CC BY
618
Для корреспонденции
Серба Елена Михайловна - профессор РАН, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник отдела биотехнологии ферментов, дрожжей, органических кислот и биологически активных добавок ВНИИ пищевой биотехнологии - филиала ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии»
Адрес: 111033, г. Москва, ул. Самокатная, д. 4-Б Телефон: (495) 362-46-78 E-mail: serbae@mail.ru
Серба Е.М., Римарева Л.В., Курбатова Е.И., Волкова Г.С., Поляков В.А., Варламов В.П.
Исследование процесса ферментативного гидролиза биомассы дрожжей для создания пищевых ингредиентов с заданным фракционным составом белковых веществ
ВНИИ пищевой биотехнологии - филиал ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», Москва
Federal Research Centre of Nutrition, Biotechnology and Food Safety (Branch) - Russian Research Institute of Food Biotechnology, Moscow
С использованием ферментативных систем (ФС) проведена направленная биокаталитическая деструкция субклеточных структур дрожжевой биомассы Saccharomyces сетеу1з1ае для получения продуктов заданного структурно-фракционного состава. В состав ФС-1 входили ферменты, катализирующие гидролиз полисахаридов клеточных стенок дрожжей. Ферменты дозировали из расчета: в-глюканазу - 300 ед в-ГкС/г дрожжей, маннаназу - 28,9 ед МС/г дрожжей. ФС-2 наряду с энзиматической композицией ФС-1 дополнительно содержала протеолитический комплекс, который включал ферменты бактериального происхождения, представляющие собой нейтральные, сериновые и металлозависимые протеиназы (в дозировке 2 ед ПС/г дрожжей). ФС-3 состояла из ферментов в-глюканазного, маннанолитического, протеолитического действия и была дополнительно усилена повышенной дозировкой протеиназ и пептидаз грибного происхождения (10 ед ПС/г дрожжей) для глубокого гидролиза белковых веществ протоплазмы дрожжевой клетки до низкомолекулярных пептидов и свободных аминокислот. Проиллюстрировано действие ферментативных систем различной субстратной специфичности на степень разрушения субклеточных структур дрожжей посредством электронной
Для цитирования: Серба Е.М., Римарева Л.В., Курбатова Е.И., Волкова Г.С., Поляков В.А., Варламов В.П. Исследование процесса ферментативного гидролиза биомассы дрожжей для создания пищевых ингредиентов с заданным фракционным составом белковых веществ // Вопр. питания. 2017. Т. 86. № 2. С. 76-83. Статья поступила в редакцию 23.11.2016. Принята в печать 27.02.2017.
For citation: Serba E.M., Rimareva L.V., Kurbatova E.I., Volkova G.S., Polyakov V.A., Varlamov V.P. The study of the process of enzymatic hydrolysis of yeast biomass to generate food ingredients with the specified fractional composition of protein substances. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2017; 86 (2): 76-83. (in Russian)
Received 23.11.2016. Accepted for publication 27.02.2017.
The study of the process
of enzymatic hydrolysis
of yeast biomass to generate
food ingredients
with the specified fractional
composition of protein
substances
Serba E.M., Rimareva L.V., Kurbatova E.I., Volkova G.S., Polyakov V.A., Varlamov V.P.
микроскопии. Полученные продукты деструкции имели различный фракционный состав и структурные особенности. Результаты исследований показали, что обработка дрожжей ФС-1 приводила к деформации клеточных стенок, но не влияла на состав белковых фракций, представленных пептидами с различной молекулярной массой (20-60 кДа) и характерных для исходного материала. Использование ФС-2 обеспечило более глубокую деструкцию белково-полиса-харидного матрикса клеточных стенок и частичный гидролиз белков с образованием растворимых белковых составляющих с молекулярной массой <14 кДа. Обработка дрожжевых клеток ФС-3 позволила получить белково-аминокислот-ные композиции с преобладающим содержанием (89%) свободных аминокислот и коротких пептидов с молекулярной массой до 300 Да. Показана эффективность направленной деструкции субклеточных структур Saccharomyces сетеу1з1ае с получением ферментолизатов биомассы с заданным фракционным составом белковых веществ для производства пищевых ингредиентов с целевым функциональным воздействием.
