CC BY
16
Раздел - молекулярная медицина
Исследование уровня экспрессии мРНК генов CCNB1 и TERT при предраковых заболеваниях и раке шейки матки
Боженко В.К., Кулинич Т.М., Мельникова Н.В., Антонова И.Б., Джикия Е.Л., Захаренко М.В.
ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "РНЦРР" Минздрава России), 117997, г. Москва, ул. Профсоюзная, д. 86 Информация об авторах
Боженко Владимир Константинович - д.м.н., профессор, заведующий отделом молекулярной биологии и экспериментальной терапии опухолей ФГБУ "РНЦРР" МЗ РФ Кулинич Татьяна Михайловна - к.м.н., заведующая лабораторией иммунологии, онкоцитологии и клеточных технологий ФГБУ "РНЦРР" МЗ РФ
Мельникова Надежда Васильевна - к.м.н., в.н.с. лаборатории иммунологии, онкоцитологии и клеточных технологий ФГБУ "РНЦРР" МЗ РФ
Антонова Ирина Борисовна - д.м.н., заведующая лабораторией профилактики, ранней диагностики и комбинированного лечения онкогинекологических заболеваний научно-исследовательского отдела раннего канцерогенеза, профилактики, диагностики и комплексного лечения онкологических заболеваний ФГБУ "РНЦРР" МЗ РФ Джикия Екатерина Левановна - к.б.н., н.с. лаборатории иммунологии, онкоцитологии и клеточных технологий ФГБУ "РНЦРР" МЗ РФ
Захаренко Маргарита Владимировна - м.н.с. лаборатории иммунологии, онкоцитологии и клеточных технологий ФГБУ "РНЦРР" МЗ РФ Контактное лицо
Кулинич Татьяна Михайловна
117997, г. Москва, ул. Профсоюзная, д. 86., e-mail: sobral@mail.ru
Резюме
Представлены результаты анализа экспрессии генов CCNB1 (циклин В1) и TERT (каталитическая субъединица теломеразы) при предраковых заболеваниях и раке шейки матки. Циклин В1 является одним из основных регуляторов пролиферации клетки, активность образования комплекса циклин B1-Cdk1 контролирует вступление клетки в митоз, переход G2/M. Функции TERT не ограничены удлинением теломер, это и синтез РНК на РНК-матрице, и усиление клеточной пролиферации, подавление апоптоза, регуляция ответа на повреждение ДНК, увеличение срока жизни клетки. Исследование изменений генов CCNB1 и TERT при предраковых процессах вносит вклад в понимание молекулярных механизмов канцерогенеза, а также позволяет оценить потенциал тестирования экспрессионных изменений CCNB1 и TERT для дифференциальной диагностики патологических процессов шейки матки.
Ключевые слова: рак шейки матки, дисплазия, CIN, CCNB1, TERT, экспрессия генов
Study of the level of mRNA expression of the CCNB1 and TERT genes in precancerous diseases and cervical cancer
Bozhenko V.K., Kulinich T.M., Melnikova N.V., Antonova I.B., Dzhikiya E.L., Zakharchenko M.V.
