CC BY
49
МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ
ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ГРАНУЛ «ГЕПАТРОПИН» НА ТЕЧЕНИЕ ХРОНИЧЕСКОГО ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ГЕПАТИТА
Яковлева Лариса Васильевна
д-р. фарм. наук, профессор Национального фармацевтического университета Украины,
61168, Украина, г. Харьков, ул. Валентиновская, 4
Геруш Олег Васильевич
канд. фарм. наук, докторант Национального фармацевтического университета Украины,
61168, Украина, г. Харьков, ул. Валентиновская, 4
Ларьяновская Юлия Борисовна
канд. биол. наук, ст. н. с. Национального фармацевтического университета Украины,
61168, Украина, г. Харьков, ул. Валентиновская, 4
Спиридонов Сергей Владимирович
д-р. фарм. наук, доцент Национального фармацевтического университета Украины,
61168, Украина, г. Харьков, ул. Валентиновская, 4
Мищенко Оксана Яковлевна
д-р. фарм. наук, профессор Национального фармацевтического университета Украины,
61168, Украина, г. Харьков, ул. Валентиновская, 4
E-mail: _ [email protected]
STUDY OF GRANULES "HEPATROPIN" ON THE COURSE OF CHRONIC EXPERIMENTAL HEPATITIS
Larysa Iakovlieva
doctor of Pharm. Sciences, Professor, National University of Pharmacy of Ukraine,
61168, Ukraine, Kharkov, Valentinovskaya St., 4
Oleg Gerush
candidate of Pharm. Sciences, doctoral student, National University of Pharmacy of Ukraine,
61168, Ukraine, Kharkov, Valentinovskaya St., 4
Yulia Laryanovskaya
candidate of Biol. Sciences, Senior research scientist, National University of Pharmacy of Ukraine,
61168, Ukraine, Kharkov, Valentinovskaya St., 4
Sergey Spiridonov
doctor of Pharm. Sciences, Associate professor, National University of Pharmacy of Ukraine,
61168, Ukraine, Kharkov, Valentinovskaya St., 4
Oksana Mishchenko
doctor of Pharm. Sciences, Professor, National University of Pharmacy of Ukraine,
61168, Ukraine, Kharkov, Valentinovskaya St., 4
Библиографическое описание: Исследование влияния гранул «Гепатропин» на течение хронического экспериментального гепатита // Universum: Медицина и фармакология: электрон. научн. журн. Яковлева Л.В. [и др.]. 2016. № 10(32). URL: http://7universum. com/ru/med/archive/item/3 761
A UNIVERSUM:
/YY\ МЕДИЦИНА И ФАРМАКОЛОГИЯ
АННОТАЦИЯ
Цель работы - изучение гепатопротекторной активности нового комплексного растительного средства гранул «Гепатропин» (внутрижелудочно 900 мг/кг один раз в день) на модели хронического гепатита, вызванного введением тетрахлорметана (50% масляного раствора в дозе 0,2 мл /100 г массы тела крысы три раза в неделю в течение 28 дней) и этанола (5% раствор вместо питьевой воды), в сравнении с референс-препаратом таблетками «Силибор» (внутрижелудочно 35 мг/кг один раз в день). Для оценки функционального состояния мембран гепа-тоцитов и степени воспалительной реакции определяли в сыворотке крови активность ферментов аланинамино-трансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), массовый коэффициент печени (МКП). Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и активность антиоксидантной системы (АОС) оценивали соответственно по уровню ТБК-активных продуктов и восстановленного глутатиона (ВГ) в гомогенате печени. Желчеобразовательную и выделительную функцию печени оценивали по показателям: скорости секреции желчи, содержания желчных кислот и холестерина. Для гистологических исследований образцы печени фиксировали в 10% растворе формалина, заливали в целлоидин-парафин. Одни срезы окрашивали гематоксилином и эозином, другие срезы, полученные на замораживающем микротоме, окрашивали суданом IV. Результаты. Гранулы «Гепатропин» и таблетки «Силибор» способствовали существенному снижению МКП (соответственно с 4,41% до 3,51% и 3,55%) и активности ЩФ (соответственно в 1,28 и 1,5 раза), АлАТ и АсАТ (соответственно в 1,4; 1,75 раза и в 1,18; 1,28 раза) в сыворотке крови, ТБК-активных продуктов (соответственно в 1,82 и в 1,69 раза) и повышению уровня ВГ (соответственно в 3,8 раза) в гомогенате печени, а также повышению секреции желчи (соответственно на 125% и 42%), содержания желчных кислот (соответственно на 75,7% и 50,5%) и холестерина в желчи (соответственно на 75,1% и 37,5%) относительно аналогичных показателей группы контрольной патологии. Выводы. Установлено гепатопротекторное действие гранул «Гепатотропин», что подтверждается ингибированием процессов ПОЛ, повышением активности АОС, устранением явлений цитолиза гепато-цитов, воспаления и некроза, положительным влиянием на образование и секрецию желчи. За выраженностью нормализующего влияния на желчесекреторную функцию печени гранулы «Гепатотропин» имеют преимущество над препаратом сравнения.