Ключевые слова: дрожжевая биомасса, ферментативный гидролиз, пептиды, аминокислоты, ферменты, пищевые ингредиенты
With the use of enzyme systems (ES) the directed biocatalytic destruction of subcellular structures of the yeast biomass Saccharomyces cerevisiae has been conducted for obtaining products of the specified structural-fractional composition. The composition of ES-1 included the enzymes catalyzing the hydrolysis of cell wall polysaccharides of yeast. Enzymes were dosed out at the rate of fi-glucanase - 300 units of fi-GcS/g of yeast, mannanase - 28.9 units of MS/g of yeast. ES-2, along with the enzymatic composition of ES-1, also contained a proteolytic complex, which included enzymes of bacterial origin, which were neutral, serine and metal-depended proteases (in a dosage of 2 units of PS/g of yeast). ES-3 consisted of the enzymes with fi-glucanase, mannanase, proteolytic activities and was further reinforced by high dose of proteases of fungal origin (10 units PS/g of yeast) for the implementation of deep hydrolysis of protein substances of yeast cell protoplasm to low molecular weight peptides and free amino acids. The action of enzymatic systems with different substrate specificity on the degree of destruction of subcellular structures of yeast was illustrated by electron microscopy. The resulting degradation products had different fractional composition and structural features. The results showed that ES-1 treatment of yeast led to deformation of the cell walls, but did not affect the composition of the protein fractions, represented by peptides with different molecular weight (20-60 kDa) that were characteristic for the starting material. The use of ES-2 has provided a deeper degradation of the protein-polysaccharide matrix of the cell walls and partial hydrolysis of proteins with the formation of soluble protein components with molecular weight less than 14 kDa. ES-3 treatment of yeast cells allowed to obtain composition with predominant content (89%) of free amino acids and short peptides with molecular weight up to 300 Da. The efficacy of targeted destruction of subcellular structures of Saccharomyces cerevisiae with getting of fermentation biomass with the specified fractional composition of protein substances for the production of food ingredients with special functional effects has been shown.
Keywords: yeast biomass, enzymatic hydrolysis, peptides, amino acids, enzymes, food ingredients
Важные открытия этого столетия в области медицины, биологии, химии повлекли за собой использование в пищевых рецептурах ингредиентов, активных с точки зрения физиологии питания человека. По мере расшифровки химического состава продовольственного сырья и пищевых продуктов и выявления корреляционных зависимостей между содержанием в них отдельных микронутриентов и биологически активных веществ, а также состоянием здоровья человека, был сформулирован новый взгляд на питание, способствующий поддержанию здоровья, снижению риска возникновения заболеваний [1-3]. При оценке функциональных пищевых продуктов наряду с пищевой ценностью осо-
бое внимание уделяется физиологическому действию ингредиентов, входящих в их состав [4-6]. Одним из перспективных способов обеспечения биологической ценности функциональных пищевых продуктов является использование натуральных составляющих пищи микробного происхождения [7-10]. Работами последних лет показано, что применение регулируемого биокатализа полимеров микробной клетки позволяет направленно модифицировать ее структуру и получать биологически активные композиции с заданным составом для создания функциональных пищевых продуктов, сбалансированных по содержанию углеводов, незаменимых аминокислот, биологически активных пептидов, витаминов
и микроэлементов [11-15]. Актуальным в настоящее время является обеспечение качества и контроля получаемых гидролизатов.
Цель данной работы состояла в исследовании процесса направленной деструкции пищевых дрожжей ЗассЬаготусеэ сегеу1э1ае ферментными композициями и получения ферментолизатов с заданным фракционным составом белковых веществ, предназначенных для производства пищевых ингредиентов с целевым функциональным воздействием.
Материал и методы
Проведена направленная биокаталитическая деструкция ферментативными системами (ФС) субклеточных структур дрожжевой биомассы ЗассЬаготусеэ сегеу1э1ае У-3167 (коллекция ВНИИПБТ). Определение активности ферментных препаратов проводили согласно национальным стандартам [16]. Длительность ферментативной обработки биомассы составила 6 ч при 50 °С. В состав ФС-1 входили ферменты, катализирующие деструкцию полисахаридов клеточных стенок (КС) дрожжей. Ферменты дозировали из расчета: р-глюканазу -300 ед р-глюканазной активности (р-ГкС)/г, маннаназу -28,9 ед маннаназной активности (МС)/г дрожжей. ФС-2 дополнительно к ФС-1 содержала протеолитический комплекс, который включал ферменты бактериального происхождения, в основном представляющие нейтральные сериновые и металлозависимые протеиназы, катализирующие частичный гидролиз белков до пептидов с различной молекулярной массой [в дозировке 2 ед протеолитической активности (ПС)/г дрожжей]. ФС-3 содержала ферменты ФС-1 и ФС-2, протеоли-тический комплекс был дополнительно усилен повышенной дозировкой протеиназ и пептидаз грибного
происхождения (10 ед ПС/г дрожжей), катализирующих глубокий гидролиз белковых веществ протоплазмы дрожжевой клетки до низкомолекулярных пептидов и свободных аминокислот.