Federal State Budgetary Institution Russian Scientific Center of Roentgenoradiology (RSCRR) of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation Russian Scientific Center of Roentgenoradiology, 117997 Moscow, Profsoyuznaya str., 86 Authors
Bozhenko V.K. -MD, Professor of medicine, Head of the Department of Molecular Biology and Experimental Tumor Therapy, Russian Research Center of Roentgenology and Radiology, Ministry of Health of Russia, Profsoyuznaya str., 86
Kulinich T.M. - PhD, Head of the Laboratory of Immunology, oncocytology and cell therapy in oncology, Russian Research Center of Roentgenology and Radiology, Ministry of Health of Russia, Profsoyuznaya str., 86
Melnikova N.V. - PhD, Leading Researcher of the Laboratory of Immunology, oncocytology and cell therapy in oncology, Russian Research Center of Roentgenology and Radiology, Ministry of Health of Russia, Profsoyuznaya str., 86
Antonova I.B. - MD, Head of the Research Department of Prevention, Comprehensive Diagnosis and Treatment of Gynecological Diseases, Russian Research Center of Roentgenology and Radiology, Ministry of Health of Russia, Profsoyuznaya str., 86
Dzhikiya E.L. - PhD, Researcher of the Laboratory of Immunology, oncocytology and cell therapy in oncology, Russian Research Center of Roentgenology and Radiology, Ministry of Health of Russia, Profsoyuznaya str.,86
Zakharchenko M.V. - Researcher of the Laboratory of Immunology, oncocytology and cell therapy in oncology, Russian Research Center of Roentgenology and Radiology, Ministry of Health of Russia, Profsoyuznaya str., 86
Summary
The results of the analysis of the expression of CCNB1 and TERT genes in precancerous diseases and cervical cancer are presented. Cyclin B1 is one of the main regulators of cell proliferation, the activity of the cyclin B1-Cdk1 complex controls cells mitosis, in particular, G2/M transition. Functions of the catalytic subunit of telomerase TERT include not only telomeres' elongation, but also RNA synthesis on the RNA matrix, the enhancement of cell proliferation, suppression of apoptosis, regulation of DNA damage response and the extension of the cell life span. Studying of the expression changes of CCNB1 and TERT genes during precancerous processes may lead to a deeper understanding of carcinogenesis and might allow us to assess the diagnostic potential of CCNB1 and TERT in the differential diagnosis of pathological processes in the cervix.
Key words: cervical cancer, dysplasia, CIN, CCNB1, TERT, gene expression Введение
Пролиферативная активность клетки, наряду с продолжительностью ее жизни, определяет гомеостаз, как отдельных тканей, так и организма в целом. Нарушение механизмов контроля этих процессов приводит к неблагоприятным и подчас необратимым последствиям. Циклин В1 (CCNB1), представитель семейства циклинов, кодируется одноименным геном и относится к регуляторным белкам, контролирующим деление клетки на этапе G2/M [6, 25]. Активация циклина В1 и образование комплекса CCNB1/Cdk1 (Cdkl - циклин-зависимая киназа 1) могут свидетельствовать о развитии фатальных изменений в судьбе клетки, так как регистрируются, когда процесс деления проходит точку рестрикции, и все последующие события не требуют внешнего контроля [6]. Кроме того, в начале митоза, мигрируя в большом количестве из цитоплазмы в ядро, комплекс фосфорилирует ядерную мембрану, разрушает ядерный конверт и открывает нитям веретена деления доступ к хромосомам [12, 14].
Важная роль циклина В1 в инициации клеточного деления и пролиферации определяет активное изучение соответствующего гена (CCNB1) и белка (CCNB1) в связи с процессами канцерогенеза. Уровень экспрессии CCNB1 является независимым прогностическим фактором при фолликулярной лимфоме [4]; делеции гена CCNB1 при лейкозе в настоящее время рассматриваются как одна из причин анеуплоидии [27]; описаны изменения экспрессии циклина В при ретинобластоме [16], раке молочной железы [13] и простаты [10].
С изменением продолжительности жизни клетки связан другой феномен. Каждый цикл клеточного деления завершается укорочением теломерного конца ДНК. Это происходит потому, что ДНК-полимераза не способна реплицировать концевые участки ДНК - возникает так называемая «проблема окончания репликации». Восстановление
рестриктированного фрагмента осуществляется за счет действия теломераз. Данные ферменты относятся к группе рибонуклеиновых протеаз и состоят из полипептидной каталитической субъединицы (TERT), обладающей ревертазной активностью, а также нити мРНК-матрицы для синтеза теломерной ДНК [8, 22]. Мутации и изменения экспрессии гена TERT могут влиять на активность теломеразы и длину ДНК, а также описаны при некоторых патологических состояниях костного мозга и злокачественных новообразованиях. Некоторые сплайс-варианты TERT ассоциированы с повышенным риском развития гемобластозов, в частности, миелодиспластического синдрома, острого и хронического миелолейкоза. Более того, существуют доказательства связи некоторых мутаций TERT и риска развития рака легкого, поджелудочной железы, мочевого пузыря, простаты, базальноклеточного рака кожи, глиом и рака шейки матки [21].
