) и биоаминного статуса крыс-самцов.
Кроме того, наши исследования проливают свет на тесную взаимосвязь биохимических и гистологических сдвигов (биоаминного статуса) в организме крыс, связанных с применением сложных по составу, но близких к природному состоянию экстрактов простаты.
Литература
1. Аль-Шукри С.Х., Горбачев А.Г., Боровец С.Ю. Эффективность простатилена при остром цистите (экспериментально-клиническое исследование) // Нефрология. 2009. Т.13, № 2. C. 92-95.
2. Артемьева И.Л., Сергеева В.Е. Морфофункциональная характеристика структур тимуса при экспериментальной тестэктомии. Чебоксары: Изд-во Чуваш. ун-та, 2012. 96 с.
3. Йен С.С.К. Репродуктивная эндокринология: 2 т. / пер. с англ. под ред. С.С.К. Йена, Р.Б. Джаффе. М.: Медицина, 1998. 429 с.
4. Кляшева Н.В. Метилирование ДНК в механизме действия анаболических стероидов на скелетную мышцу и семенники // Проблемы репродукции. 2003. № 2. С. 15-18.
5. Кляшева Н.В., Степанова Н.В., Кляшева Р.И. Влияние андрогенов на метилирование ДНК из разных органов крыс // Проблемы репродукции. 2001. № 4. С. 25-26.
6. Кляшева Р.И., Сергеева В.Е., Клочкова Е.А. Влияние простатилена на содержание триа-цилглицеридов в сыворотке крови и катехоламинов в семенниках крыс // Актуальные направления научных исследований XXI века: Теория и практика: сб. науч. тр. по материалам междунар. заоч. науч.-практ. конф. Воронеж, 2013. Вып. 3. С. 45-50.
7. Кляшева Р.И., Сергеева В.Е., Клочкова Е.А. Исследование влияния простатилена на содержание общего холестерола в сыворотке крови и серотонина в семенниках // Вестник Чувашского университета. 2014. № 2. С. 266-269.
8. Молекулярная биология клетки / Б. Албертс, Д. Брей, Дж. Льюис и др. М.: Мир, 1994. Т. 2. С. 93-253.
9. Простатилен в урологической практике. СПб.: [Б.и.], 2011. 41 с.
10. Сарилова И.Л., Сергеева В.Е., Смородченко А.Т. Эффект тестэктомии на структуры ви-лочковой железы, экспрессирующие главный комплекс гистосовместимости II класса // Бюл. эксп. биол. мед. 2008. Т. 146, № 1. С. 103-106.
11. Сельков С.А., Петленко С.В., Селькова М.С. Применение препарата простатилен в комплексной терапии хронического простатита, ассоциированного с половыми и репродуктивными нарушениями // Андрология и генитальная хирургия. 2012. № 3. С. 93-96.
12. Сингер М., Берг П. Гены и геномы: в 2 т. М.: Мир, 1998. 391 с.
13. Cross S.A., Ewen S.W., Rost F.W. A study of methods available for cyto-chemical localizatio-nof histamine by fluorescence induced with orthophaldehyde or acetaldehyde. J. Histochem, 1971, vol. 3, no. 6, pp. 471-476.
14. Fijak M., Meinhardt A. The testis in immune privilege. Immunol. Rev., 2013, vol. 2006. pp. 66-81.
References
1. Al'-Shukri S.Kh., Gorbachev A.G., Borovets S.Yu. Effektivnost' prostatilena pri ostrom tsistite (eksperimental'no-klinicheskoe issledovanie) [Effectiveness of prostatilene in acute cyctitis]. Nefrologiya [Nephrology], 2009, vol.13, no. 2, pp. 92-95.
2. Artem'eva I.L., Sergeeva V.E. Morfofunktsional'naya kharakteristika struktur timusa pri ekspe-rimental'noi testektomii [Morpho-functional characteristics of thymus structure in experimental testectomy]. Cheboksary, Chuvash State University Publ., 2012, 96 p.
3. len S.S.K. Reproduktivnaya endokrinologiya [Reproductive endocrinology]. Moscow, Medician Publ., 1998. 429 p.
4. Klyasheva N.V. Metilirovanie DNK vmekhanizme deistviya anabolicheskikh steroidovna skeletnuyu myshtsu i semenniki [DNA methylation in the mechanism of anabolic steroids action on the skeletal muscle and android glands]. Problemy reproduktsii [Problems of reproduction], 2003, no. 2, pp. 15-18.
