CC BY
0Исследование перестроек генов NTRK в опухолях разных локализаций
Авторы:
(1) Романько Александр Андреевич, Romanko.aleksandr.a@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(2) Мулкиджан Римма Сергеевна, mulkidzhan17@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(3) Саитова Евгения Станиславовна, zhenya.saitowa2017@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(4) Преображенская Елена Васильевна, chekmarevaev@mail.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(5) Алексахина Светлана Николаевна, abyshevasv@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(6) Шестакова Анна Дмитриевна, anna.message19@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(7) Имянитов Евгений Наумович, evgeny@imyanitov.spb.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(8) Левченко Евгений Владимирович, onco.lev@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Ключевые слова
транслокация, NTRK1, NTRK2, NTRK3, несбалансированная экспрессия
Актуальность
Гены нейротрофических рецепторных тирозинкиназ (NTRK1-3) могут активироваться посредством перестроек и играют ведущую роль в патогенезе некоторых опухолей человека. Два препарата, энтректиниб и ларотректиниб, недавно были одобрены для лечения NTRK-ассоциированных опухолей любых локализаций, поэтому обнаружение транслокаций с участием NTRK имеет большое клиническое значение. Диагностику транслокаций NTRK затрудняет наличие множества возможных генов-партнеров и точек разрывов.
Цель
Оценить эффективность оценки несбалансированной экспрессии 5'/3'-концов NTRK с последующей вариант-специфичной ПЦР для обнаружения NTRK-перестроек.
Материалы и методы
В исследование было включено 6436 образцов немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) и 988 новообразований других локализаций, в том числе 137 детских опухолей. РНК, выделенная из архивного опухолевого материала, анализировалась при помощи ПЦР-теста на несбалансированную экспрессию 5'/3'-концов генов NTRK1-3 с последующими вариант-специфическими реакциями для поиска 42 описанных вариантов перестроек (TPM3ex7-10/NTRK1ex9,10,12; BCANex12/NTRK1ex10; LMNAex3,4,8,10,11/NTRK1ex10-12; IRF2B-P2ex1/NTRK1ex8,10; BCRex1/NTRK2ex17 SQSTM1ex5-6/NTRK2ex16; ETV6ex4-6/NTRK3ex13-15; EML4ex2/ NTRK3ex13,14).
Результаты
Исследование НМРЛ выявило 11/6436 (0,2%) случаев несбалансированной экспрессии 5'/3'-концов NTRK. В 137 детских опухолях и 851 новообразованиях других локализаций несбалансированную экспрессию выявили у 12 (8,8%) и 18/851 (2,1%) пациента соответственно. Вариант-специфическая ПЦР позволила обнаружить транслокации в 20 из этого 41 (48,8%) случая. Из оставшегося 21 образца 13 были подвергнуты таргетному секвенированию нового поколения, которое подтвердило наличие перестройки NTRK в 9 случаях. Суммарно перестройки NTRK были обнаружены в 7/6436 (0,1%) НМРЛ, 11/137 (8,0%) детских опухолей и в 13/851 (0,2%) опухоли других локализаций у взрослых. Наиболее высокой частота перестроек NTRK оказалась при колоректальных карциномах с MSI (6/48, 12,5%), саркомах (97/143, 4,9%) и карциномах слюнных желез (5/93, 5,4%). Самая высокая частота транслокаций NTRK была зарегистрирована в когорте детских сарком (7/39, 17,8%). Случаи перестройки NTRK также наблюдались при глиомах, карциномах щитовидной железы, воспалительных миофибробластических опухолях и мезобластных нефромах.
Выводы
Тест на несбалансированную экспрессию 5'/3'-концов ЫТЯК является многообещающим инструментом скрининга транслокаций с участием этих генов. Наибольшая частота перестроек ЫТЯК характерна для некоторых опухолей детского возраста, сарком и рака толстой кишки с микросателлитной нестабильностью.
Исследование выполнено при поддержке гранта РНФ № 17-75-30027. Список литературы: -
Вовлеченность белков межклеточной адгезии в эпителиально-мезенхимальный переход
Авторы:
(1) Ильницкая Алла Станиславовна, alla.ilnitskaya@inbox.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
(2) Рубцова Светлана Николаевна, gaart2@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
(3) Литовка Никита Игоревич, foxcovert9@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
(4) Житняк Ирина Юрьевна, irazhitnyak@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
(5) Глушанкова Наталия Александровна, natglu@hotmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Ключевые слова
эпителиально-мезенхимальный переход, а-катенин, р-катенин, миграционная активность
Актуальность
Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) — программа, лежащая в основе инвазии и метастазиро-вания раковых клеток. В ходе ЭМП разрушение структур стабильной межклеточной адгезии сопровождается появлением у клеток переднезадней поляризации и способности к миграции.
Цель
Целью работы была проверка гипотезы о возможном участии белков межклеточной адгезии, высвобождающихся из разрушающихся в ходе ЭМП межклеточных адгезионных контактов (АК), в появлении у опухолевых клеток миграционной активности.
Материалы и методы
Для изучения ЭМП были использованы линия эпителиоцитов печени крысы IAR-20, линия трансформированных клеток печени крысы IAR-6-1 с гибридным эпителиально-мезенхимальным фенотипом (сохранивших АК, образованные Е-кадхерином), полученная нами линия клеток 6-1-dNE, стабильно экспрессирующих конструкцию Е-кадхерина с доминантно-негативной мутацией W156A, блокирующей образование АК, и линия клеток рака молочной железы MCF-7 tet-off SNAI, вступающих в ЭМП при активации Snail.
Результаты
С использованием конфокальной микроскопии в клетках IAR-20 и MCF-7 tet-off SNAI, проходящих ЭМП, и в клетках 6-1-dNE, более активно мигрирующих по субстрату, нежели клетки IAR-6-1, выявлена аккумуляция белка межклеточной адгезии а-катенина и актин-связывающего белка а-актинина в узкой зоне полимеризации актина на ведущем крае. Также обнаружена аккумуляция р-катенина во вновь образованных фокальных адгезиях, с помощью которых клетки прикрепляют ламеллиподии ведущего края к подлежащему субстрату. С использованием РНК-интерференции было показано, что уменьшение содержания а-катенина в клетках снижает скорость миграции, пройденный путь и дистанцию клеток 6-1-dNE более чем в 2 раза и статистически значимо уменьшает эти показатели для клеток IAR-6-1 и клеток IAR-20, вступивших в ЭМП в присутствии EGF. Супрессия а-катенина вызывала радикальное изменение морфологии клеток: клетки со сниженным содержанием а-катенина имели дискоидную форму и были хорошо распластаны на субстрате, что характерно для малоподвижных клеток.
