CC BY
8Список литературы
1. Laane E . et al . Cell death induced by dexamethasone in lymphoid leukemia is mediated through initiation of autophagy //
Cell Death & Differentiation . 2009 . V. 16 . № 7 . P 1018-1029 . 2 . Григорьева Д . Д . и др . Ингибирование глюкокортикоид-индуцированной экспрессии REDD1 рапамицином в клетках рака молочной железы // Успехи молекулярной онкологии . 2022 . Т 9 . № 1. С . 42-46 .
Исследование нативной автофлуоресценции иммунных клеток дренирующих лимфоузлов на модели мышиной меланомы B16F0 методом флуоресцентной микроскопии с временным
разрешением
Авторы
Изосимова Анна Вячеславовна, annizosimova@gmail.com, ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Минздрава России, ФГАОУ ВО «Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского», Нижний Новгород
Можеров Артем Михайлович, artemmozherov@gmail.com, ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Минздрава России, Нижний Новгород
Загайнова Елена Вадимовна, ezagaynova@gmail.com, ФГАОУ ВО «Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского», Нижний Новгород
Южакова Диана Владимировна, yuzhakova-diana@mail.ru, ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Минздрава России, Нижний Новгород
Ключевые слова:
метаболизм, флуоресцентная время-разрешенная микроскопия, иммунотерапия, лимфоциты
Актуальность
Одной из основных проблем иммунотерапии опухолей является отсутствие возможности предсказания эффективности лечения на ранних этапах. Реактивность лимфоцитов против опухоли отражается в метаболических перестройках, и они могут служить потенциальным индикатором раннего ответа на лечение [1]. Перспективным методом оценки энергетического метаболизма является визуализация автофлуоресцирующих коферментов методом флуоресцентной время-разрешенной микроскопии FLIM [2], однако работы по FLIM-визуализации нативной автофлуоресценции свежеизвлеченных иммунных клеток пока отсутствуют.
Цель
Исследование нативной автофлуоресценции иммунных клеток дренирующих лимфоузлов на модели мышиной меланомы B16F0 методом FLIM.
Материалы и методы
Исследования проводили на мышах линии C57B1/6 FoxP3-EGFP с подкожно привитой мелано-мой B16F0 вблизи пахового лимфоузла. Визуализацию свежих срезов дренирующих лимфоузлов проводили на конфокальном микроскопе LSM 880 (Carl Zeiss, Германия) с FLIM приставкой TCSPC (Becker & Hickl, Германия) в канале кофермента никотина-мидадениндинуклеотид (фосфата) НАД(Ф)Н (ex. 375 нм, em. 435-485 нм).
Результаты
Разработан оригинальный способ визуализации нативной автофлуоресценции иммунных клеток, включающий забор лимфоузлов под сте-реомикроскопом Leica M60, приготовление свежих срезов толщиной около 1 мм, помещение на чашку FluoroDish (WPI) со стеклянным дном и фиксация салфеткой, смоченной физиологическим раствором.
Методом FLIM в канале НАД(Ф)Н продемонстрировано, что у здоровых мышей наблюдается наименьшее значение отношения свободной компоненты НАД(Ф)Н к связанной с ферментами а1/ а2 (2,36±0,08). У мышей с опухолью наблюдается увеличение отношения а1/а2 с ростом опухоли: от 2,6±0,1 для мышей с объемом опухоли до 200 мм3 до 3,4±0,2 для мышей с объемом опухоли 250-400 мм3 (p = 0,0003 против здоровых мышей). Данный эффект может быть связан со сдвигом в сторону гли-колитического метаболизма, что может быть ассоциировано с активацией и пролиферацией лимфоцитов в ответ на опухоль. Увеличение размеров лимфоузлов подтверждает данную гипотезу.
Предварительные результаты по анти-СТЬА-4 терапии (анти-СТЪА-4 антитела (Bio X Cell, США), 250 мкг на мышь на 7, 8, 11 и 12-й дни роста опухоли) показали, что у части мышей, ответивших на терапию (с торможением роста опухоли) а1/а2 выше, чем у нелеченых мышей с аналогичным объемом опухоли (3,1±0,17 против 2,7±0,03).