5. Klyasheva N.V., Stepanova N.V., Klyasheva R.I. Vliyanie androgenov na metilirovanie DNK iz raznykh organov krys [Influence of androgens on methylation of DNA from different organs of rats]. Problemy reproduktsii [Problems of reproduction], 2001, no. 4, pp. 25-26.
6. Klyasheva R.I., Sergeeva V.E., Klochkova E.A. Vliyanie prostatilena na soderzhanie triatsilglitseridov v syvorotke krovi i katekholaminov v semennikakh krys [Influence of prostatilene on triacyglycerides content in blood serum and catecholamines in testes of rats], Aktual'nye napravleniya nauchnykh issledovanii XXI veka: Teoriya i praktika: sb, nauch, tr, po materialam mezhdunar, zaoch, nauch,-prakt, konf, [Proc. of conf. «Actual directions of research of the 21st century: theory and practice»]. Voronezh, 2013, Iss. 3, pp. 45-50.
7. Klyasheva R.I., Sergeeva V.E., Klochkova E.A. Issledovanie vliyaniya prostatilena na soder-zhanie obshchego kholesterola v syvorotke krovi i serotonina v semennikakh [Study of prostatilene influence on the content of total cholesterol in blood serum and serotonine content in testes]. Vestnik Chuvashskogo universiteta, 2014, no. 2, pp. 266-269.
8. Alberts B., Brei D., L'yuis Dzh.et al. Molekulyarnaya biologiya kletki [Molecular cellular biology]. Moscow, Mir Publ., 1994, vol. 2, pp. 93-253.
9. Prostatilen v urologicheskoi praktike [Prostatilene in the practice of urology]. St. Petersburg, 2011. 41 p.
10. Sarilova I.L., Sergeeva V.E., Smorodchenko A.T. Effekt testektomii na struktury vilochkovoi zhelezy, ekspressiruyushchie glavnyi kompleks gistosovmestimosti II klassa [Effect of testectomy on thymus structures expressing major histocompatibility complex of the II class]. Byulleten' eksperimen-tal'noi biologicheskoi meditsiny [Bulletin of experimental biology and medicine], 2008, vol. 146, no. 1. pp. 103-106.
11. Sel'kov S.A., Petlenko S.V., Sel'kova M.S. Primenenie preparata prostatilen vkompleksnoi te-rapii khronicheskogo prostatita, assotsiirovannogo s polovymi i reproduktivnymi narusheniyami [Use of the drug Prostatilene in complex therapy of chronic prostatitis associated with genital and reproductive disorders]. Andrologiya i genital'naya khirurgiya [Andrology and genital surgery], 2012, no. 3, pp. 93-96.
12. Singer M., Berg P. Geny i genomy: v 2 t, [Genes and genomes. 2 vols.]. Moscow, Mir Publ., 1998, 391 p.
13. Cross S.A., Ewen S.W., Rost F.W. A study of methods available for cyto-chemical localization of histamine by fluorescence induced with orthophaldehyde or acetaldehyde, J, Histochem, 1971, vol. 3, no. 6, pp. 471-476.
14. Fijak M., Meinhardt A. The testis in immune privilege, Immunol, Rev,, 2013, vol. 2006. pp. 66-81.
КЛЯШЕВА РАИСА ИВАНОВНА - доктор биологических наук, профессор кафедры фармакологии, клинической фармакологии и биохимии. Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (kaf-biology@yandex.ru).
KLYASHEVA RAISA - Doctor of Biological Sciences, Professor, Department of Farmacology, Clinical Farmacology and Bio^emis^, Chuvash State University, Cheboksary, Russia.
СЕРГЕЕВА ВАЛЕНТИНА ЕФРЕМОВНА - доктор биологических наук, профессор кафедры медицинской биологии с курсом микробиологии и вирусологии, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (kaf-biology@yandex.ru).
SERGEEVA VALENTINA - Doctor of Biological Sciences, Professor, Department of Medical Biology with the Microbiology and Virology Course, Chuvash State University, Cheboksary, Russia.
КЛОЧКОВА ЕВГЕНИЯ АЛЕКСЕЕВНА - ассистент кафедры фармакологии, клинической фармакологии и биохимии, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (kaf-biology@yandex.ru).
KLOCHKOVA EVGENIYA - Assistant Lecturer, Department of Farmacology, Clinical Farmacology and Bio^emis^, Chuvash State University, Cheboksary, Russia.
