CC BY
36
RESEARCH OF ACUTE TOXICITY OF FIXED DOSE COMBINATION TABLETS OF CITICOLINE AND MEMANTINE
Salakhetdinov1'2 D.K., Sysuev3 B.B.
1NovaMedica Innotech, Moscow, Russian Federation
2Pyatigorsk Medical Pharmaceutical Institute of Volgograd Medical State University of the Ministry of Health Care of Russia, Pyatigorsk, Russian Federation
3I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Moscow, Russian Federation
ИССЛЕДОВАНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ КОМБИНИРОВАННОЙ ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ЦИТИКОЛИНА И МЕМАНТИНА
Салахетдинов1'2 Д.Х., Сысуев3 Б.Б.
1НоваМедика Иннотех, г. Москва, Российская Федерация
2Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО ВолгГМУ, г. Пятигорск, Российская Федерация
3ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова (Сеченовский университет), г. Москва, Российская Федерация
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
RESEARCH ARTICLE | НАУЧНАЯ СТАТЬЯ
©Salakhetdinov D.K., Sysuev B.B., 2021
http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-7-49-54
Принята 10.07.2021 | Accepted 10.07.2021
Abstract. The development and study of the fixed dose combination tablets of citicoline and memantine is the relevant problem. The purpose of this study was the assessment of acute toxicity and local irritating effect of the new combined drug, the modified release tablets (citicoline 500 mg + memantine 10 mg). Material of research: fixed dose combination of modified release tablets (citicoline 500 mg + memantine 10 mg) (NovaMedica Innotech, Russia). The tested drug was administered intragastrically to males and females of half-plant outbred rats at a dose of 2000 mg/kg in the amount of active substances. According the research results, the death of animals was not noted. As it was found the value of LD50 for the test drug in the intragastric administration is>5000 mg/kg in accordance with OECD Test No.423. The tested drug can be attributed to the 5th grade of toxicity on the international classification of GHS, because LD50> 5000 mg/kg (V/g) and to 4 class of low-toxic compounds as per Hodge and
Аннотация. Актуальным проблемой является разработка и исследование комбинированной таблетированной лекарственной формы цитиколина и мемантина. Целью исследования являлась оценка острой токсичности и местно-раздражающего действия нового комбинированного препарата, таблетки модифицированного высвобождения (цитиколин 500 мг + мемантин 10 мг). Объект исследования: комбинированный препарат в форме таблеток модифицированного высвобождения (цитиколин 500 мг + мемантин 10 мг) (ООО «НоваМедика Иннотех», Россия). Тестируемый препарат вводили внутрижелудочно самцам и самкам половозрелых аутбредных крыс в дозе 2000 мг/кг по сумме действующих веществ. Как показали результаты исследования, гибели животных не отмечалось. В соответствии с OECD Test No.423 было установлено, что значение ЛД50 для
Sterner classification: 500 <d50 < 5000 mg/kg (V/g). No clinical signs of intoxication in males and females of autumn rats against the background of a single intragastric administration of the test drug was detected visually, There were no changes in animals behavior in the direction of oppression or excitement. The test drug in a single intragastric introduction in a dose of 2000 mg/kg in the amount of active ingredients did not cause a local irritant action. Thus, the drug does not have a toxic and local irritating action in one-time introduction.
Keywords: memantine, citicoline, modified release fixed dose combination tablets, acute toxicity
REFERENCES
[1] Gareri P., Cotroneo A. M., Orsitto G., Putignano S. The CITIMEM study: A pilot study. Optimizing pharmacological treatment in dementia. Arch Gerontol Geriatr. Jul-Aug 2020; 89: 104073. DOI: 10.1016/j.archger.2020.104073
[2] Globally Harmonised System of classification and labelling of chemicals (GHS). Fifth revised edition. United Nations. New York andGeneva. 2013. 530.
[3] Hodge H.C. Gosselin R.E., Smith R.P. Clinical Toxicology of Commercial Products. Acute Poisoning. Ed. 4. Baltimore. 1975. 427.
тестируемого препарата при внутрижелудочном введении составляет>5000 мг/кг. Тестируемый препарат можно отнести к 5 классу токсичности по международной классификации GHS, т.к. ЛД50> 5000 мг/кг (в/ж) и к 4 классу малотоксичных соединений по классификации Hodge и Sterner: 500< Д50 < 5000 мг/кг (в/ж). Визуально, клинических признаков интоксикации у самцов и самок аутбредных крыс на фоне однократного внутрижелудочного введения тестируемого препарата не выявлялось. У животных не отмечалось изменений поведения в сторону угнетения или возбуждения. Тестируемый препарат при однократном внутрижелудочном введении в дозе 2000 мг/кг по сумме действующих веществ не оказал местно-раздражающего действия. Таким образом, препарат не оказывает токсического и местно-раздражающего действия при однократном введении.
