CC BY
71
Сибирский медицинский журнал, 2008, № 4 © ЩУКИНА О.Г., ЮШКОВ Г.Г., ЧЕРНЯК Ю.И. - 2008
ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОЦЕССОВ ПЕРОКСИДАЦИИ В ОРГАНИЗМЕ ЖИВОТНЫХ ПРИ ПЕРОРАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА
О.Г. Щукина, Г.Г. Юшков, Ю.И. Черняк
(Ангарская государственная техническая академия, ректор — к.т.н., доц. А.В. Бадеников, кафедра ООС и РИПР, зав. —
д.м.н., проф. Г.П. Богачук)
Резюме. В результате проведенных биохимических исследований сыворотки крови и гомогенатов печени нелинейных крыс при пероральном введении дигидрокверцетина получены данные, свидетельствующие об изменениях показателей пероксидации.
Ключевые слова: дигидрокверцетин, малоновый диальдегид, восстановленный глутатион.
RESEARCH OF PEROXIDATION PROCESSES IN THE ORGANISM OF ANIMALS AT PERORAL DIHYDROQUERCETIN INJECTION
O.G. Shchukina, G.G. Yushkov, Y.I. Chernyak (Angarsk State Technical Academy)
As a result of the biochemical researches ofblood serum and liver homogenates of nonlinear rats at peroral dihydroquercetin injection, the data testifying the changes of peroxydation parameters are obtained.
Key words: dihydroquercetin, malonic dialdehyde, restored glutathione.
Вторая половина прошлого века была ознаменована появлением нового направления в науке — свободнорадикальной биологии и медицины [11], а появившаяся возможность лабораторного определения продуктов свободнорадикального окисления позволила обосновать [10] представления о природных антиоксидантах как регуляторах соответствующих реакциий в тканях, выступающих в качестве своеобразной ловушки свободных радикалов [2]. Специалисты в области клеточной патологии справедливо полагают, что одним из универсальных механизмов повреждения клеток является интенсификация перекисного окисления липидов [3], что и стимулировало поиск эффективных ан-тиоксидантных и антитоксических средств профилактики и лечения соответствующих состояний метаболизма, вплоть до экологически обусловленных [9]. При этом доказательная база строилась преимущественно на исследованиях in vitro [5,6] на примере природных флавоноидов, в том числе и дигидрокверцетина (ДКВ) из сибирской лиственницы [10].
Дигидрокверцетин является доминирующим компонентом биофлавоноидно-го комплекса диквертина.
Определяющим структурным признаком флавоноидных соединений служит углеродный скелет С6—С3—С6, включающий конденсированную систему двух колец — бензольного (А) и гетероциклического (С) — и фенильный заместитель (В) в ней. Основным классификационным признаком, по которому флавоноидные соединения подразделяются на группы внутри своего семейства, служит строение кислородсодержащего кольца С. В частности, по наличию или отсутствию двойной связи в кольце С различаются группы флавонов и флаванонов соответственно (рис. 1).
Флаваноны можно рассматривать как гидрированные производные флавонов. Широко известным представителем флавонов является кверцетин, а дигидрок-
Флаваноны (дигидро флавони)
Рис. 1. Базовые структуры.
верцетин относится к группе флаванонов (рис. 2).
В результате экспериментального фармакологического исследования установлено, что препарат «Диквер-тин», основным веществом которого является ДКВ, обладает капилляропротекторными и антиоксидантны-
Рис. 2. Структурные формулы важнейших представителей диквертина.
ми свойствами, сочетающимися с противовоспалительным, гастро- и гепатопротекторным, гиполипидемичес-ким и диуретическим действием [7].
В то же время опыт длительного применения флавоноидов для вышеупомянутых целей крайне скуден, что и определило необходимость проведения настоящих исследований.