Выводы
Впервые показана возможность визуализации автофлуоресценции иммунных клеток в лимфоузлах в их нативном состоянии. Продемонстрирована потенциальная возможность использования метабо-
Список литературы
1. Walsh et al . Nat Biomed Eng . , 2021. 2 . Zappasodi et al . Nature, 2021.
лического FLIM-имиджингa для оценки реактивности иммунных клеток против опухоли и эффективности иммунотерапии.
Работа поддержана грантом РНФ № 21-7400101.
Циркулирующие протеасомы в развитии плоскоклеточного
рака гортани
Авторы
Сиденко Евгения Александровна, sidenkoevgeniyaaleksandrovna@gmail.com, НИИ онкологии ТНИМЦ РАН, ФГБНУ «Томский национальный исследовательский медицинский центр РАН», Томск
Кондакова Ирина Викторовна, kondakova@oncology.tomsk.ru, НИИ онкологии ТНИМЦ РАН, ФГБНУ «Томский национальный исследовательский медицинский центр РАН», Томск
Черемисина Ольга Владимировна, CheremisinaOV@oncology.tomsk.ru, НИИ онкологии ТНИМЦ РАН, ФГБНУ «Томский национальный исследовательский медицинский центр РАН», Томск
Ключевые слова:
циркулирующие протеасомы, плоскоклеточный рак гортани, химотрипсинподобная активность, каспаза-подобная активность
Актуальность
Протеасомы играют важную роль в развитии рака гортани (РГ) [1]. Однако в настоящее время не показано значение циркулирующих форм протеасом, присутствующих во внеклеточных жидкостях, в развитии этой патологии. Циркулирующие протеасомы являются диагностическими биомаркерами для различных злокачественных новообразований [2-5]. Однако их роль и значение в развитии плоскоклеточного РГ еще предстоит изучить.
Цель
Определить химотрипсинподобную (ХТП) и ка-спазаподобную (КП) активности циркулирующих протеасом в сыворотке крови больных предопухоле-выми и опухолевыми заболеваниями гортани.
Материалы и методы
В исследование вошло 29 больных РГ и 20 больных предопухолевыми заболеваниями гортани. Сыворотку активировали 10% SDS (sodium dodecyl sulfate) в течение 15 минут. ХТП- и КП-активности циркулирующих протеасом в сыворотке крови определяли флуоресцентным методом. Образовавшийся продукт
регистрировали на микропланшетном ридере Cytation 1 (BioTek, USA).
Результаты
Данные, полученные в результате исследования, демонстрируют значимые изменения активностей циркулирующих протеасом в сыворотке крови пациентов с предопухолевыми и опухолевыми заболеваниями гортани. ХТП- и КП-активности соответственно в 3,2 и 2,2 раза выше в РГ при сравнении с группой контроля. Также для циркулирующих форм характерно повышение ХТП-активности в сыворотке крови пациентов с плоскоклеточным РГ по сравнению с больными хроническими гиперпластическими заболеваниями гортани, ассоциированными с диспла-зией легкой и тяжелой степени.
Выводы
Циркулирующие протеасомы — конститутивные компоненты сыворотки крови, и их концентрация может отражать состояние здоровья человека. Дальнейшее изучение циркулирующих протеасом может быть положено в основу метода оценки прогноза развития РГ у больных предопухолевыми заболеваниями гортани.
Список литературы
1. Активность и субъединичный состав протеасом в плоскоклеточных карциномах головы и шеи / Л . В . Спирина, И . В . Кондакова, Е.Л . Чойнзонов и др . Бюллетень экспериментальной биологии и медицины . 2010 . № 149 (1) . С . 89-92 .
2 . Внутриклеточный и циркулирующий пулы протеасом: значение при злокачественных новообразованиях различных локализаций / Е. Е . Шашова, Е . С . Колегова, И . В . Кондакова, А.А. Завьялов // Сибирский онкологический журнал . 2015. № 6 . С . 76-82 .