Ключевые слова: мемантин, цитиколин, комбинированные таблетки с модифицированным высвобождением, острая токсичность
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИМ СПИСОК
[1] Gareri P., Cotroneo A.M., Orsitto G., Putignano S. The CITIMEM study: A pilot study. Optimizing pharmacological treatment in dementia. Arch Gerontol Geriatr. Jul-Aug 2020; 89: 104073. DOI: 10.1016/j.archger.2020.104073
[2] Globally Harmonised System of classification and labelling of chemicals (GHS). Fifth revised edition. United Nations. New York and Geneva. 2013. 530.
[3] Hodge H.C. Gosselin R.E., Smith R.P. Clinical Toxicology of Commercial Products. Acute Poisoning. Ed. 4. Baltimore. 1975. 427.
Author Contributions; Salakhetdinov D.K. — performing research, analyzing the data obtained, writing a text; Sysuev B.B. — research concept and design.
Conflict of Interest Statement. The authors declare no conflict of interest. Salakhetdinov D.K. - SPIN ID: 3824-9174, ORCID ID: 0000-0001-5451-0039
Research interests, number of main publications: Pharmaceutical development and research, drug technology, 1 patent.
Sysuev B.B. - SPIN ID: 8321-5317; ORCID ID: 0000-0002-9933-1808
Research interests, number of main publications: Drug technology, more than 150 publications, 11 - in SCOPUS, 44 in the Higher Attestation Commission and 26 in conference.
Вклад авторов: Салахетдинов Д.Х. — выполнение исследования, анализ полученных данных, написание текста; Сысуев Б.Б. — концепция и дизайн исследования.
Заявление о конфликте интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Сысуев Б.Б. — SPIN ID: 8321-5317; ORCID ID: 0000-0002-9933-1808
Сфера научных интересов, количество основных публикаций: Технология лекарственных средств, более 150 публикаций: 11 в СКОПУС, 44 в ВАК и 26 в материалах конференций.
Салахетдинов Д.Х. — SPIN ID: 3824-9174; ORCID ID: 0000-0001-5451-0039
Сфера научных интересов, количество основных публикаций: Фармацевтическая разработка и исследования, технология лекарственных средств, 1 патент.
For citation: Salakhetdinov D.K., Sysuev B.B. RESEARCH OF ACUTE TOXICITY OF FIXED DOSE COMBINATION TABLETS OF CITICOLINE AND MEMANTINE // Medical & pharmaceutical journal "Pulse". -2021. - №7. Vol. 23. - Q 49-54. Doi: http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-7-49-54.
Для цитирования: Салахетдинов Д.Х., Сысуев Б.Б. ИССЛЕДОВАНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ КОМБИНИРОВАННОЙ ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ЦИТИКОЛИНА И МЕМАНТИНА // Медико-фармацевтический журнал "Пульс". - 2021. - №7. Т. 23. - С. 49-54 Doi: http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-7-49-54.
Введение. Фармакотерапия деменции и других когнитивных нарушений направлена на замедление прогрессирования болезни и улучшение функций головного мозга. Как правило, длительность терапии составляет полгода и более, что может приводить к нарушению комплаенса. Для лечения нейродегенеративных заболеваний применяются блокаторы холинэстеразы, НМД-антагонисты, ноотропы, вещества растительного
происхождения. Имеются данные оценки эффективности и безопасности совместного применения мемантина и цитиколина в виде монопрепаратов в клинической практике, что подтверждает целесообразность разработки двухкомпонентного лекарственного препарата для проведения фармакотерапии когнитивных расстройств. Перспективна разработка и исследование комбинации мемантина и цитиколина с потенциальным аддитивным эффектом, который проявляется в улучшении нейротрансмиссии в нейронах, повышении пластичность нейронных мембран, нормализации клеточного метаболизма, в виде таблетированной лекарственной формы с модифицированным высвобождением, что позволит уменьшить количество применяемых препаратов и улучшить приверженность лечению [1].
Цель настоящего исследования: изучение острой токсичности с оценкой местно-раздражающего действия нового
комбинированного препарата - таблетки модифицированного высвобождения (цитиколин 500 мг + мемантин 10 мг) (ООО «НоваМедика Иннотех», Россия).
Материалы и методы исследования: В
исследованиях использован комбинированный препарат в форме таблеток модифицированного высвобождения (цитиколин 500 мг + мемантин 10 мг) (ООО «НоваМедика Иннотех», Россия).