Материалы и методы
Объектом исследования являлся образец ДКВ, полученный из лиственницы Сибирской и Гмелина и предос-
тавленный ООО «Сибирский кедр» (г. Саянск). Чистота образца была оценена методом ВЭЖХ и составила около 97%. Количественное определение ДКВ проводилось в трех образцах в этиловом спирте с концентрацией 0,8-1,1 мг/ мл на жидкостном хроматографе «Милихром А-02» (ЗАО «ЭкоНова», Новосибирск, Россия) с колонкой 75х2 мм, упакованной обращено-фазным сорбентом «Мис1ео8П, С18» и эффективностью не менее 5000 т.т (по пику хрезе-на, к = 10). В качестве элюэнта А использовали водный раствор трифторуксусной кислоты 0,1 М (ТФУ), в качестве элюента В — ацетонитрил с 0,1 М ТФУ. Образцы анализировали в режиме градиентного элюирования с увеличением доли органического растворителя в элюенте с 10 до 64% В за 9 мин разделения с последующей промывкой колонки 100% В в течение 3 мин при расходе элюента 0,2 мл/ мин. Применение градиентного элюирования позволило улучшить чувствительность метода и повысить разрешение пиков на хроматограмме. Элюируемые вещества детектировали при л = 292 нм. Содержание ДКВ в образцах рассчитывали по методу внешней стандартизации с использованием в качестве стандарта ГСО ДКВ (ООО «Фла-вир»). Содержание основного вещества в образцах ДКВ относительно ГСО составило 97, 96 и 98%.
Исследования проводились на 90 белых беспородных крысах-самцах массой 180-220 г. Животные были разделены на 5 групп по 6 крыс в каждой. ДКВ включали в суточный рацион опытных групп (группы 1-3) в течение трех месяцев в количестве, поддерживающем суточную дозу
0,086 (терапевтическая), 0,86 и 3 г/кг соответственно. В качестве группы сравнения использованы животные, получавшие в указанные сроки витамин Р (как зарегистрированное лекарственное средство из группы флавоноидов) в дозе 0,086 г/кг. Контрольную группу составили интакт-ные животные, содержавшиеся в аналогичных условиях на протяжении всего эксперимента. Обследование животных проводили спустя 1, 2 и 3 месяца после завершения затравки.
Результаты и обсуждение
В результате проведенных работ отмечена отчетливая реакция организма лабораторных животных на воздействие со стороны ряда звеньев обмена веществ: МДА, ГПЛ и АК (табл. 1). В динамике накопления ГПЛ можно отметить увеличение при минимальной дозе ДКВ (0,086 г/кг) по сравнению с контролем. Величины показателя при других дозах близки к контролю. На протяжении опыта изменение ГПЛ происходило не только линейно, но и параболически.
Изменение концентрации малонового диальдегида (МДА) происходило волнообразно. В начале опыта все дозы, включая минимальные, были значительно удалены от контроля.
Через два месяца все дозы оказались ниже контроля. Через три месяца значение МДА при наименьшей дозе ДКВ и промежуточной дозе ДКВ приблизилось к контролю.
Наблюдается различие в содержании АК — увеличение после первого месяца введения, как ДКВ, так и рутина, по отношению к контролю. Затем наблюдается их выравнивание, и к третьему месяцу в группах с промежуточной дозой и токсической дозой значения анализируемых показателей совпадают с контрольной группой и группой, в которой вводился рутин.
Как показали исследования, содержание 08Н через месяц было ниже, чем у контрольной группы.