Успехи в понимании молекулярно-биологических механизмов канцерогенеза приводят к появлению новых подходов в создании таргетных противоопухолевых препаратов. Активно изучается возможность остановки процессов пролиферации опухолевых клеток с помощью клинического использования ингибиторов циклиновых киназ [3, 18]. В этой связи актуальной представляется оценка экспрессии CCNB1 и TERT в неизмененном эпителии шейки матки и при цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN I, II, III), а также при инвазивном раке шейки матки.
Цель работы: оценка изменений экспрессии генов CCNB1 и TERT при предраковых заболеваниях и раке шейки матки. Материалы и методы исследования
Ретроспективно проанализированы результаты обследования пациенток с различной патологией шейки матки, проходивших лечение в ФГБУ «РНЦРР» Минздрава России в 2006 - 2017 гг. Основную группу составили: 16 пациенток с гистологически подтвержденным плоскоклеточным раком шейки матки, средний возраст 41,1±9,6 лет; 40 пациенток с гистологически подтвержденной цервикальной интраэпителиальной
неоплазией различной степени (CIN I, CIN II, CIN III), средний возраст 37,5±10,5 лет. Контрольную группу составили 6 женщин с морфологически неизмененным эпителием шейки матки, средний возраст - 38±12,4 лет.
Для оценки экспрессии мРНК генов TERT и CCNB1 использован материал соскобов и биопсий шейки матки. Для ПЦР-исследований забор материала цервикального канала и очагов поражения шейки матки осуществлялся одноразовыми зондами до проведения комплексного обследования и начала лечения заболеваний шейки матки в пробирки со средой для стабилизации РНК. Хранение материала до начала исследования осуществляли при -70 °С.
Выделение мРНК. Образцы тканей хранились при температуре - 70 °С, далее их извлекали и гомогенизировали на приборе Tissue Lyzer (фирма Qiagen). Выделение РНК проводили согласно инструкции с использованием наборов "Oligotex mRNA Midi Kit" (фирма Qiagen). Метод основан на лизисе образцов в растворе гуанидинтиоционата, сорбции РНК на колонках, отмывке РНК в спиртовых растворах и элюции мРНК. Объем образцов после выделения составил 100 мкл.
Проведение обратной транскрипции. Реакцию обратной транскрипции ставили, используя реактивы фирмы «ЗАО НПФ ДНК-Технология», в объеме 40 мкл (в реакцию отбирали 33 мкл образца). В качестве праймеров для обратной транскрипции использовали специфические олигонуклеотиды. Реакцию проводили при температуре 40 °С в течение 30 минут, с последующей инактивацией обратной транскриптазы при 95 °С в течение 5 минут. Для увеличения объема образцов после ОТ кДНК разводили в 10 раз в ТЕ-буфере.