Животных содержали в стандартных условиях в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами СП 2.2.1.3218-
14 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник
(вивариев)» (утв. постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 29 августа 2014 г. № 51) и с Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и совета Европейского союза от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях.
Тестируемый препарат вводили внутрижелудочно самцам и самкам половозрелых аутбредных крыс (возраст 8-10 недель) в дозе 2000 мг/кг (по сумме действующих веществ: цитиколин + мемантин). Животные находились под непрерывным наблюдением первые 30 минут после введения исследуемых объектов, затем ежечасно в течение 4 часов, затем через 24 часа и далее ежедневно регистрировали следующие показатели: поведение; реакция на раздражители; состояние кожных покровов; слизистые оболочки; выделения: из глаз/из носа/из анального отверстия/из уретры; тонус мускулатуры; нарушение координации движений; одышка; смерть, другое.
Оценку индивидуального поведения экспериментальных животных проводили на 14-й день после внутрижелудочного введения тестируемого препарата и контрольного вещества. Локомоторную активность животных регистрировали в актометре «Мак-2» (ООО «Юнос», Россия). Установка по изучению локомоторной активности состояла из 8 индивидуальных боксов, с системой датчиков движения, расположенными по периферии боксов. Датчики вертикальной и горизонтальной активности управлялись системой ввода/вывода (плата-контроллер) (MED Associates, Inc., East Fairfield, VT), которая в свою очередь управлялась компьютерной программой MED-PC IV (MED Associates, Inc., East Fairfield, VT). Контролируемые показатели: • горизонтальная активность (количество последовательных датчиков горизонтальной активности, пересеченных животным);
• вертикальная активность, «подъемы на
задние лапы» (количество пересеченных датчиков вертикальной активности).
Эвтаназию осуществляли в соответствии с Директивой 2010/63/Еи Европейского Парламента и Совета Европейского Союза по охране животных, используемых в научных целях от 22 сентября 2010 г. животных эвтаназировали путем помещения в СО2-камеру, в условиях постепенного заполнения камеры диоксидом углерода, с последующим обескровливанием полостей сердца на 15-й день после введения. Данный вид эвтаназии животных сопровождался
минимумом боли, страдания и дистресса и был проведен компетентными сотрудниками.
Проводили патоморфологическое
исследование всех экспериментальных животных. После эвтаназии животные были тщательно обследованы на предмет внешних патологических признаков.
Патоморфологическое исследование включало в себя некропсию, макроскопическое исследование и взвешивание внутренних органов.
Общее количество животных,
задействованных в эксперименте - 24 аутбредных крысы (12 самцов и 12 самок). Характеристика исследуемых групп представлены в таблице 1.
Таблица 1
Характеристика исследуемых групп
Номер группы п/п Количество животных Исследуемые объекты Доза по сумме действующих веществ, мг/кг День эвтаназии
самцы самки
1.1 3 3 Дистиллированная вода - Через 14 суток после введения (на 15-й день эксперимента)
1.2 3 3
2.1 3 3 Тестируемый препарат 2000
Table 1
The tested groups' characteristics
Group number п/п Number of animals Tested objects Dose based on the amount of active ingredients, mg/kg Euthanasia day
males females
1.1 3 3 Distilled water - 14 days after administration (On the 15 th day of the experiment)
1.2 3 3
2.1 3 3 Test drug 2000
Результаты и обсуждение. Как показали результаты исследования, гибели животных, получивших однократно внутрижелудочно тестируемый препарат, таблетки
модифицированного высвобождения, цитиколин 500 мг + мемантин 10 мг в дозе 2000 мг/кг, не зафиксировано.
В соответствии с OECD Test No.423 было установлено, что значение ЛД50 для тестируемого препарата при внутрижелудочном введении составляет >5000 мг/кг. Тестируемый препарат относится к 5 классу токсичности по международной классификации GHS, т.к. ЛД5 >5000 мг/кг (в/ж) [2] и к 4 классу малотоксичных соединений по классификации Hodge и Sterner: 500<Д5о< 5000 мг/кг (в/ж) [3].
Визуально клинических признаков интоксикации у самцов и самок аутбредных крыс на фоне однократного внутрижелудочного
введения тестируемого препарата таблетки модифицированного высвобождения в дозе 2000 мг/кг не отмечали, как и у животных, получивших контрольное вещество.
Ни у одного животного не было выявлено изменений поведения в сторону угнетения или возбуждения. Все животные проявляли стандартную умеренно выраженную реакцию на взятие в руки и остальные раздражители, не проявляли признаков агрессии.