Через два месяца последовали изменения: токсичес-
Таблица 1
Изменение анализируемых показателей защитной системы организма животных (M±m)
Срок Группа Показатели
GSH мкмоль/г MДA нмоль/г ГПЛ ед.опт.пл/г AK мкмоль/л
1 месяц контроль 5,88+0,31 37,05+0,98 40,37+0,97 28,85+1,35
С, = 0,086 г/кг 4,84+0,19** 47,05+5,43* 43,00+2,30* 41,41+0,84**
С2 = 0,86 г/кг 4,99+0,41* 50,38+4,94** 43,93+2,94* 36,62+2,00**
С32 = 3 г/кг 5,33+0,37* 53,21+4,49** 42,87+3,34* 37,66+1,91**
С, (вит Р) 4,26+0,35** 44,74+3,83* 42,17+0,91* 34,51+2,25**
2 месяц контроль 6,45+0,73 57,95+1,34 50,17+4,85 25,08+0,93
С1 = 0,086 г/кг 5,78+0,42* 49,49+1,87** 55,50+3,46* 27,05+0,92*
С2 = 0,86 г/кг 6,81+0,28* 49,87+3,54* 54,10+3,01* 25,74+0,46*
С32 = 3 г/кг 7,04+0,27* 47,44+2,40** 51,17+5,33* 25,30+0,80*
С43 (вит Р) 5,59+0,34* 45,51+3,66** 57,77+1,95* 27,26+0,75**
3 месяц контроль 5,36+0,78 57,31+1,46 57,43+0,86 28,39+0,36
С = 0,086 г/кг 4,35+0,23** 60,77+3,99* 62,60+4,19* 35,77+0,36**
С21 = 0,86 г/кг 4,64+0,28* 58,33+4,59* 56,43+3,81* 28,39+1,14*
С32 = 3 г/кг 4,41+0,20** 49,87+1,70** 57,33+1,23* 27,78+1,61*
С43 (вит Р) 4,48+0,12** 52,69+3,68* 57,00+0,96* 28,49+0,23*
Примечание'. * - отличия значимы при р < 0,05 (по Стьюденту); **- отличия значимы при р < 0,05 (по Манну-Уитни).
Усыпление животных осуществляли декапитацией согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденным приказом M3 СССР от 12.08.1977 г.
^н^трацию гидроперекисей липидов (ГПЛ), малонового диальдегида ^ДА), аскорбиновой кислоты (А^ определяли в крови [8], восстановленного глутатиона (GSH) — в гомогенате печени лабораторных животных [12].
Статистическую обработку проводили с помощью программ ?Microsoft Excel? и «Biostat» с использованием параметрического критерия (t-критерия Стьюдента) и непараметрического (U-критерия Mанна-Уитни) [1,4], достоверными считались различия при р<0,05.
кая доза и промежуточная превысили контроль, что может быть связано с уменьшением активности фермента глутатионпероксидазы. Через три месяца наименьшее содержание 08Н было при терапевтической дозе 0,086 г/кг.
Таким образом, отмечена отчетливая реакция организма лабораторных животных на воздействие со стороны ряда звеньев обмена веществ: МДА, ГПЛ, 08Н и АК, что, однако, можно отнести к парадоксальным эффектам, не свойственным антиоксидантам. Гипотети-
чески можно предположить, что при отсутствии в организме действующего экзотоксиканта ДКВ проявляет собственные токсические свойства, особенно в состоянии высочайшей химической чистоты (ранее такой продукт не исследовался).
ЛИТЕРАТУРА
1. Большев Л.Н., Смирнов Н.В. Таблицы математической статистики. — 3-е изд. — М.: Наука, 1983. — 416 с.
2. Бутятян Н.Д., Герасимова О.А., Сахарова Т. С. и др. Природные антиоксиданты — как гепатопротекторы // Эксп. и хим. фармакология. — 1999. — Т 62, № 2. — С.64-57.
3. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. — М.: Медицина, 1972. - 252 с.
4. Гланц С. Медико-биологическая статистика. — М.: Практика, 1999. - 459 с.
5. Кравченко Л.В., Морозов С.В., Авреньева Л.И. и др. Оценка антиоксидантной и антитоксической эффективности природного флавоноида дигидрокверцетина // Токсикологический вестник. — 2005. — № 1. — С.14-20.
6. Кравченко Л.В., Морозов С.В., Тутельян В.А. Влияние флавоноидов на резистентность микросом к повреждающему действию ПОЛ in vitro и ex vivo // Бюлл. эксп. биол. и медицины. — 2003. — Т136, № 12. — С.648-652.
Адрес для переписки:
665835, Иркутская обл., г. Ангарск, ул. Чайковского, 60.