Электронно-микроскопические исследования дрожжевых клеток Saccharomyces cerevisiae Y-3167 и степени их ферментативной деструкции, размеров и морфологии проводили с применением методов атомно-силовой, сканирующей электронной микроскопии:
- на приборе ИНТЕГРА Прима («НТ-МДТ», РФ) в полуконтактном режиме (рис. 4 и 6, см. цв. вклейку). Пробы осаждали и высушивали на подложках из све-жесколотой слюды, измерения проводили на воздухе, для получения достоверных результатов для каждого образца использовали результаты серии измерений;
- на электронном микроскопе JEOL 1200 СХ II («JEOL Ltd.», Япония). Для микроскопирования срезы готовили на ультрамикротоме LKB III («LKB», Австрия). Полутонкие срезы докрашивали толуидиновым синим и просматривали в световом микроскопе «Polivar» («Reichert», Австрия). Ультратонкие срезы докрашивали цитратом свинца, просматривали и фотографировали в электронном микроскопе JEOL (рис. 1Б, 2А, 3Б и 5);
- на сканирующем электронном микроскопе Hitachi ТМ-3000 («Hitachi», Япония) в режиме низкого вакуума микроскопирование проводили при увеличении до 30 000х и разрешении до 10 нм (рис. 1А, 2Б и 3А).
Масс-спектрометрический анализ низкомолекулярных белковых фракций (с молекулярной массой <1000 Да) осуществляли на квадрупольной масс-спект-рометрической системе для высокоэффективной жидкостной хроматографии «Agilent 6120» («Agilent», США), для определения степени протеолиза белковых веществ дрожжевой биомассы использовали метод электрофореза в полиакриламидном геле [17, 18].
Рис. 1. Результаты электронной микроскопии исходных дрожжевых клеток (контрольная группа клеток, не обработанных ферментами): А - данные сканирующей электронной микроскопии; Б - срез клетки (увеличение х25 000): 1 - ядро, 2 - ядерная мембрана, 3 - цито-плазматическая мембрана, 4 - клеточная стенка, 5 - митохондрия, 6 - липидные включения
Рис. 2. Результаты электронной микроскопии дрожжевых клеток после гидролиза ферментативной системой 1 - I стадия ферментативного катализа (1, 2, 3, 4 - описание в тексте): А - срез клетки (увеличение х25 000); Б - данные сканирующей электронной микроскопии
Результаты и обсуждение
Исходные дрожжевые клетки (контрольная группа клеток, не обработанных ферментами) при электронном микроскопировании на сканирующем микроскопе были примерно одинакового размера, округло-овальной, вытянутой овальной, реже неправильной формы (см. рис. 1А). Встречались почкующиеся клетки. Клеточная оболочка, преимущественно одинаковой толщины, имела неравномерную плотность, в отдельных клетках отмечалось некоторое утолщение стенок. При микроскопировании ультратонких срезов клетки видно, что оболочка состоит из трех слоев: более плотных внутреннего и наружного, а также среднего менее плотного светлого слоя (см. рис. 1Б).
Основными структурообразующими полисахаридами клеточной стенки (КС) являются р-глюканы и маннаны, находящиеся приблизительно в равных количествах и в сумме составляющие порядка 60-90% сухой массы КС, оставшаяся часть приходится на долю белка, хитина и липидов [19, 20].
В связи с этим I стадию ферментолиза дрожжей осуществляли путем каталитической деструкции КС ФС-1, содержащей ферменты глюкано- и маннанолитического действия (рис. 2).
Биокаталитическое воздействие ФС-1 привело к деформации дрожжевой клетки и нарушению структуры КС в результате частичной деструкции полисахаридов оболочки. Исходное ультраструктурное строение клеток на 1-й стадии ферментолиза изменялось достаточно существенно. В большинстве клеток отмечено образование щелевидных пространств в цито-плазматической мембране между стенкой и цитоплазмой (см. рис. 2А, 1), при этом мембрана приобретала более расслоенный вид. В одних клетках она была утолщена, состояла из темных отдельных коротких волоконец, плотно прилегающих к цитоплазме (рис. 2А, 2).
