CC BY
0Ключевые слова
вирус папилломы человека, ВПЧ-ассоциированный канцерогенез
Актуальность
Для разработки и доклинических испытаний терапевтических вакцин против вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска требуются надежные и легкодоступные модели мелких животных. Мышей нельзя заразить ВПЧ, но мышиные клетки, включая опухолевые, можно заставить экспрессировать онко-белки ВПЧ. Возникает вопрос, адекватны ли эти клетки в качестве модели ВПЧ-ассоциированных форм рака и в какой степени они воспроизводят ВПЧ-экспрессирующие опухолевые клетки при естественной инфекции.
Цель
Создать клетки аденокарциномы мыши, стабильно экспрессирующие онкобелки E6/E7 ВПЧ16, изучить влияние экспрессии Е6/Е7 на их свойства in vitro и in vivo, сравнив с родительскими клетками и с опухолевыми клетками человека, инфицированными ВПЧ16.
Материалы и методы
Субклоны клеток 4T1luc2, экспрессирующих Е6 и Е7 ВПЧ16 (4T1luc2_E6E7), получили путем лен-тивирусной трансдукции. Уровни экспрессии мРНК оценивали ПЦР-РВ. Активность теломеразы определяли с помощью метода TRAP. Геномную стабильность оценивали подсчетом очагов y-H2AX. Анализ клеточного цикла проводили методом проточной цитометрии. Субклоны эктопически имплантировали мышам BALB/c; рост опухолей контролировали по сигналу биолюминесценции и морфометрически. Метастатическую активность оценивали по сигналу биолюминесценции от органов ex vivo и подтверждали гистологически.
Результаты
Cубклоны 4T1luc2_E6E7 демонстрировали низкие уровни экспрессии мРНК Е6 и Е7. Экспрессия E6/ E7 изменяла клеточные цикл, сдвигала клетки 4T1luc2 в сторону мезенхимального фенотипа, индуцировала повреждение ДНК. Клетки демонстрировали высокую активность теломеразы и повышенный уровень экспрессии мРНК mTert. Также изменялась экспрессия факторов транскрипции HIF-1a, Twist, Nrf2. При имплантации сингенным мышам субклоны 4T1luc2_E6E7 образовывали низкодифференцированные аденокарциномы. Оценка органов ex vivo показала преобладающую миграцию опухолевых клеток в легкие. Онкогенная и метастатическая активность коррелировали с задержкой прохождения клетками G0/G1 чекпойнта. В целом отличия in vitro свойств субклонов 4T1luc2_E6E7 не повышали ни туморогенного, ни метастатического потенциалов клеток в сравнении с исходными 4T1luc2-клетками.
Выводы
В целом полученные субклоны аденокарциномы мыши, экспрессирующие Е6/Е7 ВПЧ16, воспроизводят ряд характерных особенностей ВПЧ-ассоциированного канцерогенеза и могут быть использованы для доклинических испытаний терапевтических вакцин против ВПЧ16 и ассоциированных форм рака. Экспрессия онкобелков Е6/Е7 не меняет туморогенный и метастатический потенциалы опухолевых клеток мыши. Это может быть связано с отсутствием в клетках 4T1luc2 белка р53 (клетки 4T1luc2 являются p53null), что подтверждает ведущую роль Е6-р53 взаимодействия в механизме ВПЧ-ассоциированного канцерогенеза.