Проведение ПЦР. Для постановки ПЦР использовали реактивы фирмы «ЗАО НПФ ДНК-Технология». Праймеры и зонды для ПЦР были подобраны с учетом структур генов таким образом, чтобы исключить отжиг на матрице геномной ДНК исследуемых и нормировочных генов. Это позволило не использовать дополнительный этап обработки
нуклеиновых кислот ДНК-азой на этапе выделения РНК. Контроль отсутствия реакции на геномной ДНК ставили с образцами, не прошедшими реакцию обратной транскрипции, которые разводили в ТЕ-буфере в конечной концентрации, эквивалентной конечной концентрации кДНК. ДНК-зонды, использовавшиеся для детекции продуктов амплификации исследуемых и нормировочных генов, были помечены FAM. Реакции амплификации генов ставили в разных пробирках в двух повторах. Для повышения чувствительности и специфичности ПЦР был применен "горячий старт", который обеспечивался использованием парафина. Оптимальную температуру отжига праймеров и зондов подбирали экспериментально с использованием режима «градиент температур», для всех тест-систем температура была унифицирована и составила 64 °С. Амплификацию осуществляли в режиме "реального времени" в объеме 35 мкл по следующей программе: 1 цикл - 80 °С 30 сек, 94 °С 1 мин; 50 циклов - 94 °С 10 сек, 64 °С 20 сек на приборах "ДТ-322" и "ДТ-964" производства фирмы ЗАО "НПФ ДНК-Технология". Измерение уровня флуоресценции проводили на каждом цикле при температуре 64 °С. Дополнительный контроль реакции осуществляли методом электрофореза в 2% агарозном геле. Нормировка проводилась по пяти референсным генам HPRT1, TBP, B2M, GUSB, ABL. Обработка результатов осуществлялась с помощью программы EXCEL на основании данных полученных с помощью прибора. Использован метод сравнения индикаторных циклов (метод AACq).
Статистическая обработка. Статистический анализ проводили в программном пакете Statistica 10 (StatSoft, USA) с использованием методов однофакторного дисперсионного анализа. Отличия считали статистически достоверными при р<0,05. Результаты
При сравнительном анализе экспрессии мРНК гена TERT в неизмененном эпителии шейки матки, при цервикальной интраэпителиальной неоплазии и раке шейки матки было
отмечено ее повышение при прогрессировании заболевания от нормы к CIN и РШМ. Результаты представлены на рисунке 1.
норма CIN рак
COD диагноз
Среднее
Среднее±0,95*Ст.ош.
Рисунок 1. Изменение экспрессии TERT при цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN) и раке шейки матки (РШМ)
При проведении более детального анализа, включавшего определение и анализ экспрессии мРНК TERT при различной степени CIN, было обнаружено значительное повышение в случае CINIII и РШМ по сравнению с CINI, CINII (p<0,05), при этом в случае CINI-CINII экспрессия практически не отличалась от значений, полученных для неизмененного эпителия (рисунок 2). t.e I -- ■ . . .
1,4 •
1.2 ~Т~
1.0 I-
Дкагноз
Рисунок 2. Изменение экспрессии мРНК TERT при предраковых заболеваниях и РШМ
Сходная динамика характерна и для экспрессии мРНК гена циклина В1, экспрессия которого градиентно возрастала от неизмененного эпителия к CIN и далее до РШМ (рисунок 3). При этом незначительное и нелинейное изменение экспрессии при прогрессировании от нормы до CIN II резко сменялось практически трехкратным повышением в случае CIN III и РШМ (рисунок 4). Подобная особенность была также характерна для TERT (рисунок 2). Возможной причиной является активация новых механизмов, контролирующих прогрессирование предраковых заболеваний в случае CINIII и РШМ.
COD давтш
Рисунок 3. Изменение экспрессии мРНК гена CCNB1 при CIN и РШМ
Дмп<м
Рисунок 4. Изменение экспрессии мРНК гена CCNB1 при предраковых заболеваниях и РШМ
Обсуждение
Известно, что повышенная экспрессия TERT характерна для плюрипотентных стволовых клеток, а также наблюдается на ранних этапах эмбриогенеза. В дифференцированных клетках активность теломеразы снижена, что препятствует полноценному восстановлению теломерных фрагментов хромосом [9]. Наблюдаемое нами повышение экспрессии TERT может свидетельствовать о приобретении эпителиальными клетками свойств фенотипа стволовых. Эти результаты согласуются с результатами на животных моделях, в которых показано, что данные изменения ассоциированы с увеличением продолжительности жизни клетки [20, 23]. По результатам проведенного исследования можно сделать два важных вывода: во-первых, экспрессия гена TERT проградиентно возрастает от нормы до РШМ, что свидетельствует об определенной роли теломеразы в цервикальном канцерогенезе; во-вторых, многократное повышение экспрессии именно в случае CIN III и РШМ (сравнительный анализ экспрессии продемонстрировал практически одинаковые значения для этих двух патологических
состояний) указывает на качественное изменение функциональной активности теломеразы при необратимых изменениях эпителия шейки матки [5].