В других стенка имела зернистое строение, не разделялась на слои, но между ней и цитоплазмой также имелись щелевидные пространства различной толщины (см. рис. 2А, 3). В результате каталитического воздействия р-глюканазы и маннаназы на полимеры КС образовывались каналы, способствующие увеличению проницаемости внутренней мембраны (см. рис. 2А, 4), при этом клетка теряла свою форму (см. рис. 2Б).
С целью повышения степени деструкции клеточных стенок и учитывая, что полисахариды находятся в комплексе с белками, на II стадии ферментолиза в состав ФС-2 вводили протеолитические ферменты, представленные протеиназами, катализирующими частичный гидролиз белка КС, так как важно было не разрушить полимерную структуру белковых веществ протоплазмы. Этот этап ферментолиза предусмотрен в технологии получения белковых обогатителей пищи на основе дрожжевой биомассы [11, 19, 21].
В результате биокаталитической деструкции КС дрожжей происходило частичное высвобождение де-полимеризированных субклеточных структур, которые имели вид отдельных фрагментов различной величины и формы (рис. 3А), а внутриклеточные мембраны приобретали более «рыхлую» структуру (рис. 3Б).
На рис. 4 (см. цв. вклейку), полученном с помощью атомно-силовой микроскопии, видно присутствие как целых клеток, так и разрушенных фрагментов клетки, образовавшихся на II стадии биокатализа КС дрожжей ферментами протеолитического и гемицеллюлазного действия.
Таким образом, в дрожжевых клетках на II стадии ферментолиза наибольшие изменения касались КС. На рис. 4 (см. цв. вклейку) хорошо видны результаты ферментативного гидролиза КС дрожжей с выделением внутриклеточных компонентов. В оригинальных работах авторов I и II этапы ферментолиза предусмотрены в технологиях получения белковых и белково-амино-
кислотных обогатителей пищи на основе дрожжевой биомассы, а также в технологиях получения на основе клеточных стенок энтеросорбента [7, 14, 22].
Известно, что антимикробные и иммуногенные свойства проявляют низкомолекулярные пептиды с молекулярными массами менее 1000 Да при условии их превалирования в белковой фракции гидролизата [2, 17, 23]. Для получения продуктов, обогащенных белково-ами-нокислотной составляющей с преобладающим содержанием свободных аминокислот и коротких пептидов, была использована ФС-3, включающая не только комплекс ферментов, гидролизующих КС, но и протеиназы и пептидазы, осуществляющие глубокое разрушение белковых веществ протоплазмы. В дрожжевых клетках на III стадии ферментолиза посредством ФС-3 были наиболее выражены явления деструкции цитоплазмы (рис. 5). В большинстве клеток сохранились лишь отдельные ее фрагменты и окружающая клетку стенка. Органоиды в сохранившихся участках цитоплазмы практически отсутствовали (см. рис. 5А, Б).
В результате глубокой ферментативной деструкции субклеточных структур под действием комплекса про-теиназ и пептидаз, а также ферментов, оказывающих лизирующее воздействие на КС, получены ферменто-лизаты дрожжевой биомассы с размерами деполиме-ризованных фрагментов полисахаридов КС и белковых веществ протоплазмы от 10 до 250 нм (рис. 6, см. цв. вклейку).
Электрофоретические исследования дрожжевой биомассы после обработки клеточных стенок ферментами ФС-1 показали присутствие белковых фракций с различной молекулярной массой (20-60 кДа), характерных для исходного материала (рис. 7, см. цв. вклейку). Использование ФС-2 способствовало более глубокой деструкции белково-полисахаридного матрикса КС и частичному гидролизу белков с образованием растворимых белковых составляющих с молекулярной массой менее 14 кДа.
Обработка дрожжевых клеток ФС-3 привела к полной деполимеризации белков, что позволило получить белково-аминокислотные препараты с преобладающим содержанием свободных аминокислот и коротких пептидов от 10 до 250 нм (см. рис. 6, 7, см. цв. вклейку).
Таким образом, с помощью электронной микроскопии проиллюстрировано влияние ферментативных систем различной субстратной специфичности на степень деструкции субклеточных структур пищевых дрожжей ЗассЬаготусвэ свгву1э1а.
Результаты масс-спектрометрического анализа белковых фракций показали присутствие в ферментоли-зате 89% низкомолекулярных веществ с молекулярной массой менее 300 Да (см. таблицу).