ABSTRACT
The objective - study of the pharmacological activity of the new complex plant agent granules "Hepatropin" (intragastrically 900 mg/kg once daily) on chronic hepatitis model induced by carbon tetrachloride (50% oil solution in dose 0.2 ml/100g three times a week for 28 days) and ethanol (5% solution instead of drinking water), compared to reference drug tablets "Silibor" (intragastrically 35 mg/kg once per day). To evaluate the functional state of hepatocytes membranes and the extent of the inflammatory response activity of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (ALPh) in blood serum, the weight liver ratio (WLR) were determined. The intensity of lipid peroxidation (LPO) and activity of antioxidant system (AOS) were evaluated respectively by the level of TBA-active products and reduced glutathione (RG) in liver homogenate. Speed of bile secretion, content of bile acids and cholesterol have been were evaluated. Histological studies have been conducted.
Results. Granules "Hepatropin" and tablets "Silibor" contributed significantly reduce WLR (respectively from 4.41% to 3.51% and 3.55%), and ALPh activity (respectively 1.28 and 1.5 times lower), ALT and AST (respectively 1.4, 1.75 and 1.18, 1.28 times lower) in the blood serum, TBA-active products (respectively 1. 82 and 1.69 times lower) and increase the VG level (respectively 3.8 times more) in the liver homogenate, and increase bile secretion (respectively on 125% and 42% more), the content of bile acids (respectively on 75.7% and 50.5% more) and cholesterol in bile (respectively on 75.1% and 37.5% more) versus similar indicators the of control pathology. Conclusions. Hepatoprotective effect of granules "Hepatotropin" was established, as evidenced by the LPO processes inhibition, increased AOS activity, reduction of hepatocytes cytolysis, inflammation and necrosis, positive influence on the formation and secretion of bile. The expression of the normalizing effect on bile secretion granules "Hepatotropin" have an advantage over the comparison drug.
Ключевые слова: хронический экспериментальный гепатит, таблетки «Силибор», новое комплексное растительное средство гранулы «Гепатропин».
Keywords: experimental chronic hepatitis, "Silibor" tablets, a new complex plant agent granules "Hepatropin".
Современный образ жизни человека характеризуется увеличением токсических нагрузок на организм, обусловленных изменениями условий питания, загрязнением окружающей среды, что приводит к значительному распространению хронических неинфекционных заболеваний печени [7, 8, 17]. Последнее обуславливает актуальность поиска новых эффективных гепатопротекторных средств, предупреждающих нарушение структуры и функции органа при различных патологических состояниях, ускоряющих регенерацию и восстановление функциональной активности гепатоцитов [5, 9, 14]. Среди биологически
активных веществ (БАВ) особый интерес для клинической гепатологии представляют соединения флаво-ноидной природы, как мощные антиоксиданты [5, 9, 12-16]. С целью оптимизации фармакотерапии заболеваний печени учеными НФаУ было разработано комплексное растительное средство в виде гранул под условным названием «Гепатропин». Оригинальность разработки заключается в использовании в качестве базового сырья нативного порошка лекарственных растений и отрубей пшеницы. Состав нового средства был обоснован по данным литературного
поиска о гепатопротекторных свойствах растительного сырья из различных видов растений, а наличие гепатопротекторного действия доказано в эксперименте в условиях острого гепатита [1].
Учитывая, что в реальной клинической практике более распространены хронические поражения печени, целью данной работы было изучение фармакологической активности гранул «Гепатропин» на модели хронического экспериментального гепатита, вызванного сочетанным введеним тетрахлорметана и этанола, в сравнении с референс-препаратом таблетками «Силибор».