Изменение экспрессии TERT при пролиферативных заболеваниях и раке шейки матки описывают многие исследователи [8, 17]. Однако большинство авторов исследуют экспрессию гена в аспекте ассоциации заболевания с вирусом папилломы человека (ВПЧ) высокого онкогенного риска. Это представляется закономерным, т.к. персистенция ВПЧ в клетках эпителия шейки матки может предопределять иммортализацию этих клеток, возможно в результате активации теломераз [15]. По мнению Wang P.H. с соавторами повышение экспрессии TERT является одним из ключевых моментов злокачественной трансформации клетки в случае CIN III и РШМ. Кроме того, авторы отметили наличие корреляции высокой экспрессии TERT с персистенцией ВПЧ 16 и 18 типов [24]. К аналогичным выводам пришли Saha B. с коллегами, в дополнение к описанному повышению экспрессии TERT при CIN III. Авторы показали наличие положительной корреляции с увеличением пролиферативной активности клетки (увеличение экспрессии Ki-67 и Tопоизомеразы-IIa) [19]. Также отмечено наличие обратной корреляции между повышением экспрессии генов TERTи CDKN1A. Белок p21waf1 - продукт гена CDKN1A -является одним из регуляторов апоптоза [26].
Значительное повышение экспрессии CCNB1 наблюдается незадолго до начала митоза. В этот момент белок, ранее в большом количестве присутствовавший в цитоплазме, мигрирует в ядро клетки, где его функциональная активность максимальна. Однако многократное повышение уровня экспрессии циклина В1 является патологическим свойством клетки и свидетельствует об изменении ее пролиферативной активности [1]. Изучая экспрессию CCNB1 при гиперпролиферативных процессах эпителия шейки матки, авторы, как и в исследованиях TERT, в основном, уделяют внимание прогностической роли циклина В1 при ВПЧ-ассоциированном раке шейки матки. В частности, Hashiguchi Y. с коллегами описали повышение экспрессии белка
CCNB1 при CIN и РШМ, однако корреляции с типом ВПЧ не обнаружили [11]. Эти результаты противоречат данным Cho N.H. с соавторами, которые указали на непосредственную связь уровня экспрессии CCNB1 с типом вируса папилломы человека и гистологическим типом опухоли. Целью данного исследования было определение влияния полиморфизма гена TP53 на изменение механизмов перехода через точку рестрикции в G2 [7]. Авторы не нашли достоверной связи между двумя факторами, однако ВПЧ-ассоциированное повышение экспрессии циклина В1 и отсутствие инактивации митоза в точке рестрикции при ВПЧ-ассоциированном раке позволяет предположить, что определение экспрессии циклина В1 имеет прогностическое значение и позволяет судить о наличии необратимых функциональных изменений в клетке на любых этапах онкологического процесса, хотя данное предположение и требует дальнейшего изучения.
Повышение экспрессии TERT происходит на поздних стадиях клеточной трансформации, и, вероятно, может свидетельствовать о необратимости малигнизации клетки. Повышение активности теломеразы может объясняться появлением свойства иммортализации, характерного для злокачественной трансформации. Вероятная роль ВПЧ в активации этого процесса дискутабельна: многие исследователи отмечают наличие корреляции между персистенцией ВПЧ и повышением экспрессии TERT, однако механизма взаимодействия до сих пор не предложено. Отмеченное одновременное повышение пролиферативной активности клетки и блокирование ключевых молекул апоптоза свидетельствует о том, что все вышеописанные механизмы действуют как синергисты на пути злокачественной трансформации клетки [2]. То же справедливо и для циклина В1, хотя взаимодействующие механизмы в этом случае другие. Циклин В1 участвует в регуляции процессов, происходящих на поздних стадиях клеточного деления. В частности, повышение экспрессии CCNB1 связывают с нарушением работы веретена деления и появлением анеуплоидии опухоли. Возможное прогностическое значение экспрессии циклина В1 как индикатора необратимости малигнизации клетки может найти
клиническое применение, однако чувствительность и специфичность данного маркера
требуют дальнейшей оценки.