Медико-биологические исследования выявили наличие у ферментолизатов дрожжевой биомассы ряда антиоксидантных эффектов, выраженных в нормализации уровня активности глутатион-зависимого звена в плазме крови перепелов, подвергнутых окислительному стрессу в результате космического излучения [2, 23]. По-видимому, содержащиеся в препарате растворимые биологически активные вещества достаточно легко преодолевают гематоэнцефалический барьер и всасываются в кровь, а затем вступают в биохимические процессы в организме, нормализуя систему клеточного и гуморального иммунитета, и проявляют антиоксидантные свойства. Проведенные исследования показали, что ферментолизаты дрожжевой биомассы в связи с высокой степенью гидролиза белков протоплазмы клеток, а также глубокой деполимеризацией полисахаридов КС обладают высокой усвояемостью, способствуют нормализации обмена веществ человека, восстановлению работоспособности, оказывают общеукрепляющее, иммуномодулирующее и антиоксидант-ное действие [2, 22, 23]. Исследования функциональных свойств полученных ферментолизатов микробной биомассы под действием ФС-2 и ФС-3 выявили их селек-
TM3000_0074 2012.04.25 1 5:10 AL D9.4 x1.8k 50 um
А Б
Рис. 3. Результаты электронной микроскопии разрушения дрожжевых клеток после гидролиза ферментативной системой 2 - II стадия ферментативного катализа: А - деструкция клеточных стенок; Б - «рыхлость» внутриклеточной мембраны
мкм 14
12
мкм 0,8 0
мкм
0 0
0 0
Рис. 4. Результаты атомно-силовой микроскопии дрожжевых клеток после гидролиза ферментативной системой 2 - II стадия ферментативного катализа: А - с выделением внутриклеточных компонентов; Б - с полным разрушением дрожжевой клетки
мкм мкм Б мкм мкм
35 35
600
200
30 30
500
25 25
400 150
20 20
300 100
15 15
10 238 10
50
5 100 5
0 »1 0 0
Рис. 6. Результаты атомно-силовой микроскопии ферментолизатов дрожжевой биомассы с размерами деполимеризованных фрагментов полисахаридов клеточных стенок и белковых веществ протоплазмы: А - структурные фрагменты клетки до 600 нм; Б - структурные фрагменты клетки до 200 нм
Мол. масса,
ФС-1 ФС-2 ФС-3 Маркеры кда
97,4
66,2
45,0
31,4
21,5 14,4
Рис. 7. Фракционный состав белков ферментолизатов дрожжевой биомассы, обработанной ферментативными системами (ФС) с различной субстратной специфичностью
&ESCMID
XIX
МАКМАХ
АСМАС
Москва
17-19 мая -201 7
МЕЖДУНАРОДНЫЙ КОНГРЕСС
ПО АНТИМИКРОБНОЙ
ГК «Космос», проспект Мира, 150 (ст. м. ВДНХ)
Министерство здравоохранения Российской Федерации Межрегиональная ассоциация по клинической микробиологии и антимикробной химиотерапии (МАКМАХ) Европейское общество по клинической микробиологии и инфекционным болезням (ЕБСМЮ)
Международный союз за разумное применение антибиотиков (APUA) Международное общество по химиотерапии (ISC) НИИ антимикробной химиотерапии (НИИАХ)
ФГБОУ ВО «Смоленский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Секретариат
214019, Смоленск, а/я 5
Тел.: (4812) 45 06 02, 45 06 03
Факс: (4812) 45 06 12 (123)
Эл. почта: conference@antibiotic.ru
www.antibiotic.ru
Рис. 5. Результаты электронной микроскопии разрушения дрожжевых клеток после гидролиза ферментативной системой 3 - III стадия ферментативного катализа: А - фрагменты клеточных стенок; Б - органоиды в сохранившихся участках цитоплазмы
Сравнение результатов ферментативной деструкции биополимеров микробной биомассы
Показатель Ферментативные системы
ФС-1 ФС-2 ФС-3
Состав ферментов р-Глюканаза и маннаназа р-Глюканаза, маннаназа, протеиназы р-Глюканаза, маннаназа, протеиназы, пептидазы
Степень деструкции Деструкция полисахаридного комплекса КС дрожжей Глубокая деструкция белково-поли-сахаридного матрикса КС и частичная деструкция белковых веществ Глубокая деструкция белковых веществ протоплазмы до низкомолекулярных пептидов и свободных аминокислот
Фракционный состав белковых веществ, % От 20 до 60 кДа - 100 Более 1000 Да - 75; 300-1000 Да - 22; До 300 Да - 3 300-1000 Да - 11; До 300 Да - 89
Область применения биопрепаратов 1. Энтеросорбенты, обладающие селективной сорбционной способностью. 2. Белковые обогатители пищи Белково-аминокислотные добавки и обогатители пищи Биологически активные добавки с функциональными свойствами (антиоксидантными, иммуномодули-рующими и антиканцерогенными)
тивную цитотоксичность по отношению к онкоклеткам, при этом исходные клетки не обладали антиканцерогенной способностью [24].