Объектами исследования были гранулы «Гепат-ропин» - новое комплексное фармакологическое средство, содержащее нативные порошки цветков календулы, ромашки, корня солодки голой, листьев крапивы двудомной, корневища с корнями валерианы лекарственной, плодов шиповника коричного, семян каштана конского и пшеничные отруби.
Хронический гепатит у крыс вызывали введением 5% раствора этанола, который животные получали вместо питьевой воды, и 50% масляного раствора тетрахлорметана в дозе 0,2 мл /100 г массы тела 3 раза в неделю в течение 28 дней. Гепатозащитное действие гранул «Гепатропин» изучали в дозе 900 мг/кг (эффективная доза по результатам предыдущих исследований [1]), препарата сравнения таблеток «Силибор» (ООО ФК «Здоров'я», Украина) - в дозе 35 мг/кг (эффективная доза в эксперименте [11]). Исследуемые средства вводили животным ежедневно внутрижелудочно через один час после введения тетрахлорметана. Через 24 ч после последнего введения исследуемых объектов животных наркотизировали 1% раствором барбамила, оперировали и собирали желчь [2]. После выведения крыс из эксперимента декапитацией, собирали кровь, делали резекцию печени и взвешивали ее, готовили гомогенат для биохимического анализа. Для оценки функционального состояния мембран гепатоцитов и степени воспалительной реакции определяли в сыворотке крови активность ферментов аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), щелочной фос-фатазы (ЩФ) и рассчитывали массовый коэффициент печени (МКП) [2]. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и активность антиоксидантной системы (АОС) оценивали соответственно по уроню ТБК- активных продуктов и восстановленного глутатиона (ВГ) в гомогенате печени [2]. Желчеобразовательную и выделительную функцию печени оценивали по показателям: скорости секреции желчи, содержания желчных кислот и
холестерина в ней [2]. Образцы печени для гистологических исследований фиксировали в 10% растворе формалина, заливали в целлоидин-парафин. Одни срезы окрашивали гематоксилином и эозином, другие срезы, полученные на замораживающем микротоме, окрашивали суданом IV [3]. Изучение микропрепаратов проводили под микроскопом Mikros 400, микрофотосъемки изображений получали на цифровом фотоаппарате Nicon Col Pix 4500. Фотографии обрабатывали на компьютере Pentium 4GH с помощью Nicon View 5. Статистическую обработку результатов проводили параметрическим методом с использованием коэффициента Стьюдента с поправкой Бонферони при уровне вероятности р < 0,05 [4].
Комбинированное введение тетрахлорметана и этанола животным группы контрольной патологии привело к достоверному относительно интактного контроля увеличению МКП, что свидетельствует о наличии в органе воспалительного процесса (табл. 1). Результаты биохимических исследований подтвердили развитие цитолиза гепатоцитов - достоверное относительно интактного контроля повышение содержания в крови внутриклеточных печеночных ферментов АлАТ, АсАТ; развитие холестаза, усугубляющего воспаление, - достоверное относительно интактного контроля повышение уровня щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови на фоне достоверного снижения интенсивности желчеотделения и снижения содержания желчных кислот (ЖК) и холестерина в желчи. На фоне патологии также наблюдалось повышение интенсивности процессов перекис-ного окисления липидов (ПОЛ): достоверно возрос уровень ТБК-реактантов в печени, и снижение активности антиоксидантной системы (АОС): достоверно снижался уровень восстановленного глутатиона (ВГ) по сравнению с интактным контролем (табл. 1). Проведенное патоморфологическое исследование пораженной печени подтвердило вышеизложенное (рис. 3-6). В перипортальных и перивенулярных зонах часто наблюдали некроз гепатоцитов с очагами лим-фогистиоцитарной инфильтрации различной мощности. Кровеносные сосуды были полнокровными, ге-мокапилляры расширенными и содержали увеличенное количество лимфоцитов. Местами были видны мелкие кровоизлияния. Гепатоциты часто набухшие, заметное колебание ядер по размеру. Довольно часто в пораженных портальных трактах видна была пролиферация холангиол, умеренная пролиферация би-лиарного эпителия (рис. 3-6).
Таблица 1.