У всех животных обмечалась удовлетворительная упитанность. У всех крыс выявлялся умеренный тонус мускулатуры. Шерсть животных была гладкая, блестящая, без очагов алопеции, а кожа без признаков раздражения или воспаления, тургор и целостность кожных покровов сохранены, пальпируемые образования отсутствовали. Видимые слизистые оболочки бледно-розового
цвета, блестящие, без нарушения целостности. У животных не выявлено экзофтальма, отечности или гиперемии слизистой оболочки глаз. Слезотечения не наблюдали.
Отмечалась умеренная влажность носа, патологические выделения отсутствовали. Местная температура кожи ушей не повышалась, нагноений, воспаления, загрязнений за весь период наблюдения ни у одного животного отмечено не было. Зубы у всех животных сохранялись. Нарушений слюноотделения не выявлено.
Нарушений координации движений отмечено не было. У всех экспериментальных животных наблюдалось дыхание в рамках нормы. Нарушений при акте дефекации и
мочеиспускании отмечено не было. Необычное поведение не зарегистрировано.
Интегральным отражением
функционально-метаболических изменений, возникающих после перенесенной интоксикации, является индивидуальное поведение животных. Результаты данного исследования представлены в таблице 2. Из данных таблицы следует, что отсроченного влияния однократного
внутрижелудочного введения тестируемого препарата таблетки модифицированного высвобождения, (цитиколин 500 мг + мемантин 10 мг) в дозе 2000 мг/кг по сумме действующих веществ, на локомоторную активность экспериментальных животных выявлено не было.
Таблица 2
Влияние однократного внутрижелудочного введения тестируемого препарата на показатели локомоторной активности самок аутбредных, M±SEM
Дозы по сумме Горизонтальная Вертикальная
№ Исследуемый объект действующих веществ, n активность активность
мг/кг Количество пересечений датчиков
1.2 Контрольное вещество - 3 65,7±13,98 54,3±6,12
2.2 Тестируемый препарат 2000 3 52,0±2,51 53,3±7,86
Table 2
Influence of a single intragastric administration of the test drug on the parameters of locomotor
activity of outbred females, M±SEM
№ Tested objects Dose based on the amount of active ingredients, mg/kg n Horizontal activity Vertical activity
Number of sensor crossings
1.2 Control substance - 3 65,7±13,98 54,3±6,12
2.2 Test drug 2000 3 52,0±2,51 53,3±7,86
При вскрытии трупов животных, подвергнутых плановой эвтаназии, какие-либо патологические изменения во внутренних органах отсутствовали. Влияния на массовые коэффициенты внутренних органов самцов и самок крыс не было выявлено.
Оценку местно-раздражающего действия тестируемого препарата проводили путем
регистрации патологоанатомических изменений тканей в месте введения, при плановой некропсии. У всех исследованных трупов животных при патологоанатомическом исследовании в месте введения (желудок) макроскопически видимых изменений не было обнаружено (рисунки 1, 2).
Рис.1 - Место введения (вскрытый желудок): макроскопически видимые изменения отсутствуют. Контрольное вещество
Fig.1 - Place of administration (open stomach): macroscopically visible changes are absent. Control substance
Выводы. Проведено экспериментальное доклиническое исследование, направленное на изучение острой токсичности нового комбинированного препарата, таблетки модифицированного высвобождения, (цитиколин 500 мг + мемантин 10 мг) при однократном внутрижелудочном введении самцам и самкам аутбредных крыс с оценкой местно-раздражающего действия.
По показателям острой токсичности, в соответствии с OECD Test No. 423, тестируемый препарат - таблетки модифицированного
Рис.2 - Место введения (вскрытый желудок): макроскопически видимые изменения отсутствуют. Тестируемый препарат
Fig.2 - Place of administration (open stomach): macroscopically visible changes are absent. The drug under test
высвобождения (цитиколин 500 мг + мемантин 10 мг), относится к 5 классу токсичности по международной классификации GHS, ЛД5о>5000 мг/кг при внутрижелудочном введении и к 4 классу малотоксичных соединений по классификации Hodge и Sterner: 500<ЛД5о<5000 мг/кг (в/ж). Выявлено, что тестируемый препарат при однократном внутрижелудочном введении в дозе 2000 мг/кг по сумме действующих веществ при однократном внутрижелудочном введении не оказал местно-раздражающего действия.
Corresponding Author: Salakhetdinov Damir Khizbullaevich, PhD student of the Department of Pharmaceutical Technology with a course in medical biotechnology, Pyatigorsk Medical Pharmaceutical Institute of Volgograd Medical State University of the Ministry of Health Care of Russia, Pyatigorsk, Russian Federation
E-mail: [email protected]
Ответственный за переписку: Салахетдинов Дамир Хизбуллаевич - аспирант кафедры фармацевтической технологии с курсом медицинской биотехнологии, Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск, Российская Федерация
E-mail: [email protected]