Список литературы: -
Спектр транслокаций генов тирозинкиназ в колоректальных карциномах с микросателитной нестабильностью
Авторы:
(1) Мулкиджан Римма Сергеевна, mulkidzhan17@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(2) Саитова Евгения Станиславовна, zhenya.saitowa2017@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(3) Тюрин Владислав Ильич, tyurinvladislav@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(4) Алексахина Светлана Николаевна, abyshevasv@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. H.H. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(5) Венина Айгуль Рифовна, garifullina.aigul@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. H.H. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(6) Бубнов Михаил Григорьевич, mihail.bubnov.11@mail.ru, ФГБУ ШМИЦ онкологии им. H.H. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(7) Имянитов Евгений Наумович, evgeny@imyanitov.spb.ru, ФГБУ ШМИЦ онкологии им. H.H. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Ключевые слова
микросателлитная нестабильность, колоректальный рак, транслокации, таргетная терапия
Актуальность
Молекулярный патогенез опухолей с микросателлитной нестабильностью (MSI) предполагает нарушение репарации неспаренных оснований ДОК, следствием чего является накопление трансформированными клетками мутаций. Это явление свойственно, в частности, новообразованиям толстого кишечника (РТК) и встречается примерно в 5% случаев. Стандартным диагностическим тестом для РТК является исследование генов KRAS, NRAS, BRAF. Мутация хотя бы одного из драйверных генов обнаруживается в 60% случаев РТК [1]. Повышенный риск возникновения генетических дефектов в MSI-позитивных опухолях позволяет предположить наличие клинически значимых мутаций, к которым уже подобрана терапия.
Цель
Оценка спектра и частоты транслокаций с участием генов NTRK1, NTRK2, NTRK3, ALK, RET, ROS1 в MSI-позитивных опухолях толстой кишки.
Материалы и методы
В данное исследование включено 351 MSI-позитивный (BAT26) образец пациентов с опухолями толстой кишки. Образцы тестировались на мутации в генах KRAS/NRAS/BRAF методом ПЦР. Слияния генов NTRK1/2/3, ALK, ROS1 и RET были проанализированы с помощью ПЦР-теста на несбалансированную экспрессию 5'/3'-конца, выявляющего все варианты транслокаций. Тип перестройки определялся с помощью вариант-специфичной ПЦР для распространенных транслокаций или с помощью таргетного РHК-секвенирования нового поколения (NGS).
Результаты
В результате молекулярного анализа было выявлено 198 (53,7%) случаев с мутациями в генах RAS/ RAF-семейства. При этом было обнаружено 2 случая сочетанного присутствия транслокации ETV6-NTRK3 (E5;N15), детектированной методом вариант-специфичной ПЦР и мутации BRAF (V600E) и обнаруженной методом NGS-перестройки ETV5-NTRK2 (E5;N15) и мутации KRAS (A146T). Частота транслокаций в группе KRAS/NRAS/BRAF-позитивных образцов составила 1,1%. В KRAS/NRAS/BRAF-негахивных было обнаружено 22 случая с перестройками: 3 ALK-позитивных: EML4-ALK (E6;A20) (n=1), SPTBN1-ALK(S7;A20) (n=2); 5 RET-позитивных: CCDC6-RET (C1;RE12) (n=3), NCOA4-RET (N8;R12) (n=1), NCOA4-RET (N9del501;R12) (n=1); 14 NTRK-позитивных: TPM3-NTRK1 (T8;N10) (n=9), TPM3-NTRK1 (T8;N12) (n=1); ETV5-NTRK2 (E5;N15) (n=1), EML4-NTRK3(E2;N14) (n=1), ETV6-NTRK3 (E5;N15) (n=2). Частота транслокаций в группе KRAS/NRAS/BRAF-негативных образцов составила 14,8%: ALK-позитивные —2,0%; RET-позитивные — 3,4%; NTRK-позитивные — 9,4%.
Выводы
Образцы колоректального рака с микросателлитной нестабильностью имеют высокую частоту перестроек. Значительно чаще транслокации обнаруживаются в RAS/RAF-негативных опухолях [2/198 (1%) vs. 22/153 (14,8%), ¿<0,0001]. Особого внимания заслуживают перестройки с участием киназ NTRK1/2/3, их абсолютное количество составляет больше половины от всех найденных перестроек.
Работа поддержана грантом РНФ № 20-75-10163.
Использованная литература
1. Martianov AS, Mitiushkina NV, Ershova AN, et al . KRAS, NRAS, BRAF, HER2 and MSI Status in a Large Consecutive Series
of Colorectal Carcinomas // Int J Mol Sci . 2023;24(5):4868 . D0l:10 .3390/ijms24054868.