Результаты изучения гепатопротекторного действия гранул «Гепатропин» в условиях хронического гепатита у крыс, вызванного тетрахлорметаном и этанолом
Группы ^\животных Показатели\^ Интактный контроль Контрольная патология Патология + гранулы «Гепатропин», 900 мг/кг Патология + таблетки «Силибор», 35 мг/кг
МКП, % 3,43 (2,77-4,27) 4,41* (3,82-5,24) 3,55** (3,24-4,00) 3,51** (3,10-3,70)
Сыворотка крови
АлАТ ммоль/чхл. 0,65±0,03 1,23±0,03* 0,87±0,10** 0,70±0,03**
АсАТ, ммоль/чхл. 0,78±0,02 1,02±0,02* 0,86±0,20** 0,80±0,03**
ЩФ, мк/мольсекхл 0,77±0,04 2,19±0,29* 1,7±0,06*/**/*** 1,46±0,051*/**
Гомогенат печени
ТБК-активные продукты, ммоль/ч 58,63±2,30 101,68±4,69* 55,95±1,94** 59,94±1,90**
ВГ, у. е. 57,72±2,86 15,72±2,36* 59,49±1,52** 59,34±1,77**
Желчь
Скорость секреции желчи, мг/мин./100 5,93±0,35 3,02±0,14* 6,80±0,42**/*** 4,30±0,35**
Желчные кислоты, г% 887,92±16,33 502,31±29,36* 882,36±9,90**/*** 755,82±21,91**
Холестерин, г% 31,67±1,81 17,00±1,35* 29 77±1 13**/*** 23,37±0,82**
Примечания: 1)* - отклонение показателя статистически достоверно относительно группы интактного контроля, р<0,05; 2) ** - отклонение показателя статистически достоверно относительно группы контрольной патологии, р<0,05; 3)*** - отклонение показателя статистически достоверно относительно группы животных, леченных таблетками «Силибор», р<0,05.
Все это свидетельствовало о хроническом течении патологического воспалительно-некротического процесса и высокой степени его активности. Все указанные изменения функционально-биохимических и патоморфологических показателей являются свидетельством формирования у животных хронического гепатита довольно высокой степени активности, что соответствует ряду исследований [15]. Фармакотерапия хронического гепатита гранулами «Гепатропин» и таблетками «Силибор» способствовала существенному снижению воспалительных проявлений, о чем свидетельствует достоверное снижение МКП и активности маркера воспаления и холестаза ЩФ относительно аналогичных показателей группы контрольной патологии. Исследование содержания продуктов ПОЛ и активности АОС под влиянием гранул «Гепатропин» показали отчетливое снижение ТБК-реакта-нтов и повышение уровня ВГ в гомогенате печени относительно показателей группы контрольной патологии, что свидетельствует о снижении скорости патологических свободнорадикальных реакций и усилении антиоксидантной защиты. Следствием угнетения процессов ПОЛ является снижение проявлений
цитолиза (активности ферментов АлАТ и АсАТ) (табл. 1).
Данные морфологических исследований подтверждают результаты биохимического анализа. После введения крысам на фоне токсикантов гранул «Гепатропин» состояние печеночной паренхимы (рис. 7, 8) у подавляющего большинства крыс на большинстве участков долек соответствовал интактному контролю (рис. 1, 2). Признаки жировой дистрофии были значительно меньше, чем у крыс с патологией. Пролиферация дуктул выражена слабо. Однако, сохранялась полнокровность многих вен и капилляров, расширение их просвета (рис. 8). Иногда это сопровождалось расширением перивазальной зоны, незначительным отеком. По разным местам долек были видны темные небольшие гепатоциты, которые имели выразительную функциональную активность, поскольку содержали повышенное количество цитоплазматиче-ских структур. Наличие клеток с гиперхромными ядрами, полиплоидных клеток, двуядерных клеток свидетельствует об активации регенераторных явлений в ткани печени после лечения грануламы «Гепатро-пин» (рис. 8).
Vч{>\
* < , Г * 1
Шш
^ I \\Сч ♦ V» »
Рисунки 1-12. Печень крыс
Печень крыс групп: Интактного контроля: нормальное состояние печеночной паренхимы (1, 2), гематоксилин-эозин. х 200. Контрольной патологии: мостоподобный (3), перипортальный некроз (4); пролиферация дуктул (5), гематоксилин-эозин. х200; мелкие очаги накопления жира в гепатоцитах (6), замороженный срез, судан IV. х250. Гранул «Гепатропин»на фоне патологии: нормальный рисунок паренхимы (7); гепато-циты с гиперхромией ядер, полиплоидные клетки (8), гематоксилин-эозин. х 200; слабая жировая дистрофия клеток (9), замороженный срез, судан IV.х 100. Таблеток «Силибор» на фоне патологии: умеренная клеточная инфильтрация вокруг междольковых вен (10); отсутствие изменений в паренхиме, незначительная пролиферация дуктул (11), гематоксилин-эозин. х100,200; мелкие очаги жировой дистрофии (12), замороженный срез, судан IV. х100.