По результатам собственных исследований и анализа источников литературы [1, 3, 7, 10, 11, 16, 23, 24] дана оценка действия ферментативных систем различной субстратной специфичности на степень деструкции субклеточных структур дрожжей и показана перспективность использования гидролизатов, обладающих различной биологической активностью, для создания функциональных компонентов с заданными структурно-функциональными свойствами (см. таблицу).
Таким образом, в результате использования современного научно-методического подхода обоснована
эффективность направленной ферментативной деструкции пищевых дрожжей Sacchaгomycвs cвгвvisia с получением биопрепаратов с заданным фракционным составом белковых веществ, предназначенных для производства пищевых ингредиентов с целевым функциональным эффектом. Исследованный биотехнологический процесс перспективен для дальнейшего использования в технологиях конверсии микробных субстратов в структурные фрагменты с различной биологической активностью.
Исследования выполнены при финансовой поддержке гранта Российского научного фонда (проект № 16-16-00104).
Сведения об авторах
Серба Елена Михайловна - профессор РАН, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник отдела биотехнологии ферментов, дрожжей, органических кислот и биологически активных добавок ВНИИ пищевой биотехнологии - филиала ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва) E-mail: serbae@mail.ru
Римарева Любовь Вячеславовна - академик РАН, доктор технических наук, профессор, заместитель директора по научной работе ВНИИ пищевой биотехнологии - филиала ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва) E-mail: Lrimareva@mail.ru
Курбатова Елена Ивановна - кандидат технических наук, ведущий научный сотрудник отдела биотехнологии ферментов, дрожжей, органических кислот и биологически активных добавок ВНИИ пищевой биотехнологии - филиала ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва) E-mail: elena_kurbatova@list.ru
Волкова Галина Сергеевна - кандидат технических наук, заведующая лабораторией отдела биотехнологии ферментов, дрожжей, органических кислот и биологически активных добавок ВНИИ пищевой биотехнологии - филиала ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва) E-mail: galina.volkova@bk.ru
Поляков Виктор Антонович - академик РАН, доктор технических наук, профессор, директор ВНИИ пищевой биотехнологии - филиала ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва) E-mail: 4953624495@mail.ru
Варламов Валерий Петрович - доктор химических наук, профессор, заведующий лабораторией инженерии биополимеров ФГУ «ФИЦ Биотехнологии» РАН (Москва) E-mail: varlamov@biengi.ac.ru
Литература
1. Покровский А.А. Роль биохимии в развитии науки о питании. М. : Наука. 1974. 127 с.
2. Diplock А. Т., Charleud J.L., Crozier-Willi G. et al. Functional food 15. science and defence against reactive oxidative species // Br. J. Nutr. 1998. Vol. 80, suppl. 1. P. 77-112.
3. Verschuren P.M. Functional Foods: Scientific and Global Perspec- 16. tives (Summary Report) // Br. J. Nutr. 2002. Vol. 88, suppl. 2.
P. 125-130.
4. Тутельян В.А., Вялков А.И., Разумов А.Н. и др. Научные основы здорового питания. М. : Панорама, 2010. 816 с. 17.
5. Шендеров Б.А. Функциональное питание и его роль в профилактике метаболического синдрома. М. : ДеЛи принт. 2008. 320 с.
6. Roberfroid M.B. Global view on functional foods: European perspectives // Br. J. Nutr. 2002. Vol. 88, suppl. 2. P. 133-138. 18.
7. Римарева Л.В., Оверченко М.Б., Серба Е.М., Орлова Е.В. Медико-биологические и биотехнологические аспекты создания продукции геродиетического питания // Пищ. пром-сть. 2009. № 3. С. 29-30.
8. Самсонов М.А. Концепция сбалансированного питания и ее 19. значение в изучении механизма лечебного действия пищи // Вопр. питания. 2001. Т. 70, № 5. С. 3-9.
9. Diplock A.T., Aggett P.J., Ashwell M. et al. Scientific concepts
of functional foods in Europe, consensus document // FF-27-de98. 20. Brussels : ILSI Europe, 1998. P. 17-79.