Заключение
Полученные результаты по изменению экспрессии генов TERT и CCNB1 позволяют рассматривать их в качестве маркеров необратимых изменений эпителия шейки матки, отражающих два ключевых свойства злокачественного фенотипа: повышенную пролиферативную активность и иммортализацию. Список литературы
1. Боженко В.К., Ашрафян Л.А., Антонова И.Б. и др. Анализ экспрессии генов пролиферации и апоптоза при цервикальных и интраэпителиальных неоплазиях и раке шейки матки. 2011. Опухоли женской репродуктивной системы. № 4. С. 72-76.
2. Боженко В.К., Васкевич Е.Ф., Трофимов Д.Ю. и др. Анализ изменения профиля экспрессии генов при гиперпролиферативных заболеваниях шейки матки. Клиническая лабораторная диагностика. 2011. № 9. С. 21.
3. Харченко В.П., Кулинич Т.М., Лунин В.Г. и др. Цитотоксические свойства химерных пептидов, содержащих активные центры ингибиторов циклиновых киназ. Вопросы онкологии. 2007. Т. 53. № 4. С. 448-452.
4. Bjorck E., Ek S., Landgren O., et al. High expression of cyclin B1 predicts a favorable outcome in patients with follicular lymphoma. Blood. 2005. V. 105. No. 7. P. 2908-2915.
5. Bourmenskaya O., Shubina E., Trofimov D., et al. Host gene expression profiling of cervical smear is eligible for cancer risk evaluation. J Clin Pathol. 2013. V. 66. No. 4. P. 282285.
6. Cheng Y.M., Tsai C.C., Hsu Y.C. Sulforaphane, a Dietary Isothiocyanate, Induces G2/M Arrest in Cervical Cancer Cells through CyclinB1 Downregulation and GADD45P/CDC2 Association. Int J Mol Sci. 2016. V. 17. No. 9. E1530. doi: 10.3390/ijms17091530.
7. Cho N.H., Lim S.Y., Kim Y.T., et al. G2 checkpoint in uterine cervical cancer with HPV 16 E6 according to p53 polymorphism and its screening value. Gynecol Oncol. 2003. V. 90. No. 1. P. 15-22.
8. Costa C., Espinet B., Molina M.A., et al. Analysis of gene status in cervical dysplastic lesions and squamous cell carcinoma using tissue microarrays. Histol Histopathol. 2009. V. 24. No. 7. P. 821-829.
9. Donate L.E., Blasco M.A. Telomeres in cancer and ageing. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2011. V. 366. No. 1561. P. 76-84. doi: 10.1098/rstb.2010.0291.
10. Ersvœr E., Kildal W., Vlatkovic L., et al. Prognostic value of mitotic checkpoint protein BUB3, cyclin B1, and pituitary tumor-transforming 1 expression in prostate cancer. Mod Pathol. 2019. doi: 10.1038/s41379-019-0418-2.
11. Hashiguchi Y., Tsuda H., Nishimura S., et al. Relationship between HPV typing and the status of G2 cell cycle regulators in cervical neoplasia. Oncol Rep. 2004. V. 12. No. 3. P. 587591.
12. Kirkpatrick K.L., Mokbel K. The significance of human telomerase reverse transcriptase (hTERT) in cancer. Eur J Surg Oncol. 2001. V. 27. No 8. P. 754-760.