На фоне лечения таблетками «Силибор» (рис. 1011) очаги некроза паренхимы печени были в основном изолированными, меньшими по размеру относительно контрольной патологии. Выраженность воспалительной реакции варьировала, но в целом была меньше по сравнению с контрольной патологией. Пролиферация дуктул и гемокапилярные расстройства были также отчетливо снижены. На фоне таблеток «Силибор» (рис. 10-11) не наблюдали развития некроза паренхимы или он имел очаговый, изолированный характер. Как и на фоне гранул «Гепатропин» наблюдали варьирование ядер гепатоцитов по величине, гиперхромные ядра, полиплоидные клетки, достаточное количество двухъядерных клеток. Ми-
тозы отсутствовали. У животных, получавших «Си-либор», жировая дистрофия отсутствовала у большинства крыс (рис. 12), в остальных животных она носила преимущественно умеренный очаговый характер. Известно, что жировая дистрофия гепатоцитов возникает как защитно-компенсаторная реакция на нарушение липидного обмена, но этот процесс носит обратимый характер. Начальный этап развития хронического воспаления печени под влиянием тетра-хлорметана и этанола сопровождается развитием жировой дистрофии [6, 16]. Под действием исследуемых средств включаются защитно-компенсаторные механизмы организма (восстановление баланса системы ПОЛ/АОС), что приостанавливает переход острого процесса в хронический. Хронический процесс,
характеризующийся некрозом, воспалительной инфильтрацией и признаками начального фиброза в печени животных группы контрольной патологии, на фоне исследуемых средств он менялся на менее выраженную патологию - жировую дистрофию гепа-тоцитов и восстановление нормальной морфологической структуры печеночной паренхимы. О повышении функциональной активности печени при фармакотерапии гранулами «Гепатропин» и таблетками «Силибор» свидетельствовали также показатели же-лчевыделительной и желчесинтетической функции органа: достоверно повышалась секреция желчи, содержание желчных кислот и холестерина в желчи -основных компонентов внешнего секрета печени (табл. 1). Гранулы «Гепатропин» при данных условиях эффективнее силибора восстанавливали желчеотделение и экскреторную функцию печени благодаря более выраженному гепатопротекторному действию, обеспеченному многогранными фармакологическими свойствами БАВ. Очевидно, преимущество гранул «Гепатропин» над референтным препаратом «Силибор» обеспечивается большим содержанием и разнообразием БАВ, входящих в состав растительного сырья. Это полифенольные соединения -флавоноиды, дубильные вещества, оксикоричные кислоты и др., обеспечивающие антиоксидантные, мем-браностабилизирующие, антицитолитические и противовоспалительные свойства новой фитокомпози-ции [5, 7, 8, 9, 16]. Благодаря указанным свойствам полифенольные соединения нормализуют структуру и функции мембран гепатоцитов, устраняют их деструкцию при цитолизе и чрезмерное уплотнение при холестазе и воспалении, снижают интенсифика-
цию ПОЛ и повышают физиологические возможности АОС организма, способствуют восстановлению функциональной активности печени благодаря устранению нарушений метаболических процессов, обусловленных гибелью значительной части гепато-цитов. Более выраженный эффект объясняется присутствием в составе гранул «Гепатропин» и других БАВ, в частности витаминов, макро- и микроэлементов, органических кислот, эфирных масел, оказывающих метаболическое действие. В улучшении желче-выделительной и желчесинтетической функции печени преимущество гранул «Гепатотропин», несомненно, обеспечивают и растительные волокна пшеничных отрубей, усиливающих действие лекарственных растений [10].
Результаты исследования дают основание считать, что в условиях хронического поражения печени, вызванного тетрахлорметаном и этанолом, гранулы «Гепатотропин» оказывают гепатопротектор-ное действие. Это подтверждается ингибированием процессов ПОЛ, повышением активности антиокси-дантной системы, устранением цитолиза гепатоци-тов, воспаления и некроза, положительным влиянием на образование и секрецию желчи, стимуляцией синтетических процессов органа. Следует отметить, что за выраженностью нормализующего влияния на жел-чесекреторную функцию печени гранулы «Гепато-тропин» имеют преимущество над препаратом сравнения таблетками «Силибор». Полученные результаты обуславливают перспективность дальнейшего изучения гранул «Гепатотропин» с целью обоснования целесообразности их включения в комплексную фармакотерапию повреждений гепатобилиарной системы.