10. Yi D., Youg P., Wenkui L. Chinese Functional Food. Beijing : New 21. World Press, 1999. P. 19-20.
11. Римарева Л.В., Курбатова Е.И., Фурсова Н.А. и др. Биотехнологические аспекты создания пищевых добавок биокоррегиру-ющего действия на основе микробной биомассы // Хранение
и переработка сельхозсырья. 2011. № 2. С. 45-47. 22.
12. Jaehrig S. C., Rohn S., Kroh L. W. et al. In vitro potential antioxidant activity of (1-3),(1-6)-p-D-glucan and protein fractions from Sac- 23. charomyces cerevisiae cell walls // Agric. Food Chem. 2007. Vol. 55,
N 12. P. 4710-4716.
13. Mallick P., Akunna J.C., Walker G.M. Anaerobic digestion of distillery spent wash: Influence of enzymatic pre-treatment of intact yeast 24. cells // Bioresource Techn. 2010. Vol. 101. P. 1681-1685.
14. Palomero F., Morata A., Benito S. et al. Conventional and enzymeassisted autolysis during ageing over lees in red wines: Influence on the release of polysaccharides from yeast cell walls and on
wine monomeric anthocyanin content // Food Chem. 2007. Vol. 105. P. 838-846.
Suh, Hyung Joo. Method of producing yeast hydrolysate containing CHP as neurotransmitter using flavourzyme as hydrolase. Patent N 2005117196. S. Korean. 2005.
Серба Е.М., Оверченко М.Б., Игнатова Н.И. и др. Разработка национальных стандартов по методам определения активности ферментных препаратов для пищевой промышленности // Пищ. пром-сть. 2013. № 7. С. 40-44.
Римарева Л.В., Серба Е.М., Оверченко М.Б. и др. Использование биомассы гриба Aspergillus oryzae в качестве источника биологически активных веществ // Хранение и переработка сельхозсырья. 2012. № 9. C. 46-50.
Стручкова И.В., Кальясова Е.А. Теоретические и практические основы проведения электрофореза белков в полиакриламидном геле. Электронное учебно-методическое пособие. Нижний Новгород : Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, 2012. 60 с.
Поляков В.А., Римарева Л.В., Курбатова Е.И. и др. Получение белковых обогатителей пищи на основе ферментативной деструкции белково-полисахаридного комплекса клеточных стенок дрожжей // Пищ. пром-сть. 2012. № 11. С. 42-44. Klis F.M. Review: Cell Wall Assembly in Yeast // Yeast. 1994. Vol. 10. P. 851-869.
Зобкова З.С., Фурсова Т.П., Зинина Д.В. и др. Влияние способа внесения трансглутаминазы на структурно-механические свойства йогурта и протеолитическую активность заквасочных культур // Хранение и переработка сельхозсырья. 2014. № 3. С. 28-32.
Sarmadi B.H., Ismail A. Antioxidative peptides from food proteins: A review // Peptides. 2010. Vol. 31. P. 1949-1956. Орлова Е.В., Римарева Л.В. Исследование антиоксидантных свойств препарата, полученного на основе регулируемого ферментативного гидролиза биомассы дрожжей Saccharomyces cerevisiae // Хранение и переработка сельхозсырья. 2007. № 11. С. 63-64. Орлова Е.В., Римарева Л.В., Орлова В.С. Проявление селективной цитотоксичности препаратами из дрожжей Saccharomyces cere-visiae, полученных на основе направленного ферментативного биокатализа полимеров дрожжевой биомассы // Хранение и переработка сельхозсырья. 2007. № 10. С. 47-48.
References
Pokrovsky A.A. The role of biochemistry in the development of the science of nutrition. Moscow: Nauka, 1974: 127 p. (in Russian) Diplock A. T., Charleud J.L., Crozier-Willi G., et al. Functional food science and defence against reactive oxidative species. Br J Nutr. 1998; 80 (1): 77-112.