13. Liu B., Liu Y., Wang Y., et al. CyclinB1 deubiquitination by USP14 regulates cell cycle progression in breast cancer. Pathol Res Pract. 2019. V. 215. No. 10. Article ID. 152592. doi: 10.1016/j.prp.2019.152592.
14. Nagapoosanam A.L., Ganesan N., Umapathy D., et al. Knockdown of human telomerase reverse transcriptase induces apoptosis in cervical cancer cell line. Indian J Med Res. 2019. V. 149. No. 3. P. 345-353. doi: 10.4103/ijmr.IJMR_1676_16.
15. Panczyszyn A., Boniewska-Bernacka E., Gtqb G. Telomeres and Telomerase During Human Papillomavirus-Induced Carcinogenesis. Mol Diagn Ther. 2018. V. 22. No. 4. P. 421430. doi: 10.1007/s40291-018-0336-x.
16. Park A.M., Tsunoda I., Yoshie O. Heat shock protein 27 promotes cell cycle progression by down-regulating E2F transcription factor 4 and retinoblastoma family protein p130. J Biol Chem. 2018. V. 293. No. 41. P. 15815-15826. doi: 10.1074/jbc.RA118.003310.
17. Petrenko A.A., Korolenkova L.I., Skvortsov D.A., et al. Cervical intraepithelial neoplasia: Telomerase activity and splice pattern of hTERT mRNA. Biochimie. 2010. V. 92. No. 12. P. 1827-1831.
18. Ping Z.P., Zhu Y.L., Ratner E.S. Targeting Cyclin-Dependent Kinases for Treatment of Gynecologic Cancers. Front Oncol. 2018. V. 8. Article ID. 303. doi: 10.3389/fonc.2018.00303.
19. Saha B., Chaiwun B., Tsao-Wei D.D., et al. Telomerase and markers of cellular proliferation are associated with the progression of cervical intraepithelial neoplasia lesions. Int J Gynecol Pathol. 2007. V. 26. No. 3. P. 214-222.
20. Serrano M., Blasco M.A. Cancer and ageing: convergent and divergent mechanisms. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007. V. 8. No. 9. P. 715-722.
21. Siraj A.K., Bu R., Iqbal K. Telomerase reverse transcriptase promoter mutations in cancers derived from multiple organ sites among middle eastern population. Genomics. 2019. pii: S0888-7543(19)30404-5. doi: 10.1016/j.ygeno.2019.09.017.
22. Sonneborn J.S. Telomerase Biology Associations offer Keys to Cancer and Aging Therapeutics. Curr Aging Sci. 2019. doi: 10.2174/1874609812666190620124324.
23. Tomás-Loba A., Bernardes de Jesus B., Mato J.M., Blasco M.A. A metabolic signature predicts biological age in mice. Aging Cell. 2013. V. 12. No. 1. P. 93-101. doi: 10.1111/acel.12025.
24. Wang P.H., Chen G.D., Chang H., et al. High expression of human telomerase reverse transcriptase in high-grade intraepithelial neoplasia and carcinoma of uterine cervix and its correlation with human papillomavirus infection. Reprod Sci. 2007. V. 14. No. 4. P. 338-348.
25. Wu X., Peng L., Zhang Y., et al. Identification of Key Genes and Pathways in Cervical Cancer by Bioinformatics Analysis. Int J Med Sci. 2019. V. 16. No. 6. P. 800-812. doi: 10.7150/ijms.34172.
26. Zhao F.X., Sun R.F., Wang J.F., et al. Relationship among HPV16 infection and Expression of hTERT, p21waf1, Ki67 in cervical intraepithelial neoplasias and squamous cell carcinomas of cervix uteri. Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi. 2005. V. 19. No. 4. P. 370-374.
27. Zweier-Renn L.A., Riz I., Hawley T.S., Hawley R.G. The DN2 Myeloid-T (DN2mt) Progenitor is a Target Cell for Leukemic Transformation by the TLX1 Oncogene. J Bone Marrow Res. 2013. V. 1. pii: 105.