Список литературы:
1. Геруш О.В., Яковлева Л.В., Лар'яновська Ю.Б., Сахарова Т.С. Експериментальне вивчення гранул «Гепатро-тн» як потенцшного гепатотропного засобу // Укранський бiофармацевтичний журнал. - 2015. - № 2 (37). -С. 44-48.
2. Доклшчш дослщження лжарських засобiв: метод. рекоменд. / За ред. чл.-кор. НАМН Укра!ни О.В. Стефа-нова. - К.: Авщенна, 2001. - 528 с.
3. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. - М.: Медицина, 1969. - 424 с.
4. Основные методы статистической обработки результатов фармакологических экспериментов / В кн.: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: Ремедиум, 2000. - С. 349-354.
5. Попович В.П. Гепатопротекторний потенщал рослин: монографiя. - К.: 1нтерсервю, 2012. - 188 с.
6. Радченко В.Г., Шабров А.В., Зиновьева Е.Н. Основы клинической гепатологии. Заболевания печени и били-арной системы. - СПб.: Издательство «Диалект»; М.: Издательство «БИНОМ», 2005. - 864 с.
7. Ткач С.М. Перспективы развития гепатологии в ближайшем и недалеком будущем // Здоров'я Укра1ни. -2012. - № 3 (25). - С. 10-11.
8. Харченко Н.В. Гепатопротектори в л^ванш за хворювань печшки: клшiко-бюхiмiчнi мехашзми ди / Н.В. Харченко, Г.А. Анохша, С.1. Чекман та ш. // Здоров'я Укра!ни. - 2013. - № 1 (27). - С. 28-29.
9. Чернявский В.В., Сизенко А.К. Гепатопротекторы в реалиях доказательной медицины и клинической практики // Здоров'я Украши. - 2013. - № 17(318). - С. 52-53.
10. Яковлева Л.В., Геруш О.В., Спиридонов С.В. Дослщження гепатозахисно! ди нового рослинного засобу «ШКТ-2» // Вюник фармацп. - 2011. - №3 (67). - С. 70-73.
11. Яковлева Л.В., Мщенко О.Я. Вивчення впливу нових комбшованих адаптогенних засобiв природного похо-дження на деяш показники метаболiзму печiнки в умовах хрошчного гепатиту // Мат. Всеукрашсько! наук.-практич. конф. «HOTi вiтчизнянi розробки лiкарських засобiв для гастроентерологп», 14 жовтня 2004 р., м. Харшв. - Х.: НФаУ, 2004. - С. 192-200.
12. Christina A.J., Saraswathy G.R., Robert S. J. et al. Inhibition of CCU-induced liver fibrosis by Piper longum Linn // Phytomedicine. - 2006. - Vol. 13, № 5. - P. 196-198.
13. Gharagozloo M., Moayedi B., Zakerinia M. et al. Combined therapy of silymarin and desferoxamine in patients with beta-thalassemia major: a randomized double-blind clinical trial // Fundam. Clin. Pharmacol. - 2009. - Vol. 23 (3). - P. 359-365.
14. Hofmann A.F. Cholestatic liver disease: pathophysiology and therapeutic options // Liver. - 2002. - Suppl 2. -P. 14-19.
15. Kamary S.S. El., Shardell M.D., Abdel Hamid M. et al. A randomized controlled trial to assess the safety and efficacy of silymarin on symptoms, signs and biomarkers of acute hepatitis // Phytomedicine. - 2009. - Vol. 16, № 5. - P. 391-400.
16. Schwenger K.J., Allard J.P. Clinical approaches to non-alcoholic fatty liver disease // World J. Gastroenterol. -2014. - Vol. 20. - P. 1712-1723.
17. Vernon G., Baranova A., Younossi Z. M. Systematic review: the epidemiology and natural history of non-alcoholic fatty liver disease and non-alcoholic steatohepatitis in adults // Aliment. Pharmacol. Ther. - 2011. - Vol. 34 (3). -P. 274-285.