Не исключено, что и терапевтическая доза, рекомендованная по результатам изучения других образцов ДКВ, в данном случае несколько завышена. Исследования продолжаются.
7. ПлотниковМ.Б., Тюкавкина Н.А., Плотникова Т.М. Лекарственные препараты на основе диквертина. — Томск: Изд-во Том. Ун-та, 2005. — 228 с.
8. Портянная Н.И., Осипенко Б.Г., Москадынова П.А. и др. Биохимические исследования в токсикологическом эксперименте / Подред. М.Ф. Савченкова, В.М. Пруса-кова. — Иркутск: Изд-во Иркутского института, 1990. — 216 с.
9. Теселкин Ю. О., Жамбалова Б.А., Бабенкова И.В. и др. Ан-тиоксидантные свойства дигидрокверцетина // Биофизика. — 1996. — Т 41, № 1. — С.620-623.
10. Bernheim F. Biochemical implications of pro-oxidants and antioxidants // Radiation Res. — 1963. — No 3. — Suppl. — С.17-32.
11. Harman D. The free — radical theory of aging // Free Radical in Bior. — 1982. — № 5. — P.256-275.
12. Sedlak J, Lindsay R.H. Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellmams-reagent // Analyt. Biochem. — 1968. — Vol. 25. — P. 192-205.
© НЕТЕСИН Е.С., ГОЛУБ И.Е., КУЗНЕЦОВ С.М. - 2008
ВЛИЯНИЕ ИНФУЗИОННОЙ ТЕРАПИИ НА РАЗВИТИЕ ОТЕКА ГОЛОВНОГО МОЗГА
Е.С. Нетесин, И.Е. Голуб, С.М. Кузнецов
(Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра анестезиологии и реаниматологии, зав. — д.м.н., проф. И.Е. Голуб, кафедра факультетской хирургии, зав. — д.м.н., проф.
А.В. Щербатых)
Резюме. Приведены данные о частоте встречаемости отека головного мозга у больных, находящихся на лечении в отделении анестезиологии и реанимации, проведен анализ влияния количественного и качественного состава инфузи-онно-трансфузионной терапии на частоту развития отека головного мозга.
Ключевые слова: инфузионная терапия, отек головного мозга.
INFLUENCE OF INFUSION THERAPY ON THE DEVELOPMENT OF HYPOSTASIS OF
THE BRAIN
J.S. Netesin, I.E. Golub, S.M. Kuznetsov (Irkutsk State Medical University)
The data about frequency of occurrence of a hypostasis of a brain in the patients who received the on treatment in the Department of anesthesiology and reanimation are cited, the analysis of influence of quantitative and qualitative composition of infusion therapy on frequency of development of a hypostasis of head brain has been conducted.
Key words: infusion therapy, a hypostasis of a brain.
Одним из основных видов интенсивной терапии в отделениях анестезиологии и реанимации является ин-фузионная терапия, которая в силу своей высокой значимости и эффективности назначается всем больным, находящимся в критическом состоянии. Инфузионная терапия является серьезным инструментом анестезио-лога-реаниматолога, и может дать оптимальный лечебный эффект только при соблюдении двух непременных условий. Врач должен четко знать цель применения препарата и иметь представление о механизме его действия. Рациональная инфузионная терапия — самый важный аспект поддержания функции гемодинамики у реанимационных больных [2,4,6].
Основная цель проводимой инфузионной терапии
в критических ситуациях — поддержание адекватного сердечного выброса для обеспечения перфузии тканей при максимально низком гидростатическом давлении в просвете капилляров. Это необходимо для того, чтобы предупредить утечку жидкости в интерстиций.
Однако, кроме выраженных положительных эффектов (волемический, реологический, изоосмолярный, гипоосмолярный, гиперосмолярный) инфузионная терапия при нерациональном использовании может оказывать неблагоприятное воздействие анафилактоидных реакций, отрицательное воздействие активного вещества инфузионной среды на органы выведения и систему гемостаза, депрессивного влияния на иммунную систему и систему моноцитарных макрофагов или на
