ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПОВЫШЕННОЙ ЭКСПРЕССИИ RUNX2 НА ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ ОСТЕОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

120

МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ

с 30 по 50 сутки периодически регистрировались достоверные различия по данному показателю в группах ТСМ ФМ+ВВ5 и ТСМ ФМ+ВВ10 при сравнении с первой контрольной группой. В результате морфометрического анализа продемонстрировано, что процент сохранной ткани в группах ТСМ ФМ+ВВ10 и ТСМ ВВ10 был значительно выше (Р <0,05) при сравнении с аналогичным показателем в группах контрольных крыс — ТСМ и ТСМ ФМ. Оба варианта трансплантации ВВ способствовали поддержанию популяции 0!1д2+/1\1Э2+ и 0!1д2+/1\1Э2- клеток и в опытных группах были обнаружены достоверные различия при сравнении с ТСМ ФМ в зонах УР и 1_Р. В результате ПЦР-Рв было определено, что в\в МСК-ВВ значительно увеличивали экспрессию мРНК гена Mbp. Высокая дозировка ВВ при в\в приводит к увеличению экспрессии мРНК генов Gap43, S100a10. Минимальная дозировка ВВ при в/в приводит к увеличению экспрессии мРНК генов Psd95 и NeuN.

Результаты данного исследования продемонстрировали, что в/в МСК-ВВ приводит к более эффективному восстановлению двигательной функции после ТСМ у крыс по сравнению с контролем. В/в МСК-ВВ приводит к повышенному росту 0Пд2+ клеток в сером и белом веществе спинного мозга, что косвенно свидетельствует о стимуляции миелинизации в нем.

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПОВЫШЕННОЙ ЭКСПРЕССИИ RUNX2 НА ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ ОСТЕОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА

Д.А. Костина1, А.А. Лобов1, Е.С. Громова1, 2, В.В. Карелкин3, Д.В. Смирнова1, 4, А.Б. Малашичева1

1 Институт Цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия

2 Санкт-Петербургский Государственный университет, Санкт-Петербург, Россия

3 НМиЦ ТО им. Р.Р. Вредена, Санкт-Петербург, Россия

4 Национальный исследовательский университет ИТМО, Санкт-Петербург, Россия

e-mail: kostinadariaspb@gmail.com

Ключевые слова: Runx2, остеобласты, остеогенная дифференцировка.

Runx2 является ключевым регулятором и маркером остеогенной дифференцировки. Он влияет на экспрессию других проостеогенных генов и является звеном многих сигнальных каскадов, таких как Wnt, Notch, Sox9, Msx2, и сигнальный путь Hedgehog [1]. Регуляторная активность Runx2 по-разному изменяется в отношении разных генов-мишеней в зависимости от стадии диф-ференцировки, а на стадии минерализации его уровень снижается [2]. Runx2 является важнейшим регулятором дифференцировки остеобластов [3]. Остеобласты — это клетки взрослой кости, которые синтезируют большое количество различных белков, в том числе Runx2, и обладают способностью к внеклеточной минерализации. Однако роль Runx2 на поздних стадиях остеогенной диф-ференцировки остается слабо изученной.

Чтобы выяснить, какую роль играет Runx2 в дифферен-цировке остеобластов, были созданы лентивирусные конструкции, несущие 3 различные изоформы гена RUNX2: ген, кодирующий полноразмерный белок дикого типа, кодирующий укороченный вариант белка дикого типа и му-тантный вариант гена RUNX2, содержащий стоп-кодон,

а также лентивирусная конструкция, несущая шпилечную РНК к RUNX2, приводящую к подавлению синтеза белка Runx2 при внесении в клетки. Методом лентивирусной трансдукции мы активировали либо подавляли продукцию Runx2 в первичных клетках остеобластов человека.

Биологический эффект лентивирусных конструкций был подтвержден несколькими методами: методом ПЦР в реальном времени было показано, что внесение лентивирусных конструкций приводило к повышению транскрипции RUNX2 для всех трех изоформ в различных типах клеток. Методом иммуноблоттинга было показано, что при использовании созданных лентивирусных конструкций в клетках синтезируется повышенное количество соответствующих изоформ белка Runx2. С помощью исследования активности промотора RUNX2 методом измерения активности люциферазы было показано, что промотор RUNX2 активируется в ответ на внесение конструкций. При внесении шпильки на RUNX2 активность его промотора снижалась.

Влияние повышенной экспрессии RUNX2 на фенотип остеобластов было исследовано методами ПЦР в реальном времени и иммуноцитохимии. Согласно полученным результатам, RUNX2 стимулирует экспрессию остеокальцина, классической мишени RUNX2 и подавляет экспрессии остеомаркера BMP2 в остеобластах, а внесение шпильки на RUNX2 нивелирует этот эффект.

Таким образом, было показано, что активация Runx2 в остеобластах влияет на их синтетические способности. Исследование проведено при поддержке гранта РНФ 18-14-00152

Литература:

1. Rutkovskiy A., Stensl0kken K.-O., Vaage I.J. Med. Sci. Monitor Basic Res., 2016, Vol. 22, P. 95-106.

2. Wu H., Whitfield T.W., Gordon J.A.R., et. al. Gen. Biol., 2014, Vol. 15, No. 3, P. 52.

3. Franceschi R.T., Ge C., Xiao G., et al. Ann. of the New York Academy of Sci., 2007, Vol.1116, No. 1, P. 196-207.

РЕЗИДЕНТНЫЕ Т-КЛЕТКИ ЧЕЛОВЕКА В ЗАЖИВЛЕНИИ ОСТРЫХ И ХРОНИЧЕСКИХ РАН

Е.Г. Костоломова1' 2, Ю.Г. Суховей2, И.Г. Унгер2, Т.В. Акунеева2

1 ФГБОУ ВО Тюменский государственный медицинский университет Минздрава РФ, Тюмень, Россия

2 ООО «Тюменский филиал института клинической

и фундаментальной иммунологии», Тюмень, Россия

e-mail: lenakost@mail.ru

Ключевые слова: проточная цитометрия, кожа, резидентные Т-клетки, заживление ран, острая рана, хроническая рана.

Лечение длительно незаживающих ран это одна из сложнейших проблем. Boyman O. et al. предположили, что резидентные Т-клетки кожи играют главную роль в кожном иммунном гомеостазе и патологии [1].

Цель работы: изучить роль эпидермальных ар+ и у5+ T-клеток человека в заживлении острых и хроническими ран.

Материалы и методы. Образцы ткани и крови пациентов были доставлены из ГБУЗ ТО «ОКБ № 1», с острой травмой (n=10), с хронической (n=9). Суспензию клеток кожи получали по методике [2]. Исследование

Гены & Клетки XVII, №3, 2022