References:
1. Gerush O.V., Iakovlieva L.V., Laryanovska Yu. B., Sakharova T. S. Experimental study of granules "Hepatropin" as a potential hepatotropic agent. Ukrains'kij biofarmacevtichnij zhurnal [Ukrainian biopharmaceutical Journal], 2015, no. 2 (37), pp. 44-48 (In Ukrainian).
2. Stefanov O. V. eds. Preclinical studies of drugs: method. recommendations. Kiev, Avicenna Publ., 2001. 528 p. (In Ukrainian).
3. Merkulov G.A. Course patologohystologic technology. Moscow, Meditsina Publ., 1969. 424 p. (In Russian).
4. Basic methods of statistical processing of the results of pharmacological experiments. Rukovodstvo po jeksperimental'nomu (doklinicheskomu) izucheniju novyh farmakologicheskih veshhestv. [Manual on experimental (preclinical) study of new pharmacological substances]. Moscow, Remedium Publ., 2000. pp. 349-354. (In Russian).
5. Popovich V.P. Hepatoprotective potential of plants: monograph. Kiev, Interservice Publ., 2012. 188 p. (In Ukrainian).
6. Radchenko V.G., Shabrov A.V., Zinoviev E.N. Fundamentals of Clinical Hepatology. Diseases of the liver and biliary system. St. Petersburg, "Dialect" Publ., Moscow, "Binom" Publ., 2005. 864 p. (In Russian).
7. Tkach S.M. Prospects of development of hepatology in the near and distant future. Zdorov'ja Ukrai'ni. [Health of Ukraine], 2012, no.3 (25), pp. 10-11. (In Ukrainian).
8. Kharchenko N.V., Anokhin G.A., Chekman S.I., Korulya I.A., Kharchenko V.V. Hepatoprotectors in the treatment of liver disease: clinical and biochemical mechanisms of action. Zdorov'ja Ukrai'ni. [Health of Ukraine], 2013, no. 1 (27), pp. 28-29. (In Ukrainian).
9. Cherniavsky V.V., Sizenko A.K. Hepatoprotectors in the realities of evidence-based medicine and clinical practice. Zdorov'ja Ukraini. [Health of Ukraine], 2013, no. 17(318), pp. 52-53. (In Ukrainian).
10. Iakovlieva L.V., Herush O.V., Spiridonov S.V. Research hepatoprotective action of the new plant agent "GIT-2". Visnik farmacii. [Journal of pharmacy], 2011, no. 3 (67), pp. 70-73. (In Ukrainian).
11. Iakovlieva L.V., Mischenko O.Ya. Study of new combined adaptogenic of natural origin for certain metabolic indicators of liver in conditions of chronic hepatitis. Materiali Vseukrains'koi naukovo-praktichnoi konferencii «Novi vitchiznjani rozrobki likars'kih zasobiv dlja gastroenterologii» [Materials of the Ukrainian scientific-practical conference "New domestic development of drugs for gastroenterology"]. Kharkiv, NFaU Publ., 2004, pp. 192-200. (In Ukrainian).
12. Christina A.J., Saraswathy G.R., Robert S.J. et al. Inhibition of CCMnduced liver fibrosis by Piper longum Linn. Phytomedicine. 2006. Vol. 13, № 5. P. 196-198.
13. Gharagozloo M., Moayedi B., Zakerinia M., Hamidi M., Karimi M., Maracy M., Amirghofran Z. Combined therapy of silymarin and desferoxamine in patients with beta-thalassemia major: a randomized double-blind clinical trial. Fundam. Clin. Pharmacol. 2009. Vol. 23 (3). P. 359-365.
14. Hofmann A. F. Cholestatic liver disease: pathophysiology and therapeutic options. Liver. 2002. Suppl 2. P. 14-19.
15. Kamary S.S. El., Shardell M.D., Abdel Hamid M. et al. A randomized controlled trial to assess the safety and efficacy of silymarin on symptoms, signs and biomarkers of acute hepatitis. Phytomedicine. 2009. Vol. 16, № 5. P. 391-400.
16. Schwenger K.J., Allard J.P. Clinical approaches to non-alcoholic fatty liver disease. World J. Gastroenterol. 2014. Vol. 20. P. 1712-1723.
17. Vernon G., Baranova A., Younossi Z. M. Systematic review: the epidemiology and natural history of non-alcoholic fatty liver disease and non-alcoholic steatohepatitis in adults. Aliment. Pharmacol. Ther. 2011. Vol. 34 (3). P. 274-285.