Verschuren P.M. Functional Foods: Scientific and Global Perspectives (Summary Report). Br J Nutr. 2002; 88 (2): 125-30. Tutelyan V.A., Vyalkov A.I., Razumov A.N., et al. The scientific basis of healthy eating. Moscow: Panorama. 2010: 816 p. (in Russian)
5. Shenderov B.A. Functional nutrition and its role in the prevention of metabolic syndrome. Moscow: DeLi print, 2008: 320 p. (in Russian)
6. Roberfroid M.B. Global view on functional foods: European perspectives. Br J Nutr. 2002; 88 (2): 133-8.
7. Rimareva L.V.,Overchenko M.B., Serba E.M., Orlova E.V. Biomedical and biotechnological aspects of the production elderly persons nutrition. Pishevaya promyshlennost' [Food Processing Industry]. 2009; (3): 29-30. (in Russian)
8. Samsonov M.A. The concept of a balanced diet and its importance in studying the mechanism of therapeutic action of food. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2001; 70 (5): 3-9. (in Russian)
9. Diplock A.T., Aggett P.J., Ashwell M., et al. Scientific concepts of functional foods in Europe, consensus document. In: FF-27-de98. Brussels: ILSI Europe, 1998: 17-79.
10. Yi D., Youg P., Wenkui L. Chinese functional food. Beijing: New World Press, 1999: 19-20.
11. Rimareva L.V.,Kurbatova E.I., Fursova N.A., et al. Biotechnological aspects of creating supplements biocorrosive actions based on microbial biomass. Khranenie i pererabotka selkhozsyrya [Storage and Processing of Farm Products]. 2011; (2): 45-7. (in Russian)
12. Jaehrig S. C., Rohn S., Kroh L. W., et al. In vitro potential antioxidant activity of (1-3),(1-6)-p-D-glucan and protein fractions from Sac-charomyces cerevisiae cell walls. Agric Food Chem. 2007; 55 (12): 4710-6.
13. Mallick P., Akunna J.C., Walker G.M. Anaerobic digestion of distillery spent wash: Influence of enzymatic pre-treatment of intact yeast cells. Bioresource Techn. 2010; 101: 1681-5.
14. Palomero F., Morata A., Benito S., et al. Conventional and enzymeassisted autolysis during ageing over lees in red wines: Influence on the release of polysaccharides from yeast cell walls and on wine monomeric anthocyanin content. Food Chem. 2007; 105: 838-46.
15. Suh, Hyung Joo. Method of producing yeast hydrolysate containing CHP as neurotransmitter using flavourzyme as hydrolase. Patent N 2005117196. S. Korean. 2005.
16. Serba E.M., Overchenko M.B., Ignatova N.I., et al. The development of national standards on methods for determining the activity of enzyme preparations for food industry. Pishevaya promyshlen-nost' Food Processing Industry]. 2013; (7): 40-4. (in Russian)
17. Rimareva L.V, Serba E.M., Overchenko M.B., et al. The use of biomass of the fungus Aspergillus oryzae as a source of biologically active substances. Khranenie i pererabotka selkhozsyrya [Storage and Processing of Farm Products]. 2012; (9): 46-50. (in Russian)
18. Struchkova I.V., Kalyasova E.A. Theoretical and practical bases of carrying out electrophoresis of proteins in polyacrylamide gel. Elektronnoe uchebno-metodicheskoe posobie. Nizhniy Novgorod: Lobachevsky State University of Nizhni Novgorod, 2012: 60 p. (in Russian)
19. Polyakov V.A., Rimareva L.V., Kurbatova E.I. Obtaining protein of nutritious food based on enzymatic degradation of the pro-tein-polysaccharide complex of the cell walls of yeast. Pishevaya promyshlennost' [Food Processing Industry]. 2012; (11): 42-44. (in Russian)
20. Klis F.M. Review: Cell Wall Assembly in Yeast. Yeast. 1994; 10: 851-69.
21. Zobkova Z.S., Fursova T.P., Zinina D.V., et al. Influence of transgluta-minazy on ways to structurally-mechanical properties of yogurt and proteoliticescuu activity manufacture of cultures. Khranenie i per-erabotka selkhozsyrya [Storage and Processing of Farm Products]. 2014; (3): 28-32. (in Russian)
22. Sarmadi B.H., Ismail A. Antioxidative peptides from food proteins: A review. Peptides. 2010; 31: 1949-56.
23. Orlova E.V., Rimareva L.V. Study of the antioxidant properties of the drug, derived from the controlled enzymatic hydrolysis of yeast biomass Saccharomyces cerevisiae. Khranenie i pererabot-ka selkhozsyrya [Storage and Processing of Farm Products]. 2007; 11: 63-4. (in Russian)
24. Orlova E.V., Rimareva L.V., Orlova V.S. The expression of selective cytotoxicity by preparations of yeast Saccharomyces cerevisiae obtained based on the directed enzymatic Biocatalysis of polymers yeast biomass. Khranenie i pererabotka selkhozsyrya [Storage and Processing of Farm Products]. 2007; 10: 47-48. (in Russian)
